Efectele extractului de Cistanche Deserticola asupra răspunsului erectil al penisului la șobolanii castrați

Abstract:Cistanche deserticola(CD) a fost considerat ca un agent tonic asupra funcției de reproducere de mii de ani. Efectele extractului de CD asuprapenisul erectilrăspunsul a fost investigat în studiul de față. După operația de castrare, șobolanii au fost tratați intragastric cu extract de CD ({{0}},45, 0,90 și 1,8 g/kg) zilnic timp de patru săptămâni.Penis erectilrăspunsul a fost măsurat și hormonii serici au fost testați la sfârșitul experimentului. S-a evaluat căerectilelatențaa devenit mai lung și celdurata erectilămai scurt în mod semnificativ la șobolanii castrați în comparație cu martorii operați de simulare. Cu toate acestea, extrasul CD a scurtatlatența erectilăși a prelungit durata erectilă pentru a minimiza efectele negative ale castrarii. La o doză de 0,9 g/kg, extractul de CD a reglat concentrația serică a hormonului luteinizant până la nivelul normal la șobolanii castrați. Aceste descoperiri au indicat că CD a facilitat răspunsul erectil al penisului și a modulat nivelul hormonului seric într-o oarecare măsură.

Cuvinte cheie:Cistanche deserticola; răspuns erectil; castrare; hormon

Pentru mai multe detalii despre cistanche îmbunătățiți funcția sexuală

INTRODUCERE

CistancheHoffmg. Et Link, unul dintre genurile familiei Orobanchaceae, este distribuit în principal în zonele aride și deșerturile din emisfera nordică, cum ar fi Mongolia Interioară,Xinjiang, regiunile autonome Ningxia din China și Iran, India, Mongolia etc. Speciile Cistanche aparțin plantelor parazite perene, care se atașează în mod obișnuit pe rădăcinile plantelor care fixează nisipul cum ar fi Haloxylox ammodendron, H. persicum, Kalidium foliatuman și plante Tamarix etc. (Jiang și Tu 2009).Herba Cistanche, tulpina speciei Cistanche, a fost considerată un tonic superior și a câștigat onoarea de „Ginsengul deșerților”. Printre speciile de Cistanche, Cistanche deserticola YC MA a fost indicată ca sursă primară de material pentru Cistanche (Stefanova et al.2011). Cu toate acestea, din cauza recoltării excesive din ultimii ani, resursele naturale ale sălbaticului C. deserticola (CD) sunt deficitare, care a fost colectată ca una dintre plantele de clasa II care necesită protecție în China, deci și alte specii ale acestui gen, cum ar fi C. salsa. și C. sinensis, sunt, de asemenea, utilizate ca înlocuitori în unele zone. Încă de la înregistrarea inițială în materialul medical chinezesc al lui ShenNong (un vechi compendiu farmacologic), s-a crezut că CD-ul tonifiază rinichiul și revigorează „Yang” în practica clinică conform teoriei medicinei tradiționale chineze, despre care se presupune că este eficientă pentru reproducere, dezvoltare și funcția de fertilitate. Între timp, CD-ul a fost, de asemenea, fiert cu carne de oaie, cartofi sau orez pentru a produce un aliment tonic pentru a trata tulburările induse de suprasolicitare timp de sute de ani, ceea ce sugerează că este sigur de administrat pe cale orală (Xiong et al.2013). Cu toate acestea, aceste utilizări anecdotice există în principal în incunabulele chinezești, cu informații științifice limitate discutate în termeni de concepte farmacologice moderne. Disfuncția erectilă (DE) este o afecțiune caracterizată fie de erecția inadecvată a penisului sau de erecția care nu durează suficient de mult la bărbați adulți (Cohan și Korenman 2000). ). Ca răspuns la agenții chimici moderni, sofisticați, a existat un interes reînnoit pentru căutarea unor medicamente eficiente și sigure din plante pentru tratamentul DE (Adimoelja 2000). Un studiu anterior (Liuet al. 2009) a indicat că CD electuary a accelerat erecția penisului la șobolani normali, cu toate acestea, nu au existat date implicate în efectul CD asupra disfuncției erectile. La animal, castrarea chirurgicală cu orhiectomie bilaterală a fost considerată standardul castrarii. pentru investigarea ED (Tombal 2005). Prin urmare, studiul prezent a fost întreprins pentru a evalua efectele potențiale ale CD împotriva DE prin investigarea latenței și duratei erectile la șobolanii castrați.

MATERIALE ȘI METODE

 Chemicals and materials Echinacoside (purity >98%) and acteoside (purity >98 la sută au fost achiziționate de la Institutele Naționale pentru Controlul Alimentelor și Drogurilor (Beijing, China). Metanol de calitate HPLC a fost cumpărat de la Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SUA). Apa purificată a fost produsă utilizând un sistem MilliporeMilli-Q Integral 3 și un sistem Q-POD Milli-Q (Bedford, MA, SUA). Tulpinile de C. deserticola au fost achiziționate de la Shenzhen GURU Biology Co., Ltd (GuangDong, China) și măcinate în pulbere fină cu apulverizator trecut printr-o sită de 60 de ochiuri. Analiza HPLC și prepararea materialului vegetal Conținutul de echinacozidă și actozidă din pulbere CD au fost determinate urmând metoda noastră anterioară (Zhao et al.2011). Apoi, fiecare 100 g de pulbere uscată a fost fiert în 1,5 L apă timp de 1,5 ore. Răcindu-se la temperatura camerei, lichidul amestecat a fost centrifugat la 2000 rpm timp de 10 min (Eppendorf 5810R, Germania) şi precipitatul a fost reextras de două ori în aceeaşi condiţie. Supernatanții combinați au fost concentrați printr-un evaporator rotativ cu vid (Heidolph laborota 4001-eficient, Germania) la 60 de grade și apoi liofilizat și a produs aproximativ 42% pulbere de extract uscat. La efectuarea experimentului următor pe animale, extractul uscat a fost dizolvat în apă purificată la temperatura camerei.

Animale experimentale

Masculi adulți de șobolani Sprague-Dawley (200-220g) au fost obținuți de la Medicine Experimental Animal

Centrul provinciei Guangdong (Guangzhou, PR China), menținut în sferturi cu temperatură controlată cu cicluri de lumină/întuneric de 12-h la temperatura camerei (22-24 grade ) și umiditate constantă (40-70 procente) în SPF (specific fără patogeni)de laborator și hrănite ad libitum. Procedurile experimentale au fost în conformitate cu Ghidul National Institutes of Health pentru Îngrijirea și Utilizarea Animalelor de Laborator. Procedura experimentală

Cu o săptămână înainte de administrare, cincizeci de șobolani masculi SD au fost anesteziați cu pentobarbital de sodiu intraperitoneal (40 mg/kg) (Jung și colab. 1999) și au fost alocați aleatoriu în cinci grupuri: cu excepția șobolanilor din grupul operat simulat (Sham), restul au fost castrați bilateral prin abordarea scrotală (Anderes 2003, Schlatt și colab. 2002). Între timp, grupurile tratate cu CD au fost administrate intragastric cu 0,45 g/kg (doză mică de extract CD, LCD plus Cas), 0,9 g/kg (doză medie de extract CD, MCD plus Cas) și 1,8 g/kg (doză mare de CD). extract, HCD plus Cas) extract CD, respectiv, în timp ce grupurile simulate și castrate au fost administrate numai cu cantitatea corespunzătoare de apă. Măsurarea greutății corporale a fost luată la începutul procedurii și apoi în fiecare săptămână. Toți șobolanii au fost supuși laparotomiei imediat după moarte pentru îndepărtarea și cântărirea posterioară a următoarelor organe: glande prepuțiale, veziculă seminal, glanda prostatică și mușchiul elevator.

Măsurarea răspunsului erectil al penisului

Funcția erectilă a șobolanilor din fiecare grup a fost evaluată urmând metodele anterioare (Ji și colab. 2009, Luo și colab.2006). Pe scurt, un electrod bipolar din oțel inoxidabil (BL420F Data Acquisition & Analysis System, TmeTechnology Co., Ltd, Chengdu, PR China) a fost poziționat cu grijă pe penis până când a fost ridicat cu pulsul de stimulare electrică (5 V) 0,2 s. Timpul de la stimulare până la erecție a fost înregistrat ca latența erectilă a penisului. Când a fost observat răspunsul erectil al penisului, electrode-ul putea fi retras din penis, iar durata de timp în care penisul a menținut erecția a fost înregistrată ca durata erectilă.

Prelevarea de probe de sânge și analiza hormonilor serici

Sobolanii au fost anesteziati cu pentobarbitalin de sodiu intraperitoneal (40 mg/kg) (Jung et al. 1999).

S-au extras probe de sânge și s-au coagulat la 4 grade timp de 4 ore, din care serul a fost colectat prin centrifugare la 4000 rpm timp de 5 minute la 4 grade (Eppendorf 5810 R, Germania) și imediat depozitat la congelator de -20 grade până la analiză ulterioară. Nivelurile totale de LH și FSH au fost măsurate utilizând truse comerciale de radioimunotest (RIA) (Beijing North Institute of Biological Technology, Beijing, China) cu referire la instrucțiunile producătorului (Matsumoto și colab. 1986). Pe baza tehnicii imune radioactive competitive, LH (sau FSH) marcat cu I125-a fost utilizat în test. Pe scurt, 100µl agent LH (sau FSH) marcat cu I125-a fost adăugat la o probă de ser de 100µl și incubat cu 100 pl anticorp de iepure purificat la 4 grade (sau 37 grade) peste noapte. Apoi, în complexul antigen-anticorp a fost adăugat un agent de separare imună anti-iepure de măgar și a fost centrifugat (3500 rpm, 15 min) pentru a separa 125I-LH (sau FSH) liber și legat de anticorp. Ulterior, radioactivitatea precipitatului a fost măsurată la contorul de teste radioimunitare (DMF-96, Zhongcheng electrical technology development Co., Ltd., Hefei, China). Limitele de sensibilitate ale testului LH și FSH au fost ambele de 1,0 mUI/ml.

ANALIZE STATISTICE

Analiza datelor a fost efectuată utilizând software-ul SPSS versiunea 16.0.

Valorile au fost exprimate ca medie ± abaterea standard (SD). Datele parametrice au fost analizate utilizând analize unidirecționale a varianței (ANOVA) urmate de teste LSD post-hoc. Datele neparametrice au fost analizate prin testul Kruskal-Wallis. Diferențele au fost considerate semnificative din punct de vedere statistic dacă probabilitatea pentru abatere a fost mai mică de 0,05.

REZULTATE

Determinarea cantitativă a conținutului de echinacozide și acetonide ale pulberii CD

Conținutul de echinacozidă și acetonidă în pulberea CD a fost de 1,27±0.{01 la sută și 0},52±0,003 la sută, ceea ce a fost conform cerințelor Farmacopeei Chineze. Cromatograma HPLC a pulberii CD a fost prezentată în fig. 1.

(4,6 mm×250 mm, 5 µm, Waters, Milford, MA, SUA);fază mobilă: 0,5% (V/V) soluție apoasă de acid acetic (A) și metanol ( B) ingradient (0min, A: B=25:75; 10-30 min, A: B{=40: 60; 30 min, A:{=0: 100); debit: 1ml/min; lungime de undă detectivă: 330 nm; temperatura: 30.

Fig. 2: Latența și durata erectilă a penisului la castrați. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n=10). ##p<0.01 relative="" to="" sham-operated="" group,=""><0.01 relative="" to="" castrated="" group.="" abbreviation="" (below):="" sham,="" sham-operated="" group;="" cas,="" castration="" control="" group;="" lcd="" +cas="" (0.45g/kg),="" mcd="" +cas="" (0.9g/kg)="" and="" hcd="" +cas="" (1.8g/kg),="" three="" groups="" of="" cd="" extract="" treated="" in="" castrated="">

Fig. 3: Efectele extractului de CD asupra concentrațiilor serice de LH la șobolanii castrați. Datele sunt exprimate ca medie ± SD (n=10). #p<0.05 relative="" to="" sham-operated="" group,="" *=""><0.05 relative="" to="" castrated="" group.="" body="" weights="" and="" relative="" accessory="" organs="" weights="" shown="" in="" table="" 1,="" all="" rats="" were="" of="" similar="" initial="" body="" weights="" with="" an="" increase="" from="" day="" 1="" to="" day="" 28.="" however,="" mean="" values="" in="" castrated="" group="" increased="" from="" 216.8±9.2="" g="" to="" 251.4±12.7,="" 283.3±15.1,="" 306.8±15.4="" and="" 322.2±18.4="" g,="" gaining="" less="" weights="" compared="" to="" the="" sham="" operated="" counterparts=""><0.05). there="" were="" no="" statistical="" difference="" between="" sham="" group="" and="" cd="" treated="">

În plus, greutățile relative medii ale glandei prepuțiale, glandei prostate și veziculei seminale și mușchiului ridicător al șobolanilor incastrate au fost semnificativ mai mici (p.<0.05) than="" those="" of="" normal="" controls,="" respectively.="" compared="" with="" the="" rats="" castrated="" only,="" the="" relative="" values="" of="" these="" organs="" weight="" tended="" to="" be="" higher="" under="" the="" treatment="" of="" cd="" extract.="" erectile="" response="" assessment="" in="" contrast="" to="" sham="" group,="" castration="" made="" the="" rats="" spend="" more="" time="" gaining="" penis="" erection="" under="" electric="" stimulation=""><0.01). however,="" the="" erectile="" latency="" was="" shortened="" by="" cd="" extract,="" exhibiting="" a="" significant="" decrease="" by="" 52.7%="" in="" lcd="" +cas="" group=""><0.01), 73.5%="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 74.5%="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01), respectively.="" furthermore,="" castration="" shortened="" the="" erectile="" duration="" with="" the="" mean="" value="" of="" 37.2±17.3="" s="" compared="" to="" sham="" operated="" group=""><0.01). however,="" the="" erectile="" duration="" in="" rats="" was="" significantly="" prolonged="" approximately="" by="" 2.6-fold="" in="" mcd="" +cas="" group=""><0.01) and="" 2.1-fold="" in="" hcd="" +cas="" group=""><0.01). it="" showed="" no="" strict="" dose-related="" correlation.="" (fig.="">

Nivelurile hormonale serice

Analizată prin testul RIA, concentrația serică medie a LH la șobolanii castrați a fost de 2,50±0,34mUI/ml, arătând o creștere în comparație cu controlul operat simulat (p<0.05). however,="" the="" value="" descended="" about="" 49.2%="" in="" mcd="" +cas="" group="" relative="" to="" that="" in="" castrated="" control=""><0.05) (fig.="" 3).="" shown="" in="" fig.="" 4,="" no="" statistical="" differences="" were="" observed="" among="" all="" groups="" on="" fsh="">

DISCUŢIE

Rezultatele noastre au demonstrat că castrarea a prelungit semnificativ latența erectilă a penisului și a scurtat durata erectilă, cu o remarcabilă satrofie a organelor accesorii. Cu toate acestea, extractul de CD a facilitat răspunsul erectil al penisului și a modulat într-o oarecare măsură nivelul seric de LH la șobolanii castrați. Talha et al.2007). Nivelurile insuficiente de testosteron duce la o scădere a relaxării sale (McClure 1988), ceea ce duce în consecință la impotență la bărbați (Bivalacqua și colab. 2000).

În special la șobolani, este menținută de o gamă largă de concentrații sistemice de testosteron ca {{0}} procente, sub care răspunsul erectil este atenuat într-o manieră dependentă de doză (Armagan și colab. 2006). În studiul de față, concentrația de testosteron în circulație a fost prea scăzută pentru a atinge limita de sensibilitate (0,02 ng/ml) la toți șobolanii castrați (datele nu au fost prezentate în rezultate). Cu toate acestea, CDextract a scurtat semnificativ latența erectilă a penisului la trei doze și a prelungit durata erectilă la 0,90 g/kg și 1,8 g/kg. Probabil a fost consecința efectului de tip androgen al CD menționat în unele studii anterioare (He et al. 1996a, He et al. 1996b). Unele organe accesorii, cum ar fi prostata și veziculele seminale, sunt dependente de androgeni, astfel încât modificările de greutate pot reflecta modificări ale statusului endocrin (Trisomboon et al. 2007, Jang et al. 2011).

A existat nivelul prag al testosteronului, sub care metabolismul acestor organe a fost inhibat (Trachtenberg1985). S-a confirmat în studiul nostru că castrarea a indus scăderea greutății organelor de reproducere accesorii din cauza deficienței de testosteron. Testosteronul este secretat în principal de celula Leydig testiculară reglată de hormoni hipofizici, cum ar fi hormonul luteinizant (LH) și hormonul foliculo-stimulator (FSH), care joacă un rol important în menținerea funcției penisului animalelor castrate (Robert et al. 2004). Deoarece axa hipotalamus-hipofiza-gonada (HPG) este un mecanism de control al feedback-ului în buclă închisă, nivelurile scăzute ale hormonilor gonadal pot regla, la rândul lor, secreția de LH și FSH (Morales și colab. 2004). Studiul nostru a investigat că nivelul seric de LH a crescut semnificativ la șobolanii castrați și apoi a coborât la nivelurile normale cu extract de CD la 0,90 g/kg, ceea ce a fost de acord cu concluzia anterioară că nivelul crescut de LH a fost asociat cu un risc mai mare de disfuncție erectilă (Kupelian și colab. 2006).

În testicul, LH stimulează sinteza și eliberarea de testosteron, al cărui control al feedback-ului este relativ consistent, în timp ce FSH acționează direct asupra celulelor Sertoli pentru hrănire cu complexul de control al feedback-ului (Hellqvist și colab. 2008). Aceste constatări au oferit mai mult sprijin pentru presupunerea că CD-a exprimat efectul androgen, care ar putea fi în principal responsabil pentru reducerea LH seric mai mult decât FSH. În observația actuală, influența castrarii asupra dezvoltării greutății corporale la șobolanii masculi a fost similară cu constatările din studiul anterior (Christoffersen). et al. 2006), în timp ce contrar rezultatelor la femele de șobolan (Pantaleão et al. 2010). Extractul de CD nu a reușit să îmbunătățească semnificativ greutatea corporală, ceea ce s-a datorat probabil duratei insuficiente a tratamentului sau a impactului complex asupra stării generale de sănătate. În concluzie, castrarea a prelungit erectilelanța penisului și a scurtat semnificativ durata, cu creșterea LH seric și atrofia organelor sexuale accesorii. Extractul de CD a facilitat răspunsul erectil al penisului prin scurtarea latenței erectile și prelungirea duratei erectile la șobolanii castrați. Aceste efecte s-au datorat probabil efectului asemănător androgenului, care a fost susținut de observația că extractul de CD a normalizat concentrațiile de LH în aceste r, în special la doza de 0,90 g/kg.

Cu toate acestea, sunt necesare dovezi suplimentare pentru a demonstra efectul extractului de CD împotriva nivelurilor athypotalamic și limbic ED și s-ar putea acorda mai multă atenție acestei valoroase medicamente tradiționale în lumea modernă.