Persoană de contact: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 e-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Al 98-lea Spital al Armatei Populare chineze de Eliberare, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Zhejiang Universitatea de Medicina Traditionala Chineza, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Fuyang Medicina Traditionala Chineza Ortopedie Spitalul, Hangzhou City, Provincia Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Abstract

Obiectiv: Pentru a observa efectulCistancheextract de apăprivind vindecareaosteoporozafracturi la șobolani și pentru a explora mecanismul său. Metode: SPF-grad SD șobolani de sex feminin au fost împărțite aleatoriu în grup de control, grup de model, și grup de tratament, și modelate în conformitate cu metodele conexe. La 24 de ore de la modelarea fracturii, grupul de control și grupul model au primit gavaj salin normal, iar grupul de tratament a fost gavaj cuCistancheextract de apă o dată pe zi. După 2 săptămâni și 6 săptămâni de intervenție, sângele a fost colectat din aorta abdominală pentru a detecta interleukinele. TP (IL-1 B) și transformarea factorului de creștere-B l (TGF-8 1) niveluri, colecta probe de fractură, în același timp, efectua micro-CT scanare după fixare, măsura R0I calus fracția de volum osos (BV / TV) și alți parametri conexe După decalcifiere, deshidratare, și încorporarea, a fost făcută în blocuri de ceară pentru utilizare. Rezultate: la 6 saptamani de la stabilirea modelului de osteoporoza, densitatea minerala osoasa a sobolanilor din grupul model si grupul de tratament a fost mai mica decat cea a grupului de control (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchepoate promova vindecarea deosteoporozafracturi, iar mecanismul său poate fi legat de inhibarea sa deosteoporozaFracturi. După serul de șobolan IL-1 B și de a promova secreția de TGF-8 1, care poate îmbunătăți osteoporoza și de a promova vindecarea fracturilor.

Cuvinte-cheie: fractura osteoporotica, Cistanche, vindecarea fracturilor, rat

Osteoporoza este o boală în care densitatea osoasă este scăzută, structura fină a țesutului osos este distrusă, iar fragilitatea osului este crescută. Pacienții pot provoca fracturi sub o ușoară forță externă în viața de zi cu zi. Este o boală clinică comună și o boală frecventă. Mai mult decât atât, acest tip de fractură sunt în mare parte pacienți vârstnici, adesea asociați cu alte boli, iar majoritatea fracturilor sunt comminutate, cu o stabilitate slabă și, uneori, apare lent sau neunion de vindecare a fracturilor și există o rată ridicată de dizabilitate și letalitate. În prezent, tratamentul său este în principal prin chirurgie, restaurare manuală și tratament anti-osteoporoză. Există o lipsă de medicamente de tratament țintite pentru pacienții cuosteoporozaFracturi. Medicina tradițională chineză are o lungă istorie de tratare a osteoporozei și are un efect pozitiv. Multe medicamente tradiționale chineze s-au dovedit a îmbunătăți oasele. Sărăcia poate promova, de asemenea, vindecarea fracturilor. Rongrong este frecvent utilizat ca un medicament reprezentativ pentru hrănirea yang rinichi și are ca efect hrănirea ficatului și rinichilor. Medicina tradițională chineză consideră că rinichiul guvernează osul, iar tratamentul fracturilor este, de asemenea, inseparabil de rinichi și de esență. Farmacologia modernă a descoperit că cenușa de carne are, de asemenea, un anumit efect estrogenic. Acest studiu intenționează să utilizeze măsurarea densității osoase, Micro-CT și interleukina serică-13 ( IL-10 ), transformarea factorului de creștere-P KTGF-P 1) observarea nivelului și extractul de apă din pasta de hernie de carne pe vindecareaosteoporozafracturi la șobolani

Cistanche

1Materiale și metode

1.1 Animale experimentale și echipamente de reactiv: 52 de șobolani SD femele SPF cu o greutate de 210 ~ 250g sunt crescuți în Centrul de experimente pe animale al Universității de Medicină Tradițională Chineză Zhejiang. Iod complex, Hangzhou Lonzo Medical Dezinfectant Co, Ltd., numărul lotului 20160720; Penicilină, China de Nord Pharmaceutical Co, Ltd., numărul lotului F3117217; Kit IL-18 (număr lot: 20160715), kit TGF-8 1 (numărul lotului: 20160722); Scaner cu densitate osoasă cu raze X cu energie dublă, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 ExtracțiaCistancheextract de apă: înmuiați solulcistanche(Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Factory) de 10 ori mai multă apă ultrapură timp de 0,5 ore, decoct de tigaie timp de 1,5 ore, se repetă extracția de 2 ori, iar aburul rotativ lichid medicamentos mixt Concentrat la o concentrație de 1,5g/ml și se păstrează într-un frigider la 4 °C pentru utilizare ulterioară.

1.3 Pregătirea modelării: Punctele sunt după cum urmează.

1.3. 1 Modelul osteoporozei: Șobolanii au fost crescuți adaptiv timp de 1 săptămână înainte de modelare și împărțiți aleatoriu în grup de control, grup model și grup de tratament, cu 16 șobolani, 18 șobolani și, respectiv, 18 șobolani, iar fiecare grup s-a bazat pe intervalul de timp de 2 săptămâni și 6 săptămâni. Fiecare a fost împărțit în două grupuri. Atât grupul de tratament, cât și grupul de modele au fost anesteziate cu 1% sodiu pentobarbital (0,4ml/100g), pielea a fost anesteziată, dezinfectată, drapată și pielea a fost tăiată. Ovarele bilaterale ale șobolanului au fost îndepărtate. Grupul de control a avut doar o incizie. Nu

Îndepărtarea ovarelor

1.3. 2 Model de fractura: la 6 saptamani de la pregatirea modelului de osteoporoza, se va pregati modelul de fractura. După ce șobolanii din fiecare grup sunt anesteziați, se măsoară densitatea minerală osoasă a femurului mijlociu. , Incizie, face un model de fractură transversală a femurului mijlociu, fixați-l cu sârmă Kirschner de 1 mm, sterilizați și suturați pielea inciziei

1.4 Intervenția medicamentului: Detectarea cu raze X a femurului a fost efectuată după modelare, șobolanii care nu au reușit pregătirea modelului au fost eliminați și 80.000 de unități de penicilină au fost injectate intramuscular după modelare pentru a preveni infecția. La 24 de ore de la operație, grupului de tratament i s-a administrat extractul de apă din pasta de hernie de carne (concentrație 1,5g/ml, lg/kg, o dată pe zi). Grupul de control și grupul de modele au primit același volum de soluție salină normală.

1.5 Prelevarea probelor: Probele de șobolan au fost prelevate la 2 și 6 săptămâni după intervenție. După anestezie de sodiu pentobarbitală 1%, 5-10 ml de sânge au fost recoltați din aorta abdominală pentru prepararea serului și depozitați într-un frigider de -20B. cruța. Apoi, șobolanii au fost sacrificați și probele de fractură femurală au fost colectate și plasate în formaldehidă neutră 10% timp de 72 de ore.

1.6 Indicatori de testare: Punctele sunt după cum urmează.

1.6. 1 Densitatea minerala osoasa: Toti sobolanii dupa modelul osteoporozei au fost anesteziati inainte de modelul fracturii, iar apoi s-a masurat densitatea minerala osoasa a femurului mijlociu. Cele trei grupuri de șobolani au primit probe după 2 și 6 săptămâni de intervenție, iar probele au fost stabilite timp de 72 de ore și apoi densitatea osoasă a fost măsurată din nou.

1.6. 2 Micro-CT: Scanarea micro-CT se efectuează după ce proba este fixată timp de 72 de ore, cu 200 de imagini deasupra și sub capătul fracturii ca regiune de interes (R01), unghiul de scanare 360°, curentul 555uA, tensiunea 42kV, filtrul Al 0. 2mm, rezolutie 8.73um, dupa finalizarea reconstructiei tridimensionale a imaginii si analiza calusului. Parametrii de detecție sunt următorii: fracția de volum osos BV/TV, factorul model trabecular osos (Tb. Pf); indicele modelului structural (SMI) etc."

1.6.3 Determinarea serului IL-1P și TGF-P1: Dezghețați serul de șobolan din frigider la -20 °C și efectuați detectarea pas cu pas în conformitate cu instrucțiunile kitului IL-13 și TGF"1.

1.7 Metode statistice: utilizați software-ul de analiză statistică SPSS.19 pentru prelucrare. Datele experimentale sunt exprimate în termeni de deviație standard ± medie (G±s) și densitatea minerală osoasă a celor trei grupe de șobolani. Parametrii micro-CT JL-1 P JGF- P 1 niveluri sunt medii prin analiza unidirecțională a varianței, și se utilizează comparații în perechi între grupuri inspecție, nivelul de inspecție este P<0.>

2 rezultate

2.1 Densitatea osoasă a celor trei grupe: a se vedea tabelul 1.

Tabelul 1 Rezultatele densității minerale osoase în femurul mijlociu al fiecărui grup de șobolani (x±s, g/cm²)

Notă: Comparativ cu grupul de modele, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Micro-CT secțiune transversală bidimensională: secțiunea transversală bidimensională sagitală selectează imaginile axei longitudinale a femurului în fiecare moment din fiecare grup (a se vedea figura 1), iar secțiunea transversală orizontală bidimensională selectează a 100-a imagine sub linia de fractură pentru comparație (Figura 2) ), se poate observa din figură că calusul fiecărui grup a crescut treptat în timp, dar a fost din plastic în grade diferite la 6 săptămâni după fractură; în același timp, se poate observa că calusul din grupul de control a fost mare, iar cortexul calus a fost gros și târât peste linia de fractură după 6 săptămâni, în timp ce calusul din grupul model A existat mai puțin os în calus la 2 săptămâni, iar cortexul calus a fost slăbit după 6 săptămâni. Deși volumul calusului din grupul de tratament nu a fost mare la 2 săptămâni, masa osoasă din calus a fost mai mare decât cea din grupul model. Calusul a fost mai bine modelat după 6 săptămâni. Iar linia de fractură nu este evidentă.

Grup de control Grup model de tratament grup de tratament

Figura 1 Secțiunea transversală sagitală a femurului mijlociu al fiecărui grup

Figura 2 Secțiunea orizontală a femurului mijlociu al fiecărui grup

2.3 Reconstrucția tridimensională Micro-CT: reconstrucția tridimensională a calusului la capătul fracturat al femurului este prezentată în figura 3. Se poate observa din figura 3 că calusul format de-a lungul periostului la ambele capete ale liniei de fractură la 2 săptămâni după fractură în fiecare grupă, firele de fractură din fiecare grup erau încă clare, în special în grupul model și în grupul de tratament, în timp ce calusul din grupul de control era gros și gros, mai ales cu plăci la 6 săptămâni după fractură. Oasele trabeculare erau predominante și linia de fractură a dispărut, în timp ce grupul model era oase libere și linia de fractură era neclară, dar grupul de tratament avea mai mult os calus, os trabecular regulat și gros, iar linia de fractură nu era evidentă.

Figura 3 Reconstrucția tridimensională a calusului R0I la capătul fracturat

2.4 Parametrii Micro-CT: Utilizați software-ul pentru a analiza calusul la capătul fracturat. A se vedea tabelul 2 pentru parametrii asociați.

Tabelul 2 Compararea parametrilor Micro-CT ai fiecărui grup (x±s)

Grup de control Grup model de tratament grup de tratament

Notă: Comparativ cu grupul de modele, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Ser IL-1 P . Nivelul TGF-P 1: a se vedea tabelul 3.

Tabelul 3 Compararea nivelurilor IL-1 P JGF-0 1 din fiecare grupă G±s, n=8)

Notă: Comparativ cu grupul de modele, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

În ultimii ani, medicamentele tradiționale chineze Yinyangdian, Drynaria fortune și compușii săi (pastilele Qing, pastilele Liuwei Dihuang etc.) au fost dovedite în practica clinică pentru a îmbunătăți semnificativ osteoporoza. Acest tip de medicament chinezesc și compuși sunt utilizate mai ales pentru a hrăni ficatul și rinichii. Acest lucru este în concordanță cu principiul hrănirii rinichiului și reînnoirii mușchilor în stadiile medii și târzii ale fracturii. "Zece zile. Pasta de membre cărnoase a fost publicată pentru prima dată în "Shen Nong's Materia Medica". , Cald în natură, are funcțiile de a hrăni rinichiul și de a întări yang- ul, de a reface esența și măduva, de a hrăni sângele și de a hidrata uscăciunea, de a colora plăcut și de a prelungi viața.

În acest studiu, densitatea minerală osoasă a grupului de tratament a fost mai mare decât cea a grupului model după 2 și 6 săptămâni de intervenție (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporozavindecarea fracturilor. Reflectă direct conținutul osos al calusului. Acest lucru arată că Rouganrong poate avea ca efect promovarea osteogenezei. Analiza poate fi eficientă în pasta de hernie de carne. Ingredientele au ca efect reglarea BMP2, iar BMP2 este unul dintre membrii familiei TGF-8. Și acest rezultat este confirmat și de alți parametri ai scanării Micro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp și SMI reflectă proprietățile biomecanice ale calusului, iar valorile din grupul de tratament sunt semnificativ mai bune decât grupul model, ceea ce sugerează, de asemenea, că Roudongrong are ca efect îmbunătățirea pierderii osoase, promovarea osteogenezei și accelerarea vindecării fracturilor.

În ceea ce privește nivelurile serice IL-1B și JGF-P 1, după 2 săptămâni și 6 săptămâni de intervenție, s-a constatat că nivelul IL-1P al grupului de tratament a fost mai mic decât celelalte două grupuri la 2 săptămâni și la 6 săptămâni. Deși nivelul IL-1 B al grupului de tratament a fost mai mare decât grupul de control, totuși semnificativ mai mic decât grupul model (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistancheputeaîmbunătățirea pierderii osoase, promovează osteogeneza și accelerează vindecarea fracturilor. Se poate reduce nivelul de IL-13 înosteoporozafractură șobolani și inhibă fractura. Activitatea celulelor osoase se realizează; în plus, aceasta poate fi legată și de faptul căCistanchepoate crește nivelul de TGF-B 1 la șobolanii fracturați, poate promova diferențierea osteogenă și maturarea și modelarea calusului.

În rezumat, pe baza analizei densității minerale osoase, a parametrilor de scanare Micro-CT și a nivelurilor serice IL-1 P, TGF"1, sa constatat că extractul apos deCistancheputeaîmbunătățirea pierderii osoaseșipromovarea vindecarii fracturilor osteoporotice. Mecanismul poate fi legat de acest lucru. Poate inhiba secreția serului ILT 8 și poate promova secreția de TGF-B 1 la șobolani dupăosteoporozafracturi, îmbunătățind astfel osteoporoza și promovând vindecarea fracturilor.

4 Referințe

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang, et al. Orientări pentru diagnosticul și tratamentul osteoporozei la vârstnici în China (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporosis, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2] Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang, et al. Efectul terapeutic și mecanismul extractului de alcool al herniei de carne asupra șobolanilor ovariectomi cu osteoporoză[J]. Journal of Jilin University (Ediția medicinei), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Extractul de lemn de inimă din Dalbergia sissoo promovează vindecarea fracturilor și aplicarea sa la șobolanii osteoporozici induse de ovariectomie [J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4] Kevin 0'Neill, Christopher M S, Nicholas A M, et al. Evaluarea tomografiei micro-calculate a progresiei vindecării fracturilor la șoareci[j]. Os, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian, et al. Consensul experților privind diagnosticul gradat și tratamentul osteoporozei primare cu medicina tradițională chineză în provincia Zhejiang (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Progresele cercetării în prevenirea și tratamentul osteoporozei prin medicamente chinezești unice și compuse[J]. Ghid medical din China, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng, et al. Efectul piureului de carne de desert asupra expresiei proteinelor BMP-2 la soarecii osteoporozici care imbatranesc rapid[J]. Ningxia Medical Journal, 2014, 36(12): 1114-1116