Efectele glicozidelor totale de Cistanche Deserticola asupra leziunilor de stres oxidativ și apoptozei celulare la șobolani cu ischemie-reperfuzie cerebrală Ⅰ

Abstract

Obiectiv: Să exploreze efectele și posibilele mecanisme aleCistanche deserticola glicozide totale(GC) privind deteriorarea stresului oxidativ și apoptoza celulelor nervoase la șobolani cu cerebraleleziune de reperfuzie ischemie(CIRI).

Metode: Modelul de ocluzie a arterei cerebrale medii (MCAO) a fost construit la șobolani model folosind metoda de embolizare cu sutură. După ce modelul a fost stabilit cu succes, șobolanilor din grupul de medicamente (GC) li s-au administrat GC 50 mg/(kg·d) prin gavaj timp de 14 zile consecutive; șobolanilor din grupul de operație simulată (Sham) și din grupul model (Model) li sa administrat același volum de soluție salină normală. Administrare orală. După administrare s-a folosit metoda scorului Longa pentru evaluarea deficitului neurologic; șobolanii au fost apoi sacrificați și a fost efectuată colorarea TTC pentru a calcula procentul de suprafață de infarct cerebral; Metoda ELISA a fost utilizată pentru a detecta serulmalondialdehidăconținut (MDA),superoxid dismutaza(SOD) șiGlutation peroxidază (GSH-Px)activitate; Western blot pentru a detecta factorul nuclear E2-factorul 2 (Nrf2), hemoxigenaza-1 (HO{-1) și B în țesutul cerebralLimfom celular/leucemie-2 (Bcl-2), Bcl-2-proteina X asociată (Bax) și expresia caspazei-3 (Caspaza-3).

Rezultate: Comparativ cu grupul Sham, grupul Model a avut un scor de deficit neurologic crescut, un procent crescut al ariei de infarct cerebral,a crescut conținutul de MDA, a scăzut activitățile SOD și GSH-Px și a scăzut nivelul de exprimare a proteinei Nrf 2, HO -1 și Bc l{-2 Nivelurile de expresie a proteinelor Bax și Caspaze-3 au crescut; comparativ cu grupul Model, scorul deficitului neurologic al șobolanilor din grupul GC a scăzut, procentul zonei de infarct cerebral a scăzut,Conținutul de MDA a scăzut, activitatea SOD și GS H-Px crește, nivelurile de exprimare a proteinei ale Nrf 2, HO -1 și Bcl - 2 au crescut, iar nivelurile de expresie ale proteinei ale Bax și Caspazei - 3 au scăzut. Concluzie: GC-urile pot reduce în mod eficient leziunile de ischemie-reperfuzie cerebrală, iar mecanismul său poate fi legat de activarea căii Nrf 2 / HO - 1, reducând astfel nivelurile de stres oxidativ și inhibând apoptoza celulelor nervoase.

[Cuvinte cheie]Cistanche deserticola glicozide totale; leziunea de ischemie-reperfuzie cerebrală; stresul oxidativ; apoptoza celulară

EXTRACT NATURAL ORGANIC DE CISTANCHE

Faceți clic pentru a obține mai multe detalii

Serviciul de sprijin al Wecistanche-Cel mai mare exportator de cistanche din China:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Cumpărați pentru mai multe detalii despre specificații:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

ischemie-reperfuzie cerebrală,

CIS este o boală cu extremmorbiditate ridicată, handicapșirata mortalitatii. Celulele creierului sunt extrem de sensibile la ischemie și hipoxie, astfel încât recanalizarea cât mai curând posibil a vaselor de sânge cerebrale este cea mai eficientă modalitate de a face față accidentului vascular cerebral ischemic acut. Tromboliza intravenoasă și trombectomia mecanică sunt în prezent metode utilizate pe scară largă, dar datorită lor relativ

Din cauza ferestrei de timp înguste și a altor factori necontrolați, numai<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Reperfuzia ischemiei cerebrale, CIRI este un tip de recuperare a vaselor de sânge cerebrale din stenoză O afectare patologică suprapusă care apare în timpul fluxului sanguin. În prezent se crede că mecanismul său patologic poate fi legat de toxicitatea aminoacizilor excitatori, supraîncărcarea cu calciu, eliberarea de factori inflamatori și acumularea de radicali liberi de oxigen cauzată de leziunile mitocondriale [1], ducând în cele din urmă la distrugerea barierei hemato-encefalice, tulburări de microcirculație. , apoptoza celulelor nervoase și necroza [1] 2] și o serie de reacții, agravând astfel și mai mult deficitele neurologice.

Glicozidele totale de Cistanche deserticola (glicozide de cistanche, GC) sunt derivate din medicina tradițională chineză Herba Cistanche Principalul ingredient activ este extras din tulpinile și rădăcinile de inci). Studiile anterioare au arătat că GC-urile pot inhiba eficient peroxidarea lipidelor, pot îmbunătăți funcția mitocondrială, pot elimina excesul de radicali liberi de oxigen, pot inhiba eliberarea de citokine inflamatorii, pot reduce citotoxicitatea, agregarea antiplachetă, inhiba proliferarea celulară, inhiba apoptoza neuronală și reduce nivelul hormonilor. având astfel anti-îmbătrânire, anti-tumorală, anti-depresie, îmbunătățirea imunității, îmbunătățirea bolilor ischemice cardiovasculare și cerebrovasculare, îmbunătățirea abilităților de învățare și memorie și a funcțiilor cognitive și îmbunătățirea reproducerii [3].

Studiile au arătat că GC-urile pot reduce daunele oxidative ale celulelor și pot menține integritatea barierei hemato-encefalice.

[4]; GC-urile pot îmbunătăți în mod eficient viabilitatea celulară și pot bloca inflamația și apoptoza induse după ischemie-reperfuzie [5]; Nrf 2 joacă un rol important în procesele antiinflamatorii și antioxidante [6]. Pe baza contextului de mai sus, acest articol își propune să studieze în continuare efectele și căile posibile ale GC asupra stresului oxidativ și apoptozei după CIRI prin replicarea modelului CIRI.

1 Materiale și metode

1. 1 Medicamente și reactivi GC-uri (SN-5692, puritate 98%, Western

Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), soluție de colorant de clorură de trifeniltetrazoliu (TTC) 2% (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), kit ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), kit de analiză cantitativă a proteinei BCA (SUA Cell Signaling) Technology Company), anticorpi de iepure anti-șoarece Bcl-2, Bax, Caspas Anticorpi precum e-3, Nrf 2, HO{-1 și anticorpi secundari de capră anti-iepure au fost achiziționați de la Compania Protetech din Statele Unite.

1. 2 instrumente

Centrifugă (Model: TDL{0}}B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), Cititor de microplăci (Model: Max-M5, American Molecular Devices Company), instrument de electroforeză SDS-PAGE (model: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), scanner cu gel (Model: 4466611, US BIO-RAD Company).

1. 3 animale

Șobolani masculi Wistar [SCXK (Beijing) 2019-0010], grad curat, 8 săptămâni, greutate corporală 250-280 g.

1. 3 metode

1. 3. 1 Grupare și modelare

Șobolanii au fost împărțiți în grup simulat (Sham), grup model (Model) și grup de droguri (GC) folosind o metodă simplă de randomizare. Au fost 15 șobolani în fiecare grup. Au fost crescuți adaptiv timp de 1 săptămână și apoi modelați. Post strict și post cu 12 ore înainte de operație, grupul Model și grupul GC au folosit metoda embolizării cu sutură [7] pentru a crea ocluzia arterei cerebrale medii (ocluzia arterei cerebrale medii). ocluzie, model de șobolan MCAO), îndepărtarea embolului a fost efectuată după 2 ore de ischemie pentru a obține reperfuzia. , înregistrați ora de începere a reperfuziei. Rana a fost suturată, pielea a fost dezinfectată cu iodofor, iar animalele au fost returnate în cușcă și crescute, apoi perfuzate timp de 24 de ore. Operația pentru șobolanii din grupul Sham a fost aceeași cu cea pentru șobolanii model, dar nu s-a efectuat nicio blocare. În cele din urmă, 10 șobolani din fiecare grup au fost reținuți pentru experimentele ulterioare.

1. 3. 2. Mod de administrare

Luați pulbere GC și adăugați apă pură pentru a prepara o soluție de 15 mg/mL. Studiile preliminare au arătat că doza de 50 mg/(kg·d) este mai bună decât alte grupe de doze [8], astfel încât doza selectată pentru acest experiment este aceeași ca înainte. Șobolanii din grupul GC au primit GC prin gavaj după 24 de ore de ischemie și reperfuzie, iar șobolanilor din grupul Sham și grupul Model li s-a administrat un volum egal de soluție salină normală prin gavaj timp de 14 zile.

1. 3. 3 Scorul deficitului neurologic

Metoda de scor Longa [7] a fost folosită pentru a nota 24 de ore după operație, iar șobolanii model cu scoruri de la 1 la 3 au fost păstrați pentru experimentele ulterioare. Scor după ultima doză. 0 puncte: niciunul

Simptome neurologice; 1 punct: deficit neurologic usor, membrul anterior contralateral se flexeaza si se ridica atunci cand se ridica coada, iar umarul se aduc; 2 puncte: deficit neurologic moderat, membrul anterior contralateral se flexează și se ridică la ridicarea cozii, aducția umărului, rotirea în cerc în partea opusă a leziunii la mers; 3 puncte: deficit neurologic sever, aplecare spre partea opusă a leziunii la mers; 4 puncte: activități inconștiente și autonome.

1. 3. 4 Determinarea procentului ariei de infarct cerebral

După ultima administrare, 4 șobolani din fiecare grup au fost selectați aleatoriu, anesteziați profund, decapitați, iar creierul le-a fost îndepărtat rapid.

Congelați rapid țesutul creierului într-un frigider de -20 grade timp de 20 de minute. După ce țesutul cerebral este relativ fixat, scoateți-l. Pornind de la intersecția polului anterior al creierului cu chiasma optică și de la frunte la occiput, tăiați creierul de șobolan de-a lungul planului coronal. Tăiați-le în 5 felii de creier cu o grosime de 2 mm, scufundați-le în soluție 2% TTC, puneți-le într-o baie de apă la 37 de grade pentru vopsire timp de 15 minute, răsturnați-le și vopsiți-le încă 15 minute. În cele din urmă, feliile de creier au fost scufundate în soluție de paraformaldehidă 4% și fixate timp de 12 ore înainte de a fi fotografiate. Țesutul cerebral normal a fost prezentat în roșu, iar țesutul cerebral infarctat a fost prezentat în alb. Utilizați software de imagini pentru a analiza și calcula rata de infarct al fiecărei felii de creier. Rata infarctului=zona infarctului/aria totală a secțiunii creierului × 100%.

1. 3. 5 Detectarea indicatorilor legati de stresul oxidativ

Anesteziați șobolanul, luați 4 ml de sânge de aortă abdominală, alicoți-l în tuburi EP curate și puneți-l într-un frigider de 4 grade pentru 0. Se centrifugă la 3 500 r/min timp de 5 ore la 4 grade timp de 15 minute, se ia supernatantul și, în final, se păstrează serul a 3 șobolani din fiecare grup. Conținutul de malondialdehidă (MDA) și superoxid dismutază (superoxid dismutază) a fost determinat conform metodei de operare a trusei ELISA. e dismutaza,

SOD), activitate glutation peroxidază (glutation peroxidază, GSH-Px).

1. 3. 6 Detectarea Western blot

Stresul oxidativ și proteinele legate de apoptoză au fost măsurate pentru a măsura expresia proteinelor Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax și caspază -3 în țesutul cerebral. Au fost selectați trei șobolani din fiecare grup și a fost luată o cantitate adecvată de cortex cerebral din zona bolnavă, i s-a adăugat soluție de liză și concentrația de proteine ​​a fost calculată după extracția proteinei. După electroforeza pe gel proteic, transferul pe membrană, blocarea cu soluție de blocare timp de 2 ore, clătirea și apoi incubarea cu anticorp primar la 4 grade peste noapte, a doua zi, TBST-ul a fost îndepărtat, clătit și anticorpul secundar a fost adăugat pentru incubare timp de 2 h. Plasați banda țintă pe analizorul de imagini pentru a analiza valoarea gri. Calculați valoarea relativă a benzii gri, valoarea relativă a benzii gri=valoarea țintă a benzii gri/valoarea internă a benzii de referință gri.

1. 4 Metode de analiză statistică

Aplicația de date SPSS 25. Software-ul 0 pentru analiza datelor și graficele statistice din acest articol au fost desenate cu software-ul GraphPad Prism 8. Rezultatele datelor compatibile cu distribuția normală sunt exprimate ca medie ± abatere standard. Analiza de varianță cu un singur factor a fost utilizată pentru comparații între mai multe eșantioane, iar LSD-t a fost utilizat pentru comparații între două eșantioane independente. Test, cu P < 0. 05 indică faptul că diferența este semnificativă statistic.