Cistanche: Producția de oxid nitric indusă de echinacozide în celulele endoteliale: rolurile receptorilor de androgeni și ale căii PI3K-Akt

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, dANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU și XIN LIU

Introducere

CistancheHoffmg. Et Link este o plantă parazită perenă dintr-un gen din familia Orobanchaceae. HerbaCistanche, tulpina aCistanche deserticolaY c . MA șiCistanche tubuloasa(Schenk) R. Greutatea, au fost folosite ca agent tonic pentru a trata deficiența renală, impotența, leucoreea morbidă și constipația senilă (1), care se pot datora efectului său de reglare asemănător androgenilor sau hormonilor sexuali (2).Echinacozidul(EcH; c35H46O20;

greutate moleculară, 786,73; Fig. 1), este una dintre glicozidele feniletanoide (PhG) izolate din tulpinile de HerbaCistancheși prezintă multiple proprietăți biologice, inclusiv efecte antioxidante, antiîmbătrânire, antiinflamatoare, hepatoprotectoare și neuroprotectoare (3). Investigațiile farmacologice moderne au demonstrat că diverși constituenți ai HerbaCistanche, inclusiv EcH, actozidă, kancanoză, kankanozidă F și cistanozidă F, prezintă activitate vasorelaxantă (4).

Endoteliul este un regulator critic al sistemului vascular, iar oxidul nitric (NO) este un factor important de relaxare eliberat de celulele endoteliale. Prin difuzarea în celulele musculare netede, NO activează guanilat ciclaza, crește nivelurile de guanozin monofosfat ciclic (cGMP) și apoi activează protein kinazele dependente de cGMP (PKG) pentru a promova relaxarea mușchilor netezi (5). S-a demonstrat anterior că EcH la 350-400 µM acționează direct asupra mușchiului neted vascular și inhibă proliferarea indusă de hipoxie în celulele musculare netede ale arterei pulmonare de șobolan (6), în timp ce 30-300 µM EcH a provocat vasorelaxare acută în endoteliu. inelele intacte într-o manieră dependentă de concentrație și producția îmbunătățită de cGMP în mușchiul neted al corpului cavernos al inelelor aortice contractate de fenilefrină (7). Prin deschiderea canalelor NO-cGMP-PKG-BKca în celulele musculare netede, 100 sau 300 pM EcH a suprimat contracția indusă de noradrenalina în arterele pulmonare ale șobolanilor, în special în inelele denudate de endoteliu (8). Celulele endoteliale sunt regulatori cheie ai funcției cardiovasculare și, în mai multe cazuri, s-a constatat că relaxarea dependentă de endoteliu s-a datorat unei substanțe transferabile, precum NO, eliberată din endoteliu (9). Cu toate acestea, mecanismul molecular din amonte al producției de NO indus de EcH în celulele endoteliale vasculare necesită investigații suplimentare.

În endoteliul vascular, generarea de NO este mediată în primul rând de NO sintaza endotelială (eNOS). Mai multe grupuri au demonstrat că calea fosfatidilinozitol 3-kinazei (PI3K) activează serin treonin protein kinaza B (Akt), care determină fosforilarea directă a eNOS la serina 1177 (Ser1177) (10). Receptorul de androgeni (AR) este un membru al subfamiliei receptorilor nucleari s3, care modifică canonic expresia genelor. Este implicată localizarea AR în caveolele din membrana celulară

reglarea non-genomică a funcției celulelor endoteliale sau a expresiei genei prin declanșarea cascadei c-Src/PI3K/Akt, care are ca rezultat fosforilarea eNOS și producția de NO (11). În celulele endoteliale aortice umane, s-a raportat că testosteronul activează semnalizarea PI3K/Akt și induce rapid producția de NO datorită interacțiunii directe a AR și a subunității p85 a PI3K asupra sistemului cardiovascular (12). S-a raportat că EcH agravează simptomele legate de deficiența hormonală și își exercită efectele asemănătoare androgenilor datorită legării competitive de AR în loc de testosteron (2). Prin urmare, prezentul studiu a emis ipoteza că calea PI3K/Akt poate fi implicată în producția de NO prin fosforilarea eNOS dependentă de AR indusă de EcH. Scopul prezentului studiu a fost de a evalua următoarele efecte ale EcH: i) Inducerea producției de NO și fosforilarea eNOS; ii) implicarea AR în fosforilarea eNOS; și iii) activarea căii PI3K/Akt în celulele endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEcs), un model experimental bine cunoscut pentru studierea reglării funcțiilor celulelor endoteliale și a angiogenezei (13).

Materiale și metode

Produse chimice și reactivi.EcH (puritate, 92,5 la sută) a fost obținut de la Standardele Naționale de Referință pentru Medicamente din Institutul Național pentru Controlul Alimentelor și al Medicamentului. Anticorpi împotriva p-Akt (Ser473; cat. nr. ab8805), Akt (cat. nr. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. nr. ab184154) și eNOS (cat. nr. ab76198) au fost achiziționați de la Abcam. Inhibitorii nilutamidei și Icl 182780 au fost obținuți de la Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME a fost achiziționat de la Adamas-Beta, Ltd. și wortmannin a fost achiziționat de la Pribolab.

Celulă cultură și droguri tratament.HUVEcs au fost obținute de la Sciencell Research Laboratories Inc. și cultivate în mediu de celule endoteliale (EcM; Sciencell Research Laboratories) cu 5% (v/v) ser fetal bovin (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) și 1% celule endoteliale Supliment de creștere (ECGS) la 37˚C (5% CO2 și 95% umiditate) (14). La atingerea confluenței, celulele au fost digerate cu tripsină și placate în EcM cu 1% FBS și 1% EcGS. Pentru toate experimentele, HUVEcs au fost placate la o concentrație de 1x104/ml și crescute până la confluență. Înainte de tratamentul cu EcH sau alți stimulatori, celulele au fost incubate în EcM fără roșu de fenol fără FBS și EcGS timp de 6 ore pentru a induce

oprirea creșterii. În experimentele inhibitoare, HUVEcs au fost pre-incubați cu diferiți antagoniști sau inhibitori, inclusiv 10 µM nilutamidă, 10 µM IcI 182780, 0,5 mM L-NAME sau 5 µM wortmannin, timp de 30 de minute, cu sau fără ECH, la 37˚C. În toate grupurile, inclusiv controlul, dMSO a fost utilizat ca solvent la concentrații egale de 0,001 la sută.

Măsurarea intracelular NU producere.

Schimbările relative ale concentrației de NO citosol în HUVEcs au fost monitorizate utilizând sonda fluorescentă pentru NO DAF-FM (Cayman Chemical Company), așa cum s-a raportat anterior (12). Pe scurt, celulele au fost încărcate cu 5 uM diacetat DAF-FM timp de 20 de minute la 37 °C într-o placă de microtitrare neagră și clătite de mai multe ori cu PBS (pH 7,4). Fluorescența a fost determinată la lungimi de undă de excitare și de emisie de 495 și, respectiv, 515 nm, folosind un cititor de microplăci fluorescente (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) și un microscop inversat compact (Nikon eclipse Ts2R; Nikon Corporation).

occidental pata analiză.După cum sa raportat anterior (15), monostraturile de celule confluente au fost spălate de două ori în PBS rece cu gheață și lizate cu tampon RIPA (P0013d; Beyotime Institute of Biotechnology). Concentrația proteinei din supernatant a fost măsurată folosind metoda de analiză a acidului bicinconinic (16). Ulterior, 30 ug de proteină au fost încărcate pe bandă, separate folosind geluri de poliacrilamidă 10% și transferate pe membrane de difluorură de poliviniliden. Membranele au fost blocate cu lapte degresat 5% timp de 1 oră la 25°C. După incubarea cu anticorpi monoclonali împotriva Akt (1:1, diluție000), p-Akt (diluție 1:500), eNOS (diluție 1:2,000) sau p-eNOS (1 :1,000 diluție) la 4˚C peste noapte, membranele au fost spălate cu TBST (conținând 0,1 procente Tween{-20) de 4 ori timp de ~15 min per spălare la 25˚C. Ulterior, membranele au fost incubate cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (diluție 1:5,000; anticorp anti-șoarece, nr. cat. A0216, sau anticorp anti-iepure, nr. cat. A0208, Institutul Beyotime de biotehnologie) timp de 1 oră la 25°C și detectat folosind un kit de chemiluminiscență îmbunătățit (cat. nr. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Intensitățile benzilor au fost cuantificate folosind software-ul de analiză a gelului Image J, versiunea 1.8.0_112 (National Institutes of Health).

Mic interferând (si) ARN pregătire și transfecție.ARN-urile dublu catenare lungi au fost sintetizate de ARNm-ul țintă al receptorului AR și al estrogenului (ER) cu secvențele prezentate în tabelul I. Condițiile de deprimare a siRNA au implicat transfectarea HUVEC-urilor la o confluență de 70 procente menținută în non-antimicrobiene. mediu de cultură în vase de cultură acoperite cu colagen de 60 mm. Transfecția de 5 nM AR-siARN sau 10 nM ER -siRNA cu reactiv Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) a fost efectuată separat, conform protocoalelor producătorului. Eficiența transfecției a fost evaluată prin analiza cantitativă PcR cu transcripție inversă (RT-qPcR), așa cum sa raportat anterior (17). Condițiile de termociclare au fost următoarele: 10 min la 95˚C; 40 de cicluri de 95°C timp de 5 sec și 60°C timp de 1 min și o curbă de topire la 95°C timp de 15 sec, 60°C timp de 1 min și 95°C timp de 15 sec; au fost efectuate trei replici biologice independente pentru fiecare probă. Experimentele ulterioare au fost efectuate la 48 de ore după transfecție. Perechile de primer au fost proiectate folosind software-ul Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) cu următoarele secvențe: AR înainte, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' și invers, 5'-GAcTTGTAGAGAGACAGGGTAGA-3'; ER înainte, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' și înapoi, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; și GAPdH înainte, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' și invers, 5'-GGGGGAATcATATTGGAAcATGT{-3'.

Statistic analiză.Toate datele sunt prezentate ca medie ± abatere standard. Comparațiile statistice între grupuri au fost efectuate utilizând testul Kruskal-Wallis sau ANOVA în două sensuri cu testul post-hoc al lui Tukey pentru comparații multiple. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Rezultate

ECH induce NU producție și eNOSfosforilarea.După cum se arată în Fig. 2A și B, 1 pM ECH a crescut semnificativ producția intracelulară de NO în HUVEcs în comparație cu celulele de control negativ, în timp ce efectul stimulator al EcH a fost atenuat la nivelul de control prin pretratament cu L-NAME. Pentru a obține concentrația optimă, fosforilarea eNOS a fost testată la 60 de minute după tratamentul cu EcH la concentrații

de {{0}}, 0.01, 0.1, 1 și 10 µM. Rezultatele au arătat că EcH la concentrații de 0,01-10 µM poate induce în mod semnificativ fosforilarea eNOS la Ser 1177 într-o manieră dependentă de concentrație, fosforilarea maximă a eNOS observată la inducerea EcH de 10 µM (Fig. 2c și d). În plus, fosforilarea eNOS la Ser1177 a fost examinată prin analiză Western blot la 0, 5, 15, 30, 60 și 120 min după incubare cu 1 pM EcH. Sa observat că fosforilarea eNOS a fost declanșată rapid de EcH la 5 minute și a continuat să crească până la 30 de minute de incubație (Fig. 2E și F). Ulterior, în ciuda tratamentului cu EcH, magnitudinea relativă a fosforilării eNOS a rămas stabilă de la 30 de minute înainte; prin urmare, EcH nu a afectat expresia totală a eNOS (Fig. 2c și E).

AR mediază indusă de ECH NU producție și eNOSefectele de interferență ale AR-siRNA-1 și ER -siRNA-2 au fost cele mai de succes în inhibarea expresiei AR și ER în HUVEcs în studiul de față (Fig. 3). Ulterior, un antagonist pentru analiza inhibării funcției AR și ARNsi pentru analiza pierderii funcției AR au fost aplicate pentru a evalua implicarea AR în activarea eNOS indusă de EcH și producția de NO. După cum se arată în Fig. 4A, 1 µM ECH a crescut semnificativ producția de NO în HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH activează cel PI3K/Akt calea.În studiul de față, fosforilarea Akt la Ser473 a fost testată la 60 min după incubarea EcH la concentrații de 0, 0.01, 0.1 , 1 şi 10 uM. Rezultatele au indicat că EcH (0,01-10 µM) poate induce în mod semnificativ fosforilarea Akt. Nivelurile relative de expresie ale p-Akt au atins vârful la 1 și 10 pM de tratament cu EcH (Fig. 5A și B). În plus, fosforilarea Akt a fost examinată prin analiză Western blot la 0, 5, 15, 30, 60 și 120 min după adăugarea a 1 pM EcH la culturile HUVEc. După cum se arată în Fig. 5c și d, EcH a crescut rapid fosforilarea Akt după 5 minute de incubare, iar nivelul maxim de proteină al p-Akt a fost observat la 60 de minute. Prin contrast, EcH nu a afectat expresia totală a Akt (Fig. 5A și c). Mai mult, pentru a investiga efectul potențial al căii PI3K asupra fosforilării eNOS, HUVEcs au fost pre-tratate cu inhibitorul PI3K wortmannin înainte de aplicarea EcH. Sa constatat că wortmannina reduce producția de NO indusă de EcH la nivelurile de bază (Fig. 5E). Un fenomen similar a fost observat utilizând microscopia cu fluorescență la examinarea fluorescenței DAF-FM indusă de EcH (Fig. 5F). În plus, wortmannina poate avea capacitatea de a elimina fosforilarea rapidă a eNOS în HUVEcs (Fig. 5G și H). Rezultatele menționate mai sus sugerează că EcH poate activa fosforilarea eNOS și producția de NO prin calea PI3K/Akt.

Discuţie

EcH este un compus natural izolat din HerbaCistanche, cu diverse proprietăți farmacologice. Sa demonstrat anterior că EcH a exercitat un efect de relaxare vasculară dependent de endoteliu prin deschiderea canalelor NO-cGMP-PKG-BKca în celulele musculare netede ale vaselor de sânge (7,8). Descoperirile actuale oferă dovezi că ECH a exercitat activarea dependentă de AR a eNOS pentru a induce producția de NO cu implicarea căii de semnalizare PI3K/Akt în celulele endoteliale vasculare.

Fiind stratul cel mai interior al peretelui vasului, endoteliul poate simți și răspunde rapid la modificările fluxului sanguin, rezultând, la rândul său, transmiterea semnalului către celulele musculare netede subiacente pentru a regla tonusul vascular (18). S-a raportat pe scară largă că există mai mulți compuși vasodilatatori derivați din endoteliu, cu cea mai prototipică substanță.fiind NO, format din izoforma endotelială a eNOS, care are ca rezultat fosforilare (19). În condiții normale, eNOS rămâne inactiv atunci când este legat de caveolină și este activat cu următoarea succesiune de evenimente în endoteliul.celule: i) eNOS se disociază de caveolin-1 și se asociază cu ca2 plus /caM; ii) proteina de șoc termic (HSP)90 promovează eNOSdimerizarea si favorizeaza o formatiune sterica pentru recrutarea Akt; și iii) calcineurina defosforilează Thr495 pentru a întări starea de activare (20). În studiul de față, producția de NO a fost semnificativ crescută în HUVEC tratate cu 1 µM ECH. Acest fenomen a fost similar cu rezultatele anterioare, în care EcH a crescut eliberarea de NO și a stimulat sinteza cGMP în inelele aortice toracice de șobolan (7). În plus, două situsuri de fosforilare, Ser1177 și Thr495, par a fi deosebit de importante pentru reglarea activității eNOS (20), iar studiul de față a arătat că EcH a indus fosforilarea acută a eNOS la Ser1177 într-o manieră dependentă de concentrație. În plus, stimulii asociați cu efectele asupra nivelurilor proteinei eNOS determină în principal stabilitatea ARNm eNOS și, dacă stimulul este menținut pentru o perioadă mai lungă de timp, transcripția ARNm eNOS are loc prin protein kinaza activată de mitogen și factorul nuclear κB (20). Luate împreună, aceste observații indică faptul că activarea eNOS la Ser1177 este responsabilă pentru sinteza NO indusă de EcH.

Mai mult, un număr tot mai mare de studii au demonstrat că AR este exprimată în celulele endoteliale într-un număr de țesuturi umane, ceea ce sugerează un rol potențial pentru androgeni și analogii lor, care acționează prin procese mediate de AR, în modularea endoteliului uman. homeostazia celulară (21). În calea non-clasică PI3K/Akt, AR poate activa PI3K prin interacțiunea directă cu subunitatea de reglementare PI3K p85 (22). Prezentul studiu a demonstrat că un antagonist AR sau siARN AR a diminuat producția de NO și fosforilarea eNOS indusă de EcH în HUVEcs. S-a raportat anterior că estrogenii induc fosforilarea eNOS și stimulează producția de NO prin activarea clasică a ER în celulele endoteliale (23), iar administrarea de ECH îmbunătățește semnificativ expresia ER în uter (24). Cu toate acestea, în studiul de față, efectul AR a fost mai proeminent în comparație cu cel al ER asupra activării eNOS induse de EcH și producției de NO. În plus, s-a observat că EcH a provocat producția acută de NO în câteva minute prin activarea eNOS implicată în AR în HUVEcs, ceea ce este în concordanță cu natura non-genomică a răspunsului în celulele endoteliale. AR este asociat cu proteine ​​de schelă, inclusiv HSP90, HSP70 și kinaza Src, în citoplasmă și poate fi transportat la membrană din complexul AR în 5 minute de la tratamentul cu testosteron (23). Pe baza strategiei de „pescuit țintă”, HSP90 a fost identificat ca ținta cuplată cu PhG, ceea ce a indicat că EcH poate facilita disocierea AR de proteinele de schelă (25). Un alt studiu a sugerat că, în hipotalamus, EcH se poate combina cu buzunarul AR la aminoacizii Met-894 și Val{-713 și inhibă transportul AR citoplasmatic la nucleu (26). Cu toate acestea, mecanismul de bază prin care EcH mediază translocarea AR citoplasmatică în membrană necesită investigații suplimentare. Prin urmare, sunt necesare cercetări suplimentare pentru a elucida mecanismul prin care EcH realizează activarea eNOS dependentă de AR și modul în care aceasta poate fi asociată cu legarea la HSP90 în celulele endoteliale vasculare.

Calea PI3K/Akt este una dintre cele mai importante cascade de semnalizare, a cărei activare este indusă prin producerea de fosfatidilinozitol-3,4,5-trifosfat pentru a lega domeniul de omologie a pleckstrinului N-terminal al Ser/ Thr kinaza Akt. Acest lucru facilitează recrutarea Akt pe membrana plasmatică (27). Calea PI3K/Akt poate juca un rol important în controlul relaxării dependente de NO indusă de EcH.

Prezentul studiu a arătat că producția de NO indusă de EcH a fost redusă semnificativ atunci când celulele au fost incubate cu wortmannin inhibitor PI3K. Un raport anterior a demonstrat că 15 mg/kg EcH a activat calea de semnalizare PI3K/Akt în celulele măduvei osoase suprimate cu 5-fluorouracil (28). În studiul de față, inhibitorii PI3K au scăzut semnificativ fosforilarea eNOS indusă de EcH la Ser1177. Mai mult, activitatea Akt a fost predominant reglată de căi de reglare din amonte, în special fosforilarea dependentă de PI3K la Ser473 (20). În studiul de față, EcH a indus fosforilarea Akt la Ser473 într-o manieră dependentă de doză; în mod similar, un studiu anterior a demonstrat că 5, 10 sau 20 µM EcH au exercitat un efect cardioprotector împotriva tratamentului anoxiei/reperfuziei într-o manieră dependentă de doză prin reglarea potențială a p-Akt și SLc8A3 (29). Reglarea transcripțională a genei Akt rămâne în mare parte necunoscută (30); prin urmare, studiul de față s-a concentrat pe efectele de reglementare post-transcripționale ale EcH asupra Akt. Luând în considerare constatările menționate mai sus, s-a dedus că aplicarea EcH la HUVEcs poate duce la activarea căii PI3K/Akt, care fosforilează eNOS și, ulterior, crește producția de NO.

În concluzie, EcH este un produs natural care este izolat în principal din HerbaCistanche.Mecanismul potențial care stă la baza producției de NO indusă de EcH în celulele endoteliale poate include următoarele (Fig. 6): i) EcH acționează ca un ligand funcțional al AR care este localizat în caveolele din membrana celulară; ii) PI3K se leagă de domeniul hidrofob al Akt la Ser473 și facilitează recrutarea Akt la membrana celulară; iii) recrutarea cascadelor PI3K/Akt declanșează fosforilarea eNOS dependentă de AR; și iv) generarea de NO este mediată de eNOS în celulele endoteliale. Observația că EcH induce producția de NO prin fosforilarea dependentă de AR a eNOS cu implicarea căii PI3K/Akt poate contribui la înțelegerea în continuare a efectelor vasorelaxante ale EcH. În plus, EcH care vizează căile NO derivate din endoteliu se poate datora unor efecte non-genomice. Prin urmare, prezentul studiu poate ajuta la elucidarea mecanismelor prin care EcH își exercită efectele farmacologice pentru a preveni bolile cardiovasculare.

Mulțumiri

Nu se aplică.

Finanțarea

Prezentul studiu a fost susținut de Fundația Națională de Științe Naturale din China (grant nr. 81503333).

Disponibilitate de date și materiale

Seturile de date generate și analizate în timpul prezentului studiu sunt disponibile de la autorul corespunzător, la cerere rezonabilă.

autorilor contributii

LG și XL au conceput și proiectat experimentele. dL și YZ au efectuat experimentele. WZ și JG au analizat datele. LG a redactat manuscrisul. XL a revizuit și a editat manuscrisul. Toți autorii au citit și au aprobat manuscrisul final.

1202 GUet al: ECHINACOZID INDUCE PRODUCȚIA DE OXID NITRIC PRIN CALEA PI3K/AKT DEPENDENTĂ DE AR

Etică aprobare și consimţământ la participa

Nu se aplică.

Rabdator consimţământ pentru publicare

Nu se aplică.

Concurente interese

Autorii declară că nu au interese concurente.

Referințe

1. comisia Farmacopeea Chineză:CistancheHerba. În: Farmacopeea Republicii Populare Chineze 1. chin. Med. Sci. Press, Beijing, pp 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X și Zhang X: Echinacoside șiCistanche tubuloasa(Schenk)R. Wight ameliorează leziunile testiculare și ale spermei induse de bisfenol A la șobolani prin enzimele steroidogene reglate pe axa gonadelor. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B și Ma X: Echinacoside, un produs natural inestimabil în tratamentul tulburărilor neurologice și de altă natură. Molecule 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S și Muraoka O: oligoglicozide feniletanoide și oligozaharuri acilate cu activitate vasorelaxantă dinCistanche tubuloasa. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S și Murad F: Oxidul nitric activează guanilat ciclaza și crește nivelurile de guanozină 3':5'-monofosfat ciclic în diferite preparate de țesut. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y și Ge RL: Efectul antiproliferativ al echinacozidei asupra celulelor musculare netede ale arterei pulmonare de șobolan sub hipoxie. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ și Tu PF: Echinacozidul provoacă relaxare dependentă de endoteliu în inelele aortice de șobolan printr-o cale NO-cGMP. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y și Ge RL: Echinacozidul induce vasorelaxarea arterei pulmonare de șobolan prin deschiderea NO-cGMP-PKG- canalele BKca și reducerea nivelurilor intracelulare de ca2 plus. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y și Higashi Y: Evaluarea vasodilatației independente de endoteliu: de la metodologie la perspective clinice. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J și derivat pe celulele endoteliale ale venei ombilicale umane împotriva leziunilor induse de stres oxidativ: Implicarea căilor de semnalizare PI3k/Akt/eNOS/NO. Biomed Pharmacother 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y și Okabe T: Src kinaza mediază activarea non-genomică dependentă de receptorul de androgeni a cascadei de semnalizare care duce la sintaza endotelială de oxid nitric . Biochem Bioph Res commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y și Okabe T: Activarea dependentă de receptorul androgenic a sintetazei de oxid nitric endotelial în celulele endoteliale vasculare: Rolul fosfatidilinozitol {{3} calea }kinazei/Akt.Endocrinologie 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F și Reno F: proliferarea și migrarea dependentă de NO induse de vitamina d în HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X și Xu X: Supraexprimarea proteinei de decuplare 2 inhibă apoptoza ridicată indusă de glucoză a celulelor endoteliale ale venei ombilicale umane. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z și Bing S: Icariin întârzie senescența celulară endotelială indusă de homocisteină implicând activarea căii de semnalizare PI3K/AKT-eNOS. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ și Klenk dc: Măsurarea proteinei folosind acid bicinchoninic. Anal Biochem 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H și Liu X: Biosinteza triterpenoidului și răspunsul transcripțional provocat de oxidul nitric în fermentarea scufundatăGanoderma lucidum. Process Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY și Gutterman dd: Hiperpolarizare derivată din endoteliu și vasodilatație coronariană: roluri diverse și integrate ale acizilor epoxieicosatrienoici, peroxid de hidrogen și joncțiuni gap. Microcirculație 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK și Gutterman dd: comunicarea este cheia: Mecanisme de semnalizare intercelulară în vasodilatație. J cardiovasc Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B și Debret R: Sensarea micromediului endoteliului care duce la vasodilatație mediată de oxid nitric: o revizuire a semnalelor nervoase și biomecanice. Oxid nitric 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS și Smith GJ: Receptor de androgen în celulele endoteliale umane. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H și Gui YT: Acțiunea non-genomică a androgenilor este mediată de fosforilarea rapidă și reglarea traficului de receptori de androgeni. Cell Physiol Biochem 43: 223-236,2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP și Ghedini Pc: Activarea căii PI3K/Akt mediată de receptorii de estrogen este responsabilă pentru indusă de estrone activarea vasculară a semnalizării cGMP. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c, Yang Z și Li P: Activitatea antiosteoporotică a echinacozidei la șobolani ovariectomizați. Phytomedicine 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y și Tu PF: Identificarea țintelor farmacologice și analiza eficacității glicozidelor feniletanoide dincistanciHerba se bazează pe strategia de „pescuit țintă”. chin Tradit Herbal drugs 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM și Zhang X: Echinacozidul crește cantitatea de spermă la șobolani prin țintirea receptorului androgen hipotalamic. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J și Woodgett JR: Protein kinaza B (c-Akt): Un mediator multifuncțional al activării fosfatidilinozitol 3-kinazei. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y și Qian J: Echinacozidul îmbunătățește funcția hematopoietică la șoarecii cu mielosupresie indusă de 5-FU. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W și Zhou H: Efectele protectoare ale echinacozidei împotriva leziunii anoxiei/reperfuziei în celulele H9c2 prin reglarea p-AKT și SLc8A3. Biomed Pharmacother 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P și Su Y: Rolul critic al Akt în funcția cardiovasculară. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.