Analiza substanțelor bioactive și a diferențelor de origine ale Cistanche Tuberosa din Xinjiang

Rezumat: Cele șase zone producătoare aleCistanche tubulosaîn deșertul Taklamakan au fost selectate ca obiect de cercetare, s-au determinat substanțele bioactive și activitățile antioxidante ale diferitelor părți (rădăcină, mijloc și vârf) și s-a efectuat analiză statistică multivariată. Rezultatele au arătat că diferențele dintre zonele de producție au avut efecte semnificative asupra substanțelor bioactive ale Cistanche tubulosa (polifenoli totali,

Conținutul de flavonoide totale, triterpene totale, polizaharide totale, proantocianidine totale, echinacozide și verbascozide) șiactivitate antioxidantătoate au avut un impact semnificativ și au existat diferențe semnificative însubstanțe bioactiveîn diferite părți.Cistanche tubulosadin diferite origini are puternicactivitate antioxidantăin vitro, rata IC50 a radicalilor liberi DPPH (IC50 DPPH) este mai mică de 7 mg/mL, iar IC50 a ABTS rata de captare a radicalilor liberi (IC50 ABTS) este mai mică de 3 mg/mL mL. Analiza corelației a arătat că IC50 DPPH de Cistanche tubulosa a fost semnificativ corelată negativ cu polifenolii totali șiechinacozidcontinutul; IC50 ABTS a fost extrem de semnificativ corelat negativ cu polifenoli totali, polizaharide totale, echinacozide șiverbascozidcontinuturi. Analiza componentelor principale a extras 3 componente principale, a căror rată de contribuție cumulativă a variației a fost de 80. 57 la sută; analiza cluster a împărțit probele în 3 grupuri. Ordinea punctajului cuprinzător al Cistanche tubulosa din diferite zone producătoare este Kashi Jiashi County (0. 445), Alar City (0. 313), Hotan Moyu County (0. 051), Turpan Shanshan County (-0. 057), județul Hotan Yutian (-0. 071), județul Bayingolengolengqiemo (-0. 680).

Cuvinte cheie: Cistanche tubulosa; substanțe bioactive; diferențe în zonele de producție; evaluare cuprinzătoare

Faceți clic pentru a afla mai multe Introducere Extract de Cistanche Tubulosa

Introducere

Cistanche tubulosa(Schrenk) Wight, cunoscut și sub numele de Red Willow Dayun[1], împreună cu Cistanche deserticola, a fost inclus în Farmacopeea Republicii Populare Chineze ca plantă sursă a Cistanche deserticola și a fost inclus în catalogul „Food and Medicine” Omolog” de către Comisia Națională de Sănătate în 2018[2].Cistanche tubulosaConține o varietate de substanțe biologic active, cum ar fi polifenoli, polizaharide, feniletanol glicozide, iridoide și glicozide ale acestora etc. Scăderea grăsimii din sânge [6], reglarea imunității [7], protecția nervilor [8], prevenirea osteoporozei [{{3] }}], laxativ [11-12], îmbunătățirea memoriei [13] și alte activități funcționale, are reputația de „ginseng din deșert”.

Cistanche tubulosaparazitează exclusiv pe rădăcinile plantelor Tamarix și este distribuit în Hetian, Kashgar, Aksu și în alte zone din jurul deșertului Taklamakan din Xinjiang, țara mea. Cercetările [14] au descoperit că diferite locații geografice au condiții diferite de lumină, precipitații, temperatură și sol, care vor avea diferite grade de impact asupra creșterii, dezvoltării și calității intrinseci a plantelor."Farmacopeea Republicii Populare Chineze" folosește în principal conținutul de echinacozidă și verbascozidă ca indice pentru evaluarea calității Cistanche tubuloside[2], dar substanțele bioactive din Cistanche tubatus sunt mai complicate. , flavonoidele totale, polizaharidele totale, triterpenele totale, proantocianidinele totale etc. au o gamă largă de efecte farmacologice. Prin urmare, metoda de evaluare a calității multi-index poate evalua mai cuprinzător calitatea materialelor medicinale Cistanche tubulosa [1]. Pe baza acestui fapt, această lucrare intenționează să se concentreze asupra deșertului Taklamakan din Xinjiang TakingCistanche tubulosaca obiect al cercetării, tipurile, conținuturile și activitățile antioxidante ale substanțelor bioactive înCistanche tubulosadin diferite zone producătoare au fost investigate, iar analiza de corelație, analiza componentelor principale și analiza sistematică de grupare au fost utilizate pentru o evaluare cuprinzătoare, pentru a clarifica diferitele zone producătoare din Xinjiang. Diferențele de calitate ale Cistanche tubulosa oferă suport teoretic și referință pentru consolidarea controlului calității Cistanche tubulosa și a produselor sale, precum și promovarea procesării profunde și dezvoltarea și utilizarea cuprinzătoare a Cistanche tubulosa.

1. 1. 3 Principalele instrumente și echipamente Liofilizare tip pilot3-6 m

Centrifugă, produsă de Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd.; Centrifugă TGL-20B, produsă de Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; Spectrofotometru UV-vizibil tip 756, produs de Shanghai Qinghua Technology Instrument Co., Ltd.; Cromatografia lichidă de înaltă eficiență LC-20AB a fost produsă de Shimadzu Corporation din Japonia; Cititorul de microplăci multifuncțional Synergy H1 a fost produs de Porton Instruments Co., Ltd.

1.2 Determinarea substanțelor biologic active

1. 2. 1 Determinarea conținutului total de polifenoli Consultați metoda lui FH Li și colab. [17]. Prepararea soluției de probă: Cântăriți 0,50 g probă, utilizați 70% (dacă nu este specificat, procentele din text se referă la fracția de volum) soluție de etanol ca solvent de extracție, iar raportul dintre solid și lichid este 1 :40 (g/mL, la fel, mai jos.), extras în dispozitiv ultrasonic la 60 de grade, 250 W timp de 40 de minute, răcit și centrifugat la 4000 r/min timp de 10 minute, colectat supernatantul și diluat la 50 ml, lăsat deoparte. Luați 1 ml de soluție de probă, adăugați 5 ml de soluție de folinol 10 procente, oscilați și agitați bine, după ce a stat timp de 15 minute, adăugați 4 ml de soluție de Na2CO3 7,5 procente, oscilați și agitați bine și lăsați-o să stea la întuneric timp de 20 de minute. După 1 minut, măsurați absorbanța acesteia (A765), iar rezultatul este exprimat în echivalent acid galic (mg GAE/g DW).

1. 2. 2 Determinarea conținutului total de flavonoide

Consultați metoda lui Zhang Wenye și colab. [18]. Luați 1 ml de soluție de probă (la fel ca 1.2.1) într-un balon cotat maro de 10 ml, adăugați 0,3 ml de soluție de NaNO2 cu o fracțiune de masă de 5%, oscilați și agitați bine, lăsați să stea timp de 15 minute, apoi adăugați 0,3 ml. Se face ml de soluție de Al(NO3)3 10% și 4 ml de soluție de NaOH 4%, se diluează la 10 ml cu soluție de etanol 50%, se agită.

Agitați bine și, după ce ați stat la întuneric timp de 20 de minute, măsurați absorbanța acesteia (A510), rezultatul

Fructele sunt exprimate în echivalenți de rutină (mg RE/g DW).

1. 2. 3 Determinarea conținutului total de triterpene

Consultați metoda lui He Ce și colab. [19]. Luați 0,4 ml de soluție de probă (la fel ca 1.2.1), evaporați-o până la uscare într-o baie de apă, apoi adăugați 0,4 ml de soluție de acid acetic vanilină-glaciar 1,5% și 1,6 ml de acid percloric, baie de apă la 70 de grade timp de 15 min, după răcire, se adaugă 5 ml de acetat de etil, după ce a stat timp de 10 min, se măsoară absorbanța acestuia (A560), iar rezultatul este exprimat în echivalent acid oleanolic (mg OAE /g DW).

1. 2. 4 Determinarea conținutului total de polizaharide

Consultați metoda lui Zhang Yadan și colab. [20]. Prepararea probei de lichid: 1.00 g de probă a fost cântărită, a fost folosită apă deionizată ca solvent de extracție, raportul dintre solid și lichid a fost de 1:30, extras la 60 de grade, dispozitiv ultrasonic de 250 W timp de 50 de minute, răcit și apoi extras în condiții de 4000 r/min. Se centrifughează timp de 10 min, se colectează supernatantul, se adaugă de 4 ori volumul soluției de etanol 95 la sută, se lasă să stea la 4 grade timp de 12 ore, apoi se centrifugă la 5000 r/min, se colectează se precipită și se spală cu acetonă, eter și nu. Se spală cu apă și etanol de două ori, se adaugă o cantitate adecvată de apă deionizată pentru a se redizolva, apoi se efectuează tratamentul de deproteinizare (metoda Sevage) și depigmentare (metoda cărbunelui activat) și se diluează la 10 ml pentru testarea. Luați 1 ml de soluție de probă, adăugați 0,6 ml de soluție de fenol 6 procente și 3 ml de H2SO4 concentrat în secvență, oscilați și agitați bine, puneți într-o baie de apă clocotită timp de 10 minute și, după răcire, măsurați absorbanța acesteia (A490) , iar rezultatul este exprimat ca echivalent de glucoză (mg DE/g DW).

1.2.5 Determinarea conținutului de proantocianidine

Consultați metoda lui Lu Xiao și colab. [21]. Prepararea soluției de probă: Cântăriți 0,50 g de probă, adăugați 80% etanol

Soluţia a fost utilizată ca solvent de extracţie cu un raport solid-lichid de 1:30. A fost extras într-un dispozitiv cu ultrasunete la 50 de grade și 250 W timp de 40 de minute. După răcire, a fost centrifugat la 4000 r/min timp de 10 min. Supernatantul a fost colectat și volumul a fost ajustat la 50 ml. ,de rezervă.

Luați 0,5 ml de soluție de probă, adăugați 3 ml de soluție de vanilină-metanol 4% și 1,5 ml de HCI concentrat în secvență și reacționați timp de 15 minute, apoi măsurați absorbanța acesteia (A500) și rezultatele sunt exprimate ca echivalent proantocianidină (mg PCE / g DW)exprimă.

1. 2. 6 Determinarea conținutului de echinacozidă și verbascozidă

Consultați metoda lui Xu Mingjun și colab. [22]. Prepararea probei de lichid: Se cântărește 1,00 g de probă, se utilizează 80 procente de soluție de etanol ca solvent de extracție, raportul dintre solid și lichid este de 1:30, se extrage la 60 de grade, 250 W ultrasonic dispozitivul timp de 40 de minute, după răcire, extrageți la 4000 r Centrifugați timp de 10 minute în condiții de 1/min, colectați supernatantul, diluați la 50 ml și lăsați deoparte. Coloana cromatografică a fost o coloană Alltima C18 (4,6 mm × 250 mm × 5 μm), faza mobilă a fost 0,4% acid formic apos (A)-acetonitril (B), temperatura coloanei a fost de 25 de grade, iar debitul a fost 1,00 ml/min, volumul de injectare a fost de 10 μL, iar lungimea de undă de detecție a fost de 330 nm. Analiza cantitativă a fost efectuată prin metoda standard externă.

1.2.7 Determinarea activității antioxidante in vitro Prepararea soluției de probă: se cântărește

1. 20 g de probe au fost extrase cu soluție de etanol 60% ca solvent de extracție, iar raportul dintre solid și lichid a fost 1:25. Au fost extrase într-un dispozitiv cu ultrasunete la 60 de grade și 250 W timp de 40 de minute. După răcire, au fost centrifugate la 4500 r/min timp de 15 min. , se colectează supernatantul; luați mai multe cantități adecvate de supernatant, diluați cu soluție de etanol 60 la sută până la o concentrație de lichid de probă de 1 mg/mL, 3 mg/mL, 5 mg/mL, 10 mg/mL, 20 mg/mL, 30 mg/mL, 40 mg /mL, pentru a fi testat.

1) Capacitatea de captare a radicalilor liberi DPPH. Consultați metoda Xu Chunping [23]. Luați 1{{10}} μL de soluție de probă, adăugați 250 μL de soluție de DPPH, amestecați bine, adăugați pe placa de microtitrare, păstrați departe de lumină la temperatura camerei timp de 25 de minute, utilizați soluție de etanol 60% ca martor, măsurați absorbanța acesteia (A517) și calculați DPPH conform următoarei formule Viteza de captare a radicalilor liberi. Rata de captare a radicalilor liberi DPPH=1-A1-A2A0( ) × 100 la sută În formula: A0 este absorbanța soluției de etanol de 60 la sută în loc de soluție de probă (martor de control); A1 este absorbanța soluției de probă amestecată cu soluția de DPPH; A2 este absorbția etanolului absolut în loc de soluție de DPPH.

2) Capacitatea de captare a radicalilor liberi ABTS. Consultați metoda lui Kong Yuting și colab. [24]. Soluția mamă a ABTS a fost o soluție mixtă de persulfat de potasiu (concentrație finală: 2,45 mmol/L) și ABTS (concentrație finală: 7 mmol/L) preparată în apă deionizată și a stat la 25 de grade timp de 12 ore în întuneric. Înainte de a utiliza soluția mamă ABTS, diluați-o cu apă deionizată, astfel încât absorbanța (A734) să fie 0,7{{{0}}±0,05, care este soluția de lucru ABTS. Luați 10 μL soluție de probă (1 ~ 40 mg/mL), adăugați-o pe placa de microtitrare, apoi adăugați 200 μL soluție de lucru ABTS, păstrați-o la întuneric timp de 30 de minute la temperatura camerei, utilizați soluție de etanol 60% ca martor. și măsurați-i A734 conform următoarei formule pentru a calcula rata de captare a radicalilor liberi ABTS. Rata de captare a radicalilor liberi ABTS=1-A′{1-A′2A0( ) × 100 la sută unde: A′1 este absorbanța după amestecarea soluției eșantionului cu soluția ABTS; A′2 este absorbanța apei deionizate în locul soluției ABTS.

1.3 Analiza datelor

Toate datele au fost măsurate în paralel de trei ori, iar rezultatele au fost exprimate ca (medie ± abatere standard). Origin 2019 a fost folosit pentru analiza componentelor principale și analiza sistematică a clusterelor, iar SPSS Statistics 26 a fost utilizat pentru analiza varianței. P<0. 05 indicated a significant difference.