Cistanche Tubulosa induce apoptoza mediată de specii de oxigen reactiv a celulelor canceroase de colon umane primare și metastatice

ABSTRACT

Cancerul de colon este al treilea cel mai frecvent cancer la nivel mondial. Terapiile convenționale au dovedit o eficacitate moderată cu efecte adverse severe, prin urmare este nevoie urgentă de alternative mai sigure. În acest studiu, Cistanche tubulosa, numele local Thanoon, a fost considerată o potențială strategie fitoterapeutică din cauza potențialului său terapeutic ridicat cunoscut în medicina tradițională și a abundenței mari în regiunea Orientului Mijlociu. Compușii bioactivi au fost extrași din pulbere de Cistanche tubulosa și testați pentru proprietățile lor anticancerigene împotriva a patru linii celulare de cancer de colon, inclusiv două derivate din tumora primară (CaCo2 și HCT116) și două derivate din situsul metastatic (LoVo și SW620).

De asemenea, a fost investigat efectul Cistanche tubulosa asupra inducerii apoptozei și a homeostazei redox celulare. Cistanche tubulosa a prezentat o concentrație și o inhibare dependentă de timp a proliferării tuturor liniilor de celule canceroase testate cu mai mult de 60 la sută la 72 de ore de tratament cu 1 mg/mL de extract brut. Inhibarea proliferării a fost marcată de inducerea apoptozei, producția intracelulară de specii reactive de oxigen și superoxizi mitocondriali. Aceste date sugerează că Cistanche tubulosa este un candidat promițător pentru terapia aditivă împotriva cancerului de colon. Acesta este primul studiu care arată bioactivitatea anticanceroasă a Cistanche tubulosa împotriva celulelor canceroase de colon.

Faceți clic pe terapia medicinală a produsului extract de plante de cistanche

Abrevieri:

7-AAD, 7-Amino-actinomicină D; CTE, extract de Cistanche tubulosa; EMEM, Eagle's Minimum Essential Medium; FBS, ser fetal bovin; DCF, 2,7-diclorofluoresceină; DCFH-DA, diacetat de 2,7- diclorodihidrofluoresceină; DMEM, Mediul Vultur modificat al lui Dulbecco; DMSO, dimetilsulfoxid; MTT, 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazoliu; PE, Ficoeritrina; RFU, unități de fluorescență relativă; ROS, specii reactive de oxigen

INTRODUCERE

Cancerul colorectal este unul dintre cele mai frecvente tipuri de cancer la nivel mondial (Brenner et al., 2014), iar incidența acestuia este în continuă creștere, cu aproximativ 2,4 milioane de cazuri în 2035, datorită dietei și stilului de viață modern, împreună cu activitatea fizică redusă. Eforturile actuale nu sunt suficiente pentru a combate epidemia actuală de cancer colorectal și, prin urmare, sunt necesare abordări noi pentru prevenirea și tratamentul eficient, inclusiv schimbări în stilul de viață în combinație cu intervenții alternative mai sigure, cum ar fi fitoterapie (Weidner et al., 2015). Fitoterapia, utilizarea plantelor medicinale pentru tratarea bolilor, a fost o parte inevitabilă a istoriei umane antice. Plantele medicinale au fost utilizate de mult timp ca surse alternative de tratament pentru cancer, reprezentând mai mult de șaizeci la sută din agenții anticancer utilizați în medicina convențională (Balunas și Kinghorn, 2005; Saibu și colab., 2015). Unele dintre cele mai cunoscute exemple includ extracte din Catharanthus roseus G. Don. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) și Camptotheca acuminate Decne (Nyssaceae) (Cragg și Newman, 2005; da Rocha și colab., 2001). S-a demonstrat că mai multe extracte din plante și fitochimice exercită efecte antitumorale în cancerul colorectal, atribuite inducerii producției de specii reactive de oxigen (ROS) și apoptozei asociate a celulelor canceroase, ca în cazul extractelor din Melissa officinalis (Weidner et al., 2015).

Printre candidații fitoterapeutici, s-a demonstrat că Cistanche tubulosa, o plantă parazită a deșertului Orobanchaceae (Jiang et al., 2009), care este distribuită pe scară largă în regiunile aride și semi-aride din Africa, Asia și regiunea mediteraneană, s-a dovedit a avea proprietăți medicinale valoroase. Cistanche tubulosa a fost utilizată pe scară largă în medicina tradițională și se sugerează că are efecte curative în deficiența renală, leucoreea morbidă, metroragia, infertilitatea feminină și constipația senilă (Jiang și colab., 2009). Pe lângă utilizările sale medicinale tradiționale, importante medicamente proprietățile Cistanche Tubulosa au fost intens studiate în ultimul deceniu, inclusiv efecte vasorelaxante (Yoshikawa și colab., 2006), hepatoprotectoare (Morikawa și colab., 2010), efecte anti-hiperglicemiante și hipolipipidemice (Xiong și colab., 2013). Cistanche Tubulosa a fost, de asemenea, sugerată ca un potent amplificator al sistemului imunitar, un promotor al formării osoase și un agent anti-îmbătrânire și anti-oboseală (Xu et al., 2014). În plus, s-a demonstrat că extractul de Cistanche tubulosa blochează depunerea de amiloid în modelul bolii Alzheimer (Wu et al., 2015). În ciuda diferitelor sale utilizări terapeutice, efectul Cistanche Tubulosa ca potențial agent anticancerigen nu a fost încă studiat.

În lucrarea de față, am investigat efectul anticancer al Cistanche Tubulosa asupra a două linii celulare de cancer de colon primar și două metastatice și mecanismele potențiale care stau la baza acestui efect.

MATERIALE ȘI METODE

Colectarea și prepararea extractului de plantă, mostrele de Cistanche tubulosa au fost colectate dintr-o zonă deșertică din Qatar în 2014, iar autenticitatea plantei a fost confirmată de un erborolog. Probele de voucher sunt arhivate în Departamentul de Toxicologie și Polivalent de la ADLQ. Probele de plante uscate au fost măcinate cu Retsch Knife Mill Grindomix GM300 în pulbere fină. Douăzeci de grame de pulbere au fost extrase cu 200 ml apă ultrapură peste noapte la 37 de grade pe un agitator rotativ la 200 rpm. Extractele brute de Cistanche tubulosa (CTE) au fost centrifugate timp de 30 de minute la 8000 rpm pentru a peletifica compușii nesolubili, supernatantul a fost colectat și liofilizat folosind Labconco Freezone 6 plus Liofilizator. Extractul uscat a fost reconstituit în Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, SIGMA, Germania) la o concentrație de 20 mg/mL și filtrat steril printr-un filtru cu membrană de 0,2-micron.

Liniile celulare și întreținerea celulelor

Liniile celulare de carcinom de colon uman CaCo2, SW620 și LoVo au fost obținute de la Cell Lines Service (CLS, Eppelheim, Germania), în timp ce linia celulară HCT 116 a fost un cadou bun de la Departamentul de Științe Biologice și de Mediu de la Universitatea din Qatar. CaCo2 și HCT11 au fost derivate din situsul primar al carcinomului de colon, în timp ce SW620 și LoVo au fost derivate din situsul metastatic. Celulele SW620, HCT116 și LoVo au fost cultivate și menținute în mediu DME, în timp ce celulele CaCo2 au fost menținute în mediu esențial minim Eagle (EMEM, SIGMA, Germania). Celulele au fost crescute ca monostrat cultivate la 37 de grade în mediul respectiv suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS, SIGMA, Germania) și 1% penicilină/streptomicina (SIGMA, Germania) într-o atmosferă umidificată care conține 5% dioxid de carbon.

Test de viabilitate celulară

Pentru a evalua activitatea citotoxică a CTE în mod similar cu cel descris mai devreme (Jaganjac și colab., 2010). Densitatea de însămânțare a celulelor CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo cultivate în plăci de 96-godeuri a fost de 104 celule per godeu. Celulele au fost placate în mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS cu 24 de ore înainte de tratament. După 24 de ore, mediul a fost îndepărtat și celulele au fost tratate cu 0, 0,25, 0,5, 1 și 2 mg/mL de CTE timp de 24, 48 și 72 de ore la 37 de grade într-o atmosferă umidificată care conține 5% CO2. După tratamentul CTE, mediul a fost îndepărtat și s-au adăugat 40 pl de soluție MTT (0,5 mg/mL) în fiecare godeu.

După 3 ore de incubare, soluția MTT a fost îndepărtată, produsul formazan a fost dizolvat în dimetilsulfoxid (DMSO, SIGMA, Germania), iar absorbanța a fost măsurată la 590 nm cu un cititor de microplăci (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Elveția) .

Testul de apoptoză

Apoptoza în celulele CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo a fost detectată utilizând Kitul I de detectare a apoptozei PE Annexin V cu 7-Amino-Actinomicina D ({7-AAD) ca colorant vital (Becton Dickinson International, Belgia) conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, celulele au fost însămânțate în 24-plăci de godeuri la o densitate de 5×104 celule/godeu într-un mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore înainte de adăugarea de CTE (0, 0,5 sau 1 mg/ml). După incubarea de 24 CTE, celulele au fost recoltate, spălate de două ori cu soluție salină tamponată cu fosfat și colorate cu ficoeritrină (PE) anexină V și 7-AAD timp de 15 minute la temperatura camerei în întuneric. Celulele colorate au fost analizate în decurs de 1 oră prin citometrie în flux utilizând FACS. Citometru de flux Aria III și software-ul FACSDiva (Becton Dickinson) la un debit scăzut, cu un minim de 104 celule. Tratamentul celulelor timp de 4 ore cu 6 uM camptotecină (SIGMA) a fost utilizat ca martor pozitiv pentru test.

Producția intracelulară de ROS

Producția intracelulară de ROS a fost examinată folosind diacetat de 2,7- diclorodihidrofluoresceină (DCFH-DA, SIGMA, Germania). DCFH-DA este o sondă nefluorescentă, care este oxidată cu ROS intracelular la compusul fluorescent 2, 7- diclorofluoresceină (DCF) (Poljak-Blazi și colab., 2011). Testul DCFHDA a fost efectuat în mod similar așa cum am descris anterior (Cindric și colab., 2013; Poljak-Blazi și colab., 2011). Pe scurt, densitatea de însămânțare a celulelor CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo cultivate în plăci negre 96-godeuri a fost de 104 celule per godeu. Celulele au fost placate în mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore.

Înainte de tratament, celulele au fost incubate cu 10 pM DCFH-DA la 37 de grade timp de 30 de minute în 5% CO2 / 95% aer. Celulele au fost apoi spălate șitratat cu {{0}}, 0,5 și 1 mg/mL de CTE în mediu fără roșu fenol. Formarea intracelulară de ROS a fost monitorizată continuu pe parcursul a 25 de ore la 37 de grade și 5% CO2 folosind un cititor de microplăci cu fluorescență de top și modul de control al gazului (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Elveția). Intensitatea fluorescenței a fost măsurată cu o lungime de undă de excitație de 500 nm și detectarea emisiei la 529 nm. Unitățile arbitrare, unități de fluorescență relativă (RFU), s-au bazat direct pe intensitatea fluorescenței

Generarea de superoxid mitocondrial

Capacitatea CTE de a induce generarea de superoxid de către mitocondrii a fost estimată utilizând o sondă MitoSOX Red permeabilă la mitocondrii (Life Technologies) și Hoechst 33342 pentru colorarea nucleară (Life Technologies). Celulele CaCo2, HCT116, SW620 și LoVo au fost însămânțate în plăci de 96-godeuri la o densitate de 104 celule per godeu într-un mediu respectiv suplimentat cu 10% FBS timp de 24 de ore . Celulele au fost apoi încărcate cu 4 uM de MitoSOX și 2 uM de Hoechst 33342 timp de 20 de minute, excesul de colorant a fost spălat și godeurile au fost tratate cu 0, 0,5 și 1 mg/mL de CTE timp de 24 de ore la 37 de grade și 5 procente de CO2. Intensitatea fluorescenței a fost măsurată cu o lungime de undă de excitație de 510 nm și detecție de emisie la 580 nm pentru MitoSOX și o lungime de undă de excitare de 350 nm și detecție de emisie la 461 nm pentru Hoechst 33342 utilizând un cititor de microplăci cu fluorescență de vârf PRO, Teecan. AG, Elveția)

analize statistice

Statisticile descriptive au fost prezentate ca medie plus /- SD. Semnificația diferențelor dintre grupuri a fost evaluată folosind testul t Student și testul Chi pătrat. Când au fost comparate mai mult de două grupuri, am folosit ANOVA unilateral cu testare post-hoc adecvată. A fost folosit SPSS 11.01 pentru Microsoft Windows. Diferențele cu P mai mic de 0,05 au fost considerate semnificative statistic.

REZULTATE

Efectul CTE asupra proliferării liniilor celulare de cancer de colon uman este prezentat în Figura 1. Toate concentrațiile de CTE testate au arătat un efect inhibitor puternic asupra liniei celulare CaCo2 într-o manieră dependentă de concentrație și timp (Figura 1A). Șaptezeci și două de ore de tratament CTE au inhibat creșterea celulelor CaCo2 cu mai mult de 60 procente în comparație cu martor (p <0,05 pentru toate concentrațiile). Impactul semnificativ al tratamentului cu CTE asupra creșterii celulelor HCT116 a fost de asemenea detectat în toate momentele la cele mai mari două concentrații (1 mg/mL și 2 mg/mL), atingând o reducere mai mare de 70% la o ultimă concentrație (Figura 1B, p. < 0,05).

Deși cele două concentrații mai mici de CTE ({{0}},25 și 0,5 mg/mL) au redus semnificativ creșterea celulelor HCT116 după 24 de ore (p.<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{{10}}5). Inhibarea proliferării cu CTE, dependentă de timp și de concentrație, a fost confirmată în continuare în celulele LoVo cu mai mult de 60 procente la cea mai mare concentrație (p <0.05) (Figura 1C) , iar toate cele patru concentrații de CTE testate au redus creșterea celulelor SW620 după 48 de ore (Figura 1D, p < 0.05 pentru toate). După 72 de ore de tratament, același efect a fost observat doar pentru cele mai mari două concentrații (p < 0,05), în timp ce concentrațiile de 0,25 și 0,5 mg/mL nu au arătat niciun efect semnificativ în comparație cu controlul (p > 0,05). Impactul tratamentului CTE cu 0,5 și 1 mg/mL asupra inducerii apoptozei a fost testat în continuare în toate cele patru linii celulare (Figura 2). Un număr crescut de celule în apoptoza timpurie a fost detectat în HCT116 și LoVo după 24 de ore de tratament cu 0,5 mg/mL (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

Capacitatea CTE de a induce producția intracelulară de ROS este demonstrată în Figura 3. La trei ore după tratamentul cu CTE a existat o creștere puternică a producției intracelulare de ROS în toate liniile celulare (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

Fig. 1:

Efectul Cistanche tubulosa asupra viabilității liniilor celulare de cancer de colon. Viabilitatea celulară măsurată prin testul MTT a celulelor (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo și (D) SW620 sunt prezentate ca procent din linia de celule de cancer de colon martor netratată. Valorile medii (±SD) pentru 5 replici ale experimentului reprezentativ sunt date: (*) semnificație p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Fig. 2:

Extractul de apă de Cistanche tubulosa induce apoptoza în celulele canceroase de colon umane. Analizele de citometrie în flux anexin-V-FITC ale celulelor (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo și (D) SW620 sunt prezentate ca procent din linia de celule de cancer de colon martor netratată. Valorile medii (±SD) pentru 3 replici ale experimentului reprezentativ sunt date: (*) semnificație p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Fig. 3:

Extractul de apă de Cistanche tubulosa induce producția intracelulară de ROS în funcție de timp și de doză. Producția de ROS măsurată prin testul DCFH-DA în celulele (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo și (D) SW620 este prezentată ca valori medii RFU (± SD) pentru respectivele 5-replicate ale un experiment reprezentativ. (*) Semnificație p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

Fig. 4:

Extractul de apă de Cistanche tubulosa induce producția de superoxid mitocondrial în celulele canceroase de colon umane. Intensitatea fluorescenței sondei MitoSOX Red vizate de mitocondrii în celulele A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo și (D) SW620 sunt prezentate ca procent din linia celulară de cancer de colon de control netratată. Valorile medii (±SD) pentru 5 replici ale experimentului reprezentativ sunt date: (*) semnificație p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

DISCUŢIE

Deși studiile anterioare au raportat numeroase proprietăți medicinale ale Cistanche tubulosa, acesta este primul raport al efectului său anti-proliferativ în celulele maligne. Compușii bioactivi Cistanche tubulosa extrași cu apă, un solvent extrem de polar, au prezentat o puternică bioactivitate anticanceroasă. Am comparat anterior eficiența Cistanche tubulosa solubilizată în apă cu alți solvenți, cum ar fi metanolul și acetatul de etil, dar extractele de apă au prezentat cele mai promițătoare activități anticancer (datele nu sunt prezentate).

Am demonstrat capacitatea CTE la 1 mg/mL și 2 mg/mL de a inhiba 60% din creșterea liniilor celulare de cancer de colon primar și metastatic, dezvăluind un rol potențial important al Cistanche tubulosa ca tratament pentru cancerul de colon. În comparație cu celulele normale, celulele canceroase sunt în general caracterizate printr-o perturbare a homeostaziei redox și o strategie comună a terapiilor anticancer actuale este creșterea stresului oxidativ celular (Yang și colab., 2013). Deși nivelurile scăzute din punct de vedere fiziologic de ROS au un rol important ca molecule de semnalizare, producția excesivă de ROS poate contribui la instabilitatea și malignitatea cancerului (Liou și Storz, 2010). Paradoxal, acest dezechilibru în homeostazia redox celulară face celulele canceroase mai vulnerabile la moartea celulară indusă de ROS (Jaganjac și colab., 2008; Nogueira și Hay, 2013). Efectul antiproliferativ al CTE raportat în acest studiu poate fi mediat de diferite mecanisme extra și intracelulare ale compușilor cunoscuți și necunoscuți din extract, țintind căi multiple care joacă roluri esențiale în apoptoză. Pentru a diferenția între diferitele moduri de moarte celulară, am investigat mecanismul potențial responsabil pentru citotoxicitatea indusă de CTE observată.

Datele noastre indică faptul că CTE crește producția intracelulară de ROS și, în consecință, moartea celulară indusă de ROS. Starea Redox a celulei joacă, de asemenea, un rol crucial în reglarea apoptozei, iar lanțul de transport de electroni mitocondrial este unul dintre locurile majore de generare a ROS celular (Trachootham și colab., 2008). În plus, ROS intracelular ar putea provoca apoptoză celulară atât prin căi dependente de mitocondrii, cât și prin căi independente (Sinha et al., 2013). Într-adevăr, datele noastre indică, de asemenea, că externalizarea fosfatidilserinei indusă de CTE este un efect comun în apoptoză, atât în ​​liniile de celule canceroase primare, cât și în cele metastatice, sugerând că mecanismul morții induse de CTE este mediat mai degrabă de apoptoză decât de necroză. Activarea apoptozei în celulele canceroase este o strategie corectivă și multe medicamente anticancer pot exercita efecte apoptotice în celulele canceroase.

Compușii sau extractele cu activități pro-apoptotice în celulele canceroase sunt, prin urmare, potențial utili în cercetarea medicamentelor anticanceroase (Wong, 2011). Pentru a determina dacă efectul pro-apoptotic indus de CTE este mediat de mecanismul ROS indus de mitocondrii, am măsurat producția de superoxid folosind o sondă fluorescentă vizată de mitocondrii în celulele tratate cu CTE. Datele noastre arată în mod clar că CTE stimulează producția de superoxid mitocondrial, sugerând că activitatea anticanceroasă a Cistanche tubulosa este mediată cel puțin parțial prin mecanismul ROS indus de mitocondrii.

CONCLUZII

În concluzie, datele noastre sugerează că extractul de apă al plantei de deșert Cistanche tubulosa poate reprezenta un candidat promițător pentru o abordare anticanceroasă în combinație cu alte terapii convenționale pentru prevenirea și tratamentul cancerului de colon. De asemenea, demonstrăm că toxicitatea extractului de plantă împotriva celulelor canceroase este mediată de producția crescută de ROS intracelular și, cel puțin parțial, de apoptoza mitocondrială dependentă. Sunt în curs de desfășurare studii suplimentare pentru a izola și caracteriza constituenții individuali activi biologic responsabili de activitatea anticanceroasă.

Sunt necesare mai multe cercetări pentru a evalua potențiala utilizare a acestui extract ca agent chimiopreventiv eficient și pentru a înțelege mecanismele de acțiune asupra celulelor canceroase de colon la nivel molecular. Sunt necesare, de asemenea, studii preclinice și clinice suplimentare pentru a confirma efectele benefice asupra sănătății observate ale Cistanche tubulosa pentru prevenirea cancerului.

MULȚUMIRI

Sprijin financiar și sponsorizare: Acest studiu a fost susținut de Anti-Doping Lab Qatar.

Conflict de interese: Autorii nu declară niciun conflict de interese.

REFERINȚE

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Descoperirea medicamentelor din plante medicinale. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Cancer colorectal. Lancet 2014;383,1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadine atenuează afectarea unui model de barieră intestinală cauzată de 4-hidroxinonenal. Toxicol in vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newman DJ. Plantele ca sursă de agenţi anticancerigen.JEthnopharmacol. 2005;100:72-9.

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Produse naturale în terapia anticancer. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9. Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. Inducerea promotorului CMV-1 prin 4-hidroxi-2- nominal în celulele renale embrionare umane. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Implicarea granulocitelor în regresia spontană a carcinomului Walker 256. Cancer Lett. 2008;260:180-6

Jiang Y, Tu PF. Analiza constituenților chimici la speciile Cistanche. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.

Liou GY, Storz P. Specii reactive de oxigen în cancer. Radic liber Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Aminoglicozide feniletanoide acilate cu activitate hepatoprotectoare din planta deșertului Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chim. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Căi moleculare: homeostazia speciilor reactive de oxigen în celulele canceroase și implicațiile pentru terapia cancerului. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. Efectul ionilor ferici asupra formării speciilor reactive de oxigen, creșterea liniilor celulare de cancer de col uterin și expresia oncogenei E6/E7. Toxicol Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. Efectele in vitro citotoxice și pro-apoptotice ale extractelor apoase de frunze și bulbi de Tulbaghia violacea. J Etnofarmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Stresul oxidativ: căile de apoptoză dependente de mitocondrii și independente de mitocondrii. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Reglarea redox a supraviețuirii celulelor. Semnal antioxid Redox. 2008;10:1343- 74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Extractul de Melissa officinalis induce apoptoza și inhibă proliferarea în celulele canceroase de colon prin formarea de specii reactive de oxigen. Fitomedicina. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptoza în cancer: de la patogeneză la tratament. J ExpClin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. Efectele anticanceroase ale extractului de Wasabia japonica în celulele canceroase hepatice Hep3B prin acumularea de ROS, deteriorarea ADN-ului și apoptoza mediată p73-. J Funct Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. Efectele antihiperglicemice și hipolipidemice ale Cistanche tubulosa la șoarecii db/db diabetici de tip 2. J Etnofarmacol. 2013;150:935-45.

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Caracteristici de macro-amprentă în infraroșu în mai multe etape ale extractelor de etanol din diferite specii de Cistanche din China combinate cu amprenta HPLC. J Mol Struct. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Specii reactive de oxigen în biologia cancerului și terapia anticanceroasă. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Aminoglicozide feniletanoide și zaharuri oligo acilate cu activitate vasorelaxantă din Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chim. 2006;14:7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com