Evaluarea compozițiilor acizilor grași, a activităților antioxidante și farmacologice ale uleiului de semințe de dovleac (Cucurbita Moschata) din extracția enzimatică apoasă Partea 1

May 08, 2023

Abstract:Uleiul din semințe de dovleac este un produs secundar, bogat în nutrienți și componente bioactive care promovează mai multe beneficii pentru sănătate. Acest studiu și-a propus să compare compozițiile chimice, activitățile antioxidante și farmacologice ale uleiurilor din semințe de dovleac extrase din Cucurbita moschata Duch. Ex Poir. (PSO1) și Cucurbita moschata (dovleac japonez) (PSO2) prin extracție enzimatică apoasă. Un amestec de enzime constând din pectinază, celulază și protează (1:1:1) a fost utilizat în procesul de extracție enzimatică. Compoziția de acizi grași a uleiurilor a fost determinată utilizând ester metilic al acizilor grași/cromatografie gazoasă-spectrometrie de masă. Testele activității antioxidante au fost măsurate utilizând radical liber stabil difenilpicrhidrazil, radical cation 2,20 -azinobis-({3- etilbenzotiazolin{-6-sulfonat, putere de reducere/antioxidantă ferică și test de tiocianat feric. Inhibarea Au fost investigate enzimele care implică îmbătrânirea pielii și procesul de albire. Acidul linoleic a fost o componentă majoră a tuturor uleiurilor din semințe de dovleac. În plus, a fost detectată și o cantitate semnificativă de acid oleic, acid palmitic și acid stearic. PSO2 a avut cele mai mari activități antioxidante în comparație cu PSO1 și uleiurile comerciale din semințe de dovleac (COM1 și COM2). Atât PSO1, cât și PSO2 au prezentat efecte inhibitoare mai mari asupra hialuronidazei, colagenazei și tirozinazei decât reclamele. Prin urmare, extracția enzimatică apoasă ar putea produce uleiuri din semințe de dovleac cu un nivel mai mare de antioxidanți, anti-îmbătrânire și activități de albire.Acest lucru este benefic pentru studii farmacologice ulterioare și poate fi folosit ca aliment funcțional pentru beneficiile pielii.

Conform studiilor relevante,cistancheeste o plantă comună care este cunoscută sub numele de „planta miracolă care prelungește viața”. Componenta sa principală estecistanozidă, care are diverse efecte precumantioxidant, antiinflamator, șipromovarea funcției imune. Mecanismul dintre cistanche sipiele albirerezidă în efectul antioxidant al cistancheiglicozide. Melanina din pielea umană este produsă prin oxidarea tirozinei catalizată detirozinaza, iar reacția de oxidare necesită participarea oxigenului, astfel încât radicalii liberi de oxigen din organism devin un factor important care afectează producția de melanină. Cistanche conține cistanozidă, care este un antioxidant și poate reduce generarea de radicali liberi în organism, astfelinhibarea productiei de melanina.

cistanche para que serve

Faceți clic pe Suplimentul Cistanche Tubulosa

Pentru mai multe informatii:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Cuvinte cheie:Cucurbita moschata; dovleac japonez; ulei din semințe de dovleac; extracție enzimatică apoasă; acizi grași; antioxidant; anti îmbătrânire

1. Introducere

Dovleacul face parte din genul Cucurbita și din familia Cucurbitaceae, o plantă comună și faimoasă care a fost cultivată în nordul Mexicului și s-a răspândit în Europa, America de Vest și Asia [1]. Dovleacul este considerat un aliment funcțional care conține nutrienți abundenți precum proteine, carbohidrați, lipide, fibre etc., împreună cu compuși fitochimici precum tocoferoli, carotenoizi și -sitosterol [2]. S-a descoperit că fitonutrienții din diferite părți ale dovleacului au activități farmacologice [2]. Extractul de coajă de dovleac a arătat efecte benefice asupra rănilor de arsuri la modelele animale [3]. Pulpa de dovleac a demonstrat activitate antioxidantă, antiinflamatoare și anti-angiogeneză [2], precum și activitate anti-oboseală la șoareci [4]. În plus, semințele de dovleac sunt o sursă naturală bună de acizi grași esențiali și fitosteroli, care scad riscul de mortalitate cardiovasculară [5,6]. Uleiul din semințe de dovleac este un produs secundar al procesării semințelor de dovleac, care sunt bogate în diverși acizi grași și compuși bioactivi precum -caroteni, -tocoferol, vitamina B, luteină, fitosteroli și alte minerale [7,8]. Uleiul exercită efecte antioxidante, antiinflamatorii, antibacteriene și de vindecare a rănilor [1,9]. În plus, are mai multe beneficii pentru sănătate împotriva bolilor, cum ar fi hipertensiunea arterială, diabetul și cancerul [8,10].

Au fost dezvoltate diferite metode de extragere a uleiului de semințe, inclusiv metode mecanice precum presarea la rece [11] și extracția la presiune înaltă [12]. Extracția cu solvent a uleiului de semințe folosind solvenți organici cum ar fi hexan, acetat de etil, acetonă și metanol a fost, de asemenea, documentată [13,14]. Extracția asistată de enzime este o metodă alternativă pentru industria uleiurilor vegetale, deoarece este o tehnologie ecologică și sigură. Mecanismul major al extracției enzimatice apoase este hidroliza și ruperea pereților celulari ai materialului vegetal, ceea ce duce la mai multă permeabilitate și eliberează componente bioactive, inclusiv faza uleioasă [15]. Diverse amestecuri de enzime aplicate în această extracție sunt compuse din pectinaze, celulaze, hemicelulaze, arabinoză, -glucanază și xilanază [16,17]. Condițiile optimizate ale unui amestec de enzime, de exemplu, temperatura, pH-ul, timpul de reacție, dimensiunea particulelor și concentrația enzimei, au îmbunătățit și activitatea enzimei [16]. În zilele noastre, această metodă a fost utilizată pe scară largă pentru a extrage ulei din multe fructe și semințe de plante [18,19]. Unele studii anterioare au demonstrat starea optimizată a uleiului de semințe de dovleac pentru a obține un randament ridicat și activități farmacologice eficiente [20,21].

În prezent, oamenii consumă ulei de semințe de dovleac în deserturi sau sosuri de salată și este, de asemenea, un ingredient popular în produse cosmetice. Îmbătrânirea pielii este un proces biologic complex care se caracterizează prin încrețire, pierderea elasticității, pierderea umidității și textura aspră cauzată de stresul oxidativ, deteriorarea ADN-ului și acumularea avansată a produsului final de glicație [22]. Acidul hialuronic, colagenul și elastina, care sunt componente importante ale pielii, pot fi degradate de enzimele hialuronidază, colagenază și, respectiv, elastază, ducând la îmbătrânirea pielii. Mai multe uleiuri vegetale, cum ar fi uleiul de măsline, uleiul de semințe de floarea soarelui, uleiul de semințe de struguri și uleiul de jojoba, au fost folosite pentru proprietățile cosmetice ale pielii pentru a reține umiditatea, a îmbunătăți funcția de barieră a pielii și a preveni îmbătrânirea pielii [23]. În plus, pigmentarea pielii este un fenotip variabil și vizibil la om, care implică melanogeneză și este reglată de enzima tirozinază [24]. În prezent, diferite extracte de plante au fost testate pentru cosmetice și produse farmaceutice pentru a scădea producția de melanină, acționând ca agenți de albire [25,26].

cistanche tubulosa supplement

Recent, C. moschata Duch. Ex Poir este un soi de dovleac care este cultivat în mod obișnuit și popular în Thailanda, dar există puține studii care implică valorile sale funcționale și proprietățile farmacologice. În plus, extracția enzimatică apoasă este o metodă interesantă de extragere a uleiului din semințele de dovleac pentru a obține randament și eficiență ridicate. Prin urmare, acest studiu sa concentrat pe determinarea constituenților principali, a activităților antioxidante și farmacologice ale uleiului din semințe de dovleac din C. moschata Duch. Ex Poir. (soiul thailandez) și C. moschata (dovleac japonez) folosind metoda de extracție enzimatică apoasă.

2. Materiale și metode

2.1. Materiale vegetale

Fructele proaspete de C. moschata Duch. Ex Poir și C. moschata (dovleac japonez) au fost achiziționate de la o piață locală din Chiang Mai, Thailanda, în decembrie 2020. Semințele au fost colectate și toate firele fibroase au fost îndepărtate. După eliminarea învelișului semințelor, semințele de dovleac decojite au fost spălate și uscate la temperatura ambiantă. Semințele au fost păstrate într-o pungă de plastic sigilată până la experimentarea ulterioară. În plus, două mostre comerciale de ulei din semințe de dovleac (COM1 și COM2) au fost achiziționate de la un supermarket din Chiang Mai, Thailanda. Toate experimentele au fost efectuate în perioada de adecvare pentru consumul uleiurilor comerciale.

2.2. Produse chimice și reactivi 

Colagenaza din Clostridium histolyticum (ChC—EC.3.4.23.3), elastaza din pancreasul porcin (PE—EC 3.4.21.36), N-succinil-Ala-Ala-p-nitroanilida, sulfat feric (FeSO4), sare de sodiu a acidului hialuronic din Streptococcus equi, hialuronidază din testele bovine, pectinază din Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, Mai mare sau egal cu 5 unități/mg proteină, pH optim=4.{{20}}, temperatură optimă=61 ◦C), celulază din Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, mai mare sau egal cu 0,3 unități/mg solid, pH optim=6,5, temperatură optimă {{ 30}}–55 ◦C), protează din Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, Mai mare sau egală cu 0,6 unități/mg solid, pH optim=5,1, temperatură optimă=57,2 ◦ C), 2,20 -azinobis 3-etilbenzotiazolin-6-sulfonat (ABTS), 2,2-difenil{-1-picrhidrazilhidrat (DPPH), 2,4,6 tripyridil-s-triazină (TPTZ), acid 6-hidroxi{-2,5,7,{8-tetrametilcroman{-2-carboxilic (Trolox), albumină serică bovină, acid kojic, L -tirozina, L-DOPA, acid linoleic, fosfat de sodiu monobazic (NaH2PO4·2H2O), fosfat de sodiu dibazic și tirozinaza din ciuperci au fost achiziționate de la Sigma-Aldrrich (St. Louis, MO, SUA). În plus, 37% acid clorhidric, 95% etanol, apă distilată (DI), dimetil sulfoxid (DMSO) și metanol au fost achiziționate de la RCI Labscan Co., Ltd. (Bangkok, Thailanda). Tiocianatul de amoniu (NH4SCN) și clorura feroasă (FeCl2) au fost achiziționate de la Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, India). Tris (hidroximetil) aminometan a fost achiziționat de la Merck (Darmstadt, Germania).

2.3. Extracție enzimatică apoasă

Uleiuri din seminte de dovleac din ambele C. moschata Duch. Ex Poir și C. moschata (dovleac japonez) au fost extrase prin metoda de extracție enzimatică apoasă folosind parametrii de hidroliză enzimatică dintr-un studiu anterior al lui Kanopka și colab. (2016), inclusiv concentrația enzimei, raportul enzimă-substrat, temperatura de reacție, pH-ul și timpul de reacție [21]. Trei tipuri diferite de enzime, inclusiv pectinaza, celulaza și proteaza, au fost combinate într-un raport de greutate 1:1:1 pentru a genera un cocktail concentrat de enzime. După aceea, cocktailul concentrat rezultat a fost diluat în apă DI pentru a genera un amestec enzimatic apos de 2 procente g/g. Semințele de dovleac fără coajă au fost apoi adăugate la amestecul enzimatic apos rezultat într-un raport de greutate de 1:1. Amestecul a fost apoi măcinat fin folosind un blender Moulinex DB81 la temperatura camerei până la omogenitate. pH-ul suspensiei rezultate a fost apoi ajustat la 4,7 folosind HCI 0,1 M și incubat la 54 °C timp de 15 ore. După ce suspensia a fost răcită la temperatura camerei, a fost centrifugată la 11.500 x g timp de 10 minute. Stratul superior de supernatant, care era faza uleioasă, a fost colectat. Crema produsă în timpul procesului de extracție nu a fost emulsionată, ci îndepărtată prin sifonare cu ajutorul unei micropipete. Reziduul de semințe de dovleac a fost îndepărtat prin filtrare prin hârtie de filtru Whatman No.1 sub vid [21]. Ulei din semințe de dovleac de la C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) și C. moschata (dovleac japonez) (PSO2) au fost păstrate în recipiente bine închise, rezistente la lumină, la temperatura camerei până la experimentarea ulterioară.

2.4. Determinarea compoziției chimice a uleiului de semințe de dovleac folosind metoda esterului metilic al acizilor grași/cromatografic gazos-spectrometric de masă (FAME/GC/MS)

Uleiul din semințe de dovleac a fost determinat pentru compoziția acizilor grași utilizând metoda ester metilic al acizilor grași/gaz cromatografic-spectrometric de masă (FAME/GC/MS). FAME este un tip de ester de acizi grași care este derivat prin transesterificarea catalizată de acid a grăsimilor cu metanol. În acest studiu, uleiurile din semințe de dovleac (PSO1, PSO2, COM1 și COM2) au fost saponificate prin adăugarea de soluție de 0,5 M NaOH în metanol la 100 ◦C timp de 15 minute . După răcire, probele de ulei au fost derivatizate cu trifluorură de bor (BF3) în soluție de metanol la 100 ◦C timp de 1 min pentru a forma produse FAME. După răcire şi adăugare de NaCI saturată şi hexan, FAME au fost împărţite în fază hexană şi au fost colectate în flacoane pentru injectare. Extractele FAME au fost analizate folosind tehnica GC/MS în următoarele condiții: dimensiunea coloanei capilare (TR-FAME, dimensiune 60 m × 0,25 mm, dimensiunea particulei 0,25-µm), program de funcționare a temperaturii de 50 ◦C ; ține 2 min cu rata 1 rampă de 10 ◦C/min până la 180 ◦C, ține 15 min; rampa 2 viteza de 4 ◦C/min, temperatura finală 230 ◦C, ține 22,50 min. Heliul a fost utilizat ca gaz purtător la un debit de 1,0 ml/min. Probele de ulei au fost injectate într-un mod fără scindare (raport de împărțire 1:20 și 20 mL/min) la 235 ◦C cu un autosampler. Un detector MS echipat cu o sursă de ionizare prin electrospray (ESI) a funcționat la 70 eV cu temperaturile sursei de ioni și ale liniei de transfer stabilite la 200 ◦C și, respectiv, 220 ◦C, a înregistrat spectre de masă în intervalul m/z de 38–600. Compușii analizați au fost alocați prin compararea spectrelor lor de masă cu datele publicate (Institutul Național de Standarde și Tehnologie, 2008). Compoziția procentuală a fost calculată prin integrarea vârfurilor în cromatogramele ionice totale (TIC). Toate măsurătorile au fost efectuate de Laboratorul de Cercetare și Servicii, Centrul de Știință Halal, Universitatea Chulalongkorn, Bangkok, Thailanda, în conformitate cu GMP/HACCP Halal și Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Determinarea activităților antioxidante

2.5.1. 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazil (DPPH) Test de captare a radicalilor

Activitatea de captare a radicalului DPPH (DPPH•) a fost determinată utilizând metoda stabilită de Chaiyana et al. (2017) [27]. Pe scurt, 20 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) și acid linoleic dizolvat în DMSO au fost amestecate cu 180 µL de soluție etanolică DPPH 167 µM într-o placă 96-godeuri și apoi incubate timp de 30 de minute la temperatura camerei în întuneric. Acidul ascorbic (1 mg/mL) a fost utilizat ca martor pozitiv. Densitatea optică (OD) a fost măsurată la 520 nm folosind un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Procentul de inhibare a DPPH a fost calculat folosind ecuația (1):

Inhibarea DPPH ( procente )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

unde ODA este OD a unui amestec care conține apă DI și soluție DPPH•; B este ODB al unui amestec care conține apă DI și DMSO; C este ODC al unui amestec care conține probe de ulei și soluție DPPH•; iar ODD este OD a unui amestec care conține mostre de ulei și DMSO.

2.5.2. 2,20 -Azino-Bis-3-Etilbenztiazolină-6-Acid sulfonic (ABTS) Test

Activitatea de captare a radicalilor cationici ABTS (ABTS• plus) a fost măsurată prin metoda colorimetrică conform lui Chaiyana et al. (2017) și Paradee și colab. (2019) [27,28] cu o ușoară modificare. ABTS• plus a fost generat prin adăugarea a 2 mL de ABTS 7 mM cu 3 mL de persulfat de potasiu 2,45 mM și incubat timp de 16-24 ore la temperatura camerei, în întuneric. ABTS• plus rezultat a fost ulterior diluat cu etanol pentru a obține o DO de 0,7 ± 0,1 la 750 nm. Pe scurt, 20 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) și acid linoleic dizolvat în DMSO au fost amestecate cu 180 µL de ABTS• plus soluție etanolică într-o placă 96-godeuri și incubate timp de 5 minute la temperatura camerei . OD a fost măsurată la 750 nm utilizând un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). Acidul ascorbic (1 mg/mL) a fost utilizat ca martor pozitiv. Curba standard a fost produsă prin reprezentarea grafică a absorbanței la 750 nm față de diferite concentrații de Trolox, cuprinse între 2,5-30 µg/mL. ABTS• plus activitatea de captare a fost calculată din curba standard Trolox (R2=0.9922) și exprimată ca capacitate antioxidantă echivalentă Trolox (TEAC). Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți.

2.5.3. Testul de reducere a puterii antioxidante ferice (FRAP).

Puterea antioxidantă reducătoare ferică (FRAP) a fiecăreia dintre probe a fost determinată utilizând testul FRAP așa cum este descris într-un studiu anterior al lui Chaiyana și colab. (2017) care a fost ușor modificat de la Saeio și colab. (2011) [27,29]. Reactivul FRAP a fost proaspăt generat prin amestecarea a 300 mM de tampon acetat (pH 3,6), 10 mM 2,4,6 tripiridil-s-triazină (TPTZ) în 40 mM HCI și 20 mM FeCI3 în proporție de 10:1:1. În acest studiu, 20 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) și acid linoleic au fost amestecate cu 180 µL de reactiv FRAP într-o placă de 96-godeuri și incubate timp de 5 minute la temperatura camerei în întuneric. OD a fost măsurată la 595 nm folosind un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). Acidul ascorbic (1 mg/mL) a fost utilizat ca martor pozitiv. Curba standard a fost produsă prin reprezentarea grafică a absorbanței la 595 nm față de diferite concentrații de sulfat feric (FeSO4) cuprinse între 0,003-0,5 mM. Valoarea FRAP a fost calculată din curba standard FeSO4 (R2=0.9965) și exprimată ca capacitate echivalentă (EC1). Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți.

2.5.4. Testul de tiocianat feric (FTC).

Inhibarea peroxidării lipidelor a fost investigată prin metoda tiocianatului feric (FTC). Această metodă a fost efectuată conform pașilor descriși de Osawa și colab. (1981) [30] cu o ușoară modificare. Amestecul a fost compus din 50 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) și acid linoleic, 50 µL de acid linoleic 50% în DMSO, 50 µL de soluție apoasă de tiocianat de amoniu 10% (NH4SCN) și 50 pl de clorură feroasă 2 mM (FeCl2). În continuare, amestecul a fost incubat la 37 ± 2 °C timp de 1 oră și OD a fost măsurat la 500 nm folosind un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). -Tocoferolul (0,025–0,1 mg/mL) a fost utilizat ca martor pozitiv. Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Activitatea de inhibare a peroxidării lipidelor a fost calculată folosind ecuația (2):
Inhibarea peroxidării lipidelor ( procente )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
unde ODA este OD al amestecului care conține acid linoleic, NH4SCN și FeCI2; ODB este OD al DMSO; ODC este OD al amestecului care conține probe de ulei, acid linoleic, NH4SCN și FeCl2; iar ODD este OD a amestecului care conține probe de ulei și DMSO.

2.6. Determinarea activităților anti-îmbătrânire

2.6.1. Activitate anti-hialuronidază

Măsurarea activității anti-hialuronidază a fost efectuată așa cum a fost descris anterior de Chaiyana și colab. (202{0) [31]. Mai întâi, 20 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) au fost amestecate cu 100 µL de soluție de hialuronidază 15 U/mL și incubate la 37 ◦ C timp de 10 minute. După incubare, s-au adăugat 100 uL de acid hialuronic 0,03% g/v care a fost dizolvat în tampon fosfat 20 mM (pH 5,35), apoi s-a incubat la 37°C timp de 45 min. După aceea, s-a adăugat 1 ml de albumină serică bovină 0,1 procente și s-a incubat la temperatura camerei timp de 10 minute. OD a fost determinată la 600 nm folosind un detector multimod (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, SUA). Acidul oleanolic (0,25 procente g/v) a fost utilizat ca martor pozitiv. Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Procentul de inhibare a hialuronidazei a fost calculat folosind ecuația (3):

Inhibarea hialuronidazei ( procente )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
unde ODA este OD al amestecului care conţine apă DI, soluţie de hialuronidază şi acid hialuronic; ODB este OD a amestecului care conține apă DI și tampon fosfat (pH 5,35); ODC este OD al amestecului care conține mostre de ulei, soluție de hialuronidază și acid hialuronic; iar ODD este OD a amestecului care conține probe de ulei și tampon fosfat (pH 5,35).

2.6.2. Activitate anti-colagenază

Măsurarea activității anti-colagenază a fost efectuată conform procesului stabilit de Chaiyana și colab. (2019) și Thring și colab. (2009) cu ușoare modificări [32,33]. Pe scurt, 20 uL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) au fost amestecate cu 20 uL de soluție de colagenază 0,1 U/ml din Clostridium histolyticum și incubate la 37 °C timp de 15 min. După incubare, 80 µL de tampon tricină 50 mM (400 mM NaCI și 10 mM CaCl2, pH 7,5) și 40 µL de N-[3-({2-furil)acriloil]-Leu-Gly- S-a adăugat soluție de substrat Pro-Ala (FALGPA). OD a fost detectat imediat la 340 nm și apoi măsurat continuu timp de 20 de minute utilizând un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). Acidul oleanolic (1 procent g/v) a fost utilizat ca martor pozitiv. Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Procentul de inhibare a colagenazei a fost calculat folosind ecuația (4):

Inhibarea colagenazei ( procente )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
unde ODA este OD al amestecului care conține probe de ulei, soluție de colagenază, tampon de tricină și substrat FALGPA; și ODB este OD al amestecului care conține DMSO, soluție de colagenază, tampon de tricină și substrat FALGPA.

2.6.3. Activitate anti-elastaza

Măsurarea activității anti-elastazei a fost efectuată conform procesului stabilit de Chaiyana și colab. (2019) și Thring și colab. (2009) cu mici modificări [32,33]. Pe scurt, 10 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) au fost amestecate cu 40 µL de soluție de elastază 0,03 U/mL din pancreasul porcin, apoi 50 µL de tampon Tris-HCL 200 mM (pH 8,0) și 100 µL de S-a adăugat soluţie de substrat 0,8 mM N-succinil-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN). OD a fost detectată imediat la 410 nm și apoi măsurată în mod continuu timp de 20 de minute utilizând un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). Acidul oleanolic (1 procent g/v) a fost utilizat ca martor pozitiv. Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Procentul de inhibare a elastazei a fost calculat folosind ecuația (5):

Inhibarea elastazei ( procente )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
unde ODA este OD al amestecului care conține probe de ulei, soluție de elastază, tampon Tris-HCl și substrat AAAPVN; și ODB este OD al amestecului care conține DMSO, soluție de elastază, tampon Tris-HCl și substrat AAAPVN.

2.7. Determinarea activităților anti-tirozinaze

Efectul de albire al unui extract natural a fost stabilit prin măsurarea activității anti-tirozinazei care a fost efectuată conform Saeio și colab. (2011) și Laosirisathian și colab. (2020) [29,34]. L-tirozina și L-DOPA au fost substraturile enzimei tirozinazei în acest studiu. Pe scurt, 10 µL de probe de ulei (PSO1, PSO2, COM1, COM2) au fost amestecați cu 30 µL de tirozinază într-o placă 96-godeuri, apoi incubate la temperatura camerei timp de 10 minute. După incubare, s-au adăugat 100 uL de substrat, care reprezintă 2,5 mM de L-tirozină sau L-DOPA, și s-au incubat timp de 30 de minute. OD a fost determinată la 450 nm folosind un cititor de microplăci (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, Anglia). Acidul kojic (20 pg/mL) a fost utilizat ca martor pozitiv. Experimentele au fost făcute în trei exemplare și efectuate în trei independenți. Procentul de inhibare a tirozinazei a fost calculat folosind ecuația (6):

Inhibarea tirozinazei ( procente )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
unde ODA este OD al amestecului care conţine DMSO, enzimă tirozinază şi L-tirozină; ODB este OD a amestecului care conține enzima tirozinază și PBS cu un pH de 6,8; ODC este OD al amestecului care conține mostre de ulei, enzimă tirozinază și L-tirozină; și ODD este OD a amestecului care conține probe de ulei, enzimă tirozinază și PBS cu un pH de 6,8.

2.8. Analize statistice

Toate datele au fost demonstrate ca medie ± abatere standard (SD). Semnificația statistică a fost analizată utilizând analiza unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul post-hoc al lui Tukey folosind GraphPad Prism (versiunea 8.0, GraphPad Software), iar p <0}.05 a fost luat în considerare semnificativ din punct de vedere statistic.

cistanche herb

3. Rezultate si discutii

3.1. Caracter de ulei din semințe de dovleac

În acest studiu, am folosit extracția enzimatică apoasă în loc de extracția cu solvent organic pentru a extrage uleiul din semințe de dovleac din C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) și C. moschata (PSO2) deoarece este un proces simplu, eficient și productiv [15,21]. PSO1 a fost un lichid maro închis cu vâscozitate scăzută, în timp ce PSO2 a fost un lichid maro-verzui cu vâscozitate scăzută. Ambele uleiuri din semințe de dovleac aveau mirosul lor caracteristic. Randamentele de PSO1 și PSO2 au fost de 17,7 procente v/g și, respectiv, 15,6 procente v/g. În afară de ulei, s-a raportat că semințele de dovleac conțin o varietate de compuși nutritivi. Compozițiile apropiate ale C. moschata au fost în principal carbohidrați (39,51 la sută), urmați de grăsimi (28,49 la sută), proteine ​​(19,23 la sută), apă (7,67 la sută) și, respectiv, cenușă (5,18 la sută), [35]. Cu toate acestea, în comparație cu studiile anterioare care utilizează solvent și presare mecanică, studiul de față a evidențiat randamente mai mici de ulei de C. moschata. Deși extracția cu solvenți a fost descrisă ca fiind cea mai eficientă metodă de extracție a uleiului, extragând până la 98% din uleiuri din semințe, există unele probleme legate de reziduurile de solvenți și puritatea uleiului produs [36]. În plus, solventul folosit în procesul de extracție a afectat randamentul uleiului generat. Extracția cu hexan, eter de petrol, benzen de petrol, ciclohexan, eter izopropilic, acetat de etil, tetrahidrofuran, propan-2-ol și acetonă a dat 43,4-64,4 la sută [37,38]. Prin urmare, presarea la rece a fost de preferată extracției cu solvent. Cu toate acestea, o presa la rece poate provoca unele complexități în etapa inițială a utilizării unei prese cu șurub [39]. Prin urmare, extracția enzimatică apoasă ar putea fi o metodă alternativă de extracție, deoarece a dat un conținut mai mare de ulei de semințe de dovleac (36,0 la sută) în comparație cu uleiul presat la rece (33,5 la sută) [21]. Deși procesul de extracție enzimatică apoasă a fost mai complicat decât presa la rece, el cuprinde un cost de investiție relativ mai ieftin, o scădere continuă a costului preparatelor comerciale enzimatice, un potențial de a izola simultan componente fitochimice unice și valoroase, precum și de a aborda dorința răspândită de implementare a tehnologiilor verzi [21]. Studiile preliminare au descris că mai multe enzime, cum ar fi celulazele, pectinazele, hemicelulaza și proteaza au fost adesea folosite pentru a distruge structura peretelui celular al plantelor pentru a îmbunătăți extracția bioactivă din plante [16,17]. Prin urmare, am proiectat acest studiu pentru a extrage uleiul de semințe folosind un amestec de enzime care conține pectinază, celulază și protează (1:1:1) așa cum a fost descris anterior de Kanopka și colab. (2016), care au optimizat condițiile de hidroliză enzimatică pentru a obține cel mai mare randament de ulei de semințe de dovleac [21]. În plus, această metodă prezintă alternative mai sigure și mai sustenabile din punct de vedere ecologic la extracția cu solvenți, denumite aici „extracție verde”.

3.2. Compoziția chimică a uleiului din semințe de dovleac

Pentru analiza compoziției acizilor grași, uleiul din semințe de dovleac folosind extracția enzimatică apoasă (PSO1 și PSO2) a fost comparat și analizat împreună cu uleiul din semințe de dovleac comercial (COM1 și COM2) produs prin extracție prin presare la rece. Compozițiile de acizi grași ai PSO1, PSO2, COM1 și COM2 sunt prezentate în Tabelul 1. Toate probele de ulei din semințe de dovleac au constat din acizi grași polinesaturați (PUFA), mononesaturați (MUFA) și saturați. Acidul cis-linoleic (C18:2) a fost componenta principală în toate probele de ulei. COM2 a conținut cel mai mare conținut de acizi grași (51,74 la sută), urmat de COM1 (48,00 la sută), PSO1 (39,09 la sută) și respectiv PSO2 (37,63 la sută). În mod similar, acidul cis-oleic (C18:1) a fost prezent într-un procent ridicat, în special în PSO2 (37,45 la sută), urmat de COM1 (33,39 la sută), PSO1 (31,22 la sută) și COM2 (28,64 la sută). Acizii grași saturați, cum ar fi acidul palmitic (C16:0) și acidul stearic (C18:0) s-au găsit doar în cantități mici în fiecare dintre probele de ulei. Au fost de asemenea observate și identificate urme de alți PUFA, MUFA și acizi grași saturați.

În literatură, acidul linoleic este cunoscut și sub numele de omega-6, un acid gras esențial care nu poate fi sintetizat de corpul uman, ci doar primit prin consumul alimentar. Acidul linoleic este un nutrient important pentru funcțiile de sănătate la om, implicând un precursor al ceramidelor, care este o componentă majoră a membranelor celulare, vitamina D și o varietate de hormoni [40,41]. Studiile pe animale au arătat că deficiența de acid linoleic poate cauza pielea solzoasă și mâncărime [23]. În plus, acidul linoleic din uleiul de plante a sprijinit vindecarea rănilor pielii, împreună cu prevenirea inflamației pielii și a acneei [23]. În plus, acidul oleic sau omega-9 a fost benefic în prevenirea cancerului, a bolilor autoimune și inflamatorii [42]. Într-adevăr, acidul oleic a redus semnificativ producția de oxid nitric la locul rănii, rezultând închiderea mai rapidă a plăgii [43]. Aceste date susțin că uleiul din semințe de dovleac, care îmbogățește acidul linoleic (omega-6) ​​și acidul oleic (omega-9), prezintă potențiale beneficii pentru sănătate.

cistanche tubulosa

Din descoperirile noastre, uleiul din semințe de dovleac (PSO1, PSO2, COM1 și COM2) a constat din mulți acizi grași, inclusiv acid linoleic (C18:2), acid oleic (C18:2), acid palmitic (C16:0) și acid stearic (C18:0), care sunt componente comune găsite în uleiul de semințe de dovleac [44]. Acidul linoleic (omega-6) și acizii oleic (omega-9) au fost dominanti în toate probele de ulei. Cea mai mare cantitate de acid linoleic a fost COM2, urmată de COM1, PSO1 și, respectiv, PSO2. De asemenea, cea mai mare cantitate de acid oleic a fost PSO2, urmată de COM1, PSO1 și COM2. Aceste rezultate explică faptul că extracția enzimatică apoasă a uleiului de semințe de dovleac a avut un acid linoleic puțin mai scăzut, dar nu acid oleic decât extracția prin presare la rece. Motivul pentru conținutul mai scăzut de acid linoleic din semințele de dovleac din extracția enzimatică apoasă decât în ​​probele de ulei comerciale sa datorat unei diferențe în procesul de extracție. Studiile anterioare au găsit inconsecvențe în cantitatea de acizi grași nesaturați, în special acid oleic și acid linoleic, din uleiurile din semințe de dovleac din extracții distincte [39]. Conținutul de acid oleic a variat de la 28,19 la sută în uleiul de semințe de dovleac presat la rece până la 30,56 la sută în uleiul de semințe de dovleac extras prin pentan, în timp ce conținutul de acid linoleic a variat de la 43,86 procente în uleiul de semințe de dovleac extras cu pentan. la 46,67 la sută în ulei de semințe de dovleac presat la rece [39]. Pe lângă diferitele metode de extracție, solvenții utilizați în procesul de extracție și temperatura în timpul maturării semințelor au afectat și conținutul de acid linoleic al semințelor de plante. Un studiu anterior a evidențiat că eterul de petrol a dat ulei de in cu conținut scăzut de linoleic (26,2 la sută), în timp ce n-hexanul a dat rezultate contradictorii cu un conținut de acid linoleic de 46,5 la sută [45]. În plus, acidul linoleic este invers proporțional cu temperatura în timpul maturării semințelor de floarea soarelui [46].

În plus, un studiu relativ a descoperit că compoziția chimică din punct de vedere al compoziției acizilor grași a relevat faptul că acizii linoleic și oleic au fost prezenți în 47,45% și, respectiv, 35% în uleiul de semințe de dovleac (C. maxima) extras cu dietil eter [47] . Conform lui Akin et al. (2018), conținutul de acid linoleic a variat de la 53,19 la sută la 53,27 la sută, urmat de acid oleic, care a fost prezent și în cantități mari, variind de la 27,52 la sută la 27,59 la sută în extracția uleiului de semințe de C. pepo L. presat la rece [48] ]. Prin urmare, extracția enzimatică apoasă în acest studiu a obținut și randamente mai mici de acizi grași decât extracția cu solvent și extracția prin presare la rece menționate în studiile anterioare. În comparația soiurilor, am constatat că PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) a prezentat o cantitate mai mare de acid linoleic decât PSO2 (C. moschata sau dovleac japonez). În mod divers, PSO2 a prezentat o cantitate mai mare de acid oleic decât PSO1. Este important că variațiile profilurilor de acizi grași și cantitățile de ulei din semințe de dovleac au fost dependente de originea anumitor soiuri, de condițiile climatice și de managementul post-recoltare [49]. Pe lângă diferențele de profil de acizi grași ale uleiurilor din semințe de dovleac obținute prin diferite metode de extracție, uleiurile din tehnologia enzimatică apoasă au fost raportate a fi bogate în fitosterol și tocoferol [50]. Prin urmare, PSO1 și PSO2, care au fost produse prin metoda de extracție verde, sunt sugerate ca uleiuri alternative din semințe de dovleac pentru aplicații ulterioare.


Pentru mai multe informații: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

S-ar putea sa-ti placa si