Cistanche Tubulosa induce reactive specii de oxigen mediate de apoptoza de celule primare și metastatice cancer de colon uman

Afnan Saleh Al-Menhali, Safia Ali Jameela, Aishah A. Latiff, Mohamed A. Elrayess, Mohammed Alsayrafi, Morana Jaganjac

Anti Doping Lab Qatar, Toxicologie și Multifuncțională, Doha, Qatar.

Anti Doping Lab Qatar, Life Science Research, Doha, Qatar.

Contact:joanna.jia@wecistanche.com

ABSTRACT

Cancerul de colon este al treilea cel mai frecvent cancer la nivel mondial. Terapiile convenționale au arătat moderată eficacitatea cu efecte adverse severe, prin urmare, există o nevoie urgentă de alternative mai sigure. În acest studiu,Cistanchetubulosa, un nume local Thanoon, a fost considerat ca o potențială strategie fitoterapeutică datorită cunoscut potențial terapeutic ridicat în medicina tradițională și abundență largă în regiunea Orientului Mijlociu. Compușii bioactivi au fost extrași din pulbereCistanchetubulosași testate pentru anticancerigenul lor proprietăți împotriva a patru punctecancerlinii celulare, inclusiv două derivate din tumora primară (CaCo2 și HCT116) și două derivate din situl metastatic (LoVo și SW620). EfectulCistanchetubulosaprivind inducerea apoptozei și homeostazia celulară redox a fost, de asemenea, investigată.Cistanchetubulosaa prezentat o concentrare și inhibarea dependentă de timp a proliferării tuturor liniilor celulare canceroase testate cu mai mult de 60% la 72 de ore de tratament cu 1 mg/ml de extract brut. Inhibarea proliferării a fost marcată de inducerea apoptozei, intracelulare producția de specii reactive de oxigen și superoxidi mitocondriali. Aceste date sugerează că Cistanche tubulosa este un candidat promițător pentru terapia aditivă anti-colon a cancerului. Acesta este primul studiu care arată împotriva cancerului bioactivitatea Cistanche tubulosa împotriva celulelor canceroase de colon.

Ingredientul activ alCistancheare unanti-cancerefect

Abrevieri:

7-AAD, 7-amino-actinomicină D;

CTE,Cistancheextract de tubuloză;

EMEM, Eagle's Minimum Mediu esențial;

FBS, ser fetal bovin; DCF, 2,7-diclorfluoresceină;

DCFH-DA, diacetat de 2,7-diclorodihydrofluorescein;

DMEM, Dulbecco's Modified Eagle's Medium;

DMSO dimetilsulfoxid; MTT, 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazoliu;

PE, Ficoeritrină; RFU, unități de fluorescență relativă;

ROS, specie reactivă de oxigen

INTRODUCERE

Cancerul colorectal este unul dintre cele mai frecvente tipuri de cancer la nivel mondial (Brenner et al., 2014), iar incidența sa este constantă în creștere cu aproximativ 2,4 milioane de cazuri în 2035, ca urmare a dieta modernă și stilul de viață, împreună cu activitatea fizică redusă. Eforturile actuale nu sunt suficiente pentru a combate epidemia actuală de cancer colorectal și, prin urmare, sunt necesare abordări noi pentru o prevenire și un tratament eficace, inclusiv modificări ale stilului de viață în combinație cu intervenții alternative mai sigure, cum ar fi Fitoterapeuticele (Weidner et al., 2015). Fitoterapie, utilizarea plante medicinale pentru tratarea bolilor, a fost o parte inevitabilă a istoria omenirii antice. Plante medicinale au fost mult timp utilizate ca surse alternative de tratament pentru cancere, reprezentând mai mult decât șaizeci la sută din agenții anticancerigeni utilizați în medicina convențională (Balunas și Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). Unele dintre cele mai cunoscute exemple includ extracte din Catharanthus roseus G. Don. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) și Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg și Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Mai multe extracte din plante și fitochimicale s-au dovedit a exercita efecte antitumorale în colorectal cancer atribuit inducției producției de specii reactive de oxigen (ROS) și apoptozei asociate celulelor canceroase ca fiind cazul extracte din Melissa officinalis (Weidner et al., 2015).

Cistanchedeserticola are ca efect inhibareacelulăapoptoza

Printre candidații fitoterapeuți,Cistanchetubulosa, o plantă deșert parazitară Orobanchaceae (Jiang et al., 2009) care este s-a demonstrat că distribuite pe scară largă în regiunile aride și semi-aride din Africa, Asia și regiunea mediteraneană au o valoare valoroasă proprietăți medicinale.Cistanchetubulosa a fost pe scară largă utilizate în medicina tradițională și a sugerat să aibă efecte curative în deficiență renală, leucoree morbidă, metroragie, femeie infertilitate, și constipație senilă (Jiang et al., 2009). În plus față de utilizările sale medicinale tradiționale, proprietăți medicinale importante ale Cistanche Tubulosa au fost intens studiate în timpul ultimului deceniu inclusiv vasorelaxant (Yoshikawa et al., 2006), hepatoprotectoare (Morikawa et al, 2010), anti-hiperglicemiant și efecte hipolipidemice (Xiong et al., 2013). Cistanche Tubulosawas este, de asemenea, sugerat ca un potențiator puternic al sistemului imunitar, promotor al formării osoase și un anti-îmbătrânire și anti-oboseală agent (Xu et al., 2014). În plus, extractul de Cistanche tubulosa a fost demonstrat pentru a bloca depunerea amiloid în Modelul bolii Alzheimer (Wu et al., 2015). În ciuda diferitelor sale utilizări terapeutice, efectul Cistanche Tubulosa ca un potențial agentul anticancerigen nu a fost încă studiat.

În lucrarea de față, am investigat efectul anticancerigen alCistancheTubulosa pe două primare și două linii celulare metastatice de cancer de colon și mecanismele potențiale care stau la baza acestui efect.

MATERIALE ȘI METODE

Colectarea și prepararea extractului de plante

Eșantioanele deCistanchetubulosa au fost colectate din zonele deșertice din Qatar în cursul anului 2014 și autenticitatea plantei a fost confirmat de un herpetolog. Mostrele de vouchere sunt arhivate în Departamentul de Toxicologie și Polivalentă din cadrul ADLQ. Probele de plante uscate la soare au fost măcinate cu Retsch Knife Mill Grindomix GM300 în pulbere fină. Douăzeci de grame de pulbere au fost extrase cu apă ultrapură de 200 ml peste noapte la 37 °C pe un agitator rotativ la ora 200. BrutCistancheextracte de tubuloză (CTE) au fost centrifugate timp de 30 de minute la 8000 rpm pentru a pelete compuși nesolubile, supernatant colectate, și liofilizate folosind Labconco Freezone 6 plus freeze uscător. Extractul uscat a fost reconstituit în Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, SIGMA, Germania) la o concentrație de 20 mg/ml și sterilă filtrat printr-un filtru cu membrană de 0,2 microni.

Linii celulare și întreținerea celulelor

Liniile celulare de carcinom colon uman CaCo2, SW620 și LoVo au fost obținute de la Cell Lines Service (CLS, Eppelheim, Germania), în timp ce linia de celule HCT 116 a fost un cadou bun de la Științe biologice și de mediu, Departamentul din Qatar Universitate. CaCo2 și HCT11 au fost derivate din site-ul primar de carcinom de colon în timp ce SW620 și LoVo au fost derivate din site-ul metastatic. Celulele SW620, HCT116 și LoVo au fost cultivate și menținute în DME Mediu în timp ce celulele CaCo2 au fost menținute în eagle's Minimum Essential Medium (EMEM, SIGMA, Germania). Celulele au fost cultivate ca monostrat cultivat la 37 °C în mediul respectiv, suplimentat cu 10% bovine fetale ser (FBS, SIGMA, Germania) și 1% penicilină/streptomicină (SIGMA, Germania) într-o atmosferă umidificată care conține 5% bioxid de carbon.

Testul de viabilitate celulară

3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazoliu (MTT) testul a fost utilizat pentru a evalua activitatea citotoxică a CTE în mod similar, așa cum s-a descris mai devreme (Jaganjac et al., 2010). Însămânțarea densitatea celulelor CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo cultivate în Plăcile cu 96 de puțuri erau de 104celule pe fântână. Celulele au fost placate în mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS cu 24 de ore înainte tratament. După 24 de ore, mediul a fost îndepărtat și celulele au fost tratate cu 0, 0,25, 0,5, 1 și 2 mg/ml de CTE pentru 24, 48 și 72 ore la 37°C într-o atmosferă umidificată care conține 5% CO2. La tratamentul cu CTE, mediul a fost îndepărtat și 40 μL de Soluția MTT (0,5 mg/ml) a fost adăugată la fiecare godeu.

După 3 ore de incubație, soluția MTT a fost îndepărtată, produs formazan dizolvat în dimetilsulfoxid (DMSO, SIGMA, Germania), iar absorbanța a fost măsurată la 590 nm cu un cititor de microplăci (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Elveția).

Testul apoptozei

Apoptoza în celulele CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo a fost detectat cu ajutorul PE Anexain V Apoptoza Kit de detectare I cu 7-Amino-Actinomicina D (7-AAD) ca colorant vital (Becton Dickinson International, Belgia) conform producătorului instruire. Pe scurt, celulele au fost însămânțate în plăci cu 24 de godeuri la o densitate de 5×104celule/fântână într-un mediu respectiv, suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore înainte de adăugarea de CTE (0, 0,5 sau 1 mg/ml). După 24 de incubări CTE, celulele au fost recoltate, spălate de două ori cu soluție salină tamponată cu fosfat rece și colorată cu Ficoeritrină (PE) Anexain V și 7-AAD timp de 15 minute în cameră temperatura în întuneric. Celulele colorate au fost analizate în decurs de 1 oră prin citometrie de flux folosind FACS. Citometrul de debit Aria III și FACSDiva software (Becton Dickinson) la un debit scăzut cu un minim 104celule. Tratamentul celulelor timp de 4 ore cu 6 μM camptothecin (SIGMA) a fost folosit ca un control pozitiv pentru Test.

Producția intracelulară de SRO

Producția intracelulară de SRO a fost examinată cu ajutorul diacetatului de 2,7-diclordihidrofluoresceină (DCFH-DA, SIGMA, Germania). DCFH-DA este o sondă nefluorescentă, care este oxidată cu SRO intracelular la compusul fluorescent 2,7-diclorfluoresceină (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011). Testul DCFHDA a fost efectuat în mod similar, așa cum am descris anterior (Cindric et al, 2013; Poljak-Blazi et al., 2011). Pe scurt, însămânțarea densitatea celulelor CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo cultivate în 96-bine plăci negre a fost de 104celule pe fântână. Celulele au fost placate în mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore. Înainte ca celulele de tratament să fie incubate cu 10 μM DCFH-DA la 37°C timp de 30 de minute în 5% CO2/ 95% aer. Celulele au fost apoi spălate și tratate cu 0, 0,5 și 1 mg/ml de CTE în mediu w/o fenol roșu. Formarea SRO intracelulară a fost monitorizată continuu pe parcursul a 25 de ore la 37 °C și 5% CO2 folosind un cititor de microplăci cu fluorescență superioară și modul de control al gazului (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Elveția). Intensitatea fluorescenței a fost măsurată cu o lungime de undă de excitație de 500 nm și emisie detecție la 529 nm. Unitățile arbitrare, unitățile de fluorescență relativă (RFU), s-au bazat direct pe intensitatea fluorescenței.

Generarea superoxidului mitocondrial

Capacitatea CTE de a induce generarea de superoxid de mitocondriile au fost estimate cu ajutorul sondei roșii MitoSOX (Life Technologies) și Hoechst, permeabile la celule, orientate spre mitocondrii 33342 pentru colorare nucleară (Life Technologies). CaCo2, HCT116, SW620 și celulele LoVo au fost însămânțate în plăci cu 96 de godeuri la o densitate de 104celule pe godeu într-un mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore. Celulele au fost apoi încărcate cu 4 μM de MitoSOX și 2 μM din Hoechst 33342 timp de 20 de minute, colorantul în exces spălat și puțuri tratate cu 0, 0,5 și 1 mg/ml de CTE timp de 24 de ore la 37 °C și 5% CO2. Intensitatea fluorescenței a fost măsurată cu un lungimea de undă de excitație de 510 nm și detectarea emisiilor la 580 nm pentru MitoSOX și o lungime de undă de excitație de 350 nm și detectarea emisiilor la 461 nm pentru Hoechst 33342 utilizând o microplată cititor cu fluorescență de top (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Elveția).

Analiza statistică

Statisticile descriptive au fost prezentate ca medie +/− SD. Importanța diferențelor dintre grupuri a fost evaluată utilizând student t-test și Chi-pătrat de testare. Când mai mult de două grupuri au fost comparate, am folosit ANOVA unilaterale cu post corespunzătoare testarea hoc. Spss 11.01 pentru Mircosoft Windows a fost utilizat. Diferențele cu P mai mic de 0,05 au fost luate în considerare statistic important.

CistancheKAPanti-cancerproprietăți și îmbunătățiriimunitate

REZULTATELE

Efectul CTE asupra proliferării colonului uman liniile celulare canceroase sunt prezentate în figura 1. Toate concentrațiile de CTE testate au arătat un puternic efect inhibitor asupra liniei celulare CaCo2 într-o modul de concentrare și de depinde de timp (Figura 1A). Șaptezeci și două de ore de tratament CTE au inhibat creșterea celulelor CaCo2 cu mai mult de 60% în comparație cu controlul (p< 0.05="" for="" all="" concentrations).="" the="" significant="" impact="" of="" cte="" treatment="" on="" hct116="" cell="" growth="" was="" also="" detected="" at="" all-time="" points="" at="" the="" two="" highest="" concentrations="" (1="" mg/ml="" and="" 2="" mg/ml),="" reaching="" a="" greater="" than="" 70%="" reduction="" at="" a="" latter="" concentration="" (figure="" 1b,="" p="">< 0.05).="" although="" the="" two="" lower="" cte="" concentrations="" (0.25="" and="" 0.5="" mg/ml)="" significantly="" reduced="" hct116="" growth="" of="" cells="" after="" 24="" hours=""><0.05), they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" 72="" hours="" treatment="" compared="" to="" control="" (p="">0.05). Inhibarea proliferării cu CTE dependentă de timp și concentrare a fost în continuare confirmate în celulele LoVo cu mai mult de 60% la cel mai înalt nivel concentrație (p< 0.05)="" (figure="" 1c),="" and="" all="" four="" cte="" concentrations="" tested="" reduced="" the="" growth="" of="" sw620="" cells="" after="" 48="" hours="" (figure="" 1d,="" p="">< 0.05="" for="" all).="" after="" 72="" hours="" of="" treatment="" the="" same="" effect="" was="" observed="" only="" for="" the="" two="" highest="" concentrations="" (p="">< 0.05)="" while="" 0.25="" and="" 0.5="" mg/ml="" concentrations="" showed="" no="" significant="" effect="" compared="" to="" control="" (p="">0.05). Impactul de 0,5 și 1 mg/ml tratament CTE la inducerea apoptozei a fost în continuare testate în toate cele patru linii celulare (Figura 2). Creșterea numărului de celule în apoptoza precoce a fost detectată în HCT116 și LoVo după 24 ore de tratament cu 0,5 mg/ml (p<0.05, figure="" 2b="" and="" 2c)="" and="" in="" all="" cell="" lines="" at="" 1="" mg/ml=""><0.05). a="" significant="" increase="" in="" necrotic="" or="" late="" apoptotic="" cell="" number="" was="" further="" observed="" in="" caco2="" and="" sw620="" cell="" lines=""><0.05, figure="" 2a="" and="" 2d).="" the="" ability="" of="" cte="" to="" induce="" intracellular="" ros="" production="" is="" demonstrated="" in="" figure="" 3.="" three="" hours="" following="" cte="" treatment="" there="" was="" a="" strong="" increase="" in="" intracellular="" ros="" production="" in="" all="" cell="" lines=""><0.05). the="" intracellular="" ros="" production="" increased="" progressively="" throughout="" the="" 25="" hours="" of="" treatment="" in="" a="" time="" and="" concentration-dependent="" manner.="" furthermore,="" staining="" of="" cells="" with="" mitochondria-targeted="" probe="" revealed="" a="" strong="" impact="" of="" cte="" on="" mitochondrial="" superoxide="" production="" in="" a="" concentration-dependent="" manner="" (figure="" 4).="" the="" highest="" increase="" in="" superoxide="" production="" by="" mitochondria="" was="" observed="" in="" hct116="" (69%,="" figure="" 4b)="" and="" lovo="" cells="" (82%,="" figure="" 4c)="" following="" 24="" hours="" of="" treatment="" with="" 1="" mg/ml="" of="">

DISCUȚIE

Deși studiile anterioare au raportat numeroase proprietățile medicinale aleCistanchetubulosa, acesta este primul raport a efectului său anti-proliferativ în celulele maligne. Cistanchetubulosa compuși bioactivi extrași cu apă, un foarte polar solvent, a arătat bioactivitate anticancerigenă puternică. Am făcut-o anterior a comparat eficiențaCistanchetubulosa solubilizată în apă împotriva altor solvenți, cum ar fi metanolul și acetatul de etil, dar extractele de apă au prezentat cele mai promițătoare activități anticancerigene (date neactualizate).

Am demonstrat capacitatea de CTE la 1 mg/ml și 2 mg/ml pentru a inhiba 60% din creșterea atât primar și linii celulare metastatice de cancer de colon, dezvăluind un potențial important rolul Cistanche tubulosa ca un tratament pentru cancerul de colon. Comparativ la celulele normale, celulele canceroase sunt, în general, caracterizate printr-o tulburări în homeostazia redox și o strategie comună de terapii anti-cancer actuale este de a crește stresul oxidativ celular (Yang et al, 2013). Deși nivelurile fiziologic scăzute de ROS au un rol important ca molecule de semnalizare, ROS excesiv producția poate contribui la instabilitatea și malignitatea cancerului (Liou și Storz, 2010). Paradoxal, acest dezechilibru în celulare homeostazia redox face celulele canceroase mai vulnerabile la moartea celulelor induse de ROS (Jaganjac et al., 2008; Nogueira și Hay, 2013). Efectul anti-proliferativ al CTE raportat în acest studiu pot fi mediate prin diverse mecanisme extra- și intracelulare de compuși cunoscuți și necunoscuți din extract, direcționare mai multe căi care joacă roluri esențiale în apoptoza. Spre diferenția între diferite moduri de moarte celulară, noi a investigat mecanismul potențial responsabil pentru observat Citotoxicitate indusă de CTE.

Datele noastre indică faptul că CTE crește ROS intracelular producția și, în consecință, moartea celulară indusă de ROS. Statul Redox a celulei joacă, de asemenea, un rol crucial în reglarea apoptozei, iar lanțul de transport al electronilor mitocondriali este unul dintre locurile majore ale generarea celulară ROS (Trachootham et al., 2008). În plus, ROS intracelular ar putea provoca apoptoza celulară prin ambele căi dependente de mitocondrii și independente (Sinha et al., 2013). Într-adevăr, datele Curții indică, de asemenea, că CTE induse externalizarea fosfatidilserinei, un efect comun în apoptoza, atât în liniile celulare primare, cât și în cele metastatice ale cancerului, sugerând că mecanismul morții induse de CTE este mediat de apoptoza mai degrabă decât necroza. Activarea apoptozei în celulele canceroase este o strategia de corecție și multe medicamente împotriva cancerului pot exercita apoptotice efecte în celulele canceroase.

Compuși sau extracte cu activități pro-apoptotice în celulele canceroase sunt, prin urmare, potențial utile în medicamente împotriva cancerului cercetare (Wong, 2011). Pentru a determina dacă CTE efectul pro-apoptotic indus este mediat de induse de mitocondriile induse de Mecanismul ROS, am măsurat producția de superoxid folosind sonda fluorescentă orientată spre mitocondrii în celulele tratate cu CTE. Noastră datele arată clar că CTE stimulează superoxidul mitocondrial producție care sugerează că activitatea anticancerigenă a Cistanche tubulosa este cel puțin în parte mediată prin ROS indus de mitocondrii mecanism.

CistancheKAPanti-cancerșificatprotecțieEfecte

CONCLUZIILE

În concluzie, datele noastre sugerează că extractul de apă din planta deșert cistanche tubulosa poate reprezenta o promițătoare candidat pentru o abordare anticancerigenă în combinație cu alte terapii convenționale pentru prevenirea și tratamentul colonului cancer. De asemenea, demonstrăm că toxicitatea extractului de plante împotriva celulelor canceroase este mediată de creșterea ROS intracelulare producție și, cel puțin parțial, dependentă de mitocondrial apoptoza. Studii suplimentare sunt în curs de desfășurare pentru a izola și caracteriza constituenții biologic activi individuali responsabili de activitatea anticancerigenă.

Mai multe de cercetare este necesar pentru a evalua utilizarea potențială a acest extract ca agent chemopreventiv eficient și pentru a să înțeleagă mecanismele de acțiune asupra celulelor canceroase de colon la nivel molecular. Alte studii preclinice și clinice sunt, de asemenea, necesare pentru a confirma efectele benefice observate asupra sănătății ale Cistanche tubulosa pentru prevenirea cancerului.

MULŢUMIRILOR

Sprijin financiar și sponsorizare

Acest studiu a fost susținut de Laboratorul Anti-Doping Qatar.

Conflictul de interese:

Autorii nu declară niciun conflict de interese.

REFERINŢE

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Descoperirea de droguri de la medicamente plante. Viața Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Cancer colorectal. Lancet 2014;383,1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadine atenuează afectarea unui model de barieră intestinală cauzată de 4-hidroxinonenal. Toxicol In Vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newman DJ. Plantele ca sursă de împotriva cancerului Agenţi. J Ethnopharmacol. 2005;100:72-9.da

Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Produse naturale în terapia anticancerigenă. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9.

Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. Inducerea promotorului CMV-1 prin 4-hidroxi-2-nominal în celulele renale embrionare umane. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Implicarea granulocitelor în regresia spontană a lui Walker 256 carcinom. Cancer Lett. 2008;260:180-6.

Jiang Y, Tu PF. Analiza constituenților chimici în Cistanche specie. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.Liou GY, Storz P. Specii reactive de oxigen în cancer. Libera Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Feniletanoid acilat oligoglicozide cu activitate hepatoprotectoare din planta deșertică Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Căi moleculare: oxigen reactiv homeostazia speciilor în celulele canceroase și implicațiile pentru terapia cancerului. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grace M. Efectul ionilor ferici asupra formării speciilor reactive de oxigen, cresterea liniilor celulare de cancer de col uterin si expresia oncogene E6/E7. Toxicol In Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. In vitro efecte citotoxice și pro-apoptotice ale extractelor de apă din Tulbaghia violacea frunze și bulbi. J Ethnopharmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Stresul oxidativ: căi dependente de mitocondrii și independente de mitocondrii ale apoptoza. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80.

Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Redox reglarea supraviețuirii celulelor. Antioxid Redox semnal. 2008;10:1343-74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Extractul de Melissa officinalis induce apoptoza și inhibă proliferarea în celulele cancerului de colon prin formarea de reactive specii de oxigen. Fitomedicină. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptoza în cancer: de la patogeneză la tratament. J Exp Clin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu S-H, Chou F-P, Chyau C-C, Chen J-H, Tu S-F, Lin H-H. Efectele anti-canceroase ale wasabia japonica extract în hep3B cancer de ficat celule prin acumularea de ROS, deteriorarea ADN-ului și apoptoza mediată de p73. J Funct Foods. 2015;14:445-55.

Xiong W-T, Gu L, Wang C, Sun H-X, Liu X. Efecte antihiperglicemice și hipolipidemice ale Cistanche tubulosa în tipul 2 diabetici DB / DB șoareci. J Ethnopharmacol. 2013;150:935-45

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Caracteristicile macro-amprentei infraroșii în mai multe etape ale extractelor de etanol din diferite specii de Cistanche din China, combinate cu amprenta HPLC. J Mol Struct. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Reactive specii de oxigen în biologia cancerului și terapia anticancerigenă. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Oligoglicozide feniletanoide și oligosugari acilați cu activitate vasorelaxantă din Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.