Un regim heterolog de amorsare AZD1222 și de stimulare a BNT162b2 generează mai eficient anticorpi de neutralizare, dar nu celulele T de memorie, decât regimul omologul BNT162b2

abstract

Context: sunt necesare analize comparative ale răspunsurilor imune specifice SARS-CoV-2-declanșate de diverse regimuri de stimulare primară pentru a stabili regimuri eficiente pentru controlul COVID-19. Metodă: În acest studiu prospectiv de cohortă observațională, imunoglobulina G (IgG) și anticorpi neutralizanți (nAbs) specifici spike-ului, alături de răspunsurile celulelor T specifice spike-ului, în grupurile de vârstă de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 omoloage sau AZD1222/AZD1222/AZD1222, heterologo. Au fost evaluate vaccinarea BNT162b2 și infecția/vaccinarea anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic. Rezultate: Răspunsurile imune maxime au fost atinse după a doua doză de vaccin în grupurile vaccinate naiv și după prima doză în grupul anterior cu infecție/vaccinare. Titrurile maxime de IgG anti-spike și nAb au fost semnificativ mai mari în grupurile cu vaccinare AZD1222/BNT162b2 și cu infecție/vaccinare anterioară decât în ​​grupurile BNT162b2/BNT162b2 sau AZD1222/AZD1222. Cu toate acestea, frecvența celulelor CD4 plus T producătoare de interferon-c a fost cea mai mare în grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2. Rezultate similare au fost observate în analiza celulelor T polifuncționale. Când au fost analizate răspunsurile nAb și CD4 plus celulelor T împotriva variantei Delta, grupul anterioară de infecție/vaccinare a prezentat răspunsuri mai mari decât grupurile de alte regimuri de vaccinare omoloage sau heteroloage. Concluzie: nAb-urile sunt declanșate eficient prin vaccinarea heterologă AZD1222/BNT162b2, precum și prin infecție/vaccinare anterioară, în timp ce răspunsurile CD4 plus T-specifice de vârf sunt declanșate eficient prin vaccinarea omoloagă BNT162b2. Imunitatea de recunoaștere a variantelor este generată mai eficient de infecția/vaccinarea anterioară decât celelalte regimuri de vaccinare omoloage sau heteroloage.

cistanche tubulosa-imbunatateste sistemul imunitar

1. Introducere

Sindromul respirator acut sever coronavirus 2 (SARS-CoV-2) s-a răspândit la nivel global de la apariția sa în decembrie 2019, iar dezvoltarea de vaccinuri eficiente împotriva bolii coronavirus 2019 (COVID-19) a fost accelerată [1 ]. Succesul demersului a fost observat relativ repede, iar mai multe vaccinuri care utilizează proteina spike (S) ca antigen al vaccinului au demonstrat cu succes siguranța și eficiența în prevenirea COVID simptomatic-19. În mod specific, vaccinul pe bază de ARNm BNT162b2 (Comirnaty, Pfifizer-BioNTech) și vaccinul pe bază de vector adenovirus AZD1222 (Vaxzevria, AstraZeneca) au fost inițial aprobate și administrate pe scară largă ca un regim de prim-boost în două doze. Două doze de BNT162b2 au avut o eficacitate de 95% (95% interval de încredere [IC], 90–98%) împotriva COVID simptomatic-19 [2], iar două doze de AZD1222 au avut 70% (95% CI, 55–81). procente ) eficacitate [3]. În mod intrigant, regimurile heterologe de prim-boost ale vaccinurilor COVID-19 licențiate au câștigat un interes substanțial și au fost ulterior începute în mai multe țări, în ciuda datelor insuficiente privind imunogenitatea și siguranța. BNT162b2 administrat ca doză de rapel la indivizii vaccinați cu AZD1222 a indus titruri robuste de anticorpi (Ab) imunoglobulină G (IgG) S-specifică, răspunsuri de anticorpi neutralizanți (nAb) și celule T interferon-c plus (IFN-c plus) [4] ,5]. Cu toate acestea, puține studii au evaluat eficacitatea vaccinării heterologe AZD1222/BNT162b2 în comparație cu vaccinarea omoloagă BNT162b2/BNT162b2 [6-8], iar aceste studii nu au avut o evaluare completă a răspunsurilor celulelor T specifice S. În consecință, dacă vaccinarea heterologă AZD1222/BNT162b2 are ca rezultat răspunsuri puternice cu variante încrucișate nAb sau celule T rămâne neclar. Un alt exemplu de stimulare a amorsării heterologe poate fi observat la persoanele care au fost infectate cu SARS-CoV-2 și ulterior vaccinate împotriva virusului. Mai multe studii au sugerat că nivelurile specifice de legare de Ab și nAb sunt detectate la niveluri ridicate la indivizii cu infecție și vaccinare anterioară, deși nu au existat analize comparative [9,10]. Lucrătorii din domeniul sănătății cu infecție anterioară cu SARS-CoV-2 au titruri Ab mai mari ca răspuns la o singură doză de vaccin ARNm decât cei care nu au fost infectați anterior [11]. Mai mult, indivizii cu infecție anterioară prezintă răspunsuri sporite ale celulelor T specifice S și răspunsuri ale celulelor B de memorie care secretă Ab după doza principală fără doza de rapel [12]. În studiul de față, am examinat în mod cuprinzător imunogenitatea umorală și celulară a regimurilor de stimulare primară omoloage și heterologe într-o cohortă de observație prospectivă cu comparații paralele ale răspunsurilor cu legare S-specifică Ab, nAb și Sspecific CD4 plus celulele T. . De asemenea, am evaluat rezultatele imunologice la participanții care au fost infectați cu SARS-CoV de tip sălbatic-2 și au primit vaccinuri COVID{-19 pentru a determina dacă infecția și vaccinarea anterioară provoacă în mod eficient răspunsuri imune împotriva variantei Delta.

cistanche beneficii pentru bărbați-întărește sistemul imunitar

2. Metode

2.1. Design de studiu

O cohortă prospectivă multicentrică a fost înființată în martie 2021 pentru a studia răspunsurile imune la vaccinarea COVID-19. Participanții din această cohortă au fost recrutați voluntar printre lucrătorii din domeniul sănătății și inițial programați să primească două doze de BNT162b2 la un interval de 3-săptămână sau AZD1222 la un interval de 12-săptămână. Cu toate acestea, o parte dintre indivizii primi vaccinați cu AZD1222 au primit doza de rapel de BNT162b2 între mai și iunie 2021 și au fost incluși în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2. Printre participanții din cohortă, cei care au avut anterioară infecție cu SARSCoV-2 de tip sălbatic și au primit BNT162b2 sau AZD1222 au fost incluși ca grup anterior de infecție/vaccinare. Toți beneficiarii de vaccin analizați în acest studiu au fost comparați în funcție de vârstă între grupuri. Au fost colectate probe de sânge periferic de la toți participanții din cohortă la fiecare moment (T): înainte și la 3 săptămâni după prima doză de vaccin (T1 și, respectiv, T2), la 5 săptămâni după prima doză de BNT162b2 sau la 11 săptămâni după prima doză de vaccin. AZD1222 (T3) și la 14 săptămâni după prima doză de vaccin (T4). O reprezentare schematică a protocolului de studiu este oferită în Fig. 1. Pentru comparație, au fost obținute probe de convalescent de la pacienți nevaccinați infectați cu SARSCoV-2 Varianta Delta confirmată prin reacția în lanț a polimerazei de transcripție inversă în timp real folosind Seegene Allplex { {38}}Ktul de testare nCoV (Seegene, Coreea) și kitul Illumina BTSeq SARS-CoV-2 de secvențiere a întregului genom (Celemics Inc, Coreea) pe un secvențior MiSeq (150-mod de tip paired-end; Illumina, San Diego, CA, SUA). Secvența de bază obținută prin BTseq a fost comparată cu secvența de referință NCBI NC_045512.2 utilizând software-ul IGV 2.10 pentru a confirma varianta Delta. Studiul a fost aprobat de consiliile de evaluare instituționale ale fiecărui institut participant și realizat conform principiilor Declarației de la Helsinki. Toți participanții au furnizat consimțământul informat scris înainte de înscriere.

2.2. Participanții la studiu

Această cohortă a inclus 22 de participanți care au primit vaccinare omoloagă BNT162b2/BNT162b2 (vârsta medie, 38,0 ani; 31,8 la sută bărbați), 20 de participanți care au primit vaccinare omoloagă AZD1222/AZD1222 (vârsta medie, 39,7 la sută; bărbați 23). și 9 participanți care au primit vaccinare heterologă AZD1222/BNT162b2 (vârsta medie, 38,2 ani; 33,3% bărbați). Dintre cei 11 participanți cu infecție anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic (vârsta medie, 38,5 ani; 27,3% bărbați), 2 și 9 au fost vaccinați cu BNT162b2/BNT162b2 și, respectiv, AZD1222/AZD1222. Datele demografice ale diferitelor grupuri vaccinate sunt prezentate în Tabelul suplimentar 2. Toți participanții cu infecție anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic au prezentat COVID-19 asimptomatic sau ușor, iar 3 dintre ei au avut pneumonie. Timpul mediu de la confirmarea COVID-19 până la prima vaccinare a fost de 121,5 (interval interquartile [IQR], 102,3–252,5) zile. Datele demografice ale participanților cu infecție anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic și vaccinare sunt furnizate în Tabelul suplimentar 1. Au fost obținute probe de convalescenți de la 17 pacienți (vârsta medie, 53 de ani; 52,9 la sută bărbați) infectați cu SARS -CoV-2 Varianta Delta și spitalizat pentru COVID-19 moderat până la critic (moderat, 17,6 la sută; grav, 35,3 la sută; grav bolnav, 47,1 la sută). Timpul mediu de la debutul simptomelor legate de COVID{70}}până la prelevare a fost de 24 (IQR, 22–32) zile. Datele demografice ale participanților convalescenți SARS-CoV-2 Delta sunt furnizate în Tabelul suplimentar 2 și Tabelul 3.

2.3. Anticorpi de legare

Abs de legare specifică SARS-CoV-2 S au fost analizate utilizând un imunotest comercial. Testul Elecsys anti-S proteina (Roche Diagnostics, Germania) este un imunotest electrochimiluminiscent utilizat pentru detectarea anticorpilor specifici SARS-CoV-2 S pe analizorul Cobas e411 (Roche Diagnostics, Germania), cu un interval de măsurare de la -2 {8}}.4 U/ml până la 250 U/ml (până la 2500 U/ml cu diluție 1:10 integrată și până la 12.500 U/ml cu diluție 1:50 integrată). Domeniul de legare la receptorul recombinant al proteinei S a fost utilizat cu un principiu sandwich dublu antigen. Antigenele din reactiv captează predominant IgG anti-SARSCoV-2. Testul proteinei anti-nucleocapsid Elecsys (Roche Diagnostics, Germania) a fost utilizat pentru a detecta infecțiile anterioare cu SARS-CoV-2, cu un indice de limită de 1,0.

beneficii supliment cistanche-crește imunitatea

2.4. Test de neutralizare a reducerii plăcii

Teste de neutralizare a reducerii plăcii pentru virusurile SARS-CoV- 2 de tip sălbatic (BetaCoV/Korea/KCDC03/2020) și tulpina variantă Delta YS117 (numărul de acces GenBank MZ798798 și numărul de acces GISAID EPI{{ {8}}ISL_3411836) au fost efectuate folosind probe de plasmă. Virusul a fost crescut pe celule Vero E6 într-un laborator de nivel 3 de biosecuritate la Centrul de Cercetare Biomedicală Avison din Seul, Coreea. Probele de plasmă inactivată (135 lL) de probe de plasmă inactivată au fost de 2-ori diluate în serie (1:40 până la 1:1280) și adăugate la un volum egal de 100 de ori mai mare decât doza infecțioasă de 50% din cultura de țesut (TCID50) din virus. Izolatele care conțin de 100 de ori TCID50 au fost incubate în plăci de 96-godeuri timp de 60 de minute la 37 °C. Amestecuri de virus-plasmă au fost incubate timp de 60 de minute la 37 °C într-un incubator cu CO2. Amestecuri de virus-plasmă au fost apoi adăugate la celulele Vero E6 însămânțate într-o placă de 24-godeuri cu 1x105 celule/godeu și incubate timp de 1 oră la 37 °C. Medii de suprapunere compus din 2% ser fetal bovin (FBS) în DMEM şi 1% agar a fost adăugat la celulele E6 şi incubat timp de 3 zile la 37°C într-un incubator cu CO2. După ce s-a format o placă, au fost folosite 10% soluție de formaldehidă și 0,33% roșu neutru în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) pentru a fixa și colora stratul de cultură celulară. Diluția de neutralizare a fiecărei probe a fost determinată prin identificarea godeului cu cea mai mare diluție de plasmă fără un efect citopatic observabil. Dozele de neutralizare de 50% (ND50) au fost exprimate ca diluare reciprocă a plasmei, ceea ce a dus la o reducere cu 50% a numărului de plăci în comparație cu controlul pozitiv al virusului. Metoda Spearman-Kärber a fost utilizată pentru a calcula titrurile ND50. Prin comparație cu serurile standard internaționale ale OMS (NIBSC 20–136; titrul nAb: 1000 UI/mL), titrurile nAb au fost convertite în unități internaționale pe mililitru (UI/mL).

Fig. 1. Reprezentarea schematică a cohortelor de primitori de vaccin. Schema de studiu pentru detectarea anticorpilor specifici de legare a vârfurilor SARS-CoV-2, a anticorpilor neutralizanți și a răspunsurilor celulelor T în probele de sânge periferic de la indivizi vaccinați pentru COVID-19. Studiul include BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {= 9) și SARS-CoV de tip sălbatic anterior{{20 }} grupuri de infecție/vaccinare (n=11). Printre infecția/vaccinarea anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic, 2 și 9 au fost vaccinați cu BNT162b2/BNT162b2 și, respectiv, AZD1222/AZD1222. Istoricul infecției cu SARS-CoV-2 a fost confirmat printr-un test pozitiv de anticorpi anti-SARS-CoV-2 nucleocapsid. T, punct de timp; săptămâni, săptămâni.

2.5. Testele cu celule T

Celulele mononucleare din sângele periferic (PBMC) au fost izolate prin centrifugare cu gradient de densitate folosind tuburi Leucosep (Greiner Bio-One) care conţin mediu de separare a limfocitelor. După centrifugare la 800 g timp de 15 minute cu frânare, fracția celulară îmbogățită constând din PBMC a fost recoltată și spălată cu 20 mL de PBS. După centrifugare la 300 g timp de 10 minute, peletul celular a fost resuspendat în 10 ml de PBS pentru numărare. După centrifugare la 300 g timp de 10 minute, celulele au fost crioconservate în FBS cu 10% dimetil sulfoxid la 180 C până la utilizare. Pentru colorarea intracelulară cu citokine (ICS) a IFN-c, interleukină-2 (IL{-2) și factorul de necroză tumorală (TNF), am folosit grupuri de peptide de 15-mer peptide suprapuse cu 11 aminoacizi care acoperă părțile imunodominante ale proteinei S SARS-CoV-2 Wuhan (aa 304–338, 421–475, 492–519, 683–707, 741–770, 785–802 și 885–1273; Biotec). Pentru a compara răspunsurile celulelor T față de tulpinile Wuhan și Delta, am folosit două seturi diferite de pool-uri de peptide S care cuprind regiuni neconservate de secvențe S între tulpinile Wuhan și Delta (linie B.1.617.2) (Miltenyi Biotec). După decongelarea PBMC-urilor și repausul peste noapte, 1  106 PBMC-urile au fost stimulate cu pool-uri de peptide la o concentrație finală de 1 mg/mL și CD28/CD49d anti-uman (1 mg/mL; BD Biosciences) timp de 1 oră într-o { {45}}Placă de godeuri în mediu RPMI-1640 care conține 1% penicilină-streptomicină, 2 mM L-glutamina și 10% FBS. Cultura PBMC a fost incubată încă 5 ore după adăugarea de brefeldin A și monensin (BD Biosciences) la 37 °C în 5% CO2. După stimulare, celulele au fost spălate cu PBS și colorate cu Live/Dead-Aqua (Invitrogen) timp de 20 de minute la temperatura camerei, urmate de un cocktail de Abs de suprafață timp de 20 de minute la temperatura camerei, inclusiv anti-CD14- BV510, anti-CD19-BV510, anti-CD4- BV650, anti-CD{3-BV786 și anti-CD{8-APC-Cy7 (BD Bioscience). Celulele au fost fixate și permeabilizate folosind un set de tampon de colorare Foxp3/Factor de transcripție (eBioscience) și apoi colorate cu un cocktail de Abs intracelular, inclusiv anti-TNF-FITC, anti-IL-2-PE (eBioscience) și anti- IFN-c-APC (BD Biosciences) timp de 20 de minute la temperatura camerei. După finalizarea colorării, celulele au fost analizate pe un instrument LSR II cu FACSDiva (BD Biosciences), iar datele au fost analizate în software-ul FlowJo (FlowJo LLC).

cistanche plant-creșterea sistemului imunitar

2.6. analize statistice

Datele reprezentate grafic la scară liniară au fost exprimate ca medie ± abatere standard. Datele reprezentate pe scale logaritmice au fost exprimate ca medie geometrică ± abatere standard geometrică. Testele Mann-Whitney U sau Wilcoxon au fost aplicate pentru comparații nepereche sau, respectiv, pereche. Analizele statistice au fost {{{0}}cozi, cu P < 0,05 considerat semnificativ. Toate analizele au fost efectuate în R studio sau GraphPad Prism v9.0.

3. Rezultate

3.1. Cinetica răspunsurilor imune determinate de diferite regimuri de vaccinare

În primul rând, am examinat titrurile de IgG anti-S după vaccinare cu diferite regimuri. După cum era de așteptat, prima doză a crescut semnificativ titrurile de IgG anti-S (T2), iar a doua doză a crescut semnificativ titrurile de IgG anti-S în vaccinarea omoloagă BNT162b2/BNT162b2 (T3) și AZD1222/AZD1222 (T4) și AZD1222/ heterolog. Grupuri de vaccinare BNT162b2 (T4) (Fig. 2A). În grupul de infecție/vaccinare anterioară, prima doză a crescut maxim titrurile anti-S IgG (T3), dar a doua doză nu a crescut suplimentar titrurile anti-S IgG (T4). De asemenea, am examinat răspunsurile celulelor S-specifice CD4 plus T în urma stimulării directe ex vivo cu pool-uri de peptide care acoperă secvența proteinei S de tip sălbatic Wuhan SARSCoV-2. Pe baza ICS, prima doză a crescut semnificativ frecvența celulelor producătoare de IFN-c printre celulele CD4 plus T, iar a doua doză a crescut semnificativ frecvența în grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 (T3) și AZD1222/BNT162b2 (T4). (Fig. 2B). În grupurile AZD1222/AZD1222 și anterioare cu infecție/vaccinare, prima doză a crescut semnificativ frecvența celulelor IFN-c plus printre celulele CD4 plus T, dar a doua doză nu a crescut în continuare frecvența.

3.2. Comparația titrurilor Ab între diferite regimuri

Apoi, am comparat titrurile de vârf ale Ab de legare între diferitele regimuri de vaccinare. Ca titruri de vârf, am selectat titruri de IgG anti-S după a doua doză în grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupul de infecție/vaccinare anterioară. Titrurile maxime de IgG anti-S au fost semnificativ mai mari în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2 decât în ​​grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 sau AZD1222/AZD1222 (Fig. 3A). În mod similar, titrurile de vârf ale IgG anti-S au fost semnificativ mai mari în grupul de infecție/vaccinare anterioară decât în ​​grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 sau AZD1222/AZD1222. Nu a existat nicio diferență în titrurile de IgG anti-S între AZD1222/BNT162b2 și grupurile de infecție/-vaccinare anterioară. De asemenea, am evaluat titrurile de nAb la momentele de vârf: după a doua doză în grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupul de infecție/vaccinare anterioară. În mod remarcabil, titrurile de nAb au fost semnificativ mai mari în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2 decât în ​​grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 sau AZD1222/AZD1222 (Fig. 3B). În plus, titrurile de nAb au fost semnificativ mai mari în grupul de infecție/vaccinare anterioară decât în ​​grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 sau AZD1222/AZD1222. Nu a existat nicio diferență în titrurile de nAb între AZD1222/BNT162b2 și grupurile anterioare de infecție/vaccinare. Nivelul răspunsului umoral provocat de diversele regimuri de vaccinare a fost clasificat în respondenți puternici, moderati și niciunul/slab pe baza clasamentului percentilei. Proporția respondenților puternici a fost cea mai mare în grupul de infecție/vaccinare anterioară, urmat de grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2 în ceea ce privește analiza IgG anti-S (Fig. 3C) și nAb (Fig. 3D). Luate împreună, aceste rezultate indică faptul că amorsarea și stimularea heterologă, incluzând atât vaccinarea AZD1222/BNT162b2, cât și infecția/vaccinarea anterioară, este mai eficientă în generarea de răspunsuri umorale decât amorsarea și stimularea omoloage.

3.3. Compararea răspunsurilor CD4 S-specific plus celulelor T între diferite regimuri

De asemenea, am comparat răspunsurile celulelor S-specifice CD4 plus T între diferitele regimuri de vaccinare la momentele de vârf: după a doua doză în grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupele de vaccinare anterioară. grup de infecție/vaccinare. Spre deosebire de titrurile anti-S IgG și nAb, frecvența celulelor IFN-c plus printre celulele CD4 plus T a fost cea mai mare în grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 4A). Proporția respondenților puternici a fost, de asemenea, cea mai mare în grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, urmat de grupul de infecție/vaccinare anterioară (Fig. 4B). Aceste rezultate arată că imunizarea cu al doilea boost omolog de BNT162b2 determină mai eficient răspunsuri ale celulelor T de memorie decât a doua vaccinare heterologă de rapel sau prima doză de vaccinare după infecția naturală cu SARS-CoV-2. Dimpotrivă, regimurile heterologe prime-boost sunt mai susceptibile de a dezvolta niveluri mai mari de răspunsuri imune umorale. De asemenea, am analizat frecvența relativă a celulelor CD4 plus T polifuncționale care produc simultan mai multe citokine (adică IFN-c, IL-2 și/sau TNF). Grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 a prezentat frecvențe semnificativ mai mari de celule polifuncționale producătoare de 2 citokine printre celulele CD4 plus T specifice S decât grupurile de vaccinare AZD1222/AZD1222 sau AZD1222/BNT162b2 (Fig. 4C). Nu a existat nicio diferență în ceea ce privește frecvența între vaccinarea BNT162b2/BNT162b2 și grupurile de infecție/vaccinare anterioară. Frecvența celulelor polifuncționale a fost semnificativ mai mare în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2 decât în ​​grupul de vaccinare AZD1222/AZD1222. Graficele circulare reprezentând celule CD4 plus T simple, duble și triple pozitive în ceea ce privește producția de citokine care răspund la grupurile de peptide suprapuse S au indicat, de asemenea, o frecvență relativ ridicată a celulelor dublu sau triplu pozitive în vaccinarea BNT162b2/BNT162b2 și anterioară. infecție/- grupe de vaccinare (Fig. 4D).

3.4. Răspunsuri imune împotriva variantei Delta în diferite regimuri

În cele din urmă, am analizat răspunsurile imune împotriva variantei Delta. În această analiză, am inclus persoane convalescente care s-au vindecat de infecția SARS-CoV-2 Delta pentru comparație. Titrurile de nAb specifice variantei Delta au fost semnificativ mai mari în grupul de infecție/vaccinare anterioară decât în ​​grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 sau AZD1222/BNT162b2 și au fost chiar mai mari decât cele din subiecții convalescenți Delta. . Am examinat, de asemenea, răspunsurile celulelor T CD4 plus împotriva proteinei S a variantei Delta. În această analiză, am efectuat ICS de IFN-c în urma stimulării directe ex vivo folosind două seturi diferite de pool-uri de peptide S care cuprind regiuni neconservate de secvențe S între tulpinile Wuhan și Delta și am calculat raportul dintre frecvența IFN-c specific Delta plus celule la frecvența celulelor IFN-c specifice Wuhan S plus. După cum era de așteptat, raportul a fost cel mai mare la persoanele convalescente din Deltă. În mod intrigant, raportul a fost mai mare în grupul de infecție/vaccinare anterioară decât în ​​grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 5B), deși răspunsurile CD4 plus T-specifice Wuhan au fost cele mai mari în grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2 (Fig. 4A). Luate împreună, aceste rezultate indică faptul că răspunsurile celulelor T nAb și CD4 plus care recunosc încrucișat varianta Delta sunt generate mai eficient de infecția/vaccinarea anterioară decât regimurile de vaccinare omoloage sau heteroloage.

Fig. 2. Răspunsurile anticorpilor și celulelor T determinate de diverse regimuri de prim-boost. Răspunsuri imune longitudinale conform programului de prelevare de la pre-vaccinare până la 14 săptămâni după prima vaccinare. (A) Anticorpii de legare specifici pentru vârful SARS-CoV-2 au fost măsurați în BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/ BNT162b2 (n {{{ 20}}) și grupuri de infecție/vaccinare anterioară (n=6). (B) Răspunsurile CD4 plus T-specifice pentru SARS-CoV-2 au fost măsurate în BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 (n=9) și grupuri de infecție/vaccinare anterioară (n=7). Datele sunt prezentate ca medie geometrică ± SD geometrică (A) sau medie ± SD (B). Analizele statistice între punctele de timp din cadrul fiecărui grup au fost efectuate utilizând testul Wilcoxon cu semne. ns, nesemnificativ; *P < 0.05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Fig. 3. Răspunsuri imune umorale la momentele de vârf. (A) Anticorpii de legare specifici pentru vârful SARS-CoV-2 au fost comparați între BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/ AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{{ 15}}) și grupuri de infecție/vaccinare anterioară (n=6) la momentele de vârf. (B) Anticorpii de neutralizare au fost comparați între BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) și infecția/vaccinarea anterioară ( n=11) grupuri în momentele de vârf. Punctele de vârf au fost selectate după cum urmează: după a doua doză în grupele de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupul de infecție/vaccinare anterioară. Datele sunt prezentate ca medie geometrică ± SD geometrică și analizate pentru semnificație folosind testul Mann-Whitney. (C și D) Procentele de participanți cu niveluri diferite de răspunsuri imune umorale. Cuantificarea tipului de răspuns (puternic, moderat și deloc/slab) este exprimată ca o fracțiune din numărul de primitori de vaccin din fiecare grup. Tipurile de respondenți au fost determinate de scorul percentila calculat de la toți participanții vaccinați. ns, nesemnificativ; *P < {{40}}.05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

4. Discutie

Vaccinurile ARNm autorizate în prezent și vaccinurile cu vectori adenovirus au dovedit o eficacitate remarcabilă în prevenirea COVID-19. Cu toate acestea, s-a considerat că vaccinarea heterologă prime-boost îmbunătățește imunogenitatea și atenuează lipsa intermitentă de aprovizionare [13]. În plus, au fost ridicate probleme de siguranță cu vaccinurile cu vectori adenovirus după recunoașterea evenimentelor adverse severe, inclusiv tromboza venoasă care pune viața în pericol asociată cu vaccinarea AZD1222, în special la femeile mai tinere [14,15]. Acestea au condus la imunizarea de rapel heterologă ARNm pentru cei care au primit deja prima doză de AZD1222. Deși nu erau disponibile date privind eficiența, multe autorități sanitare naționale au adoptat regimuri heterologe de vaccinuri autorizate COVID-19. Astfel, un studiu comparativ al răspunsurilor imune umorale și celulare provocate de diverse regimuri de vaccinare prime-boost este informativ și ajută la o mai bună înțelegere a provocărilor din lumea reală. În studiul de față, am demonstrat inducerea diferențială a imunității umorale și celulare prin vaccinări heterologe prime-boost (Tabelul suplimentar 4). În contrast puternic atât cu nivelurile de Ab de legare specifică, cât și cu titrurile de neutralizare, care au fost cele mai ridicate în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2, răspunsurile CD4 plus T-specifice au fost cele mai mari în grupul de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, nu în grupul de vaccinare AZD1222/BNT162b2 grup. Nivelurile relativ scăzute ale răspunsurilor celulelor S-specifice CD4 plus T la participanții vaccinați cu AZD1222/BNT162b2-au fost neașteptate și pot încă pune acești indivizi la risc de infecție severă cu SARS-CoV-2. Descoperirile noastre diferă de cele raportate de Schmidt și colegii săi, care au sugerat că, la stimularea heterologă a BNT162b2, titrurile nAb și răspunsurile celulelor T au fost semnificativ crescute la indivizii amorsați cu AZD1222-[7]. Cu toate acestea, frecvența absolută a celulelor CD69 plus IFN-c plus printre celulele CD4 plus T a fost doar marginal crescută, iar acest studiu a exclus analizele aprofundate ale polifuncționalității răspunsurilor celulelor T specifice S. Pentru persoanele care au fost infectate anterior, prima doză de vaccin poate acționa ca o imunizare de rapel și poate induce răspunsuri umorale și celulare [16,17]. Deoarece se presupune că titrul de nAb este o corelație cheie a protecției împotriva infecției cu SARS-CoV-2 [18], rezultatele noastre se potrivesc bine cu descoperirea recentă a unui impuls benefic al imunității dobândite de infecții, cu eficacitatea vaccinului ajustată de > 90% după prima doză la beneficiarii vaccinului care au avut anterioară infecție cu SARS-CoV-2 [19]. Mai mult, în ciuda evadării considerabile a răspunsurilor nAb împotriva variantei Delta în rândul participanților la studiu, am observat cele mai înalte niveluri de nAb recunoașterea încrucișată a variantei Delta în grupul de participanți cu infecție anterioară cu SARS-CoV-2 de tip sălbatic și vaccinare. Cu toate acestea, în conformitate cu grupul de vaccinare heterologă AZD1222/BNT162b2, cei cu infecție anterioară care au fost vaccinați au avut un răspuns CD4 plus T-specific S mai slab decât indivizii cu vaccinare omoloagă BNT162b2/BNT162b2 fără infecție anterioară. În special, rezultatele noastre arată că două doze de BNT162b2 duc la inducerea fiabilă și robustă a răspunsurilor CD4 S-specific plus celulelor T, semnificativ mai mari decât alte regimuri de vaccinare prime-boost. Aceste constatări sunt în concordanță cu un raport recent privind patru vaccinuri diferite COVID-19 [20], în timp ce analiza noastră a inclus regimuri de stimulare primară heterologe și imunitate hibridă de la infecția și vaccinarea anterioară. În consecință, platformele de vaccin ARNm ar putea fi selectate pentru capacitatea lor de a induce răspunsuri robuste ale celulelor CD4 plus T cu memorie. Pe măsură ce incidența infecției revoluționare după vaccinare crește la nivel mondial, există un interes din ce în ce mai mare pentru protejarea imunității împotriva COVID sever-19. Pe măsură ce noi variante de SARS-CoV-2 continuă să apară și să se sustragă apărării imune umorale, imunitatea celulară, care vizează un spectru larg de epitopi SARS-CoV{-2 recunoscuți de celulele T, poate oferi o imunitate de protecție stabilă [21]. ], deși determinanții răspunsurilor celulare în protecția mediată de vaccin nu sunt încă definiți cu precizie. Prin urmare, rămâne neclar dacă imunogenitatea umorală crescută a vaccinării heterologe AZD1222/BNT162b2 se traduce în mod constant într-o protecție îmbunătățită, iar acest lucru necesită studii suplimentare. În plus, trebuie investigat dacă persoanele care au dezvoltat răspunsuri slabe ale celulelor T după vaccinare, cum ar fi cele amorsate cu AZD1222, pot beneficia de formulările de vaccin cu celule T [22]. Atât imunitatea indusă de infecție, cât și cea indusă de vaccin scad în mod natural în timp; cu toate acestea, o protecție mai mare pare să fie conferită persoanelor care au fost infectate anterior cu SARS-CoV-2 [23]. La indivizii vaccinați, infecția inovatoare cu varianta Omicron induce răspunsuri nAb mai mici decât infecția cu varianta Delta [24] și se cunoaște relativ puțin despre potențialele consecințe ale imunității hibride conferite de infecție și vaccinare cu diferite tulpini. Cu toate acestea, prezența celulelor T polifuncționale S-specifice la participanții anterior infectați și vaccinați la studiul nostru este în concordanță cu o scădere mai lentă a protecției împotriva COVID-19 sever la această populație și poate contribui la modificarea severității bolii după reinfectarea cu SARS. -CoV-2 variante [25,26]. Studiul actual are mai multe limitări. În primul rând, dimensiunile mici ale eșantionului din cohortă fac ca analiza statistică robustă să fie dificilă; prin urmare, constatările noastre vor trebui validate în continuare în cohorte mai mari. În al doilea rând, nu am putut testa mostre la momente ulterioare pentru a determina durabilitatea și scăderea răspunsurilor imune umorale și celulare. În al treilea rând, rezultatele noastre pot subestima impactul epitopilor celulelor T subdominanți în afara epitopilor dominanti. În al patrulea rând, am studiat doar limfocitele circulante și pot fi necesare studii viitoare despre drenarea ganglionilor limfatici după vaccinare pentru a înțelege mecanismele care stau la baza răspunsurilor diferențiale observate aici. În rezumat, studiul actual cu comparații directe, potrivite în funcție de vârstă, pune în lumină imunogenitatea umorală și celulară discordantă a amorsării și stimulării heterologe în contextul expunerilor la antigenul SARS-CoV-2. Descoperirile noastre evidențiază modul în care experiența imunologică individuală modelează răspunsul imun ulterior provocat de vaccinarea COVID{107}}. Datele suplimentare privind eficacitatea din lumea reală și investigațiile de laborator vor informa în continuare cea mai adecvată strategie de vaccinare pentru protecția împotriva variantelor emergente de SARS-CoV-2, cu implicații pentru dezvoltarea platformelor de vaccin de generația următoare.

Fig. 4. Răspunsurile imune celulare la momentele de vârf. (A) Frecvențele celulelor IFN-c plus specifice vârfurilor dintre celulele CD4 plus T au fost comparate între BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 ( n=9) și grupuri de infecție/vaccinare anterioară (n=7) la momentele de vârf. Punctele de vârf au fost selectate după cum urmează: după a doua doză în grupele de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupul de infecție/vaccinare anterioară. (B) Procentele de participanți cu niveluri diferite de răspunsuri imune celulare. Cuantificarea tipului de răspuns (puternic, moderat și deloc/slab) este exprimată ca o fracțiune din numărul de primitori de vaccin din fiecare grup. Tipurile de respondenți au fost determinate de scorul percentila calculat de la toți participanții vaccinați. (C) Frecvențele celulelor CD4 plus T polifuncționale specifice spike care produc orice combinație de IFN-c, IL{29}} sau TNF în fiecare grup de participanți vaccinați. (D) Fracția de celule CD4 plus T specifice spike este pozitivă pentru un număr dat de citokine. Datele sunt prezentate ca medie ± SD. Semnificația a fost analizată folosind testul Mann-Whitney (A și C). ns, nesemnificativ; *P < 0.05, **P < 0.{01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Mai mult, ingredientul din medicina tradițională chinezăiarba cistanchepoate crește, de asemenea, imunitatea, Mecanismul Cistanche deserticola în creșterea imunității

Beneficiile suplimentului cistanche-cum să întărești sistemul imunitar

Faceți clic aici pentru a vedea produsele Cistanche Enhance Immunity

【Cereți mai multe】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche tubulosapolizaharidele pot favoriza proliferarea limfocitelor T și B, dar efectul de proliferare al limfocitelor B este semnificativ mai puternic decât cel al limfocitelor T. Polizaharidele Cistanche deserticola promovează eliberarea de citokine IL22 din limfocite, care este legată de promovarea proliferării limfocitelor splenice. Cistanche deserticola poate activa macrofagele și regla sistemul imunitar. Polizaharidele Cistanche deserticola, echinazidul și pilozidul au efecte semnificative asupra formării și activității limfocitelor umane. Poate crește răspunsul de proliferare a limfocitelor, sporind astfel funcția imunitară a organismului.

extract de cistanche

Componentele funcționale aleCistanche tubulosaglicozidele totale au un impact semnificativ asupra refacerii celulelor după lezarea radiațiilor 60Coy și, de asemenea, pot îmbunătăți funcția imunitară împotriva daunelor cauzate de radiații.

Extractul de Cistanche tubulosa poate nu numai să compenseze deficiența imunitară înnăscută, ci și să sporească imunitatea dobândită.

Fig. 5. Răspunsuri imune încrucișate împotriva Deltei provocate de diverse regimuri de stimulare. (A) Probele de plasmă au fost analizate prin teste de neutralizare a reducerii plăcii pentru varianta Delta SARS-CoV-2 în BNT162b2/BNT162b2 (n {{10}}), AZD1222/AZD1222 (n {{{ 13}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), infecție/vaccinare anterioară (n=11) și grupuri Delta-convalescent (n {{2{0}}). Anticorpii de neutralizare delta au fost comparați între grupuri în următoarele momente: după a doua doză în grupurile de vaccinare BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 și AZD1222/BNT162b2 și după prima doză în grupul de infecție/vaccinare anterioară. (B) PBMC-urile au fost analizate prin colorare intracelulară pentru IFN-c în urma stimulării directe ex vivo folosind două seturi diferite de pool-uri de peptide S care cuprind regiuni neconservate de secvențe de vârf între tulpinile Wuhan și Delta din BNT162b2/BNT162b2 (n {{37} }), AZD1222/AZD1222 (n {{4{0}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), infecție/vaccinare anterioară (n {= 7) și Delta-convalescent ( n=17) grupuri. Raportul dintre frecvența celulelor CD4 plus T producătoare de IFN-c față de vârful Delta și frecvența celulelor CD4 plus T producătoare de IFN-c față de vârful Wuhan a fost calculat în fiecare grup. Datele sunt prezentate ca medie geometrică ± SD geometrică (A) sau medie ± SD (B) și analizate pentru semnificație utilizând testul Mann-Whitney. ns, nesemnificativ; *P < 0,05, **P <0,01, ***P <0,001, ****P <0,0001.

Referințe

[1] Bok K, Sitar S, Graham BS, et al. Dezvoltarea accelerată a vaccinului COVID-19: repere, lecții și perspective. Imunitatea 2021;54:1636–51. https://doi. org/10.1016/j.immuni.2021.07.017.

[2] Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Siguranța și eficacitatea vaccinului ARNm BNT162b2 Covid-19. N Engl J Med 2020;383:2603–15. https://doi.org/ 10.1056/NEJMoa2034577.

[3] Falsey AR, Sobieszczyk ME, Hirsch I, et al. Faza 3 Siguranța și eficacitatea vaccinului AZD1222 (ChAdOx1 nCoV-19) Covid-19. N Engl J Med 2021;385:2348–60. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2105290.

[4] Borobia AM, Carcas AJ, Pérez-Olmeda M, et al. Imunogenitatea și reactogenitatea amplificatorului BNT162b2 la participanții cu amorsare ChAdOx1-S (CombiVacS): un studiu multicentric, deschis, randomizat, controlat, de fază 2. Lancet 2021;398:121–30. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21) 01420-3.

[5] Barros-Martins J, Hammerschmidt SI, Cossmann A, et al. Răspunsuri imune împotriva variantelor SARS-CoV-2 după vaccinarea ChAdOx1 nCoV-19/BNT162b2 heterologă și omoloagă. Nat Med 2021;27:1525–9. https://doi.org/ 10.1038/s41591-021-01449-9.

[6] Hillus D, Schwarz T, Tober-Lau P, et al. Siguranța, reactogenitatea și imunogenitatea imunizării prime-boost omoloage și heterologe cu ChAdOx1 nCoV-19 și BNT162b2: un studiu de cohortă prospectiv. The Lancet Respir Med 2021;9:1255–65. https://doi.org/10.1016/S2213-2600(21)00357- X.

[7] Schmidt T, Klemis V, Schub D și colab. Imunogenitatea și reactogenitatea vaccinării heterologe ChAdOx1 nCoV-19/ARNm. Nat Med 2021;27:1530–5. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01464-w.

[8] Liu X, Shaw RH, Stuart ASV, et al. Siguranța și imunogenitatea programelor de stimulare primară heterologe versus omoloage cu un vaccin cu ARNm COVID-19 (Com-COV): un studiu unic-orb, randomizat, de non-inferioritate. Lancet 2021;398:856–69. https://doi.org/10.1016/S0140- 6736(21)01694-9.

[9] Krammer F, Srivastava K, Alshammary H, et al. Răspunsurile anticorpilor la persoanele seropozitive după o singură doză de vaccin ARNm SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021;384:1372–4. https://doi.org/10.1056/NEJMc2101667.

[10] Bradley T, Grundberg E, Selvarangan R, et al. Răspunsurile anticorpilor după o singură doză de vaccin ARNm SARS-CoV-2. N Engl J Med 2021;384:1959–61. https:// doi.org/10.1056/NEJMc2102051.

[11] Saadat S, Rikhtegaran Tehrani Z, Logue J, et al. Titruri de anticorpi de legare și neutralizare după o singură doză de vaccin la lucrătorii din domeniul sănătății infectați anterior cu SARS-CoV-2. JAMA 2021;325:1467–9. https://doi.org/ 10.1001/jama.2021.3341.

[12] Reynolds CJ, Pade C, Gibbons JM, et al. Infecția anterioară cu SARS-CoV-2 salvează răspunsurile celulelor B și T la variante după prima doză de vaccin. Science 2021;372:1418–23. https://doi.org/10.1126/science.abh1282.

[13] Ledford H. Ar putea fi amestecarea vaccinurilor COVID să stimuleze răspunsul imunitar? Nature 2021;590:375–6. https://doi.org/10.1038/d41586-021-00315-5.

[14] Schultz NH, Sorvoll IH, Michelsen AE și colab. Tromboză și trombocitopenie după vaccinarea ChAdOx1 nCoV-19. N Engl J Med 2021;384:2124–30. https:// doi.org/10.1056/NEJMoa2104882.

[15] Greinacher A, Thiele T, Warkentin TE, et al. Trombocitopenie trombotică după vaccinarea ChAdOx1 nCov-19. N Engl J Med 2021;384:2092–101. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2104840.

[16] Mazzoni A, Di Lauria N, Maggi L, et al. Vaccinarea cu prima doză de ARNm este suficientă pentru a reactiva memoria imunologică la SARS-CoV-2 la subiecții care s-au vindecat de COVID-19. J Clin Invest 2021;131:e149150.

[17] Samanovic MI, Cornelius AR, Gray-Gaillard SL, et al. Răspunsurile imune robuste sunt observate după o doză de vaccin ARNm BNT162b2 la indivizii cu experiență SARS-CoV-2-. Sci Transl Med 2022;14:eabi8961.. https://doi.org/ 10.1126/scitranslmed.abi8961.

[18] Khoury DS, Cromer D, Reynaldi A, et al. Nivelurile de anticorpi neutralizanți sunt foarte predictive pentru protecția imună împotriva infecției simptomatice cu SARS-CoV-2. Nat Med 2021;27:1205–11. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01377-8.

[19] Sala V, Foulkes S, Insalata F, et al. Protecție împotriva SARS-CoV-2 după vaccinarea Covid- 19 și infecția anterioară. N Engl J Med 2022;386:1207–20. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2118691.

[20] Zhang Z, Mateus J, Coelho CH, et al. Memoria imună umorală și celulară la patru vaccinuri COVID-19. Cell 2022;185:2434–51. https://doi.org/10.1016/ j.cell.2022.05.022.

[21] Vardhana S, Baldo L, Morice WG, et al. Înțelegerea răspunsurilor celulelor T la COVID-19 este esențială pentru informarea strategiilor de sănătate publică. Sci Immunol 2022;7:eabo1303.. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo1303.

[22] Moss P. Răspunsul imun al celulelor T împotriva SARS-CoV-2. Nat Immunol 2022;23:186–93. https://doi.org/10.1038/s41590-021-01122-w.

[23] Goldberg Y, Mandel M, Bar-On YM, et al. Protecția și scăderea imunității naturale și hibride la SARS-CoV-2.N Engl. J Med 2022;386:2201–12. https://doi. org/10.1056/NEJMoa2118946.

[24] Rossler A, Knabl L, von Laer D, et al. Profil de neutralizare după recuperarea de la infecția cu SARS-CoV-2 Omicron. N Engl J Med 2022;386:1764–6. https://doi. org/10.1056/NEJMc2201607.

[25] Guerrera G, Picozza M, D'Orso S, et al. Vaccinarea BNT162b2 induce celule T specifice SARS-CoV-2-durabile cu un fenotip de memorie a celulelor stem. Sci Immunol 2021;6(eabl5344). https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abl5344.

[26] Goldblatt D. SARS-CoV-2: de la imunitatea de turmă la imunitatea hibridă. Nat Rev Immunol 2022;22:333–4. https://doi.org/10.1038/s41577-022-00725-0.