Efectele poligona-polizaharozei asupra ferroptozei la șobolanii cu nefropatie diabetică

Cuvinte cheie:nefropatie diabetica;poligona-polizaharoză; ferroptoza; transferină; FTH1; GPX4

 

Nefropatie diabetica(DN) este o complicație microvasculară gravă adiabetul zaharat[1] DN este un gravcomplicație microvasculară a diabetului zaharatmellitus [1], prezentându-se de obicei ca microalbuminurie în stadiile incipiente, urmată de dezvoltarea progresivă a Stadii incipiente se prezintă de obicei cu microalbuminurie, urmată de dezvoltarea progresivă a proteinuriei masive, scăderea progresivă a ratei de filtrare glomerulară și creșterea progresivă a creatininei [2] ]. creșterea progresivă a creatininei[2] . Dacă este lăsată netratată, boala poate duce la boli cronice. Dacă este lăsată netratată, poate duce la leziuni renale cronice progresive și, în cele din urmă, la boală în stadiu terminal. Dacă este lăsată netratată, poate duce la leziuni renale cronice progresive și în cele din urmă la insuficiență renală în stadiu terminal[3] . Moartea fierului Moartea fierului este o acumulare dependentă de fier de acizi grași nesaturați moartea fierului este o acumulare dependentă de fier de oxidare a fosfolipidelor acizilor grași nesaturați care duce la moartea celulelor, manifestată în principal prin Manifestarea principală a morții fierului este acumularea dependentă de fier. peroxizii lipidici intracelulari[4] . [4] . Studii S-a descoperit că leziunea celulelor epiteliale tubulare renale este strâns asociată cu moartea fierului[5] . Wang şi colab.

Wang și colab. [6] au descoperit că expresia glutation peroxidazei 4 (GPX4) în expresia interstițială tubulară renală (GPX4) este strâns legată de severitatea și progresia bolii DN. GPX4, ca o țintă importantă pentru declanșarea programului de moarte a fierului, este un senzor de stres oxidativ și de semnalizare a morții celulare, iar expresia redusă a GPX4 duce la o creștere semnificativă a scăderii expresiei GPX4 viu, ducând la o creștere semnificativă a oxigenului viu în organism. 7] . . Prin urmare, inhibarea morții celulelor epiteliale tubulare renale prin reglarea morții cu fier Prin urmare, inhibarea morții celulelor epiteliale tubulare renale prin reglarea morții cu fier pentru a atenua leziunea renală DN poate fi o strategie eficientă pentru tratarea DN. Prin urmare, inhibarea morții tubulare renale. Moartea celulelor epiteliale prin reglarea morții fierului poate fi o strategie eficientă pentru tratamentul DN.
ThepolizaharidădeC. flavuseste cea mai abundentă și mai importantă farmacologică Este una dintre cele mai abundente și mai importante componente farmacologice ale C. flavus. Studiul experimental a constatat că joacă un rol important în îmbunătățirea funcției renale a DN și atenuarea răspunsului inflamator. Li și colab.[8] . Li și colab.[9] . au descoperit că Li et al[9] au descoperit că intervenția polizaharidei C. flavus a îmbunătățit semnificativ tulburările de metabolism al glucolipidului și toleranța la insulină la șoarecii diabetici. Li şi colab. Un alt studiu a constatat că toleranța la glucoză, 24 de ore la glucoză și la insulină a șoarecilor cu nefropatie diabetică a fost îmbunătățită semnificativ după intervenția polizaharidei din extract galben. Un alt studiu a constatat că glucoza din sânge, 24-h microalbumina urinară, creatinina sanguină (SCr) și azotul ureic din sânge (BUN) la șoarecii model cu nefropatie diabetică au fost îmbunătățite semnificativ după intervenția polizaharidei Fructus flavus. iar nivelurile de azot ureic din sânge (BUN) au fost reduse semnificativ într-un model de nefropatie diabetică[10] . Tratamentul DN cu polizaharidă de la Flos Chrysanthemi Cu toate acestea, mecanismul specific al acțiunii sale nu este clar. Prin urmare, prezentul În acest studiu, o dietă bogată în grăsimi combinată cu injecție de streptozotocină (STZ) a fost utilizată pentru a stabili un model de șobolan DN.
Prin urmare, în acest studiu, am stabilit un model de șobolan DN prin dietă bogată în grăsimi combinată cu injecție de streptozotocină (STZ) și am observat efectul polizaharidei C. flavus asupra morții cu fier la șobolani. Prin urmare, studiul de față a fost realizat pentru a observa efectul polizaharidei C. flavus asupra morții cu fier la șobolanii hrăniți cu o dietă bogată în grăsimi combinată cu injecție cu streptozotocină (STZ) și pentru a clarifica mecanismul de acțiune al polizaharidei C. flavus asupra DN.

Materiale și metode
1.1 Animale
Cincizeci de șobolani SD masculi sănătoși cu o masă corporală de (200±20) g au fost găzduiți la Institutul de Radiologie, Academia Chineză de Științe Medicale, Beijing, China, sub un ciclu de 12-h lumină-întuneric la o temperatură de (25±2) grade și umiditate relativă de (50±15) la sută și alimentat ad libitum. Dietă bogată în zahăr și grăsimi (10% untură, 20% zaharoză, 2,5% colesterol, 67,5% furaje convenționale), (4,8% grăsimi, 20% proteine ​​și 59,4% zahăr total), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Acest experiment a fost aprobat de Spitalul de Medicină Integrativă din Cangzhou (CZX2022-KY-023).

1.2 Medicament și preparat
PolizaharidădeFlos Astragalus(puritate 70 la sută, număr de lot S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd. a fost preparată cu soluție salină la o concentrație de 200, respectiv 800 mg/mL. 800 mg/ml soluție. Tabletele de irbesartan (lot 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. a fost preparată în soluție salină la 30 mg/mL. soluţie.

 

1.3 Principalii reactivi și instrumente
Proteine ​​urinare (număr lot C035-2-1), SCr (număr lot C011-2-1), BUN (număr lot C013-2-1) BUN (număr lot C013-2-1), malondialdehidă ( MDA, număr de lot C003-1- 2), glutation (GSH, lot C006-2-1), conținut total de ioni de fier (număr de lot A{039-2-1), Institutul de Cercetare de Inginerie Biologică Nanjing Jiancheng Institutul de Inginerie Biologică , Nanjing, China; Transferrin (număr de lot ab278498), feritină Transferrin (lot ab278498), lanț greu de feritină (FTH1, lot ab75973), GPX4 (lot ab252833) și -feritină (lot ab252833). ab252833), -actin (lot ab179467), Abcam, Marea Britanie. Marker enzimatic multifuncțional iMark680, Bio-Rad, SUA. Centrifuga Fresco17, Thermo, SUA; 5810 centrifuga congelata de banc, Eppndorf, Germania; Cuantificarea fluorescenței ABI Prism® 7500 Applied Biosystems, SUA; Rezervor vertical de electroforeză DYCZ-24DN, Beijing Liuyi Instrument Factory, Beijing, China; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modelare, grupare și administrare de medicamente
După 1 săptămână de hrănire adaptivă, 10 șobolani au fost selectați aleatoriu ca fiind normali. Restul de 40 de șobolani au fost referiți la metoda din literatură [11] pentru a stabili modelul de șobolan DN. Șobolanii au fost hrăniți cu o dietă bogată în zahăr și grăsimi timp de 7 săptămâni, apoi au postit timp de 12 ore fără apă. Șobolanii au fost hrăniți cu o dietă bogată în zahăr și grăsimi timp de 7 săptămâni, apoi au postit cu mâncare și apă timp de 12 ore. STZ a fost injectat intraperitoneal la 30 mg/kg. După 72 de ore, sângele a fost colectat din vena cozii pentru a detecta glicemia aleatorie, iar o glicemie mai mare sau egală cu 16,7 mmol/L a fost considerată modelare de succes a diabetului. Șobolanii au fost hrăniți cu o dietă bogată în zahăr și grăsimi timp de 1 săptămână, iar 24-h urină a fost colectată din cușca metabolică.

 

 

1.5.5 Test Western blot
Se colectează țesuturile renale, se adaugă 150 μL de tampon de liză RIPA, se omogenizează. Supernatantul proteic a fost reținut după centrifugare. Concentrația totală de proteine ​​a fost determinată utilizând trusa de analiză a proteinei BCA. Concentrația totală de proteine ​​a fost determinată utilizând trusa de analiză a proteinei BCA și concentrația de proteine ​​a fost omogenizată. Au fost utilizate cantități egale de proteină 20 ug, 8% -12% SDS-PAGE pentru separarea proteinelor și proteina a fost transferată. Membranele au fost închise cu 5% lapte praf degresat la temperatura camerei timp de 2 ore. Anticorpul primar anti-șobolan de iepure Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) și GPX4 (1:3 000). 3,000), GPX4 (1:3,000), -actină (diluată 1:5,000) și incubate peste noapte la 4 grade . Se incubeaza peste noapte la 4 grade. Membrana a fost spălată, a fost adăugat anticorp secundar (1:9 000) și incubat timp de 2 ore la temperatura camerei. Membranele au fost spălate cu TBST, dezvoltate prin chemiluminiscență ECL și detectate folosind
Software-ul Image J a fost folosit pentru a analiza valorile tonurilor de gri ale benzilor.

 

1.6 Metode statistice
SPSS Statistics25.0 a fost folosit software statistic pentru analiză. Experiment Rezultatele au fost exprimate ca xˉ±s și toate datele au fost testate pentru normalitate și chi-pătrat. Toate datele au fost testate pentru normalitate și chi-pătrat, iar testele t au fost utilizate dacă au fost satisfăcute și au fost utilizate teste neparametrice dacă nu au fost satisfăcute. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 Rezultate
2.1 Efectele polizaharidei Flavopiridium asupra masei corporale și a glicemiei a jeun la șobolani model Comparativ cu grupul normal, masa corporală a șobolanilor din grupul model a fost redusă semnificativ (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Vezi tabelul 2.

2.2 Efectele polizaharidei Flavopiridium asupra indicilor funcției renale la șobolani model
Comparativ cu grupul normal, SCr, nivelul BUN și conținutul de proteine ​​​​urine de 24 de ore la șobolanii din grupul model au fost semnificativ mai mari (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Efectele polizaharidei cu extract galben asupra morfologiei histopatologice a rinichilor la șobolani model
Glomerulul și structura tubulară a șobolanilor din grupul normal nu au prezentat anomalii, iar membrana tilacoidiană și stroma tilacoidă nu au fost proliferate și nu a existat nicio infiltrație de celule inflamatorii etc.; modelul La șobolanii model, s-au observat degenerare și atrofie tubulară focală, iar membrana bazală glomerulară a fost ușor. Șobolanii din grupul model au prezentat degenerare și atrofie tubulară focală, membrana bazală glomerulară ușor îngroșată, hiperplazie tilacoidă și degenerare grasă a glomerulilor și tubii. Şobolanii din fiecare grup de administrare a medicamentului au prezentat leziuni reduse, iar ameliorarea a fost mai evidentă în grupul de medicament pozitiv şi în doza mare de polizaharidă Flavopiridium. Îmbunătățirea a fost mai evidentă în grupul de medicamente pozitiv și în doza mare de polizaharidă Flavopiridium. A se vedea figura 1.