Cum crește echinacozidul Cistanche androgenul prin celulele endoteliale?

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstract.

Echinacozidul (ECH) este un compus natural cu efect vasodilatator dependent de endoteliu. Oxidul nitric (NO) este un vasorelaxant important eliberat de celulele endoteliale. Pentru a examina mecanismul molecular al producției de NO indus de ECH în celulele endoteliale, prezentul studiu a investigat implicarea receptorului de androgeni (AR) și a căii fosfatidilinozitol 3-kinazei (PI3K)/protein kinazei B (Akt) în fosforilarea oxidului nitric sintetazei endoteliale (eNOS) în celulele endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC). Folosind sonda fluorescentă DAF-FM, s-a dovedit că producția de NO a crescut semnificativ, iar eNOS a fost fosforilat la Ser1177 într-o manieră dependentă de concentrație sub tratament cu 0.01-10 µM ECH în HUVEC. În plus, producția de NO și fosforilarea eNOS indusă de ECH au fost diminuate atunci când au fost pretratate cu nilutamidă antagonistă AR sau când au fost transfectate cu ARN-uri mici de interferență AR. În plus, fosforilarea indusă de ECH a Akt la Ser473 a fost abrogată de 5 pM wortmannin (un inhibitor PI3K). Aceste date au indicat că ECH a stimulat producția de NO prin activarea dependentă de AR a eNOS în HUVEC și că calea PI3K/Akt poate fi implicată în fosforilarea eNOS indusă de ECH.

Cistanche deserticola are multe efecte, click aici pentru a afla mai multe

Introducere

Cistanche Hoffman. Et Link este o plantă parazită perenă dintr-un gen din familia Orobanchaceae. HerbaCistanche, tulpina aCistanche deserticolaYC MA șiCistanche tubulosa(Schenk). Cistanche este o planta tonica care a fost folosita pentru a tratadeficiență renală, impotență, leucoree morbidă și constipație senilă (1), care se pot datora efectului său de reglare asemănător androgenilor sau hormonilor sexuali (2). Echinacozidul (ECH; C35H46O20; greutate moleculară, 786,73; Fig. 1), este una dintre glicozidele feniletanoide (PhGs) izolate din tulpinile de Herba.Cistancheși prezintă multiple proprietăți biologice, inclusiv efecte antioxidante, antiîmbătrânire, antiinflamatoare, hepatoprotectoare și neuroprotectoare (3). Investigațiile farmacologice moderne au demonstrat că diverși constituenți ai HerbaCistanche, inclusiv ECH,acteozid, kankanose, partea lankază F șicistanozidăF, prezintă activitate vasorelaxantă (4).

Endoteliul este un regulator critic al sistemului vascular, iar oxidul nitric (NO) este un factor important de relaxare eliberat decelule endoteliale.Prin difuzarea în celulele musculare netede, NO activează guanilat ciclaza, crește nivelurile de guanozin monofosfat ciclic (cGMP) și apoi activează protein kinazele dependente de cGMP (PKG) pentru a promova relaxarea mușchilor netezi (5). S-a demonstrat anterior că ECH la 350-400 µM acționează direct asupra mușchiului neted vascular și inhibă proliferarea indusă de hipoxie în celulele musculare netede ale arterei pulmonare de șobolan (6), în timp ce 30-300 µM ECH a provocat vasorelaxare acută în endoteliu. inelele intacte într-o manieră dependentă de concentrație și producția îmbunătățită de cGMP în mușchiul neted al corpului cavernos al inelelor aortice contractate de fenilefrină (7). Prin deschiderea canalelor NO-cGMP-PKG-BKCa în celulele musculare netede, 100 sau 300 µM ECH a suprimat contracția indusă de noradrenalina în arterele pulmonare ale șobolanilor, în special în inelele denudate de endoteliu (8).Celule endotelialesunt regulatori cheie ai funcției cardiovasculare și, în mai multe cazuri, s-a constatat că relaxarea dependentă de endoteliu s-a datorat unei substanțe transferabile, precum NO, eliberată din endoteliu (9). Cu toate acestea, mecanismul molecular din amonte al producției de NO indus de ECH în vascularcelule endotelialenecesită investigații suplimentare. În endoteliul vascular, generarea de NO este mediată în primul rând de NO sintaza endotelială (eNOS). Mai multe grupuri au demonstrat că calea fosfatidilinozitol 3-kinazei (PI3K) activează serin-treonin protein kinaza B (Akt), care determină fosforilarea directă a eNOS la serina 1177 (Ser1177) (10). Receptorul de androgeni (AR) este un membru al subfamiliei receptorilor nucleari s3, care modifică canonic expresia genelor. Localizarea AR în caveolele din membrana celulară este implicată în reglarea non-genomică a funcției celulelor endoteliale sau a expresiei genelor prin declanșarea cascadei c-Src/PI3K/Akt, care are ca rezultat fosforilarea eNOS și producția de NO (11). În aorta umanăcelule endoteliale, s-a raportat că testosteronul activează semnalizarea PI3K/Akt și induce rapid producția de NO datorită interacțiunii directe a AR și a subunității p85 a PI3K asupra sistemului cardiovascular (12). S-a raportat că ECH agravează simptomele legate de deficiența hormonală și își exercită efectele asemănătoare androgenilor datorită legării competitive de AR în loc de testosteron (2). Prin urmare, prezentul studiu a emis ipoteza că calea PI3K/Akt poate fi implicată în producția de NO prin fosforilarea eNOS dependentă de AR indusă de ECH. Scopul prezentului studiu a fost de a evalua următoarele efecte ale ECH: i) Inducerea producției de NO și fosforilarea eNOS; ii) implicarea AR în fosforilarea eNOS și iii) activarea căii PI3K/Akt în celulele endoteliale ale venei ombilicale umane (HUVEC), un model experimental binecunoscut pentru studiul reglării funcțiilor celulelor endoteliale și angiogenezei (13).

Materiale și metode

Produse chimice și reactivi. ECH (puritate, 92,5 la sută) a fost obținută de la Standardele Naționale de Referință a Medicamentelor din Institutul Național pentru Controlul Alimentelor și Drogurilor. Anticorpi împotriva p-Akt (Ser473; cat. nr. ab8805), Akt (cat. nr. ab81283), p-eNOS (Ser1177; cat. nr. ab184154) și eNOS (cat. nr. ab76198) au fost achiziționați de la Abcam . Inhibitorii nilutamidei și ICI 182780 au fost obținuți de la Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME a fost achiziționat de la Adamas-Beta, Ltd. și wortmannin a fost achiziționat de la Pribolab.

Cultură celulară și tratament medicamentos.

HUVEC-urile au fost obținute de la ScienCell Research Laboratories Inc. și cultivate încelula endotelialămediu (ECM; ScienCell Research Laboratories) cu 5% (v/v) ser fetal bovin (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) și 1% supliment de creștere a celulelor endoteliale (ECGS) la 37˚C (5% CO2 și 95 la sută umiditate) (14). La atingerea confluenței, celulele au fost digerate cu tripsină și placate în ECM cu 1% FBS și 1% ECGS. Pentru toate experimentele, HUVEC-urile au fost placate la o concentrație de 1x104/ml și au fost crescute până la confluență. Înainte de tratamentul cu ECH sau alți stimulatori, celulele au fost incubate în ECM fără roșu fenol fără FBS și ECG timp de 6 ore pentru a induce oprirea creșterii. În experimentele inhibitoare, HUVEC-urile au fost pre-incubate cu diferiți antagoniști sau inhibitori, inclusiv 10 µM nilutamidă, 10 µM ICI 182780, 0,5 mM L-NAME sau 5 µM wortmannin, timp de 30 de minute, cu sau fără ECH, la 37˚C. În toate grupurile, inclusiv controlul, DMSO a fost utilizat ca solvent la concentrații egale de 0,001 la sută.

Măsurarea producției intracelulare de NO.

Modificările relative ale concentrației de NO citosol în HUVEC au fost monitorizate utilizând sonda fluorescentă pentru NO DAF-FM (Cayman Chemical Company), așa cum s-a raportat anterior (12). Pe scurt, celulele au fost încărcate cu 5 uM diacetat DAF-FM timp de 20 de minute la 37 °C într-o placă de microtitrare neagră și clătite de mai multe ori cu PBS (pH 7,4). Fluorescența a fost determinată la lungimi de undă de excitare și de emisie de 495 și, respectiv, 515 nm, folosind un cititor de microplăci fluorescente (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) și un microscop inversat compact (Nikon eclipse Ts2R; Nikon Corporation).

Analiza Western blot.

După cum sa raportat anterior (15), monostraturile confluente de celule au fost spălate de două ori în PBS rece cu gheață și lizate cu tampon RIPA (P0013D; Beyotime Institute of Biotechnology). Concentrația proteinei din supernatant a fost măsurată folosind metoda de analiză a acidului bicinconinic (16). Ulterior, 30 ug de proteină au fost încărcate pe bandă, separate folosind geluri de poliacrilamidă de 10% și transferate pe membrane de difluorură de poliviniliden. Membranele au fost blocate cu lapte degresat 5% timp de 1 oră la 25°C. După incubarea cu anticorpi monoclonali împotriva Akt (1:1, diluție000), p-Akt (diluție 1:500), eNOS (diluție 1:2,000) sau p-eNOS (1 :1,000 diluție) la 4°C peste noapte, membranele au fost spălate cu TBST (conținând 0,1% Tween-20) de 4 ori timp de ~15 minute per spălare la 25°C. Ulterior, membranele au fost incubate cu anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (diluție 1:5,000; anticorp anti-șoarece, nr. cat. A0216, sau anticorp anti-iepure, nr. cat. A0208, Institutul Beyotime of Biotechnology) timp de 1 oră la 25°C și detectat utilizând un kit de chemiluminiscență îmbunătățit (cat. nr. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Intensitățile benzilor au fost cuantificate folosind software-ul de analiză a gelului Image J, versiunea 1.8.0_112 (National Institutes of Health).

Prepararea și transfecția ARN mic interferent (si).

ARN-urile dublu catenare lungi au fost sintetizate de ARNm-ul țintă al receptorului AR și al estrogenului (ER) cu secvențele prezentate în tabelul I. Condițiile pentru eliminarea siRNA au implicat transfectarea HUVEC-urilor la o confluență de 70 procente menținută în non-antimicrobiene. mediu de cultură în vase de cultură acoperite cu colagen de 60 mm. Transfecția de 5 nM AR-siARN sau 10 nM ER -siRNA cu reactiv Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) a fost efectuată separat, conform protocoalelor producătorului. Eficiența transfecției a fost evaluată prin analiză PCR cantitativă cu transcripție inversă (RT-qPCR), așa cum s-a raportat anterior (17). Condițiile de termociclare au fost următoarele: 10 min la 95˚C; 40 de cicluri de 95°C timp de 5 sec și 60°C timp de 1 min și o curbă de topire la 95°C timp de 15 sec, 60°C timp de 1 min și 95°C timp de 15 sec; au fost efectuate trei replici biologice independente pentru fiecare probă. Experimentele ulterioare au fost efectuate la 48 de ore după transfecție. Perechile de primer au fost proiectate folosind software-ul Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) cu următoarele secvențe: AR înainte, 5'-GGTTACACCAAAGGGCTAGAA-3' și invers, 5'-GACTTGTAGAGAGACAGGGTAGA-3'; ER înainte, 5'-CCAGTACCAATGACAAGGGAAG-3' și înapoi, 5'-TCACAGGACCAGACTCCATAA-3'; și GAPDH înainte, 5'-CAGGGCTGCTTTTAACTCTGGTAA-3' și înapoi, 5'-GGGTGGAATCATATTGGAACATGT-3

Analize statistice.

Toate datele sunt prezentate ca medie ± abatere standard. Comparațiile statistice între grupuri au fost efectuate utilizând testul Kruskal-Wallis sau ANOVA în două sensuri cu testul post-hoc al lui Tukey pentru comparații multiple. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Rezultate

ECH induce producția de NO și fosforilarea eNOS.

Așa cum se arată în Fig. 2A și B, 1 pM ECH a crescut semnificativ producția intracelulară de NO în HUVEC în comparație cu celulele de control negativ, în timp ce efectul stimulator al ECH a fost atenuat la nivelul de control prin pretratament cu L-NAME. Pentru a obține concentrația optimă, fosforilarea eNOS a fost testată la 60 min după tratamentul cu ECH la concentrații de 0, 0.01, 0. 1, 1 și 10 uM. Rezultatele au arătat că ECH la concentrații de 0,01-10 µM poate induce în mod semnificativ fosforilarea eNOS la Ser 1177 într-o manieră dependentă de concentrație, fosforilarea maximă a eNOS observată la inducerea ECH de 10 µM (Fig. 2C și D). În plus, fosforilarea eNOS la Ser1177 a fost examinată prin analiză Western blot la 0, 5, 15, 30, 60 și 120 min după incubare cu 1 pM ECH. Sa observat că fosforilarea eNOS a fost declanșată rapid de ECH la 5 minute și a continuat să crească până la 30 de minute de incubație (Fig. 2E și F). Ulterior, în ciuda tratamentului ECH, magnitudinea relativă a fosforilării eNOS a rămas stabilă de la 30 de minute înainte; prin urmare, ECH nu a afectat expresia totală a eNOS (Fig. 2C și E).

AR mediază producția de NO indusă de ECH și fosforilarea eNOS.

Testul RT-qPCR a demonstrat că efectele de interferență ale AR-siRNA-1 și ER -siRNA{-2 au avut cel mai mare succes în inhibarea expresiei AR și ER în HUVEC în studiul de față (Fig. 3). ). Ulterior, a fost aplicat un antagonist pentru analiza inhibării funcției AR și ARNsi pentru analiza pierderii funcției AR pentru a evalua implicarea AR în activarea eNOS indusă de ECH și producția de NO. După cum se arată în Fig. 4A, 1 µM ECH a crescut semnificativ producția de NO în HUVEC (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibition="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH activează calea PI3K/Akt.

În studiul de față, fosforilarea Akt la Ser473 a fost testată la 60 min după incubarea ECH la concentrații de 0, 0.01, 0.1 , 1 și 10 uM. Rezultatele au indicat că ECH (0,01-10 µM) poate induce în mod semnificativ fosforilarea Akt. Nivelurile relative de expresie ale p-Akt au atins vârful la 1 și 10 pM de tratament ECH (Fig. 5A și B). În plus, fosforilarea Akt a fost examinată prin analiză Western blot la 0, 5, 15, 30, 60 și 120 min după adăugarea a 1 pM ECH la culturile HUVEC. După cum se arată în Fig. 5C și D, ECH a crescut rapid fosforilarea Akt după 5 minute de incubare, iar nivelul maxim de proteină al p-Akt a fost observat la 60 de minute. Prin contrast, ECH nu a afectat expresia totală a Akt (Fig. 5A și C). Mai mult, pentru a investiga efectul potențial al căii PI3K asupra fosforilării eNOS, HUVEC-urile au fost pre-tratate cu inhibitorul PI3K wortmannin înainte de aplicarea ECH. Sa constatat că wortmannina reduce producția de NO indusă de ECH la nivelurile de bază (Fig. 5E). Un fenomen similar a fost observat utilizând microscopia cu fluorescență la examinarea fluorescenței DAF-FM indusă de ECH (Fig. 5F). În plus, wortmannina poate avea capacitatea de a elimina fosforilarea rapidă a eNOS în HUVEC (Fig. 5G și H). Rezultatele menționate mai sus sugerează că ECH poate activa fosforilarea eNOS și producția de NO prin calea PI3K/Akt.

Discuţie

ECH este un compus natural izolat din HerbaCistanche, cu diverse proprietăți farmacologice. Sa demonstrat anterior că ECH a exercitat un efect de relaxare vasculară dependent de endoteliu prin deschiderea canalelor NO-cGMP-PKG-BKCa în celulele musculare netede ale vaselor de sânge (7,8). Descoperirile actuale oferă dovezi că ECH a exercitat activarea dependentă de AR a eNOS pentru a induce producția de NO cu implicarea căii de semnalizare PI3K/Akt în sistemul vascular.celule endoteliale.

Fiind stratul cel mai interior al peretelui vasului, endoteliul poate simți și răspunde rapid la modificările fluxului sanguin, rezultând, la rândul său, transmiterea semnalului către celulele musculare netede subiacente pentru a regla tonusul vascular (18). S-a raportat pe scară largă că există mai mulți compuși vasodilatatori derivați din endoteliu, cu substanța cea mai prototipică

fiind NO, format din izoforma endotelială a eNOS, care are ca rezultat fosforilare (19). În condiții normale, eNOS rămâne inactiv atunci când este legat de caveolină și este activat cu următoarea succesiune de evenimente încelule endoteliale: i) eNOS se disociază de caveolin-1 și se asociază cu Ca2 plus /CaM; ii) proteina de șoc termic (HSP)90 promovează eNOS.

În plus, un număr tot mai mare de studii au demonstrat că AR se exprimă încelule endotelialeîntr-un număr de țesuturi umane, ceea ce sugerează un rol potențial pentru androgeni și analogii lor, care acționează prin procese mediate de AR, în modularea homeostaziei celulelor endoteliale umane (21). În calea non-clasică PI3K/Akt, AR poate activa PI3K prin interacțiunea directă cu subunitatea de reglementare PI3K p85 (22). Prezentul studiu a demonstrat că un antagonist AR sau siARN AR a diminuat producția de NO și fosforilarea eNOS indusă de ECH în HUVEC. S-a raportat anterior că estrogenii induc fosforilarea eNOS și stimulează producția de NO prin activarea clasică a ER în celulele endoteliale (23), iar administrarea de ECH îmbunătățește semnificativ expresia ER în uter (24). Cu toate acestea, în studiul de față, efectul AR a fost mai proeminent în comparație cu cel al ER asupra activării eNOS induse de ECH și producției de NO. În plus, s-a observat că ECH a provocat producție acută de NO în câteva minute prin activarea eNOS implicată în AR în HUVEC, ceea ce este în concordanță cu natura non-genomică a răspunsului în celulele endoteliale. AR este asociat cu proteine ​​de schelă, inclusiv HSP90, HSP70 și kinaza Src, în citoplasmă și poate fi transportat la membrană din complexul AR în 5 minute de la tratamentul cu testosteron (23). Pe baza strategiei de „pescuit țintă”, HSP90 a fost identificat ca țintă cuplată cu PhG, ceea ce a indicat că ECH poate facilita disocierea AR de proteinele de schelă (25). Un alt studiu a sugerat că, în hipotalamus, ECH se poate combina cu buzunarul AR la aminoacizii Met-894 și Val{-713 și inhibă transportul AR citoplasmatic la nucleu (26). Cu toate acestea, mecanismul de bază prin care ECH mediază translocarea AR citoplasmatică la membrană necesită investigații suplimentare. Prin urmare, sunt necesare cercetări suplimentare pentru a elucida mecanismul prin care ECH realizează activarea eNOS dependentă de AR și modul în care aceasta poate fi asociată cu legarea la HSP90 în celulele endoteliale vasculare.

Calea PI3K/Akt este una dintre cele mai importante cascade de semnalizare, a cărei activare este indusă prin producerea de fosfatidilinozitol-3,4,5-trifosfat pentru a lega domeniul de omologie a pleckstrinului N-terminal al Ser/ Thr kinaza Akt. Acest lucru facilitează recrutarea Akt pe membrana plasmatică (27). Calea PI3K/Akt poate juca un rol important în controlul relaxării dependente de NO indusă de ECH. Prezentul studiu a arătat că producția de NO indusă de ECH a fost redusă semnificativ atunci când celulele au fost incubate cu wortmannin inhibitor PI3K. Un raport anterior a demonstrat că 15 mg/kg ECH a activat calea de semnalizare PI3K/Akt în celulele măduvei osoase suprimate cu 5-fluorouracil (28). În studiul de față, inhibitorii PI3K au scăzut semnificativ fosforilarea eNOS indusă de ECH la Ser1177. Mai mult, activitatea Akt a fost reglată predominant de căile de reglare din amonte, în special fosforilarea dependentă de PI3K la Ser473 (20). În studiul de față, ECH a indus fosforilarea Akt la Ser473 într-o manieră dependentă de doză; în mod similar, un studiu anterior a demonstrat că 5, 10 sau 20 µM ECH au exercitat un efect cardioprotector împotriva tratamentului anoxiei/reperfuziei într-o manieră dependentă de doză, prin reglarea potențială a p-Akt și a SLC8A3 (29). Reglarea transcripțională a genei Akt rămâne în mare parte necunoscută (30); prin urmare, prezentul studiu s-a concentrat pe efectele de reglementare post-transcripționale ale ECH asupra Akt. Luând în considerare constatările menționate mai sus, s-a dedus că aplicarea ECH la HUVEC poate duce la activarea căii PI3K/Akt, care fosforilează eNOS și, ulterior, crește producția de NO.

În concluzie, ECH este un produs natural de care este izolat în principalHerba Cistanche. Mecanismul potențial care stă la baza producției de NO indusă de ECH încelule endotelialepoate include următoarele (Fig. 6): i) ECH acționează ca un ligand funcțional al AR care este localizat în caveolele din membrana celulară; ii) PI3K se leagă de domeniul hidrofob al Akt la Ser473 și facilitează recrutarea Akt la membrana celulară; iii) recrutarea cascadelor PI3K/Akt declanșează fosforilarea eNOS dependentă de AR și iv) generarea de NO este mediată de eNOS încelule endoteliale. Observația că ECH induce producția de NO prin fosforilarea dependentă de AR a eNOS cu implicarea căii PI3K/Akt poate contribui la înțelegerea în continuare a efectelor vasorelaxante ale ECH. În plus, ECH care vizează căile NO derivate din endoteliu se poate datora unor efecte non-genomice. Prin urmare, prezentul studiu poate ajuta la elucidarea mecanismelor prin care ECH își exercită efectele farmacologice pentru a preveni bolile cardiovasculare.

Autor:

LI GU, DANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU și XIN LIU

Centrul de Cercetare în Inginerie Alimentară și Sănătate al Ministerului Educației de Stat, Școala de Științe ale Vieții,

Universitatea Sun Yat-sen, Guangzhou, Guangdong 510275, PR China

Primit 1 mai 2019; Acceptat 10 decembrie 2019

Referințe

1. comisia Farmacopeea Chineză:Cistanche Herba. În: Farmacopeea Republicii Populare Chineze 1. chin. Med. Sci. Press, Beijing, pp 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X și Zhang X:EchinacozidulșiCistanche tubulosa(Schenk) R. Wight ameliorează leziunile testiculare și ale spermei induse de bisfenol A la șobolani prin enzimele steroidogene reglate pe axa gonadelor. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, Dong Y, Zhang B și Ma X:Echinacozidul, un produs natural inestimabil în tratamentul tulburărilor neurologice și de altă natură. Molecule 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S și Muraoka O: Aminoglicozide feniletanoide și oligozaharuri acilate cu activitate vasorelaxantă dinCistanche tubulosa. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal CK, Katsuki S și Murad F: Oxidul nitric activează guanilat ciclaza și crește nivelurile de guanozină 3':5'-monofosfat ciclic în diferite preparate tisulare. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wren TN, Lu dX, Zhou Y și Ge RL: efect antiproliferativ alechinacozidpe celulele musculare netede ale arterei pulmonare de șobolan sub hipoxie. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ și Tu PF:Echinacoziduldetermină relaxarea dependentă de endoteliu în inelele aortice de șobolan printr-o cale NO-cGMP. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y și Ge RL:Echinacozidulinduce vasorelaxarea arterei pulmonare de șobolan prin deschiderea canalelor NO-cGMP-PKG-BKca și reducerea ca intracelular^{2 plus}niveluri. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y și Higashi Y: Evaluarea vasodilatației independente de endoteliu: de la metodologie la perspectivele clinice. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, Chen J, Khan FU, Chen X, Xu J și ding Q: Efectele protectoare ale unui nou derivat de elemente sintetice asupra venei ombilicale umanecelule endotelialeîmpotriva leziunilor induse de stresul oxidativ: Implicarea căilor de semnalizare a antioxidării și PI3k/Akt/eNOS/NO. Biomed Pharmacother 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y și Okabe T: activarea non-genomică dependentă de receptorul androgenic mediată de Src kinază a cascadei de semnalizare care duce la sintaza endotelială de oxid nitric . Biochem Bioph Res Commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y și Okabe T: Activarea dependentă de receptorul de androgeni a sintetazei de oxid nitric endotelial în vascularecelule endoteliale: Rolul căii fosfatidilinozitol 3-kinazei/Akt. Endocrinologie 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F și Reno F: proliferarea și migrarea dependentă de NO induse de vitamina d în HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X și Xu X: Supraexprimarea proteinei de decuplare 2 inhibă apoptoza ridicată indusă de glucoză a venei ombilicale umanecelule endoteliale. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z și Bing S: Icariin întârzie indusă de homocisteinăcelular endotelialsenescența implicând activarea căii de semnalizare PI3K/AKT-eNOS. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ și Klenk dc: Măsurarea proteinei folosind acid bicinchoninic. Anal Biochem 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H și Liu X: Biosinteza triterpenoidelor și răspunsul transcripțional provocat de oxidul nitric în Ganoderma lucidum în fermentație scufundată.Process Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellingsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY și Gutterman dd: Hiperpolarizare derivată din endoteliu și vasodilatație coronariană: roluri diverse și integrate ale acizilor epoxieicosatrienoici, peroxid de hidrogen și joncțiuni gap. Microcirculation 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK și Gutterman dd: comunicarea este cheia: Mecanisme de semnalizare intercelulară în vasodilatație. J Cardiovasc Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Din B și dezbatere R: Sensarea micromediului endoteliului care duce la vasodilatație mediată de oxid nitric: O revizuire a semnalelor nervoase și biomecanice. Oxid nitric 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, Carreno V, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS și Smith GJ: receptor de androgeni la omcelule endoteliale. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. Deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H și Gui YT: Acțiunea non-genomică a androgenilor este mediată de fosforilarea rapidă și reglarea traficului de receptori de androgeni. Cell Physiol Biochem 43: 223-236, 2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP și Ghedini Pc: Activarea căii PI3K/Akt mediată de receptorii de estrogen este responsabilă pentru estrone- activarea vasculară indusă a semnalizării cGMP. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c, Yang Z și Li P: Activitatea antiosteoporotică aechinacozidla șobolani ovariectomizați. Phytomedicine 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y și Tu PF: Identificarea țintelor farmacologice și analiza eficacității glicozidelor feniletanoide dincistanciHerba se bazează pe strategia de „pescuit țintă”. chin Tradit Herbal drugs 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM și Zhang X:Echinacozidulcrește cantitatea de spermatozoizi la șobolani prin țintirea receptorului androgen hipotalamic. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J și Woodgett JR: Protein kinaza B (c-Akt): Un mediator multifuncțional al activării fosfatidilinozitol 3-kinazei. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y și Qian J:Echinacozidulîmbunătățește funcția hematopoietică la șoarecii cu mielosupresie indusă de 5-FU. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. Chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W și Zhou H: Efecte protectoare aleEchinacozidulîmpotriva leziunii anoxiei/reperfuziei în celulele H9c2 prin suprareglarea p-AKT și SLc8A3. Biomed Pharmacother 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P și Su Y: Rolul critic al Akt în funcția cardiovasculară. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.