Efectele Cistanche asupra funcției anti-îmbătrânire și imune a șobolanilor model înainte și după procesare

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstract: Obiectiv: Să exploreze diferitele produse prelucrate alecistanciherba in D - galactoza functie anti-imbatranire la sobolani si efectele functiei organelor imune. Metode: Am extras diferitele produse prelucrate din Cistanches herba. Șobolanii SD au fost împărțiți aleatoriu în grupul martor, grupul model de îmbătrânire, grupul cu vitamina E, grupurile cu doză mare, medie și mică, grupurile cu doze mari, medii și mici de vin cistanche. Cu D - galactoză a fost stabilit modelul de șobolan, după tratament, am detectat conținutul de MDA, SOD și NO în serul fiecărui grup de șobolani și am numărat indicele splinei și indicele timusului; și apoi a observat modificările morfologice patologice ale țesuturilor splinei și ADNmt din creier. Rezultate: MDA și NO din serul șobolanilor model în vârstă au crescut semnificativ (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">cistanciherba poate reduce semnificativ MDA și NO (P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Cuvinte cheie: Cistanches herba; prelucrare; îmbătrânire; imun

Medicina tradițională chinezăCistanche deserticolaYC Ma orCistanche deserticolaYC Ma sau C. tubulosa (Schenk) Wight este tulpina cărnoasă uscată, solzoasă aCistanche deserticola(Schenk) Wight. Este de natură caldă, gust dulce și sărat și se află în meridianul rinichilor și intestinului gros. Este esențială pentru întărirea rinichilor și întărirea yangului. Medicina se numește „ginseng de deșert” (2). Cistanche a fost publicat pentru prima dată în „Shen Nong’s Materia Medica”. Este listat ca clasa superioară. Are efecte de umplere a esenței și hrănire a măduvei, hrănirea rinichilor și întărirea yangului, culoarea plăcută și prelungirea vieții, hrănirea sângelui și uscăciunea hidratantă, etc. Poate trata infertilitatea feminină, impotența masculină, constipația uscată, talia rece și genunchii. . Boli precum durerea, blocarea, colapsul sângelui etc.! 3_5]o Ediția din 2010 a „Farmacopeea Republicii Populare Chineze” conțineCistanche tubulosașiCistanche E.

Pe măsură ce corpul îmbătrânește, va exista o anumită degradare atât a funcțiilor fiziologice, cât și a structurii morfologice. Aceasta este ceea ce numim adesea „îmbătrânire”. Manifestările sale sunt în principal deteriorarea organelor, țesuturilor și celulelor, cum ar fi scăderea elasticității țesuturilor, atrofia organelor și scăderea numărului de celule, ceea ce va determina scăderea treptată a numeroaselor funcții ale corpului. Experimentele au confirmat astaCistancheare efecte anti-îmbătrânire „I”, dar studii comparative asupra efectelor anti-îmbătrânire aleCistancheînainte și după procesare nu au fost încă raportate. Acest experiment studiază în principalefecte anti-imbatraniredeCistancheînainte și după prelucrare și oferă o bază științifică pentru studierea mecanismului de îmbătrânire.

Echinacozidul

1 Material experimental

1.1 Animale experimentale

șobolani SD, cântărind 180-220 g. SPF a fost furnizat de Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., numărul de licență: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Medicamente și reactivi

Cistanchea fost achiziționat de la frasinul de carne sălbatică Alashan din Mongolia Interioară și a fost identificat ca tulpina cărnoasă uscată cu frunze de solzi deCistanche deserticolaYC Ma de profesorul Zhai Yanjun de la spitalul nostru; metoda de preparare a fiecărei grupe de substanțe de testat este următoarea, cistanche brute: crud Cistanche se fierb la abur timp de 2 ore, se taie în felii groase de 6 mm și se usucă la 70P. Luați felii de Cistanche și extrageți de 3 ori în apă, apoi combinați decoctul și concentrați până la o anumită concentrație. Preparare Cistanche: Se ia Cistanche crude si se inmoaie in vin galben timp de 8 ore, se adauga 1:1, se fierbe la abur 16 ore, se taie felii groase de 6 mm, si se usuca la 70 T. Se iau feliile de Cistanche si se extrag de 3 ori cu apa, apoi combinați decoctul și concentrați-l la o anumită concentrație. Vitamina E capsule moi (număr de lot 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-galactoză (număr de lot 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Kit oxid nitric (NO) (număr lot: BPE30262); Kit Malondialdehidă (număr lot: BPE30262) MDA) (număr lot BPE30527); kit de superoxid dismutază (SOD) (număr lot: BPE3O387); toate furnizate de Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; kit de extracție a ADN mitocondrial animal de tip coloană (achiziționat de la Beijing Lab Technology Co., Ltd.); Kit PCR (achizitionat de la TIANGEN Reagent Company); alți reactivi sunt puri pe plan intern.

1.3 Echipamente experimentale

Ciclator de gene (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); Cititor de microplaci (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., SUA); Camera de temperatură și umiditate constantă (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); Tipul TGL-16C spune mașinii centrifuge de banc (Shanghai Anting Scientific Instrument Factory); Vortex Mixer (Fabrica de instrumente Shanghai Qingpu Huxi); Balanță electronică (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Mixer Vortex (Fabrica de instrumente Shanghai Qingpu Huxi).

2 Metoda experimentală

2.1 Modelul animal și gruparea

După 1 săptămână de hrănire adaptivă, șobolanii au fost împărțiți aleatoriu într-un grup martor, un grup model, un grup de control, unCistanchegrupul cu doză mare, medie și mică și B. striata: grupuri cu doză mare, medie și mică, fiecare dintre ele fiind de 9 grupuri și 8 bucăți. Cu excepția grupului martor, celelalte grupuri au fost injectate cu D-galactoză 167,5 mg/kg subcutanat dimineața; grupul martor a fost injectat cu un volum egal de ser fiziologic normal; dupa-amiaza, dozele mari, medii si mici de cenusa de carne si vin au fost date 5,48 si respectiv 2. 74, 1,37 g/kg de soluție de produs de testat, grupului martor pozitiv i s-au administrat 2,75 mg/mL vitamina E, grupului martor și grupului model li s-a administrat un volum egal de soluție salină normală prin administrare intragastrică. Timp de 6 saptamani consecutive au fost in sfarsit omorati si au fost masurati diversi indicatori.

2.2 Determinarea conținutului de SOD, MDA și NO în serul de șobolan

Sângele a fost colectat din aorta abdominală a șobolanului, centrifugat la 3000 r/min timp de 15 minute pentru a separa serul sanguin și depozitat la -20 Y pentru utilizare ulterioară. Determinarea conținutului MDA.SOD.NO se efectuează în conformitate cu instrucțiunile trusei de testare.

2.3 Efectul asupra greutății organelor imune la șobolani model în vârstă

Șobolanii din fiecare grup au fost cântăriți și sacrificați după ce a fost prelevat sânge. Splina și timusul au fost prelevate, spălate cu ser fiziologic, uscate și cântărite și s-au calculat coeficienții splinei și timusului.

2.4 Observarea morfologiei țesutului splinei

Splinele cântărite au fost fixate cu paraformaldehidă 4%, încorporate în parafină, secţionate şi colorate cu HE. Modificările în secțiunile patologice ale splinei în fiecare grup au fost observate la microscop.

2.5 Metode statistice

Utilizați software-ul SPSS pentru a efectua o analiză unidirecțională a varianței și testul LSD-t pentru compararea perechilor.

2.6 Detectarea mutațiilor ADNmt în creier

Țesutul creierului de șobolan a fost plasat într-un mortar cu azot lichid, măcinat rapid în pulbere și apoi s-a referit la metoda din literatură, conform instrucțiunilor din kit pentru extracția mtDNA a țesutului cerebral.

Amplificarea PCR detectează deleția fragmentului mtDNA4834: primerii se referă la secvența completă a genomului mtDNA de șobolan raportată de Gada-leta și colab. (1898), iar primerii sunt sintetizați de Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. Pl: 5'-GCGAAGCTTAGAGGCGTTAAC-3'P2: 5'AGTGAGATAAGGAAGCCTGC -3' P3: 5'-AG- GACTTAACCAGACCCAAAGACG{ {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGGCGGG-3,

Sistem de reacție PCR: șablon ADN 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 jiL, câte 2 primeri. Condiții de amplificare: prima denaturare 95 Y timp de 5 min; 95 T denaturare timp de 30 s, 56 T recoacere timp de 30 s, 72 T extensie timp de 45 s, un total de 35 de cicluri; ultima extensie de 72 T timp de 7 minute. Produsele amplificate au fost supuse electroforezei pe gel de agaroză 1,5%.

Acteozid

3 Rezultate și analiză

3.1 EfectulCistancheasupra semnelor fizice ale șobolanilor în vârstă

În comparație cu grupul martor, șobolanii îmbătrâniți au prezentat blană închisă și galbenă, piele moale și plictisitoare, piele moale, căderea părului, pierderea poftei de mâncare, activitate spontană redusă, mișcare lentă, umflare a coloanei vertebrale, apatie, răspuns lent și alte manifestări de îmbătrânire. Cu cât timpul de injectare este mai lung, cu atât simptomele sunt mai evidente. Comparativ cu grupul de îmbătrânire, starea mentală a șobolanilor, culoarea blanii, apetitul, forma corpului și sensibilitatea la reacție s-au îmbunătățit odată cu creșterea timpului de administrare în fiecare grup de administrare.Cistanche. Printre acestea, practic nu a existat nicio diferență între grupul de produse cu doză mare și grupul de control.

3.2 EfectulCistancheasupra conținutului de MDA, SOD și NO din serul șobolanilor model în vârstă

Rezultatele sunt prezentate în tabelul I. În comparație cu grupul martor, grupul model mda.no a fost semnificativ crescut (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Cistanche, MDA.N0 din grupurile cu doze medii și mici de Cistanche a fost redus semnificativ (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3efectul Cistancheprivind funcția imună a șobolanilor model îmbătrâniți Chi

3.3.1 Efectul Cistanche asupra indicelui splinei și indicelui timusului la șobolani model în vârstă

Rezultatele sunt prezentate în tabelul 2. În comparație cu grupul martor, coeficientul timusului și splinei în grupul model este g

Există o tendință de scădere, dar nu este semnificativă statistic. Comparativ cu grupul model, coeficienții timusului și splinei ai fiecărui grup de tratament au fost semnificativ măriți (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Comparație de grup, coeficienții timusului și splinei din grupele cu doză medie și mică deCistancheau tendinta de a scadea

Potenţial; comparativ cu doza mareCistanche deserticolagrupul cu doze mari, timusul și splina din grupurile de pastă pentru fete de vin cu doză medie și mică

Coeficientul visceral are o tendință de scădere; comparativ cu doza mareCistanche deserticolagrupul cu doză mare, coeficienții timusului și splinei din grupul cu doză marecistanche deserticolagrupul cu doze mari au o tendință de scădere. Acest rezultat arată că grupul cu doză mare este mai bun decât grupul cu doză mică în comparație cu diferite grupuri de doză, iar efectul de tratament al grupului de produse este mai bun decât cel al grupului de produse brute în comparație cu același grup de doză.

Tabelul 1 Comparația conținutului de SOD.MDA.NO din sângele șobolanilor din fiecare grup (n. =8,x ±s)

Notă:. În comparație cu grupul de model I, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 Efectul modificărilor patologice ale splineiCistancheșobolani model în vârstă. Grupul martor are o capsulă subțire și uniformă a splinei, trabecule splenice clare, fără umflare, separare clară a pulpei roșii și albe, mai mulți noduli splinei și aceeași dimensiune, în centrul splinei. Numărul de celule din teaca limfatică din jurul arteriolele sunt dense. În grupul model, splina a fost îngroșată, trabecula și cortexul au fost umflate, pulpa roșie și albă a fost neclară, pulpa albă a fost redusă semnificativ, numărul de limfocite a fost redus, un număr mare de celule inflamatorii au fost infiltrate și structura morfologică a fost deteriorată. Deși dimensiunea nodulilor splinei din fiecare grup de tratament a fost diferită, limitele pulpei albe și roșii au fost clare. Numărul de celule din teaca limfatică din jurul arterei mici centrale a splinei a fost dens, iar morfologia și structura au fost restaurate. În plus, grupul de distilatori cu doze mari a reușit să îmbunătățească modificările patologice. Este mai bun decât grupul de vitamina E, în careCistancheprodusul este mai bun decât grupul de produse brute, iar grupul cu doză mare este mai bun decât grupul cu doză mică. Vezi insertul X-XI insert.1-10 este ADNmt din creierul șobolanilor din grupul martor, grupul model, grupul de control și grupul crescut. mtDNA Figura 3 Rezultatele electroforezei produselor de amplificare a mtDNA PCR în creierul de șobolan (primer PI.P2)

3.4 Deleția și mutația ADNmt în creier

Conform primerilor P3 și P4, se poate obține un fragment conservator de ADNmt de aproximativ 770 pb. Din Figura 2 putem vedea că fragmentele țintă au fost amplificate pe toate cele 9 benzi, ceea ce indică faptul că toate cele 9 grupuri de mtDNA au fost extrase cu succes.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p și 750 bp în benzile 2, 4, 5, 7, 9 și 10. Fragmentele au fost recuperate și trimise la Hangzhou Baocheng Biotechnology Company pentru secvențiere. În comparație cu secvența raportată de Gadateta și colab. (1989), a demonstrat că există o deleție a fragmentelor de ADNmt de aproximativ 4000-5000 bp. Prin urmare, arată că există o ștergere de aproximativ 4834 bp a ADNmt în creierul grupului model. Benzile 1, 3 și 8 nu au fragmente, ceea ce indică faptul că nu există deleții de fragmente mitocondriale în 1, 3 și 8. Rezultatele au arătat că nu au lipsit fragmente în grupul de drojdie de la distilatorul cu doze mari, grupul de medicament pozitiv, și grupul martor, sugerând că grupul de drojdie de distilare cu doză mare poate avea efecte anti-îmbătrânire. Vezi Figura 2 ~ Figura 3.

1-10 este ADNmt din creierul șobolanilor din grupul martor, grupul model, grupul de control și grupul crescut. mtDNA Figura 3 Rezultatele electroforezei produselor de amplificare a mtDNA PCR în creierul de șobolan (primer PI.P2)

Cistanche: anti-imbatranire

4. Discutie

Modelul de îmbătrânire cauzat de administrarea intragastrică de D-galactoză este în prezent un model de îmbătrânire mai frecvent utilizat. Modelul reduce în principal activitatea unei varietăți de enzime antioxidante, astfel încât un număr mare de radicali liberi sunt generați în timpul metabolismului organismului, ceea ce duce la îmbătrânirea organismului. Modificările în morfologia țesuturilor sunt similare cu cele ale îmbătrânirii naturale ⑻. Un număr mare de experimente au arătat că creșterea anormală a conținutului de NO în creier și cortex cerebelos și în sângele șoarecilor în vârstă a indusă de D-galactoză. Rezultatele acestui studiu au confirmat că conținutul de sânge al șobolanilor în vârstă a fost semnificativ mai mare decât cel al grupului normal, ceea ce a fost similar cu rezultatele raportate în literatura de specialitate „-m.

În acest experiment, efectul anti-îmbătrânire al modelului de îmbătrânire al șobolanilor înainte și după procesareaCistanchea fost studiat. Rezultatele au arătat MDA și N seric la șobolanii model în vârstă. A crescut semnificativ (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Cistanche.