Efectele glicozidelor Cistanche asupra funcției imune a șoarecilor model de îmbătrânire indusă de D-galactoză

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

〔Rezumat〕 Obiectiv:

Pentru a studia mecanismul imunologic al efectului anti-îmbătrânire al glicozidelor Cistanche asupra șoarecilor îmbătrâniți induși de D-galactoză.Metode: Metoda de încorporare a 3 H-TdR a fost utilizată pentru a determina capacitatea de transformare a limfocitelor, testul roșu neutru a fost utilizat pentru a determina funcția fagocitară a macrofagelor peritoneale de șoarece, metoda imunofluorescenței a fost utilizată pentru a detecta subseturile de limfocite și radioimunotestul a fost utilizat pentru a determina nivelul IL-2 din sângele periferic. , Metoda de eliberare a enzimei Trace NAG pentru a măsura activitatea celulelor NK.Rezultate: Funcția imună a șoarecilor îmbătrâniți indus de D-galactoză a fost semnificativ scăzută, ceea ce s-a manifestat în capacitatea de transformare a limfocitelor, conținutul de IL-2 din sângele periferic, celulele CD4 plus T și conținutul de celule CD8 plus T, un fagocitar. funcția macrofagelor peritoneale și activitatea celulelor NK. Scăderea (p<>cistanchea glicozideipoate îmbunătăți capacitatea de transformare a limfocitelor, conținutul de IL-2 din sângele periferic, o funcție fagocitară a macrofagelor peritoneale, activitatea celulelor NK, conținutul de celule CD4 plus T și CD8 plus T (P<0.05). 0.="" 05).="">Concluzie: cistanche de glicozid poate îmbunătăți în mod semnificativ funcția imună a șoarecilor îmbătrâniți indus de D-galactoză, poate restabili sau aborda starea șoarecilor tineri și are efectul de a întârzia îmbătrânirea.

[Cuvinte cheie]: glicozide totale de Cistanche; D-galactoză; model de îmbătrânire; imunitate

Cistanche de glicozid:anti îmbătrânire

Cistancheeste cel mai des utilizat medicament în formulele anti-îmbătrânire și longevitate. Glicozide totale de Cistanche (GCS) este termenul general pentru o clasă de glicozide feniletanoide din cistanche și este principala activitate biologică extrasă din cistanche producătoare de sare din Componenta Xinjiang de nord [1], GCS s-a dovedit a avea un anti-lipid efect de peroxidare [2], dar există puține rapoarte de cercetare cu privire la acestamecanism imunitar anti-îmbătrânire.

1. Materiale și Metode

1. 1 Gruparea animalelor și medicina

60 de șoareci Kunming, masculi și femele, în vârstă de 3 luni, cântărind 18-21 g, asigurați de Camera Animalelor a Institutului de Produse Biologice, Ministerul Sănătății. Șoarecii din fiecare grup au fost găzduiți în aceeași cameră în cuști separate și au fost liberi să mănânce și să bea. Animalele au fost împărțite aleatoriu în trei grupuri: grupul de control pentru tineri, grupul model în vârstă și grupul de administrare model, cu 20 de animale în fiecare grup. GCS a fost extras și identificat de către Departamentul de Fitochimie, Școala de Farmacie, Universitatea Jiamusi conform literaturii de specialitate [1].

Îmbunătățiți imunitateaSupliment de Cistanche

1.2 Metoda

Grupul tânăr a fost injectat subcutanat cu soluție salină normală în gât timp de 30 de zile în fiecare zi și a primit apă caldă timp de 15 zile din a 15-a zi. Șoarecilor din grupul model de îmbătrânire li s-a injectat D-galactoză (autoclavată) 100 mg/kg subcutanat pe partea din spate a gâtului în fiecare zi. Greutatea corporală timp de 30 de zile consecutive. În grupul de administrare model, D-galactoză 100 mg/kg greutate corporală a fost injectată subcutanat pe ceafa în fiecare zi și GCS 125 mg·kg-1·d{-1 a fost administrat în același timp. timp din a 15-a zi, iar administrarea a fost administrată continuu timp de 15 zile. Toate animalele au fost sacrificate în același timp în a 30-a zi și s-au determinat diverși indici de observație.

1. 2. 1 Experiment de transformare a limfocitelor

Suspensia de celule splinei de șoarece a fost ajustată la o concentrație de celule de 2 x 106 și Con A a fost utilizat ca stimul pentru a fi cultivat in vitro timp de 5 zile, iar capacitatea sa de transformare a fost testată prin metoda de încorporare a 3H-Td R. Rezultatele sunt exprimate ca indice de stimul SI (grup de stimulare SI=ConA/grup de control).

1. 2. 2 Funcția fagocitară a macrofagelor peritoneale de șoarece (test roșu neutru [3])

Colectați lichidul peritoneal de șoarecemacrofagesuspensie aseptic. După centrifugare, plutește precipitatul în mediul de cultură celulară. Utilizați un hemocitometru pentru a număra și ajusta concentrația celulară a soluției la 2×106. Puneți-l într-un incubator la 37 de grade timp de 2 ore. , Aruncați supernatantul și celulele neaderente. Luați macrofagele de perete și adăugați 0,1% roșu neutru salin fiziologic la 37 de grade și continuați cultivarea timp de 30 de minute, aruncați roșul neutru și spălați în mod repetat macrofagele cu PBS la 37 de grade, diluați cu 50% acid acetic și 50% etanol, setați 722 Spectrofotometru colorimetric la 540 nm lungime de undă, măsurată valoarea absorbanței A.

1. 2. 3 Detectarea subgrupurilor de limfocite

Luați 0,1 ml de 1×107/mlsuspensie de limfocite, se adaugă 10 ul de anticorpi monoclonali anti-șoarece CD3, CD4 și, respectiv, CD8, se amestecă bine, se incubează la 4 grade timp de 30 de minute, 1% FC S în PBS (0, 2 M, pH 7, 4) Spălare De 3 ori, detectare prin citometrie în flux: citometru cu laser (FACScan, compania SUA BD), laser cu argon, lungime de undă de excitație 488 nm, spectru de detecție FITC 480-630 nm, numărare 800/s celule, 200,000 celule in total. Rezultatele au fost analizate și înregistrate cu un computer HP340 și software-ul profesional LYSI SⅡ.

1. 2. 4 Determinarea IL-2 în sângele periferic prin radioimunotest

Luați 1 ml de sânge din globii oculari ai șoarecelui într-o eprubetă. După coagulare, serul este separat. În funcție de funcționarea kitului, numărul CPM este măsurat pe contor.

1. 2. 5 Activitatea celulelor NK

Luați sânge de ochi de șoarece în mod aseptic și adăugați heparină pentru anticoagulare. Consultați literatura [4] pentru detalii. 1.3 Prelucrare statistică Datele experimentale sunt exprimate ca x±s, procesate de software-ul S AS și analizate prin analiza varianței, testul F și testul t.

beneficiul cistanche: Îmbunătățirea imunității

2. rezultate

2.1 Efectele GCS asupra capacității de transformare a limfocitelor și a subgrupurilor de celule T din fiecare grup de șoareci sunt prezentate în Tabelul 1.

tabelul 1. Efectul GCS asupra capacității de transformare a limfocitelor și a subgrupurilor de celule T din fiecare grup de șoareci (n= 16,x±s)

Comparativ cu Ⅰ: 1) P<0.05, 2)="" p.="" 05;="" compared="" with="" ⅱ:="" 2)="" p=""><0.05; the="" same="" as="" the="" table="">

2.2 Efectele GC asupra funcției fagocitare, conținutului IL-2 și activității celulelor NK a macrofagelor peritoneale din fiecare grup de șoareci sunt prezentate în Tabelul 2.

Tabelul 2. Efectul GCS asupra funcției fagocitare, activității celulelor NK și conținutului IL-2 al macrofagelor peritoneale din fiecare grup de șoareci (n= 16,x±s)

3. Discuție

În acest experiment, funcția fagocitară a macrofagelor peritoneale și activitatea celulelor NK a șoarecilor model de îmbătrânire au fost reduse (P<0.05). gcs="" can="" increase="" the="" phagocytic="" function="" and="" nk="" cell="" activity="" of="" peritoneal="" macrophages="" in="" aging="" model="" mice=""><0.05), which="" is="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" from="" this,="" it="" can="" be="" inferred="" that="" gcs="" can="">îmbunătățește imunitatea celulară nespecifică a organismului și funcțiile de reglare imunitară, șisporește Anti-tumoral și anti-infectiea organismului îmbătrânit este una dintre modalitățile de a întârzia îmbătrânirea [4]. IL-2 este o citokină indispensabilă pentru proliferarea și diferențierea limfocitelor T și poate regla funcțiile limfocitelor, monocite-macrofagelor și celulelor NK. IL-2 poate promova proliferarea și diferențierea limfocitelor T, reglarearăspunsul imun, induc activitatea Tc și promovează producția de anticorpi și interferon- .Joacă un rol important în sistemul imunitar. În acest experiment, conținutul IL-2 al șoarecilor model în vârstă a scăzut (P<0.05). after="" gcs="" were="" given,="" the="" il-2="" content="" increased=""><0.05), which="" was="" close="" to="" the="" youth="" model="" group,="" indicating="" that="" gcs="" produced="" il="" by="" increasing="" t="" lymphocytes.="" -2,="" enhance="" the="" immune="" function="" of="" elderly="" mice="" and="" achieve="" the="" effect="" of="" delaying="" immune="" aging.="" the="" content="" of="" cd4+="" t="" cells="" and="" cd8+="" t="" cells="" decreased="" significantly="" with="" increasing="" age.="" the="" low="" t="" cell="" function="" was="" also="" manifested="" by="" the="" decline="" of="" specific="" antigen="" and="" mitogen="" con="" a,="" and="" the="" decline="" of="" the="" ability="" of="" t="" cells="" to="" divide="" repeatedly.="" in="" this="" experimental="" model,="" the="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4+="" t="" cell="" and="" cd8+="" t="" cell="" content="" of="" the="" mouse="" was="" reduced="" (p=""><0.05), and="" gcs="" increased="" the="" mouse="" lymphocyte="" transformation="" ability,="" cd4="" +="" t="" cell="" and="" cd8="" +="" t="" cell="" content="" (p=""><0.05). 05),="" close="" to="" the="" youth="" model="" group.="" it="" shows="" that="" gcs="" can="" make="" the="" body="" resist="" aging="" and="" tend="" to="" be="" younger="" by="" promoting="" the="" proliferation="" of="" lymphocytes="" and="">îmbunătățirea funcției imune celulare specifice a șoarecilor.

Supliment pentru îmbunătățirea imunității cistanche

4. Referințe

1. Du Niansheng, Wang Hong. Izolarea și identificarea glicozidelor fenoxietanol din Cistanche [J]. Cercetare și dezvoltare produse naturale, 1993; 5(4): 7-8.

2. Li Linlin, Wang Xiaowen, Wang Xuefei și colab. Anti-peroxidarea lipidică și efectele anti-radiații ale glicozidelor totale din Cistanche 〔J〕. Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1997; 22(6): 364-367.

3. Xu Shuyun, Bian Rulian. Metodologia experimentală a farmacologiei [M]. Ediția a II-a. Beijing: Editura Sănătății Poporului, 1994: 1221.

4. Liu Xiongbo, Liu Caiyu, Yang Xiuyun și colab. Detectarea activității celulelor NK prin metoda de eliberare a micro-NAG [J]. Journal of Clinical Laboratory Science, 1996; 14(2): 66-67.