Izolarea ghidată de activitate a compozițiilor fenolice din peretele Anneslea Fragrans. Și efectul lor citoprotector împotriva stresului oxidativ indus de peroxid de hidrogen în celulele HepG2 Partea 2

Vă rog contactațioscar.xiao@wecistanche.compentru mai multe informatii

2.7. Efect inhibitor asupra generării intracelulare de ROS

Stresul oxidativ este un fel de dezechilibru între oxidare și antioxidare în organism [28]. Acumularea excesivă de ROS poate duce la stres oxidativ care poate provoca leziuni celulelor și țesuturilor, cum ar fi lipidele, membranele și ADN-ul [29]. Antioxidanții, inclusiv polifenolii și flavonoidele, pot ajuta organismul să reducă aceste daune cauzate de SRO. În general, H, O, este utilizat pe scară largă pentru a induce producția intracelulară de tulburări de ROS și pentru a afecta apărarea antioxidantă a celulelor [30]. În studiul nostru de față, H2O2 a fost ales pentru a induce acumularea anormală de ROS intracelular și pentru a afecta apărarea antioxidantă a celulelor. Pentru a evalua efectul inhibitor asupra generării intracelulare de ROS în celulele HepG2 induse de H, O2-, nivelurile de ROS intracelulare au fost testate prin citometrie în flux. Pe scurt, celulele HepG2 au fost cultivate într-o placă de 6-godeuri (1 × 10 grade celule/godeu). După incubarea timp de 24 de ore a 50 ug/ml de extracte diferite sau 8 ug/ml de Vc (grup pozitiv), toate grupurile, cu excepția grupului martor, au fost induse de HO, timp de 6 ore. Au fost testate nivelurile ROS intracelulare ale fiecărui compus (Figura 3). Raportul de generare a ROS a crescut semnificativ la 215,64±9,80 la sută în H2O, grupul tratat în comparație cu grupul de control (100 la sută). În comparație cu grupul tratat cu H, O, compușii 2, 5 și 6 au suprimat remarcabil producția intracelulară de ROS (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Efect citoprotector împotriva apoptozei celulare induse de H2O2-

Apoptoza este un fenomen biologic de bază al celulelor, care joacă un rol important în mecanismul de reglare al proliferării, creșterii și mutației celulelor și stabilității mediului intern. Apoptoza, diferită de necroză, este un tip special de moarte celulară. Tulburarea procesului apoptotic are efecte negative asupra organismului și provoacă multe boli [32]. H2O2, ca o moleculă importantă de semnalizare, reglează procesul de proliferare, creștere și apoptoză celulară [5]. Prezentul studiu a măsurat apoptoza celulelor HepG2 induse de H,O și a evaluat efectele citoprotectoare ale compușilor 2, 5 și 6. După tratarea celulelor HepG2 cu 1.0 mM H2O2, raportul de apoptoză a fost remarcabil crescut ( 57,20±1,97 la sută), în comparație cu cea a grupului de control (9,10±0,62 la sută, p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Materiale și Metode

3.1. Produse chimice și reactivi

Metanolul, acetonitrilul și acidul formic pentru cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC) au fost de calitate HPLC și achiziționate de la Merck (Darmstadt, Germania). Solvenții pentru extracția probei, inclusiv etanol, diclormetan și n-butanol, au fost de calitate analitică. Apa deionizată a fost purificată utilizând un sistem de apă ultrapură Milli-Q (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, SUA) și utilizată în toate experimentele. Compușii standard fenolici de acid galic, rutina, Trolox și vitamina C au fost achiziționați de la Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, China). Bromură de metiltiazol-2-il{{-25-difenil tetrazoliu (MTT), reactiv Folin-Ciocalteu, acid 2,2’-și-bis({3-etilbenzen-tiazolin-6-sulfonic)( ABTS),2,2-difenil-1-picrhidrazilradical (DPPH), 1,3,5-tri({2-piridil){-2,4,{{23 }}triazină (TPTZ), diacetat de 2’,7’-diclorfluoresceină (DCFH-DA) și FeSO4-7HO au fost achiziționate de la Sigma-Aldrich (Shanghai, China). Spectrele RMN au fost obținute folosind spectrometre Bruker AV-400 și/sau DRX-500. Spectrele ESIMS au fost înregistrate pe un spectrometru Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF.

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

3.2. Pregătirea unei mostre

Anneslea fragrans Wall. frunzele au fost colectate din orașul Lincang din China în 2 iulie020. Frunzele au fost uscate într-o cameră umbrită până la greutate constantă și apoi au fost pudrate cu o râșniță electrică. Extracția și fracționarea au fost efectuate ca metoda noastră raportată anterior, cu o ușoară modificare [33]. Proba sub formă de pulbere (100 g) a fost amestecată cu 1000 ml de solvent apos de etanol 80% și supusă ultrasonică într-o baie de curățare cu ultrasunete la 200 W de trei ori (0,5 ore pe timp). Apoi, suspensia sonicată a fost colectată și centrifugată la 1500 × g timp de 10 minute cu o centrifugă Eppendorf (TGL-20B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, China). Supernatantul combinat a fost concentrat la 50 de grade printr-un evaporator rotativ (Hei-VAP, Heidolph, Germania) și apoi uscat cu un liofilizator cu uscare în vid (Alpha 1-2 LD plus, Christ, Germania). Extractul de etanol brut (CE, 30 g) a fost resuspendat cu apă şi împărţit secvenţial cu solvenţi diclormetan, acetat de etil şi n-butanol de trei ori. După concentrare și liofilizare, s-au obținut fracția de diclormetan (DF), fracția de acetat de etil (EAF), o fracțiune de n-butanol (BF) și fracția de apă reziduală (RWF) cântărind 3,2 g, 6,3 g, 7,2 g și 8,2 g. , respectiv. Conform activităților antioxidante ale diferitelor fracții, BF a fost cromatografiat pe coloane de sticlă (30 mm × 400 mm) umed cu 20 g (rășină uscată) de rășină hidratată selectată D101. Volumul stratului (BV) al rășinii a fost de aproximativ 40 ml. După atingerea saturației de adsorbție, coloana a fost mai întâi spălată cu apă distilată cu 4×BV și apoi eluată cu etanol-apă (0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,v/y, fiecare 4× BV), pentru a produce cinci subfracții (BF-A la E). Fiecare parte a soluţiilor de desorbţie a fost concentrată la sec sub vid. CE, patru fracții (DF, EAF, BF și RWF) și cinci subfracții (BF-A la E) au fost păstrate într-un frigider (-20 grade) pentru experimentare ulterioară.

3.3. Izolarea bio-ghidată a constituenților activi

Sub îndrumarea testelor antioxidante și a analizei HPLC, fracția antioxidantă a fost cromatografiată în continuare pentru izolarea compușilor puri. Pe scurt, BF a fost supus unei coloane de rășină hidratată D101 pentru a produce cinci subfracții (BF-A la E). BF-C (1,5 g) a fost supus unei coloane cu silicagel, eluând cu DCM/MeOH (15:1), apoi a fost separat folosind TLC preparativ (DCM/MeOH, 10:1) pentru a obține compușii 6 (118 mg). ) și 7 (10 mg). BF-D (1,1 g) a fost supus unei coloane cu silicagel (CHCI3/MeOH 10:1, 5:1) pentru a da compușii 1 (129 mg) și 4 (15 mg). BF-E (1,2 g) a fost supus la coloană cu silicagel (CHCI3/MeOH, 30:1, 10:1, 5:1) pentru a da compușii 1 (216 mg), 2 (135 mg) și un amestec. Acesta din urmă a fost purificat prin coloană cu silicagel (CHCl3/MeOH). ,12:1) pentru a da compușii 3 (19 mg) și 5 (15 mg) (Figura 5).

3.4. Elucidarea structurii compușilor 1-7

Conform activităților antioxidante ale diferitelor fracții, trei subfracții, de la BF-C la E, au fost supuse cromatografiei pe coloană. În acest fel, fracționarea ghidată de bioactivitate a BF-C la E a condus la izolarea a șapte compuși fenolici individuali. Structurile lor au fost identificate ca confusozid(1)[34], vaccinifolin (2)[34],1-[4-(-D-glucopiranosiloxi)-2-hidroxifenil]-3- (4-hidroxi-3-metoxifenil)-1-propanonă (3) [35], (S)-naringenin{-7-O- -D-glucopiranozidă (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahidroxidihidrochalconă (5)[26], (epi)-catechina (6)[26] și cornozidă (7)[36](Figura 1B) prin analiza 1D - Date RMN și ESI-MS și comparație cu compușii raportați anterior în literatură. Dintre aceștia, compușii 3, 4 și 7 au fost izolați din această plantă pentru prima dată.

Cistanche poate îmbunătăți imunitatea

Confuzozid (1). Formula moleculară a fost atribuită ca C21H24O, iar separarea a dat 129 mg de ace galben pal. Datele „IH RMN (500 MHz, DMSO-d6) și ESI-MS (m/z 421 [M plus H]) au fost identice cu compusul raportat anterior în literatură [34]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13C RMN（125 MHz,DMSO-dg）∶δ204,4 （s,C=O),163,5(s,C{-2'),163,3(s,C). -4'),155,5(s,C{-4),132,6(d,C-6'),130,9(s,C{-1),129,2(d, C -2, 6),115,0(d,C-3/C{-5),114,4(s, C{-1'),108,3(d, C{{45} }'),103,4(d,C-1"),99,6(d,C{-3'),77,1(d, C{-5"),76,4(d, C{{{ 57}}"), 73,1(d,C-2"),69,5(d, C4'),60,5(t,C{-6'),39,8(t,C- ),28,9( t, C-6).

Vacciniifolin (2) a fost obținut sub formă de pulbere amorfă galbenă (153 mg) și i s-a atribuit o formulă moleculară de C2H24O1o.'H RMN (500 MHz, DMSO-dg) și ESI-MS (m/z 437 [M plus H]) datele au fost aceleași cu datele raportate anterior [34]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13CNMR（125 MHz,DMSO-de）∶δ204,4 （s, C=O）,163,5（s, C-2'）,163,3 (s, C{ {21}}),145,0(s, C-3),143,3(s, C{-4),132,6(d, C-6),131,7(s, C{{33) }}),118,9(d, C-6),115,8(d, C{-2),115,4(d, C{-5),114,4(s, C-1 '), 108,3(d, C-5'),103,4(d, C{-1'),99,6(d,C{{-3'),77,1(d, C{{57 }}"),76,4(d,C-3'),73,1(d,C{-2"),69,5(d,C{-4'),60,5(t,C{ {69}}'),39,4(t,Ca),29,1(t, C{-6).

{{0}}[4-( -D-Glucopiranosiloxi)-2-hidroxifenil]-3-({4-hidroxi{-3-metoxifenil){{8 }}propanona (3). Compusul a fost obținut sub formă de ace incolore (19 mg), iar formula moleculară a fost atribuită ca C22H2O10.'H RMN (400 MHz, DMSO-d6) și ESI-MS (m/z451 [M plus H]* ) date de acord cu literatura de specialitate [35]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13CNMR（100 MHz,DMSO-d）∶δ204,5（s,C=O）,163,5（s,C-2'）,163,3（s,C{ {31}}'）,147,4(s,C-3),144,6(s,C{-4),132,6(d,C{-6),131,6(s,C{{{ 43}}),120,4(d,C-6),115,2 (d,C{-5),114,5(s,C{-1'), 112,6(d,C{{{55} }}),108,3(d,C{-5'), 103,3 (d,C{-1"),99,5 (d, C{-3'),77,0(d,C{{{ 67}}'), 76,3(d, C-3"), 73,0(d,C{-2"),69,5(d,C{-4'),60,5(t,C -6'),55,5(q,C-OCH3),39,5(t,C-),29,4(t,C-6).

(S)-Naringenin-7-O- -D-glucopiranozida (4) a avut formula moleculară C21H2.O10, care a fost obținută sub formă de 15 mg de pulbere albă. Datele IH RMN (500 MHz, DMSO-dg) și ESI-MS (m/z 435 [M plus H] plus) au fost în acord cu lucrările anterioare[22]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13C RMN（125 MHz, DMSO-d）∶δ197,2 （s, C-4), 165,3（s, C-7), 165,2 (s, C{{25} }}), 162,9 (s, C-9), 157,9 (s, C{-4'), 128,6 (s, C{-1'), 128,4 (d, C{{37) }}',6'),115,2 (d, C-3'/C{-5'),1{{11{0}}3,2 (s,C{-10 ),99,6(d,C{-1'),96,5(d,C{-6),95,4(d,C{-8),78,7(d,C{-2) ,77.0(d, C{{{6{{240}}}}"),76,3 (d,C{-3'),73,0(d,C{{ 66}}"), 69,5 (d,C-4'),60,5(t,C{-6'),42,0(t,C{-3). 2'3,4,A'-Tetrahidroxidihidrochalcona (5) a avut formula moleculară ca C15H4O5 și separată (15 mg) sub formă de pulbere albă. 'H RMN (400 MHz, DMSO-dg) și ESI-MS (m/z 275 [ Datele M plus H] plus ) au fost în concordanță cu cele raportate în literatură [26]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13C RMN（125 MHz, DMSO-d6）∶δ203.9 （s, C=O）,164.7(s,C-2'),164.2(s,C). -4'),144,9(s, C{-3),143,3(s, C{-4),133,0(d,C{-6),131,8(s,C-4 {114}}),118,9 (d,C-6),115,7(d,C-2),115,4(d,C{-5),112,5 (s,C{{126) }}),108,2(d,C-5'),102,4(d,C{-3'),39,5(t, C-a2),29,2(t, CB). (Epi)-catechina (6) a fost izolată sub formă de pulbere albă (118 mg) și a stabilit formula moleculară ca CHO4.1H RMN (400 MHz, DMSO-dg) și ESI-MS (m/z 291 [M plus H] plus )datele au fost de acord cu cele raportate în literatură [26]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13C RMN （125 MHz, DMSO-d6）∶δ156,4（s,C-7）,156,1（s, C-5), 155,3（s,C{{162 }}）,144,8(s,C{-3'),144,8(s,C{-4'),130,5(s,C{-1'),118,4(d,C{{ 174}}'), 115,0(d,C{-5'),114,4(d,C{-2'), 99,0(s,C{-10),95,1(d,C{ {186}}),93,8(d, C{-8),80,9(d, C{-2),66,2 (d,C{-3),27,8(t, C{{198 }}). Cornozida (7) a fost obținută ca solid amorf (10 mg) și s-a determinat formula moleculară ca C1H20O8. Datele RMN H (500 MHz, DMSO-dg) și ESI-MS (m/z317 [M plus H] plus) au corespuns cu datele date publicate [36]. Identificarea a fost susținută în continuare de 13CNMR（100 MHz,DMSO-dg）∶δ185,3（s, C-4）,153,3（d,C{-2), 153,2 （d,C{{220 }}）,126,4（d, C-3）,126,4(d,C{-5),102,8(d,C{-1'),76,8(d,C{{232} }'),76,6(d,C{-3'),73,3(d,C{-2'),70,0(d,C{-4),67,3(s, C{{244 }}), 63,8(t, C-8), 61,0(t, C{-6'), 39,7(t, C{-7).

3.5. Determinarea conținutului total de fenolici (TPC) și a conținutului total de flavonoide (TFC)

TPC și TFC a patru fracții (DF, EAE, BF și RWF) și cinci subfracții (BF-A la E) au fost măsurate conform metodei noastre raportate anterior [37]. Pentru TFC, 1,0 ml din fiecare probă (cu concentrația de 1,0 mg/ml) dizolvată în metanol s-a amestecat cu 0,5 ml de reactiv Folin-Ciocalteu în un tub de centrifugă și incubat timp de 1 min. Apoi, 20 procente soluție de Na2CO3 (m/o) (1,5 ml) și apă deionizată (7,0 ml) au fost adăugate în tub și ținute la 70 de grade într-o baie de apă timp de 10 minute. După ce a fost răcit la temperatura camerei, 200 uL de soluție au fost transferați pe o microplacă de 96-godeuri și absorbanța a fost determinată la 765 nm de un cititor de microplăci SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SUA).

Pentru TFC, 1,2 mL de soluții de probă (cu concentrația de 1,0mg/mL) au fost amestecate cu 0,3 mL de NaNO, (5 procente m/o) și 3,8 mL de 7 0% etanol apos și incubat timp de 8 minute. Ulterior,0,3 ml 10% Al(NO3), 4 ml4% NaOH apos și 0,4 ml 70% etanol apos s-au adăugat la amestec si se lasa sa reactioneze la temperatura camerei timp de 30 min. Apoi, 200 μL de soluție au fost transferați pe o microplacă de 96-godeuri, pentru care absorbanța a fost măsurată la 510 nm folosind un cititor de microplăci. TFC și TPC au fost exprimate ca miligrame de echivalenți de acid galic (mg GAE/gextract) și echivalenți de rutină per gram de extract (mg RE/g extract).

3.6.Determinarea activității antioxidante

Activitatea antioxidantă a patru fracții (DF, EAF, BF și RWF) și cinci subfracții (BF-A la E) au fost evaluate într-o combinație de teste de captare a radicalilor DPPH și ABTS și testul FRAP pe baza metodei descrise în studiul nostru anterior. [33]. Pentru testul DPPH, 50μL din soluția de probă （50,10{0,200ug/mL) s-au amestecat cu 0,2 ml soluție DPPH (0,1 mmol/ L) într-o placă de 96-godeuri și lăsat să se incubeze timp de 30 de minute. Absorbanța a fost măsurată la 517 nm cu un cititor de microplăci SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SUA). Pentru ABTS, 25 μL de soluție de probă (50, 100, 200 ug/mL) au fost adăugate la 0,2 mmol LABTSsolution (7 mmol). Amestecul a fost ținut la întuneric timp de 6 minute, apoi absorbanța a fost înregistrată la 734 nm. Pentru FRAP, 20 μL soluție de probă (50.100.200 ug/mL) a fost amestecată cu 0,18 mL de reactiv FRAP (7 mmol/l). L). După incubare timp de 10 minute la întuneric la 37 de grade, absorbanța a fost determinată la 593 nm. Toate testele au fost efectuate în trei exemplare. Rezultatele valorilor DPPH, ABTS și FRAP au fost exprimate ca echivalenți umol Trolox per gram de extract （μmol TE/g extract）.

3.7.Analiza HPLC

BF și compușii {{0}} au fost analizați pe un sistem HPLC Agilent 1260 cuplat cu un detector cu matrice de diode. Înainte de analiză, soluția proaspăt preparată a fost filtrată printr-o membrană de nailon de 0.45 um. Separarea a fost efectuată folosind o coloană Reprosil-Pur Basic C18 (5 μm, 4,6×250 mm, Germania) menținută la 35 de grade. Volumul de injectare a fost de 5,0 μL, debitul a fost de 1,0 ml/min, iar lungimea de undă de detecție a fost setată la 280 nm. Fazele mobile au fost apă acidulată cu acid formic 0,1% (faza A) și acetonitril (faza B), eluarea cu gradient liniar a fost efectuată după cum urmează:0-3 min, 20% B;3-10 min, 40 la sută B;10-15 min, 60 la sută B;15-20 min, 100 la sută B.

3.8. Cultura celulară și viabilitatea celulară

Celulele HepG2 ale cancerului de ficat uman au fost achiziționate de la Kunming Cell Bank (Kunming, China). Celulele HepG2 au fost crescute în DME suplimentat cu 1% penicilină-streptomicina și 10% ser fetal bovin într-o atmosferă de 5% CO,/95% aer la 37 de grade. Când celulele au fost incubate la o densitate adecvată (aproximativ 80%), au fost tratați cu controlul pozitiv (Vc) și compușii izolați pentru experimente ulterioare.

Viabilitatea celulară a fost determinată prin test MTT pentru evaluarea citotoxicității fiecărei probe [29]. Celulele la o densitate de 1×104 celule per godeu au fost însămânțate într-o placă de 96-godeuri și lăsate să se incubeze timp de 24 de ore. Fiecare compus (preparat ca patru doze de la 50 până la 200 ug/mL) a fost adăugat în fiecare godeu timp de 20 de ore. Apoi, celulele au fost tratate folosind soluție MTT cu o concentrație finală de 4 ore. Mediul cu MTT a fost îndepărtat și 200 S-au adăugat μL de DMSO pentru a dizolva formazanul.Absorbanța a fost înregistrată la 570 nm de un cititor de microplăci.Rezultatele au demonstrat că fiecare compus a fost netoxic pentru celulele HepG2 la concentrațiile testate.

3.9.Inhibarea generării ROS în celulele HepG2 induse de H2O2-

Celulele HepG2 induse de H,O au fost folosite pentru a determina efectul inhibitor asupra producției de ROS [3]. Celulele HepG2 (1,0×10 celule de grad pe godeu) au fost însămânțate într-o placă de 6-godeuri și co-cultivate cu compuși izolați cu 50 ug/mL și Vc（8ug/ ml). După incubare timp de 20 de ore, mediul a fost îndepărtat și s-au adăugat 2 μL de H, O (0,5 mM) în fiecare godeu pentru încă 6 ore. La sfârșitul experimentului, celulele au fost etichetate cu 2 μL DCFH-DA (10 mM) la întuneric la 37 de grade timp de 20 de minute. Absorbanța a fost înregistrată prin citometrie în flux (Guava easy yet 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, SUA).

3.10.Determinarea apoptozei celulare

Efectul protector al fiecărui compus asupra apoptozei induse de H2O2-a celulelor HepG2 a fost determinat utilizând un kit de apoptoză VFITC/PI anexină umană [38]. Celulele HepG2 au fost pre-tratate cu sau fără compuși izolați timp de 48 de ore. După incubare, 100 μL de tampon de legare au fost adăugate celulelor, iar celulele au reacţionat la întuneric cu 10 μL de anexină V-FITC timp de 5 minute la temperatura camerei şi cu 10 μL de iodură de propidiu (PI) într-o baie de gheaţă timp de 5 minute. min, succesiv. Apoptoza celulară a fost imediat analizată utilizând citometrie în flux.

3.11.Analiza statistică

Toate experimentele au fost efectuate în trei exemplare. Toate valorile sunt exprimate ca medie ± abatere standard (SD). Diferențele în interiorul și între grupuri au fost analizate folosind o analiză unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul Tukey. Diferența a fost considerată semnificativă statistic la p<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Concluzii

În acest studiu, diferite fracții din frunzele de A.fragrans au fost fracționate și au fost analizate TPC și TFC ale acestora. Sub izolarea ghidată de activitatea antioxidantă, compușii 1-7, inclusiv patru glicozide flavonoide (1-4) și două flavonoide (5 și 6), au fost izolați și identificați din frunzele de A. fragrans, ceea ce sugerează că această specie este bogată. în compușii flavonoizi. Compușii 2, 5 și 6 au arătat o activitate antioxidantă semnificativă în testele DPPH, de captare a radicalilor ABTS și FRAP. În plus, au prevenit vizibil deteriorarea stresului oxidativ printr-o scădere a conținutului de ROS și a apoptozei celulare în celulele HepG2 induse de H2O2-. Conform acestor rezultate, compușii polifenoli, în special flavonoidele, au o capacitate antioxidantă considerabilă datorită grupărilor hidroxil fenolice. Mai mult, compusul 2, care posedă restul glicozid și trei grupări hidroxil fenolice, a fost principalul component antioxidant cu cel mai mare conținut din frunzele de A. fragrans. Compusul 6 a prezentat cea mai bună activitate antioxidantă, care poate fi o contribuție majoră la activitatea A.fragrans. În plus, extractele de A.fragrans ar putea fi servite ca o sursă naturală fezabilă de antioxidanți în băuturile promițătoare pentru sănătate. Studiul asupra compușilor din frunzele de A. fragrans sugerează că aceștia ar putea fi serviți ca un ceai sănătos antioxidant pentru tratarea daunelor celulare induse de stresul oxidativ și ar putea servi ca suplimente nutritive aplicate în industria alimentară și a sănătății.

Acest articol este extras din Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules