Complement în bolile renale ca potențial contributor la hipertensiunea arterială

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Lisa-Maren Fischer, et al

Abstract

Obiectiv:Depunerea de complement este predominantă în biopsiile renale ale pacienților cu hipertensiune arterială și nefropatie hipertensivă, dar până în prezent nu a fost demonstrată o asociere între hipertensiune arterială și depunerea complementului sau implicarea complementului în patogeneza nefropatiei hipertensive.

Metode:În acest studiu, am analizat depunerea complementului C1q și C3c într-un model de supraîncărcare și hipertensiune arterială la șobolan prin nefrectomie subtotală (SNX) și în biopsii renale umane arhivate de la 217 pacienți cu hipertensiune arterială cunoscută și 91 de pacienți de control fără antecedente de hipertensiune arterială folosind scorul semicantitativ al Imunohistochimia C1q și C3c și corelarea cu parametrii funcției renale. Pentru a aborda dacă complementul a fost depus doar pasiv sau exprimat activ de către celulele renale, expresia ARNm C1q și C3 a fost analizată suplimentar.

Rezultate:Depunerea glomerulară a complementului C1q și C3c a fost semnificativ mai mare la rinichii șobolanilor hipertensivi SNX și hipertensivi comparativ cu pacienții nehipertensivi. Tensiunea arterială medie (TA) la șobolanii SNX a corelat bine cu cantitatea de depunere glomerulară de C1q și C3c și cu greutatea ventriculară stângă, ca parametru indirect al TA ridicată. Analiza cantitativă a ARNm a arătat că C3 nu a fost doar depus, ci și produs în mod activ de celulele glomerulare ale șobolanilor hipertensivi SNX și în biopsiile renale umane. De remarcat, la pacienți stadiul CKD a corelat semnificativ cu intensitatea colorării glomerulare C3c, dar nu și cu cea a C1q.

Concluzie: Depunerea complementului renal a fost corelată cu hipertensiunea experimentală, precum și cu prezența hipertensiunii într-o varietate derenalboli. Pentru a răspunde la întrebarea dacă și cum exact complementul renal este cauzal pentru patogeneza hipertensiunii arteriale la bărbați, sunt necesare studii suplimentare.

Cuvinte cheie:Rinichi, depunere de complement, hipertensiune arterială,Renalboala

Cistanche poate tratarenalboala

Introducere

The complement system and its regulatory proteins are components of the innate immune system consisting of >20 de factori solubili, care joacă un rol important în (i) opsonizarea, (ii) stimularea diferitelor căi inflamatorii și (iii) liza osmotică a agenților patogeni și a celulelor deteriorate în numeroase boli, în special inflamatorii.rinichiboala[1]. Sistemul complementului este format din 3 căi: (i) calea clasică, activată de orice structură care este recunoscută de C1q [2], (ii) calea lectinei, activată atunci când modelele zaharidelor sunt recunoscute de complexele de recunoaștere a modelelor [3] și (iii) calea alternativă, activată prin hidroliza spontană a C3 [4].

Ultimele 2 decenii ne-au intensificat cunoștințele despre sistemul complementului și rolul acestuia în patogeneza diferitelor sisteme sistemice șirenalbolicum ar fi glomerulonefrita postinfecțioasă (GN), nefropatia IgA (IgAN), nefrita lupică (LN), GN membranoproliferativă și glomerulopatiile C3 [1, 5]. Un rol important al sistemului complementului și al disfuncției acestuia este cunoscut și în patogeneza microangiopatiilor trombotice, incluzând sindromul hemolitic uremic atipic [6], vasculita IgA (fostă purpură Henoch-Schönlein) [7] și hipertensiunea malignă [8]. În timp ce patomecanismele microangiopatiei trombotice sunt deja cunoscute [6, 7], cunoștințele noastre despre semnificația sistemului complement în relație cu hipertensiunea arterială sunt încă relativ vagi. Majoritatea pacienților cu BRC prezintă tensiune arterială crescută (TA) [9], dar patogeneza exactă a hipertensiunii este necunoscută. Sunt disponibile mai multe studii care descriu o asociere între C3 plasmatic și hipertensiune arterială [10, 11], în timp ce un alt studiu nu a putut confirma aceste observații [12]. În modelul de hipertensiune arterială DOCA-sare de șobolan, depunerea glomerulară de C3 a fost crescută la șobolanii cu sare DOCA și a scăzut prin terapia antihipertensivă, adică spironolactonă și terapie triplă cu hidroclorotiazidă, rezerpină și hidralazină [13]. Studii recente care utilizează modele preclinice de hipertensiune arterială au sugerat un rol al complementului în patogeneza hipertensiunii [14] mediat de diferite celule ale sistemului imunitar, cum ar fi macrofagele și celulele T reglatoare (Tregs) [15–17] și activarea sistemului renină-angiotensină care duce la modificări fenotipice în celulele musculare netede vasculare [18]. Rolul detaliat al depunerii complementului renal în dezvoltarea TA crescută este încă neclar. Prin urmare, în acest studiu, am investigat C1q, ca produs de clivaj al clasicului, și C3c ca marker comun al tuturor celor 3 căi de activare a complementului în biopsiile renale de la pacienți hipertensivi și normotensivi, precum și într-un model stabilit de supraîncărcare și ulterioară la șobolan. hipertensiune arterială prin nefrectomie subtotală (SNX).

Metode

Model animal

Pentru investigarea depunerilor de complement renal, a leziunii renale și a modificărilor cardiace la animalele hipertensive, am folosit modelul de șobolan, care se caracterizează prin hiperfiltrare glomerulară și supraîncărcare datorată reducerii nefronului, glomeruloscleroza focală segmentară și globală, cicatrici tubulointerstițiale și CKD progresivă cu semnificativă. TA crescută. Șobolanii au fost menținuți într-o unitate specifică fără patogeni într-un mediu controlat de temperatură și lumină și au avut acces ad libitum la mâncare standard (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germania) și apă. Șobolanii au fost ținuți pe așternut clasic de lemn de aspen (sniff Spezialdiäten GmbH, Soest, Germania) în cuști makrolon de tip IV (Tecniplast Deutschland GmbH, Hohenpeißenberg, Germania) cu o populație maximă de 3. Pentru model de inducție, 12 masculi Dark Agouti (DA/ HanRj, Janvier, Le Genest-Saint-Isle, Franța) șobolani cu vârsta de 12-14 săptămâni au fost SNX într-un protocol în 2 pași, începând cu o tomie neinspirată urmată de rezecția standardizată în greutate a polilor superiori și inferiori din rinichiul rămas timp de 1 săptămână. mai tarziu. În acest scop, animalelor li s-a administrat Buprenovet (Bayer, Leverkusen, Germania) într-o doză de 0.{05 mg/kg greutate corporală sc înainte de operație. După anestezie cu izofluran, flancul drept a fost ras, dezinfectat cu tinctură KO-DAN forte (Schülke & Mayr GmbH, Norderstedt, Germania), flancul a fost deschis cu o incizie de 1,5 cm și rinichiul a fost ridicat cu grijă și fixat cu 2 sterile. tampoane urmate de ligatura aportului de sânge renal și a ureterului și îndepărtarea rinichiului. Incizia abdominală a fost închisă cu o sutură absorbabilă și o cusătură continuă, precum și pielea închisă cu cusături cu un singur nasture. O săptămână mai târziu, rinichiul stâng a fost ridicat exact așa cum este descris pentru rinichiul drept. Apoi, artera renală a fost fixată cu o clemă atraumatică și polul superior și inferior al rinichiului a fost rezecat cu un bisturiu și suprafața tăiată a fost închisă cu un burete de colagen (Resorba medical GmbH, Nürnberg, Germania). În cele din urmă, rinichiul rămas a fost readus în poziția inițială și incizia abdominală a fost închisă așa cum este descris mai sus. Activitatea postoperatorie, aportul de lichide, greutatea, textura blanii și comportamentul animalelor au fost evaluate, dar nu au prezentat semne de durere postoperatorie. Cu toate acestea, analgezia a fost menținută cel puțin peste 3 zile după operație. Martorii au primit o intervenție chirurgicală simulată (sham, n=11). La sfârșitul experimentului, animalele au fost găzduite timp de 24 de ore în cuști metabolice pentru a colecta urina pentru măsurarea proteinuriei folosind un test de proteine ​​Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories GmbH, München, Germania). Adsorbția a fost măsurată în probe de urină diluate cu PBS la 595 nm într-un cititor de microplăci și proteinuria a fost calculată utilizând o curbă standard din standardele de albumină serică bovină variind de la 0,15 la 2 mg (Thermo Scientific, Rockford, IL, SUA). După 12 săptămâni, șobolanii au fost eutanasiați după măsurarea intra-arterială a TA timp de 30 de minute prin inserarea unui cateter în A. carotidă utilizând sistemul AD instruments power lab (ADInstruments Ltd., Oxford, Marea Britanie). În cele din urmă, rinichii și inimile au fost recoltate și împărțite în 2 părți, una a fost congelată rapid pentru analiza ARN și a doua parte a fost procesată pentru imunohistochimie. S-a recoltat sânge pentru detectarea creatininei serice folosind un autoanalizator (Beck man Instruments, Brea, CA, SUA).

Cistanche poate tratarenal boala

Analiza cantitativă a ARNm

ARN-ul total din rinichii de șobolan a fost izolat folosind coloane RNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Germania). Reacțiile de transcripție inversă și PCR în timp real au fost efectuate folosind Power SYBR Green pe un sistem 7500 Fast Real-Time PCR (ambele Applied Biosystems, Weiterstadt, Germania) conform instrucțiunilor producătorului. Datele PCR în timp real au fost analizate folosind software-ul SDS v1.3 (Applied Biosystems), iar expresia relativă a nivelurilor de ARNm al genei țintă a fost calculată folosind metoda comparativă delta Ct [19]. Normalizarea a fost efectuată față de nivelurile endogene de ARNr 18S aplicate modificărilor relative rezultate. Au fost utilizați următorii primeri: 18 s (fw 5'TTGATTAAGTCCCTGC-CCTTTGT3'; rev 5'CGATCCGAGGGCCTCACTA3'); C3 (fw 5′ TGCGGCTGGGAGAGTGAAG3′; rev 5′ TTACTGGCTGGAATC-TTGATGG3′) [20]; și C1qB (fw 5′TCATAGAACACGAGGAT TCCATACA3′; rev 5′GACCCAGTACAGCTGCTTTGG3′) [20].

Imunohistochimie

Pentru biopsii de rinichi imunohistochimice sau SNX și rinichi de șobolan simulat, specimenele au fost fixate în formol, încorporate în parafină și tăiate în secțiuni de 1 μm și colorate într-un colorant Ventana Benchmark (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Germania) folosind următorul protocol : extragerea antigenului sa făcut folosind digestia cu pronaza E timp de 40 min la 37 de grade . După blocarea cu Avidin-Biotin Block (Vector Laboratories, Burlingame, CA, SUA), ser normal de capră și secțiuni botto (1:5) au fost incubate timp de 1 oră la 37 de grade folosind următorii anticorpi diluați 1% BSA în 50 mM Tris pH 7.4: C1q, un anticorp policlonal de iepure împotriva C1q uman (A0126; DAKO Deutschland, Hamburg, Germania) și; C3c, un anticorp policlonal de iepure împotriva C3c uman (A0062; DAKO Deutschland). După spălare cu 50 mM Tris pH 7,4, anticorpii primari legați au fost detectați utilizând „Kitul Universal DAB Detection Ultra view” (Roche Diagnostics Deutschland GmbH, Mannheim, Germania). Controalele negative au inclus fie eliminarea, fie substituirea anticorpului primar cu concentrații echivalente ale unui anticorp monoclonal murin irelevant sau IgG preimun de iepure.

Specimenele de țesut renal uman

Într-o primă etapă, o cohortă neselectată de 308 biopsii de rinichi arhivate în parafină fixate în formalină consecutive (Departamentul de Nefropatologie, Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg [FAU]) a fost analizată pentru depunerea complementului renal utilizând imunohistochimia și comparând cazurile cu prezența. sau absenţa hipertensiunii arteriale conform fişelor clinice, indiferent de primarărenalboala. Au fost incluse doar biopsiile de la pacienți hipertensivi și nehipertensivi cu TA bine documentată clinic. În plus, 46 de biopsii zero din alogrefe de rinichi de transplant donate de la donatori vii nehipertensivi au servit drept martori.

Într-o a doua etapă, ne-am concentrat pe compararea grupurilor comune selectate derenalboli, și anume martori (Zero-biopsii; n=46), IgAN (n=65), GN membranos (MGN, n=18), LN (n=10), focal glomeruloscleroza segmentară (FSGS, n=17) și nefropatia diabetică (DN, n=28) rezultând un subgrup reprezentativ de 184 de biopsii. În acest subgrup, relația dintre hipertensiunea arterială și depunerea complementului în contextul diferitelor nefropatii comune a fost analizată mai detaliat. Caracteristicile de bază ale pacienților sunt descrise în Tabelul 1.

Evaluare histopatologică

Diagnosticarea biopsiei renale a fost efectuată de 3 neuropatologi specializați cu foarte multă experiență în timpul examinării de rutină, cu discuții de consens asupra tuturor cazurilor ambigue (inclusiv MBH și KA). Evaluarea morfologiei detaliate a biopsiilor renale umane a fost făcută de un om de știință cu foarte multă experiență (CD) folosind scorul semicantitativ bine stabilit de glomeruloscleroză, scorul de leziune tubulară și scorul de leziune vasculară (VSI) pe secțiunile de parafină colorate cu PAS, așa cum a fost descris anterior [21]. Fibroza interstițială/atrofia tubulară (IF/TA) a fost clasificată conform clasificării BANFF pentru biopsiile de transplant renal [22]

Evaluarea retrospectivă

Date clinice Au fost colectați parametrii clinici care erau disponibili la momentul biopsiei renale. Următorii parametri au fost incluși pentru analiza corelației cu scorurile C1q și C3c, localizarea complementului și scorurile leziunilor folosind software-ul SPSS: vârsta pacientului, prezența sau absența hipertensiunii arteriale și diabetului, proteinurie, creatinina serică, ureea serică, colesterolul seric, proteinele serice. și factorii complementului C3 și C4 serici. Din păcate, informații despre durata derenalboalaand current medication was not consistently available and could therefore not be systematically analyzed. In renal patients, BP is measured regularly and particularly before performing a kidney biopsy. BP measurements and grading was done according to the KDIGO guidelines for renal patients [23]. Proteinuria was measured by analysis of a 24 h urine collection and significant proteinuria was defined as urinary protein excretion >300 mg/zi. În 2/3 din cazuri, proteinuria a fost administrată sub formă de g/24 de ore de urină. Doar unii pacienți au avut proteinurie documentată prin măsurătorile spot ale urinei și, pentru foarte puțini pacienți, nu erau disponibile date despre proteinurie. Deoarece valorile proteinuriei la 24 de ore și cele spot nu pot fi comparate cu greu, am inclus doar pacienți cu colectare de urină de 24 de ore pentru corelarea proteinuriei cu depunerea de complement. Pentru a standardiza în continuare constatările noastre, am subdivizat pacienții în funcție de diferite clase de CKD folosind formula CKD-EPI pentru calcularea RFG [24] și clasele CKD conform clasificării KDIGO 2012 [25].

Cistanche poate tratarenal boala

Evaluarea semicantitativă a depunerilor de complement în biopsiile renale

Colorația complementului prin imunohistochimie în biopsiile renale a fost clasificată separat în compartimentul glomeruli și tubulointerstițial. Scorurile semicantitative {{0}}–4 descriu intensitatea C3c sau C1q observabile în biopsiile de rinichi la mărire ×200. Scorul 0 indică lipsa depunerilor, scorul 1: colorare slabă care afectează până la 25 la sută din compartimentul investigat. Scorul 2: colorare moderată care afectează până la 50 la sută sau colorare puternică<25% of="" the="" compartment.="" score="" 3:="" substantial="" staining="" affecting="" up="" to="" 75%="" of="" the="" investigated="" compartment.="" score="" 4:="" highest="" staining="" intensity="" affecting="">75 la sută din compartimentul investigat.

ARNm C1q și C3 în biopsiile renale umane

Datele pentru C1q și C3 în glomeruli și tubulointerstitiul biopsiilor renale umane cu diferite boli au fost evaluate din baza de date Nephroseq folosind setul de date Ju CKD [26].

Analize statistice

După testarea distribuției normale a valorilor folosind testul Kolmogorov-Smirnov, datele au fost analizate folosind testul Mann-Whitney pentru compararea a 2 grupuri și testul Kruskal-Wallis cu testul Dunn de comparație multiplă ca test post-hoc pentru compararea mai multor grupuri. În toate testele, p < 0.05="" a="" fost="" acceptat="" ca="" fiind="" semnificativ="" statistic.="" testul="" spearman="" a="" fost="" folosit="" pentru="" a="" testa="" corelația="" depunerii="" de="" complement="" cu="" scorurile="" de="" leziune="" renală="" și="" datele="" clinice.="" analizele="" statistice="" au="" fost="" efectuate="" folosind="" software-ul="" spss="" pentru="" windows="" (versiunea="" 19.0="" spss,="" ibm,="" münchen,="" germania)="" sau="" software-ul="" graphpad="" prism="" 8="" pentru="" windows="" (versiunea="" 8.3,="" graphpad="" software="" inc.,="" san="" diego,="" ca,="">

Rezultate

Depunerea de complement renal C3c și C1q este prezentă într-un model de șobolan hipertensiv de CKD stabilă și se corelează cu modificările renale și cardiace

Depunerea de complement a fost investigată într-un model de șobolan hipertensiv de CKD, adică șobolani Dark Agouti nefrectomizați subtotal (SNX), în care TA arterială medie la 12 săptămâni după inducerea modelului a fost semnificativ (p < 0.0).="" 01)="" a="" crescut="" (175,7="" ±="" 21,0="" mm="" hg)="" în="" comparație="" cu="" controalele="" operate="" simulat="" (135,8="" ±="" 2,8="" mm="" hg)="" (fig.="" 1a).="" proteinuria="" a="" fost,="" de="" asemenea,="" semnificativ="" mai="" mare="" în="" snx="" în="" comparație="" cu="" martorii="" operați="" de="" simulare="" (78,5="" ±="" 16,6="" vs.="" 8,9="" ±="" 0,8="" mg/24="" h).="" acest="" model="" de="" hipertensiune="" și="" insuficiență="" renală="" progresivă="" a="" șobolanului="" de="" supraîncărcare="" a="" părut="" potrivit="" pentru="" a="" examina="" modificările="" asociate="" hipertensiunii="" în="" depunerea="" și="" exprimarea="" complementului="" renal.="" depunerea="" glomerulară="" c3c="" și="" c1q="" au="" fost="" absente="" la="" șobolanii="" de="" control="" normotensivi,="" operați="" de="" simulare="" (fig.="" 1b,="" c)="" și="" au="" crescut="" semnificativ="" la="" șobolanii="" snx="" hipertensivi="" (fig.="" 1d,="" e,="" g,="" h).="" la="" șobolanii="" snx,="" factorul="" de="" complement="" c3c="" nu="" a="" fost="" doar="" depus="" în="" țesutul="" renal,="" ci="" și="" a="" fost="" reglat="" în="" mod="" semnificativ="" la="" nivelul="" arnm="" (fig.="" 1f).="" expresia="" arnm="" c1q="" renală="" a="" arătat="" o="" tendință="" la="" niveluri="" mai="" mari="" la="" șobolanii="" snx="" decât="" martorii,="" dar="" această="" diferență="" nu="" a="" atins="" semnificație="" (fig.="" 1i).="" interesant,="" la="" șobolani,="" atât="" depunerea="" glomerulară="" c3c,="" cât="" și="" c1q="" au="" fost="" corelate="" cu="" ta="" arterială="" medie="" (fig.="" 2a,="" d)="" și="" hipertrofia="" cardiacă,="" așa="" cum="" este="" evaluată="" prin="" greutatea="" lv="" (fig.="" 2b,="" e).="" în="" plus,="" în="" modelul="" snx,="" depunerea="" complementului="" renal="" este="" corelată="" cu="" leziuni="" renale,="" precum="" și="" cu="" funcția="" renală.="" c3c="" glomerular,="" precum="" și="" depunerea="" c1q,="" au="" arătat="" o="" corelație="" puternică="" cu="" creatinina="" serică="" (fig.="" 2c,="" f)="" și="" proteinurie="" (fig.="" 2g,="" h).="" corelația="" atât="" a="" creatininei="" serice,="" cât="" și="" a="" proteinuriei="" cu="" complementul="" nu="" a="" fost="" surprinzătoare,="" deoarece="" ambii="" parametri="" au="" arătat,="" de="" asemenea,="" o="" corelație="" puternică="" între="" ei="" în="" acest="" model="" de="" șobolan="" (fig.="" 2i).="" astfel,="" datele="" noastre="" dintr-un="" model="" de="" șobolan="" de="" ckd="" hipertensiv="" din="" cauza="" reducerii="" masei="" renale="" și="" a="" supraîncărcării="" au="" sugerat="" o="" asociere="" între="" depunerea="" complementului="" renal="" și="" hipertensiunea="" arterială.="" prin="" urmare,="" ne-am="" propus="" să="" confirmăm="" aceste="" constatări="" într-o="" cohortă="" umană="" de="" pacienți="" hipertensivi="" versus="" normotensivi,="" la="" care="" a="" fost="" efectuată="" o="" biopsie="" renală="" din="" diferite="">

Depunerea de complement este independentă de boala renală de bază

Aici, am folosit o abordare în 2 pași: în primul rând, am inclus toți pacienții cu o valoare raportată a TA independentă de cea de bază.rinichiboala(n=308, consultați Tabelul 1 pentru detalii). De remarcat, 217 din 308 pacienți (70,5 la sută) au fost raportați că au hipertensiune arterială. În al doilea rând, pentru o analiză ulterioară, ne-am concentrat pe subgrupurile celor mai răspândite forme de GN, adică IgAN, MGN și LN, și 2 mediate de complex neimun.renalbolianume DN şi glomeruloscleroza segmentară focală (FSGS). 46 de biopsii zero din alogrefe de rinichi de transplant donate de la donatori vii normotensivi au servit ca grup de control (vezi Tabelul 1).

Pentru a investiga o relație potențială între hipertensiune arterială și complement renal, depunerea de C1q și C3c în compartimentul glomerular și tubulointerstițial a fost analizată prin scorarea semicantitativă a colorațiilor imunohistologice. Cantitatea și intensitatea colorării C1q și C3c au variat foarte mult în biopsiile investigate (pentru detalii vezi Fig. 3). În compartimentul tubulointerstițial, C3c a fost depus de-a lungul membranelor bazale tubulare și în interiorul matricei interstițiale (Fig. 3G), în timp ce colorarea C1q a fost de obicei slabă și limitată la interstițiu (Fig. 3H).

Depunerea glomerulară de C3c a fost crescută la mulțirenalboli, inclusiv IgAN, MGN, LN și FSGS, în comparație cu biopsiile normotensive zero (Fig. 4A). În general, depunerea glomerulară C1q a fost mai slabă decât C3c glomerulară. Acesta a fost semnificativ crescut în IgAN, MGN, LN și DN, dar nu FSGS în comparație cu controalele cu biopsie zero (Fig. 4B). În mod interesant, complementul C3 și C1q nu s-au depus doar în rinichii bolnavi, ci și expresia locală a ARNm renală a crescut. Datele Nephroseq au arătat că atât expresia ARNm C3, cât și C1q au fost reglate în mod semnificativ în IgAN, LN, DN și FSGS în comparație cu grupul de control, adică donatori vii sănătoși (Fig. 4C, D). Expresia ARNm C1q a fost mai mică decât expresia C3. Depunerea tubulointerstițială C3c a fost, de asemenea, crescută în comparație cu zero-biopsiile în majoritatearenalboli(Fig. 4E), în timp ce C1q nu a fost semnificativ diferit de martorii cu biopsie zero (datele nu sunt prezentate). Pe scurt, depunerea marcată a complementului renal este o constatare comună în diverserinichiboli. În continuare, am investigat potențiala relevanță a BP ridicată asupra depunerilor de complement renal.

Fig. 3. Depunerea C3c și C1q în biopsiile renale. Biopsiile renale umane au fost colorate pentru C3c (A, C, E, G) și C1q (B, D, F, H) folosind imunohistochimie (colorare maro). Imaginile reprezentative ale depunerii glomerulare și tubulointerstițiale de C3c și C1q arată exemple de diferite scoruri de depunere a complementului. Fără colorare pentru C3c în biopsiile zero (A) și C1q în necroza tubulară acută (B). Exemple de depunere glomerulară C3c în NP hipertensiv/ischemic, scor 1 (C) și depunere C1q în clasa II LN, scor 2 (D). Depunere C3c mai proeminentă în IgAN, scor 4 (E) și depunere C1q, scor 4, într-un alt caz de clasa II LN (F). Depunerea în compartimentul tubulointerstițial a C3c în nefrita interstițială, scor 4 (G) și depunere C1q, scor 4 (H) într-un caz de GN postinfecțioasă. Barele de scară reprezintă 100 µm. LN, nefrită lupică; GN, glomerulonefrită.

Fig. 4. Depunerea și expresia complementului renal în diferiterinichiboli. Analiza semicantitativă a colorației glomerulare C3c (A) și C1q (B) în anumiterenalboli. IgAN, MGN, LN, DN, FSGS și biopsiile din alogrefe de rinichi de transplant donate de la donatori nehipertensivi (0-biopsie) au servit drept martori. Datele din baza de date Nephroseq au arătat expresia ARNm glomerulară C3c (C) și C1q (D) în diferiterenalboliși grupul de control respectiv, adică HLD. În compartimentul tubulointerstițial, în primul rând C3c (E) a fost detectat în biopsiile renale de la pacienți cu diferite boli. Diferențele semnificative sunt marcate prin asteriscuri: *p < 0.05;="" **p="">< 0,01="" și="" ***p="">< 0,001="" indică="" diferențe="" semnificative="" față="" de="" biopsiile="" zero.="" gn,="" glomerulonefrită;="" mgn,="" gn="" membranoasă;="" ln,="" nefrită="" lupică;="" fsgs,="" glomeruloscleroza="" segmentară="" focală;="" dn,="" nefropatie="" diabetică;="" hld,="" donator="" cu="" viață="" sănătoasă;="" igan,="" nefropatie="">

Depunerea renală de C3c și C1q este semnificativ crescută la pacienții hipertensivi comparativ cu pacienții normotensivi

Pentru a investiga dacă prezența TA ridicată la pacienți este asociată cu depunerea complementului renal, am analizat biopsii de la pacienți normotensivi și hipertensivi cu diferite substanțe.rinichiboliși le-a comparat cu depunerea de complement în biopsii zero din alogrefe de rinichi transplantate donate de la donatori nehipertensivi (biopsii zero). În IgAN, cel mai răspândit GN din regiunea noastră [27], doar biopsiile de la pacienții cu hipertensiune arterială au avut C3c glomerular (Fig. 5A) și tubulointerstițial semnificativ mai mare (Fig. 5C), precum și depunere glomerulară C1q (Fig. 5E). comparativ cu zero-biopsii. Când am comparat depunerea C3c (Fig. 5B, D) și C1q (Fig. 5F) în biopsiile renale ale cohortei totale, atât probele normotensive, cât și cele hipertensive au arătat o reactivitate semnificativ crescută în comparație cu martorii. Mai mult, în biopsiile pacienților hipertensivi glomerulare și tubulointerstițiale, C3c a fost semnificativ mai mare decât la pacienții normotensivi (Fig. 5B, D). Deoarece depunerea tubulară de C1q a fost scăzută în toate biopsiile investigate, nu am observat diferențe între grupuri nici în IgAN (Fig. 5G), nici în analiza tuturor cazurilor investigate (Fig. 5H). Prin urmare, datele noastre sugerează că, în special, depunerea de C3c pare a fi relevantă la hipertensivirenalboli.

Fig. 5. Depunerea complementului renal în biopsiile renale de la pacienţi hipertensivi şi normotensivi. Depunerea de C3c a fost analizată în biopsiile de la pacienți cu IgAN (A, C) și toate biopsiile investigate curenalboli(B, D) separate la pacienții cu TA normală și TA ridicată în comparație cu biopsiile din alogrefe de rinichi transplantate donate de la donatori nehipertensivi (zero-biopsii) ca martori în compartimentul glomerular (A, B) și tubulointerstițial (C, D). În mod similar, depunerea C1q a fost analizată și în biopsiile de la pacienți cu IgAN (E, G) și toate biopsiile investigate curinichiboli(F, H) în compartimentul glomerular (E, F) și tubulointerstițial (G, H). Diferențele semnificative sunt marcate prin asteriscuri: *p < {{0}}.05;="" **p="">< 0,01="" și="" ***p="">< 0,001="" indică="" diferențe="" semnificative.="" ta,="" tensiunea="">

Depunerea de complement renal este asociată cu leziuni și funcții renale

Evaluarea modificărilor histopatologice, așa cum a fost evaluată prin glomeruloscleroză (Fig. 6A), scorul leziunii tubulointerstițiale (Fig. 6B) și VSI (Fig. 6C), a arătat o leziune renală semnificativ mai mare în biopsiile de la pacienții cu hipertensiune arterială documentată decât pacienții normotensivi. Gradul de depunere glomerulară de C3c a corelat pozitiv cu glomeruloscleroza (Fig. 6D) și C3c tubulointerstițial cu leziune tubulointerstițială (Fig. 6E) și VSI (Fig. 6F), indicând faptul că depunerea de complement este asociată cu leziuni renale cronice. În plus, fibroza interstițială/atrofia tubulară (IF/TA) a fost semnificativ mai mare în biopsiile renale ale pacienților hipertensivi (Fig. 6G) și s-au corelat bine cu gradul de depunere tubulară C3c (Fig. 6J). Funcția rinichilor, așa cum a fost evaluată de creatinina serică, a fost, de asemenea, semnificativ mai scăzută la pacienții hipertensivi (Fig. 6H) și corelată cu depunerea glomerulară de C3c (Fig. 6K). Nu a fost detectată nicio diferență semnificativă între pacienții normotensivi și hipertensivi în ceea ce privește proteinuria (Fig. 6I). Cu toate acestea, a existat o corelație slabă între proteinurie și C3c glomerular (r=0.238; p=0.008; Fig. 6L). Aceste rezultate au confirmat o asociere între leziuni renale, funcție, depunerea de complement și hipertensiune arterială.

În cele din urmă, am investigat măsura în care depunerea de complement a fost dependentă de stadiul CKD. După cum era de așteptat, vârsta medie a pacienților a crescut odată cu un stadiu mai ridicat al CKD (Fig. 7A). În schimb, proporția de pacienți cu hipertensiune arterială a fost independentă de stadiul CKD (Fig. 7B), confirmând constatările noastre de mai sus. Glomerular (Fig. 7C) și tubular C3c (Fig. 7D) au fost semnificativ mai mici în stadiile CKD 1 și 2 decât stadiile CKD superioare, în timp ce nu a fost observată o astfel de asociere pentru C1q (Fig. 7E, F).

Fig. 6. Depunerea complementului renal în biopsiile umane corelată cu afectarea și funcția renală. Leziunile renale evaluate de GSI (A), TSI (B) și VSI (C) au fost semnificativ crescute la pacienții cu TA ridicată și GSI corelat cu depunerea glomerulară de C3c (D), TSI corelat cu C3c tubulointerstițial (E) și VSI corelat cu tubulointerstițial C3c (F). IF/TA (G) și creatinina serică (H) au fost crescute la pacienții hipertensivi, în timp ce proteinuria a fost similară în ambele grupuri (I). C3c tubular s-a corelat cu IF/TA (J) și C3c glomerular cu creatinina serică (K) și într-o măsură mai slabă C3c glomerulară cu proteinurie (L). Diferențele semnificative sunt marcate prin asteriscuri: **p < 0.01="" și="" ***p="">< 0,001="" indică="" diferențe="" semnificative="" între="" pacienții="" cu="" ta="" normală="" și="" ta="" mare="" sau="" corelații="" semnificative.="" ta,="" tensiunea="" arterială;="" gsi,="" glomeruloscleroza;="" tsi,="" leziune="" tubulointerstițială;="" vsi,="" leziune="" vasculară;="" if/ta,="" fibroză="" interstițială/atrofie="">

Fig. 7. Depunerea renală de C3 în biopsiile umane, dar nu hipertensiunea arterială este corelată cu stadiul CKD. Vârsta medie a pacienților cu CKD a crescut odată cu creșterea stadiului CKD (A), în timp ce procentul pacienților hipertensivi nu a fost legat de stadiul CKD (B). C3c (C, D), dar nu C1q (E, F) s-au corelat frumos cu diferite stadii CKD. Glomerul C3c (C), C3c tubular (D), C1q glomerular (E) și C1q tubular (F). Diferențele semnificative sunt marcate prin asteriscuri: *p < 0.{{10}}5;="" **p=""><0,01; și="" ***p="">< 0,001="" indică="" diferențe="" semnificative="" între="" grupurile="" conectate="" prin="">

Discuţie

Progresia luirenalboala, în special afectarea tubulointerstițială, s-a dovedit a fi mediată, cel puțin parțial, de activarea complementului [28], dar rolul depunerii complementului în hipertensiune arterială și afectarea renală este încă neclar. În studiul nostru, am găsit o depunere renală crescută a factorilor complementului, în special a C3c, care s-a corelat puternic cu leziuni renale crescute și funcție renală inferioară. În plus, foarte frecventrinichiboalaeste asociată cu apariția hipertensiunii arteriale, care ea însăși este legată de risc crescut de boli cardiovasculare și progresia CKD [9]. Aici, am arătat o depunere renală mai mare a produselor de clivaj a complementului C1q, ca marker al căii de activare clasice, și C3c, o componentă a tuturor celor 3 căi de activare, la rinichii de la pacienți hipertensivi cu diferiterenalbolidecât pacienţii normotensivi. Există unele dovezi că complementul joacă un rol important în dezvoltarea și agravarea hipertensiunii arteriale, dar rolul depunerii complementului renal în acest proces este necunoscut. În biopsiile renale umane și modelul nostru de șobolan cu supraîncărcare hipertensivă, a devenit evident că C3c este mai frecvent detectabil decât C1q, sugerând că calea clasică nu este responsabilă exclusiv de activarea complementului înrenal boala. Cu toate acestea, sa constatat că C1q este implicat critic în remodelarea arterială hipertensivă prin activarea semnalizării -cateninei [29]. Întrebarea dacă complementul induce hipertensiunea sau hipertensiunea activează complementul rămâne până în prezent neclară. În acest studiu, am observat o corelație puternică a depunerilor de complement renal, în special a factorului C3c, cu gradul de leziune și funcție renală. Cel mai probabil, hipertensiunea duce la activarea suplimentară a sistemului complementului, dar există unele rapoarte care susțin ipoteza că complementul este nu numai secundar, ci și cauzator pentru hipertensiune arterială. Într-un studiu longitudinal cu o urmărire de 15 ani, incidența hipertensiunii arteriale a fost semnificativ mai mare la pacienții cu niveluri plasmatice crescute ale complementului C3 la momentul inițial, sugerând un rol al C3 plasmatic în patogenia hipertensiunii [10]. În plus, pacienții cu hipertensiune arterială rezistentă la terapie au avut niveluri plasmatice de C3 semnificativ mai mari în comparație cu pacienții cu hipertensiune arterială controlată [11]. În schimb, într-un studiu de cohortă bazat pe populație, C3 plasmatic crescut a fost asociat cu o incidență crescută a primei spitalizări din cauza IRC, dar independent de TA [12]. Cu toate acestea, ultimul studiu a fost limitat la investigarea nivelurilor plasmatice de C3, în timp ce expresia locală a factorilor complementului și activarea complementului nu au fost investigate. Produșii de clivaj C3, adică C3c, nu au fost doar depuse pasiv, dar mARN-ul C3 a fost, de asemenea, exprimat local în rinichii bolnavi de la pacienți hipertensivi și șobolani SNX. Totuși, nu am determinat sursa C3 renală, dar există rapoarte că, pe lângă ficat, majoritatea ARNm C3 este exprimată în monocite și macrofage [30]. În plus, fibroblastele, celulele epiteliale și endoteliale au fost, de asemenea, raportate a fi potențiale surse extrahepatice C3-[31]. Activarea complementului a fost observată și într-un model de hipertensiune indusă de angiotensină II la șoareci. La șobolanii hipertensivi spontan, deficiența de C3 ar putea elimina hipertensiunea sensibilă la sare [18], indicând faptul că C3 este implicat critic în căile de inducere a hipertensiunii. Cu toate acestea, aceste efecte pot fi, de asemenea, mediate mai departe în aval în cascada complementului. Folosind șoareci cu deficit de receptor C5a (C5aR) Zhang și colab. [32] au demonstrat că semnalizarea C5aR joacă un rol patologic în inflamația și remodelarea cardiacă. Deși inhibarea C5aR nu a afectat tensiunea arterială crescută indusă de angiotensină II, afectarea cardiacă, așa cum este evaluată prin hipertrofie cardiacă, inflamație și fibroză perivasculară, ar putea fi redusă [33]. În modelul nostru de hipertensiune la șobolan SNX, am confirmat că depunerea de complement renal se corelează bine cu afectarea renală, dar și cu hipertrofia cardiacă și BP. Hipertensiunea indusă de complement a fost mediată prin receptorii complementului pentru C3a și C5a. Treg-urile reglatoare pot inhiba activarea Treg-urilor efectoare și exercită efecte antiinflamatorii. În modelul de hipertensiune indusă de angiotensină II, Tregs s-a dovedit a fi un modulator important al TA și prevenirea afectarii organelor terminale [15, 34]. Tratamentul cu angiotensină II a stimulat expresia receptorilor C3a și C5a pe Treg, conducând la un număr redus de Tregs la șoarecii de tip sălbatic, dar nu și la șoarecii cu dublu knockout al receptorilor C3a și C5a [35]. În plus, acești șoareci dublu knock-out au dezvoltat hipertensiune arterială tocită și mai puțină fibroză renală și leziuni glomerulare [35]. O asociere între activarea complementului și leziunea glomerulară și fibroza renală, așa cum a fost evaluată prin glomeruloscleroză și IF/TA, a fost, de asemenea, confirmată în studiul nostru de biopsie. Din punct de vedere mecanic, creșterea TA a fost indusă de activarea mediată de C3-a sistemului renină-angiotensină în celulele musculare netede vasculare cu molecule din aval, cum ar fi TGF-ß/PDGF-A și prin modificarea fenotipului celulelor mezenchimale și inducerea epiteliului. tranziție -la mezenchimală [31]. Semnalizarea complementului a fost vizată și în alte boli hipertensive. În sarcina normală, activarea complementului este prezentă, dar este excesivă în tulburările hipertensive ale sarcinii, iar polimorfismele genetice ale proteinelor complementului par să predispună la preeclampsie [36]. Inhibarea semnalizării complementului prin tratamentul cu receptorul solubil al complementului 1 a dus la hipertensiune arterială atenuată într-un model de ischemie placentară de preeclampsie [37].

Limitările studiului

Deși am încercat să ne consolidăm descoperirile în biopsiile renale umane de diferiterenalbolicu și fără hipertensiune arterială prin încorporarea unui model animal adecvat pentru a demonstra o asociere între depunerea de complement în țesutul renal și hipertensiune arterială, trebuie să recunoaștem câteva limitări și prejudecăți de selecție. În studiul uman, ne confruntăm cu limitarea unei cohorte variabile cu numeroși factori de confuzie diferiți care nu pot fi identificați sau excluși în mod clar. Pentru a aborda acest aspect și pentru a armoniza grupul de studiu, am analizat și corelația complementului cu fibroza renală (IF/TA) ca marker surogat al pierderii nefronului și al progresiei subiacente.renalboalaprecum și cu stadiile CKD în care am putea arăta constatări similare. Mai mult, datele privind durata bolilor respective sau tratamentul medical actual nu au fost disponibile în mod sistematic, lăsând aceste aspecte drept un alt potențial de confuzie pe care trebuie să-l menționăm. Deoarece i-am exclus în mod oficial acei puțini pacienți fără TA bine documentată clinic, este probabil ca acești pacienți să nu aibă hipertensiune arterială sau să aibă hipertensiune arterială controlată până la punctul în care ar putea veni la urmărire regulată, ceea ce ar putea cauza prejudecăți de selecție. Spre deosebire de experimentul pe animale din cohorta noastră umană, proteinuria la momentul biopsiei renale nu a fost raportată în mod constant pentru toți pacienții, așa că am putut include doar 2/3 din toți pacienții pentru analizele respective, ceea ce poate afecta unele dintre rezultate. De remarcat, proteinuria nu a fost semnificativ mai mare la pacienții renali cu și fără TA mare, ceea ce face improbabilă o părtinire semnificativă a proteinuriei.

Concluzie

Luat împreună, studiul nostru subliniază o asociere puternică a depunerilor de complement cu hipertensiunea arterială, dar și afectarea renală la om și experimentalrenalboala. Deși nu am putut răspunde la întrebarea dacă depunerea de complement este cauzatoare a dezvoltării hipertensiunii arteriale, datele susțin o implicare a activării complementului în patogeneza sau progresia hipertensiunii în diverserinichi boli, implicând un rol potențial pentru strategiile de inhibare a complementului pentru managementul viitor al cazurilor refractare la terapie de hipertensiune arterială șirenalboala. Cu toate acestea, sunt necesare studii suplimentare pentru a aborda rolul exact al complementului în patogeneza bolilor hipertensive.

Cistanche poate trataboala renala

Din: „Complement înRenalBoalaca potențial contributor la hipertensiunea arterială” de cătreLisa-Maren Fischer, et al

---Kidney Blood Press Res 2021;46:362–376

Referințe

1 Couser WG. Concepte de bază și translaționale ale bolilor glomerulare mediate imun. J Am Soc Nephrol. 2012 Mar;23(3):381–99.

2 Kojouharova M, Reid K, Gadjeva M. Noi perspective asupra mecanismelor moleculare ale activării complementului clasic. Mol Immunol. 2010 Aug;47(13):2154–60.

3 Dobo J, Pal G, Cervenak L, Gal P. Rolurile emergente ale serin proteazelor asociate lectinei de legare a manozei (MASP) în calea lectinei a complementului și nu numai. Immunol Rev. 2016 Nov;274(1):98–111.

4 Pangburn MK, Schreiber RD, Muller-Eber hard HJ. Formarea convertazei C3 inițiale a căii alternative a complementului. Dobândirea activităților asemănătoare C3b prin hidroliza spontană a tioesterului presupus în C3 nativ. J Exp Med. 1981 septembrie 1;154(3):856–67.

5 Ricklin D, Hajishengallis G, Yang K, Lambris JD. Complement: un sistem cheie pentru supravegherea imună și homeostazie. Nat Immunol. 2010 Sep;11(9):785–97.

6 Nozal P, Lopez-Trascasa M. Autoanticorpi împotriva proteinelor alternative ale căii complementului în patologiile renale. Nefrologia. 2016 sept-oct;36(5):489–95. 7 Lau KK, Suzuki H, Novak J, Wyatt RJ. Geneza patologică a purpurei nefrite Henoch-Schönlein. Pediatr Nephrol. 2010 ianuarie;25(1):19–26.

8 Wenzel U, Turner JE, Krebs C, Kurts C, Har rison DG, Ehmke H. Mecanismele imune în hipertensiunea arterială. J Am Soc Nephrol. 2016 Mar;27(3):677–86.

9 Drawz PE, Beddhu S, Kramer HJ, Rakotz M, Rocco MV, Whelton PK. Măsurarea tensiunii arteriale: o perspectivă KDOQI. Am J Rinichi Dis. Martie 2020;75(3):426–34.

10 Engstrom G, Hedblad B, Berglund G, Janzon L, Lindgarde F. Nivelurile plasmatice ale complementului C3 sunt asociate cu dezvoltarea hipertensiunii arteriale: un studiu de cohortă longitudinală. J Hum Hipertens. 2007 Apr;21(4):276–82.

11 Magen E, Mishal J, Paskin J, Glick Z, Yosefy C, Kidon M, et al. Hipertensiunea arterială rezistentă este asociată cu niveluri mai mari ale complementului C3 și proteinei C reactive. J Clin Hypertens. 2008 Sep;10(9):677–83.

12 Bao X, Borne Y, Muhammad IF, Schulz CA, Persson M, Orho-Melander M, et al. Complement C3 și spitalizare incidentă din cauza cronicărinichiboala: un studiu de cohortă bazat pe populație. BMC Nephrol. 21 februarie 2019; 20(1):61.

13 Klanke B, Cordasic N, Hartner A, Schmieder RE, Veelken R, Hilgers KF. Tensiunea arterială versus efectele mineralocorticoide directe asupra inflamației rinichilor și fibrozei în hipertensiunea cu sare DOCA. Transplant Nephrol Dial. 2008 nov;23(11):3456–63.

14 Chen L, Fukuda N, Shimizu S, Kobayashi H, Tanaka S, Nakamura Y, et al. Rolul complementului 3 în generarea de renină în timpul diferențierii celulelor stem mezenchimale la celulele musculare netede. Am J Physiol Cell Physiol. 1 mai 2020;318(5): C981–C990.

15 Kvakan H, Kleinewietfeld M, Qadri F, Park JK, Fischer R, Schwarz I, et al. Celulele T de reglare ameliorează deteriorarea diacului auto indusă de angiotensină II. Circulaţie. 9 iunie 2009;119(22): 2904–12.

16 Ruan CC, Ge Q, Li Y, Li XD, Chen DR, Ji KD și colab. Polarizarea macrofagelor mediată de complement în țesutul adipos perivascular contribuie la leziuni vasculare la șoarecii cu sare de acetat de deoxicorticosteron. Arterioscler Tromb Vasc Biol. 2015 Mar;35(3):598–606.

17 Carney EF. Hipertensiune arterială: rolul C3aR și C5aR în celulele Treg. Nat Rev Nephrol. 2018 apr; 14(4):214.

18 Negishi E, Fukuda N, Otsuki T, Katakawa M, Komatsu K, Chen L, et al. Implicarea complementului 3 în hipertensiunea sensibilă la sare prin activarea sistemului renal renină-angiotensină la șobolanii hipertensivi spontan. Am J Physiol Renal Physiol. 1 Dec 2018; 315(6):F1747–F1758.

19 Dimmler A, Haas CS, Cho S, Hattler M, Forster C, Peters H, et al. Microdisecție cu captură cu laser și PCR în timp real pentru analiza expresiei genei endotelinei glomerulare-1 în mesangioliza glomerulonefritei anti-Thy 1.1 și a veninului de șarpe Habu murin. Diagn Mol Pathol. 2003 iunie;12(2):108–17.

20 Diez M, Abdelmagid N, Harnesk K, Strom M, Lidman O, Swanberg M, et al. Identificarea regiunilor genice care reglează răspunsul microglial inflamator în SNC de șobolan după leziuni nervoase. J Neuroimmunol. 25 iulie 2009;212(1– 2):82–92.

21 Hainz N, Thomas S, Neubert K, Meister S, Benz K, Rauh M și colab. Inhibitorul proteazomului bortezomib previne nefrita lupică în modelul de șoarece NZB/W F1 prin păstrarea arhitecturii glomerulare și tubulointerstițiale. Nephron Exp Nephrol. 2012; 120(2):e47–58.

22 Solez K, Racusen LC. Clasificarea Banff revizuită. Rinichi Int. 2013 Feb;83(2):201–6.

23 Ghid de practică clinică KDIGO pentru managementul tensiunii arteriale în cronicirinichiboala. Kidney Int Suppl. Dec 2012; 2(5):343.

24 Levey AS, Stevens LA, Schmid CH, Zhang YL, Castro AF 3rd, Feldman HI, et al. O nouă ecuație pentru estimarea ratei de filtrare glomerulară. Ann Intern Med. 2009 mai 5;150(9):604–12.

25 Grupa KCW. Ghidul de practică clinică KDIGO 2012 pentru evaluarea și gestionarea bolilor cronicerinichiboala. Kidney Int Suppl. 2013;3:1–150.

26 Ju W, Greene CS, Eichinger F, Nair V, Hodgin JB, Bitzer M și colab. Definirea specificității de tip celular la nivel transcripțional în boala umană. Genom Res. 2013 Nov;23(11):1862–73.

27 Barratt J, Feehally J, Smith AC. Patogenia nefropatiei IgA. Semin Nefrol. 2004 mai;24(3):197–217.

28 Hsu SI, Couser WG. Progresia cronică a leziunii tubulointerstițiale în proteinuricrenalboalaeste mediată de activarea complementului: un rol terapeutic pentru inhibitorii complementului? J Am Soc Nephrol. 2003 Jul;14(7 Suppl 2): ​​S186–91.

29 Sumida T, Naito AT, Nomura S, Nakagawa A, Higo T, Hashimoto A, et al. Activarea indusă de complementul C1q a semnalizării -cateninei determină remodelarea arterială hipertensivă. Nat Commun. 2015;6:6241.

30 de Bruijn MH, Fey GH. Componenta complementului uman C3: secvența de codificare a ADNc și structura primară derivată. Proc Natl Acad Sci US A. 1985 Feb;82(3):708–12.

31 Chen L, Fukuda N, Matsumoto T, Abe M. Rolul complementului 3 în patogeneza hipertensiunii. Hipertens Res. aprilie 2020; 43(4):255–62.

32 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Cui W, Miwa T și colab. Receptorul de complement 5a mediază inflamația și remodelarea cardiacă induse de angiotensină II. Arterioscler Tromb Vasc Biol. 2014 iunie;34(6):1240–8.

33 Zhang C, Li Y, Wang C, Wu Y, Du J. Antagonistul C5aR previne remodelarea cardiacă în hipertensiunea indusă de angiotensină II. Sunt J hipertens. 2014 iunie;27(6):857–64.

34 Barhoumi T, Kasal DA, Li MW, Shbat L, Lau rant P, Neves MF, et al. Limfocitele reglatoare T previn hipertensiunea indusă de angiotensină II și leziunile vasculare. Hipertensiune. 2011 Mar;57(3):469–76.

35 Chen XH, Ruan CC, Ge Q, Ma Y, Xu JZ, Zhang ZB și colab. Deficiența receptorilor de complement C3a și C5a previne hipertensiunea indusă de angiotensină II prin intermediul celulelor T reglatoare. Circ Res. 2018 Mar 30;122(7):970–83.

36 Regal JF, Burwick RM, Fleming SD. Sistemul complementului și preeclampsia. Curr Hypertens Rep. 2017 Oct 18;19(11):87.

37 Regal JF, Lund JM, Wing CR, Root KM, Mc Cutcheon L, Bemis LT și colab. Interacțiuni între sistemele complement și endotelină în sarcina normală și după ischemia placentară. Mol Immunol. 2019 oct;114: 10–8.