Gao-Zi-Yao îmbunătățește funcția de învățare și memorie la bătrânii șobolani hipertensivi spontani, partea a 2-a

Animale experimentale

Șobolanii hipertensivi spontani (SHR) masculi în vârstă de douăsprezece luni și opt săptămâni au fost achiziționați de la Centrul de modele animale din Nanjing.

Există o relație puternică între 8-bărbații de o săptămână și memorie. În această perioadă, creierul creaturii masculine se dezvoltă rapid, iar conexiunile dintre neuronii săi cresc treptat, ceea ce afectează, la rândul său, dezvoltarea memoriei sale.

Cercetările arată că memoria creaturilor masculine continuă să se îmbunătățească odată cu vârsta. Acest lucru nu numai că are un impact semnificativ asupra supraviețuirii și reproducerii lor, dar îi ajută și să se adapteze mai bine la mediu și să facă față noilor provocări.

Prin urmare, ar trebui să încurajăm în mod activ bărbații tineri să participe la o varietate de activități benefice, cum ar fi rezolvarea puzzle-urilor, învățarea de noi abilități și explorarea de noi domenii. Aceste activități le stimulează creierul, permițându-le să se dezvolte mai rapid și să-și îmbunătățească abilitățile de memorie.

În același timp, ar trebui să oferim, de asemenea, un mediu și o atmosferă potrivite pentru creaturi masculine tinere. Făcându-i să se simtă în siguranță și aproape le poate promova dezvoltarea creierului și le poate îmbunătăți memoria.

Pe scurt, ar trebui să facem tot ce putem pentru a-i ajuta pe tinerii de sex masculin să-și îmbunătățească memoria, astfel încât să devină creaturi mai inteligente, mai încrezătoare și mai capabile. Acest lucru nu este favorabil doar dezvoltării lor personale, ci și prosperității și supraviețuirii întregii specii. Se poate observa că trebuie să îmbunătățim memoria, iar Cistanche deserticola poate îmbunătăți semnificativ memoria, deoarece Cistanche deserticola are efecte antioxidante, antiinflamatorii și anti-îmbătrânire, care pot ajuta la reducerea reacțiilor oxidative și inflamatorii din creier, protejând astfel sănătatea sistemului nervos. În plus, Cistanche deserticola poate promova și creșterea și repararea celulelor nervoase, sporind astfel conectivitatea și funcția rețelelor neuronale. Aceste efecte pot ajuta la îmbunătățirea memoriei, a învățării și a vitezei de gândire și pot preveni, de asemenea, dezvoltarea disfuncției cognitive și a bolilor neurodegenerative.

Faceți clic pe cunoașteți suplimentele pentru a crește memoria

În acest model, hipertensiunea începe să se dezvolte la vârsta de 4 luni cu apariția unor modificări legate de hipertensiune în microvascularizația creierului până la vârsta de 6 luni [37].

Șobolanii au fost găzduiți în condiții optime cu igiena standard, ținuți la o temperatură de 25 de grade cu un ciclu lumină/întuneric 12/12 și hrăniți cu mâncare standard de șobolan și apă ad libitum.

Toate procedurile au fost aprobate de și efectuate în conformitate cu liniile directoare pentru îngrijirea și utilizarea animalelor stabilite de Universitatea Soochow, ceea ce este în concordanță cu raportul nostru anterior[35].

Experimentele au fost efectuate în conformitate cu Ghidurile National Institutes of Health pentru utilizarea animalelor de laborator (NIH, numărul publicației 85–23, revizuită în 1996). Prezentul studiu este raportat de ghidurile ARRIVE.

SHR de opt săptămâni a fost aplicat pentru controlul îmbătrânirii (SHR-Young, n=10). Șobolani de 12 luni au fost tratați cu sau fără Gao-Zi-Yao pentru apă distilată (Old SHR-C, n=10), doză mică (Old SHR-L, n{=10), doză medie (Vechi SHR-M, n=10), doză mare (Old SHR-H, n{=10) prin hrănire gastrică.

Doze de Gao-Zi-Yao scăzute, medii și mari egale cu 1/2-, 1-, doze triple pentru aplicarea clinică a pacientului, calculate în funcție de suprafața corpului. Gao-Zi-Yao a fost dizolvat în 5 ml apă distilată înainte de aplicare și a fost administrat o singură dată lactate timp de 4 săptămâni.

Tensiunea arterială și ritmul cardiac au fost monitorizate în fiecare săptămână prin metoda manșetei cozii, iar greutatea corporală a fost, de asemenea, monitorizată în fiecare săptămână, conform observației noastre anterioare [35].

După 4 săptămâni, a fost efectuat experimentul labirint de apă Morris și șobolanii au fost sacrificați sub anestezie cu pentobarbital de sodiu (50 mg/kg ip), țesutul hipocampus a fost colectat pentru analiză ulterioară. Toate protocoalele experimentale au fost aprobate de comitetul de licență de etică al Universității Soochow.

Experimentul labirintului cu apă Morris

Experimentul labirintului cu apă Morris (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, China) a fost realizat așa cum a fost descris anterior cu unele modificări [38]. Testul a fost planificat pentru 6 zile, zilele 1 până la 5 au fost pentru perioada de antrenament, iar ziua 6 a fost pentru rezultatele testării.

Șobolanii au fost instruiți pentru 2 minute lactate, înregistrând timpul de îmbarcare pe platformă ca timp de latență. În ziua 6 platforma a fost îndepărtată. Șobolanii au fost introduși în cel mai îndepărtat cadran și traiectoria de înot a fost înregistrată timp de 2 minute.

Parametrii pentru funcția de învățare și memorie au fost calculați de software.

Măsurarea nivelurilor serice de NO și factori inflamatori prin ELISA

Nivelurile serice de NO (Număr de catalog: S0023), IL-1 (Număr de catalog: A301BH80153), IL-2 (Număr de catalog: A31038348), IL-6 (Număr de catalog: A30681042), și TNF- (Număr de catalog: A38280855) au fost măsurate utilizând truse ELISA disponibile comercial (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai Enzyme Research. Shanghai, China). Toate etapele au fost efectuate conform instrucțiunilor producătorului.

Colorarea Nissl

Țesutul de hipocamp de șobolan a fost izolat, fixat, încorporat în parafină, apoi incubat în soluție de colorare cu albastru de toluidină 1% timp de 5-10 minute la temperatura camerei. Zece secțiuni au fost clătite în apă distilată, înmuiate în etanol 95% timp de 5-30 de minute și deshidratate în etanol 100%.

După deshidratare, felia a fost plasată în xilen și acoperită cu lame folosind un mediu de rășină. Numărul de neuroni din regiunile CA1, CA2 și girusul dentat (DG) ale hipocampusului a fost observat și analizat utilizând programul de analiză ImageJ.

Western blot pentru învățare și proteine ​​legate de memorie

Western blot pentru învățare și proteine ​​legate de memorie a fost efectuat așa cum este descris în raportul nostru anterior, cu unele modificări [39].

Hipocampusturile au fost omogenizate cu tampon RIPA (50 mmTris, 150 mM NaCI, 1% Triton-X{-100, pH 7,0) care conține fluorură de fenilmentansulfonil (R&D Systems Inc., Minneapolis, SUA). Omogenații au fost centrifugați la 12,000 × g timp de 10 minute la 4 grade.

Proteinele celulare au fost separate prin SDS-PAGE și transferate pe membrane PVDF (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membranele au fost blocate în lapte degresat 5% în PBS și 0,1% Tween{-20la temperatura camerei.

Petele au fost apoi incubate cu anticorp primar: receptor anti-glutamat 1 (1:1000, Abcam, Inc., Catalog Nr: ab183797), anticorp AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., Catalog Nr: ab28373), Anti-fosfo -anticorp CaMKII (1:1000, Abcam, Inc., Nr. catalog: ab171095), anticorp antifosfo-CREB (1:1000, Abcam, Inc., Nr. catalog: 32096) sau anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Nr. catalog: sc-47724).

Apoi, membranele au fost incubate timp de 1 oră cu un anticorp secundar (HRPconjugated anti-iepure Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Catalog Nr: ab205718). Membranele au fost apoi spălate de trei ori timp de 15 minute folosind TBS-T pentru a îndepărta excesul de anticorpi înainte de incubare timp de 1 min. cu reactivi chemiluminescenți (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, SUA).

În plus, benzile imunoreactive au fost detectate printr-un sistem de analiză cu gel de electroforeză (GL2200 Pro, Crestream Inc. SUA). Intensitatea benzilor a fost analizată prin software-ul Image J. Cantitatea de proteine ​​țintă a fost normalizată prin expresia GAPDH [39].

analize statistice

Pentru analiza statistică a fost utilizat software-ul SPSS 18.0. Datele sunt prezentate ca medie ± SEM. Datele grupate au fost analizate folosind o analiză unidirecțională a varianței, urmată de testul Student-Newman-Keuls. O valoare P < 0.05 a fost considerată ca fiind semnificativă din punct de vedere statistic ca raportul nostru anterior [35].

Rezultate

Tensiunea arterială sistolică (TAS), ritmul cardiac și greutatea corporală între SHR tânăr și SHR bătrân

Yong SHR a arătat SBP mai scăzută în primele două săptămâni în comparație cu SHR vechi, apoi a crescut până la nici o diferență între cele două grupuri în ultimele trei săptămâni (Fig. 2A).

Dimpotrivă, ritmul cardiac nu a fost nicio diferență între cele două grupuri în primele două săptămâni, apoi SHR tânăr a crescut semnificativ în comparație cu SHR vechi în ultimele trei săptămâni (Fig. 2B). SHR tânăr a arătat o greutate corporală mai mică în comparație cu SHR vechi în întreaga perioadă de observare (Fig. 2C).

Parametrii labirintului de apă Morris între SHR tânăr și SHR bătrân

Pentru a determina învățarea și memoria dependente de hipocamp, a fost efectuat experimentul labirintului de apă Morris. SHR vechi a arătat o latență de evadare mai lungă în primele patru zile în comparație cu SHR tânăr (Fig. 3A).

Timpii de traversare a cadranului țintă au fost mai puțini în SHR vechi decât în ​​SHR tânăr (Fig. 3B).

Procentul de timp la cadranul platformei țintă a fost mai scurt în SHR vechi în comparație cu SHR tânăr (Fig. 3C). Procentul de lungime a căii în cadran a fost, de asemenea, mai scurt în SHR vechi în comparație cu SHR vechi (Fig. 3D). Aceste rezultate sugerează că vechiul SHR are o afectare a funcției cognitive.

Numărul de neuroni din hipocamp între SHR tânăr și SHR vechi

Numărul de neuroni din diferite zone ale hipocampului a fost numărat prin colorare Nissl. Rezultatele au arătat că există un număr mai mic de neuroni în regiunile CA1, CA2 și DG ale SHR vechi în comparație cu SHR tânăr (Fig. 4).

Expresiile proteinelor legate de învățare și memorie în hipocamp între SHR tânăr și SHR vechi

Rezultatele Western blot au arătat că expresia proteinelor legate de învățare și memorie (GluR1, NMDAR 2B, fosforilat-CaMK II și fosforilat-CREB) în hipocampul vechi SHR a fost mai scăzută decât în ​​hipocampul SHR tânăr (Fig. 5).

Efectul Gao-Zi-Yao asupra SBP, ritmului cardiac și greutății corporale în SHR vechi

A fost analizat efectul Gao-Zi-Yao asupra SBP. Tratamentul cu o doză mică de Gao-Zi-Yao a scăzut semnificativ TAS în SHR vechi din a doua săptămână până în a patra săptămână în comparație cu grupul de control vechi SHR, dozele medii și mari de Gao-Zi-Yao au scăzut semnificativ TAS în SHR vechi din prima săptămână până la a patra săptămână în comparație cu SHR vechi de control (Fig. 6A). Aceste rezultate indică faptul că Gao-Zi-Yao exercită efect antihipertensiv în SHR vechi.

De asemenea, am comparat datele privind efectele ritmului cardiac Gao-Zi-Yaoon și ale greutății corporale. Datele noastre au demonstrat că nu a existat nicio diferență semnificativă în ritmul cardiac și greutatea corporală între toate grupurile pe parcursul întregii perioade de observație (Fig. 6B, C).

Efectul Gao-Zi-Yao asupra nivelurilor serice de NO, IL-1, IL-2 și TNF- în SHR vechi

Tratamentul cu doze medii și mari de GAO-ZIYAO a crescut nivelul seric de NO în comparație cu nivelurile din grupul de control SHR (Fig. 7A). Tratamentul cu toate dozele testate de GAO-ZI-YAO a redus nivelurile serice de IL-1, IL{-2 în comparație cu nivelurile din grupul de control SHR (Fig. 7B, C); cu toate acestea, doar doza mare de GAO-ZI-YAO a suprimat nivelurile serice de TNF- (Fig. 7D).

Aceste rezultate demonstrează că GAO-ZI-YAO ar putea regla stresul oxidativ și inflamația.

For more information:1950477648nn@gmail.com