Extractul de Herba Cistanche îmbunătățește generarea mitocondrială de ATP în inimile de șobolan și celulele H9c2

Contact: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Hoi Yan Leung și Kam Ming Ko

Pentru a cita acest articol: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/13880200880355

Abstract

Pentru a investiga baza farmacologică a acțiunii „Yang-vigorante” a Herbal Cistanche [planta întreagă uscată a Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], în medicina chineză, au fost efectele extractului metanolic de Herba Cistanche asupra capacității de generare a ATP mitocondrial. examinat folosind un model de inimă de șobolan ex vivo și un test de celule H9c2 in situ. Tratamentul cu extract de Herba Cistanche a crescut capacitatea de generare a ATP mitocondrial miocardic într-o manieră dependentă de doză la șobolani, așa cum a fost evaluat prin măsurare in vitro. Stimularea capacității de generare a ATP a fost asociată cu o îmbunătățire paralelă a transportului de electroni mitocondriali susținut de piruvat, dar nu de succinat. Tratamentul cu Herba Cistanche a crescut, de asemenea, activitățile miocardice mitocondriale ale complexului I și complexului III, gradul de stimulare a activității complexului I fiind mai mare. Tratamentul cu Herba Cistanche a produs o creștere dependentă de doză și timp a capacității mitocondriale de generare a ATP în celulele H9c2. Rezultatele indică faptul că tratamentul cu Herba Cistanche poate crește generarea de ATP mitocondrial în inimile de șobolan ex vivo și celulele H9c2 in situ, posibil prin îmbunătățirea fosforilării oxidative.

Cuvinte cheie:ATP, Cistanche deserticola, celule H9c2, inima, mitocondrii.

Cistanche deserticola YC Ma

Introducere

„Vigoarea Yang”, care întruchipează îmbunătățirea generalizată a funcției corpului în medicina chineză, implică utilizarea energiei în conducerea diferitelor procese biochimice. În acest sens, ATP, care este moneda universală a energiei în alimentarea funcției celulare, este generată în principal prin fosforilarea oxidativă în mitocondrii. Am postulat că ierburile „vigorante Yang” au capacitatea de a crește capacitatea mitocondrială de generare a ATP (Ko et al., 2004). Acest lucru este susținut de descoperirea noastră recentă conform căreia ierburile tonifiante chinezești „vigorante Yang”, dar nu „hrănitoare Yin”, ar putea spori capacitatea de generare a ATP miocardic în inimile de șoarece ex vivo (Ko și colab., 2006). Herba Cistanche, planta parazita intreaga uscata (excluzand floarea) a Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), este clasificata ca o planta de tonifiere „invigoranta Yang” in medicina traditionala chineza (Chen, 1998) si apare ca cea mai populara ingredient într-un număr de formulări de brevete chinezești utilizate pentru revigorarea Yang”. În China și Japonia, Herba Cistanche este utilizat pe scară largă pentru tratamentul unei multitudini de simptome de deficiență Yang. Studiile farmacologice au indicat că Herba Cistanche ar putea elimina radicalii liberi (Xiong et al., 1996), produce efecte sedative (Lu, 1998), antiîmbătrânire (Lee et al., 1990), antinociceptive și antiinflamatorii (Lin et al., 2002). ) și îmbunătățesc funcția imunitară (Wu și colab., 2005). Principalul ingredient activ al Herba Cistanche este glicozidele feniletanoide (Ouyang et al., 2003), care s-a dovedit a avea proprietăți antibacteriene, antistres și antioxidante (Xiong și colab., 1998), precum și efecte anti-apoptotice asupra culturilor. neuronii (Tian & Pu, 2005). În studiul actual, pentru a investiga baza farmacologică a acțiunii de revigorare Yang a Herba Cistanche, au fost examinate efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra capacității de generare a ATP în mitocondriile izolate din inimi de șobolan ex vivo și cardiomiocite H9c2 cultivate in situ. Pentru a explora mecanismul biochimic care stă la baza acțiunii de îmbunătățire a generării de ATP, efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra transportului de electroni mitocondriali și activităților complexe I-IV au fost, de asemenea, examinate în inimile de șobolan.

Extract de Cistanche deserticola

Materiale și metode

Produse chimice, culturi celulare și materiale pe bază de plante ATP, ADP și 3-[4,5-dimetiltiozol-2-il]{-2,5-bromură de difenil-tetrazoliu ( MTT) au fost achiziționate de la Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, SUA). Soluția de luciferază (ATPlite) a fost obținută de la PerkinElmer (Boston, MA, SUA). Mediul Eagle modificat de Dulbecco (DMEM) și serul fetal bovin (FBS) au fost achiziționate de la GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, SUA). Linia celulară H9c2 a fost achiziționată de la ATTC (Rockville, MD, SUA). Herba Cistanche a fost furnizată de un dealer local de plante medicinale (Lee Hoong Kee). Planta a fost autentificată de furnizor și un exemplar de voucher (HKUSTY00301) a fost depus în Departamentul de Biochimie, Universitatea de Știință și Tehnologie din Hong Kong (HKUST).

Extracția plantelor

Herba Cistanche (100 g) a fost tăiată în bucăți mici și apoi extrasă prin încălzire la reflux în 300 ml metanol

la 65◦C timp de 2 ore. Procedura s-a repetat de două ori. Extractul reunit a fost uscat prin evaporarea solventului la presiune redusă, iar extractul metanolic de Herba Cistanche a fost obţinut cu un randament de 39 la sută (g/g). Analiza chimică a indicat că extractul metanolic de Herba Cistanche conținea saponine totale, flavonoide totale, lignani totali și polizaharide la concentrații de 1,62 la sută (g/g), 0.08 la sută, 0,15 la sută și, respectiv, 75,6 la sută.

Îngrijire animale

Șobolanii Sprague-Dawley masculi adulți (8–10 săptămâni; 250–300 g) au fost menținuți într-un ciclu întuneric/luminos de 12-h într-o cameră cu aer/umiditate controlată la aproximativ 22°C și au permis hrană și apă ad libitum în unitățile de îngrijire a animalelor

la HKUST. Protocoalele experimentale au fost aprobate de Comitetul de practică de cercetare de la HKUST.

Tratament medicamentos

Animalele au fost împărțite aleatoriu în grupuri, cu cinci până la șase animale în fiecare. În grupurile de tratament, șobolanii au fost administrați intragastric cu extract metanolic de Herba Cistanche (dizolvat/suspendat în apă) în doze zilnice crescătoare ({{0}}.031–0,5 g/kg) timp de 3 zile. Animalele de control au primit doar apă. La douăzeci și patru de ore după ultima dozare, inima a fost obținută de la animale anesteziate cu fenobarbital și supusă analizei biochimice.

Prepararea fracțiilor mitocondriale și măsurarea capacității de generare a ATP (ATP-GC) ex vivo

Probele de țesut ventricular stâng al inimii au fost excizate și clătite cu tampon izotonic rece cu gheață (0,32 M zaharoză, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCI, pH 7,4). Fracțiile mitocondriale cardiace au fost preparate prin centrifugare diferențială în tampon izotonic la 4◦C. Un omogenat cardiac de 10% (g/v) a fost preparat prin omogenizarea țesutului ventricular măcinat cu un omogenizator din sticlă teflon la 4000 rpm pentru 20-30 de mișcări complete. Omogenatul a fost centrifugat la 600 g timp de 10 minute pentru a îndepărta nucleele și resturile celulare. Supernatantul a fost apoi centrifugat la 8000 g timp de 30 de minute pentru a sedimenta mitocondriile (Evan, 1992). Peletele au fost resuspendate în 1 ml de tampon izotonic și s-au reconstituit fracțiile mitocondriale. ATP-GC mitocondrial al animalelor netratate a fost măsurat prin metoda lui Leung și colab. (2005).

Măsurarea transportului de electroni mitocondriali

Măsurarea transportului de electroni în mitocondriile izolate, care se bazează pe reducerea MTT, a fost efectuată așa cum este descris de Cohen și colab. (1997). Mitocondriile au fost preparate la o concentrație de proteine ​​de 1 mg/mL cu un tampon de incubare (250 mM zaharoză, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7,4) . O parte alicotă (40 uL) din mitocondrii a fost amestecată cu 100 uL fiecare de 15 mM piruvat sau 0,5 mM succinat și 0,42 mg/mL MTT. Amestecul de reacție a fost incubat la 37°C timp de 10 minute cu agitare ușoară. După incubare, amestecul de reacţie a fost terminat prin adăugarea a 100 uL tampon de liză (10%, g/v, dodecil sulfat de sodiu şi 45% dimetilformamidă, ajustat la pH 4,7 cu acid acetic glacial). După ce a stat timp de 5 minute, citirile de absorbanță ale amestecului de reacție au fost luate cu un cititor de plăci de microtitrare (Bio-Rad, Hercules, CA, SUA) și au fost raportate ca diferență între 570 nm și 630 nm. Datele au fost exprimate ca procent din valoarea medie a grupului martor (adică, Herba Cistanche-netratat).

Cultură de celule

Celulele H9c2, o linie celulară permanentă derivată din mioblaste cardiace (Hescheler și colab., 1991), au fost cultivate ca monostraturi în DMEM suplimentat cu 10% (v/v) FBS. Mediul a conţinut glucoză (4,5 g/L) şi glutamina (4,5 mM), suplimentate cu NaHC03 (17 mM), penicilină (100 UI/mL) şi streptomicina (100 pg/mL). Toate celulele au fost crescute într-o atmosferă de 5% (v/v) CO2 în aer la 37°C. Mediul a fost înlocuit cu mediu proaspăt la fiecare 2 sau 3 zile. Un stoc de celule a fost crescut într-un balon de cultură de 75 cm2 și a fost divizat înainte de confluență la un raport de subcultivare de 1:10. Pentru testul ATP-GC, celulele H9c2 au fost însămânțate la o densitate de 2,5 104 celule/godeu într-o placă de 24-godeuri. După atașarea celulelor, extractul de Herba Cistanche (dizolvat în soluție salină tamponată cu fosfat; PBS) a fost aplicat în mediu, iar celulele au fost incubate pentru perioade crescânde (2-16 ore) de timp. Celulelor de control (netratate) li sa administrat numai PBS.

Măsurarea ATP-GC in situ

După perioadele indicate de incubare cu extract de Herba Cistanche la concentrații crescătoare (5{{10}}–300 µg/mL), a fost efectuat testul ATP-GC. Mediul a fost aspirat și celulele au fost tratate cu digitonină (50 ug/mL) într-un tampon de incubare (120 mM KCI, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0,1 mM MgCl2, 0,5 la sută BSA, pH 7,4) pentru 3. min la 37◦C. După aspirarea digitoninei, glutamat (5 mM), malat (5 mM) și ADP (60 pM) s-au adăugat la celule pentru generarea de ATP mitocondrial, care a fost monitorizat la intervale de timp crescătoare cuprinse între 0 și 15 min. Reacția a fost încheiată prin adăugarea a 60 uL de acid percloric (30 procente, gr/v), iar amestecurile de reacție au fost apoi centrifugate la 600 g timp de 10 minute la 4°C. O parte alicotă (120 uL) de supernatant a fost amestecată cu 90 uL de KHCO3 1,4 M pentru neutralizare. Amestecuri au fost centrifugate din nou la 600 g la 4°C, iar supernatanții au fost măsurați pentru conținutul de ATP așa cum s-a descris mai devreme. ATP-GC al celulelor netratate a fost estimat prin calculul ariei de sub curba graficului (AUC1) graficând ATP generat (nmol/mg proteină) în timp (0-15 min) și exprimat în unități arbitrare. Pentru celulele tratate cu Herba Cistanche, valorile AUC1 ale timpilor de incubare crescând (3, 5, 7, 10 și 15 min) au fost normalizate la o valoare medie de control respectivă din probele netratate și exprimate ca control procentual. Apoi, aria de sub curba (AUC2) a graficului care prezintă valorile procentuale de control față de timpul de incubare (3-15 min) a fost calculată și exprimată în unități arbitrare. Datele grupurilor tratate cu Herba Cistanche au fost exprimate ca procent din controlul din ecuație:

[AUC2(HerbaCistanche − tratat)/AUC2(netratat)]×100 la sută .

Măsurătorile complexului I–IV și activităților citrat sintetazei

Activitățile complexului I-III ale lanțului de transport de electroni mitocondriali (ETC) au fost măsurate prin metode spectrofotometrice folosind substraturi specifice complexului (NADH pentru complexul I, succinat pentru complexul II și decilubichinol pentru complexul III), așa cum este descris (Grad & Lemire, 2004; Hsu și al., 2005; Mark şi colab., 2001). Activitatea complexului IV a fost măsurată utilizând un kit de testare a citocromului c oxidazei de la Sigma. Activitatea citrat-sintazei mitocondriale a fost măsurată prin metoda lui Srere (1969).

Testul proteinelor

Concentrațiile de proteine ​​ale fracțiilor mitocondriale și ale lizatelor celulare au fost determinate utilizând un kit de testare a proteinelor BioRad utilizând albumină serică bovină ca standard ({{0}},038–0,600 mg/mL).

analize statistice

Toate datele au fost exprimate ca eroare standard medie a mediei (SEM). Acestea au fost analizate prin analiza unidirecțională a varianței (ANOVA). S-au făcut comparații multiple post-hoc cu LSD. valorile P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">

Rezultate

Efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra ATP-GC mitocondrial miocardic la șobolani

După cum se arată în Figura 1, tratamentul cu extract de Herba Cistanche în doze de până la 0,5 g/kg a crescut ATP-GC mitocondrial miocardic într-o manieră dependentă de doză la șobolani, gradul de stimulare fiind de 89% în doză de 0,5 g/kg.

Efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra transportului de electroni mitocondriali în inimile de șobolan

Amploarea transportului de electroni în mitocondriile izolate a fost măsurată prin monitorizarea reducerii MTT. Substratul utilizat pentru analiză a fost fie piruvat, fie succinat. După cum se arată în Figura 2a, tratamentul cu Herba Cistanche a crescut în funcție de doză amploarea transportului de electroni mitocondriali susținut de piruvat în inimile de șobolan, cu stimularea optimă observabilă la doze de 0,5 g/kg. Cu toate acestea, în inimile de șobolan tratate cu Herba Cistanche, nu au fost detectate modificări semnificative în amploarea transportului de electroni mitocondriali susținut de succinat (Fig. 2b).

Efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra activităților complexe respiratorii mitocondriale în inimile de șobolan

După cum se arată în Figura 3, tratamentul cu Herba Cistanche la doza optimă de 0,5 g/kg a crescut semnificativ activitățile complexului I (34 la sută) și complexului III (22 la sută) în inimile de șobolan. Activitatea citrat sintetazei, o enzimă cheie pentru ciclul acidului tricarboxilic, nu a fost afectată de tratamentul cu Herba Cistanche (Fig. 3). Analiza Western blot a indicat că nivelurile de proteine ​​ale complexului I și III nu au fost afectate de tratamentul cu Herba Cistanche (datele nu sunt prezentate).

Cursul de timp al modificărilor induse de Herba Cistanche în ATP-GC mitocondrial în celulele H9c2

Modificările ATP-GC au fost examinate în celulele tratate cu Herba Cistanche (50 și 150 µg/mL) după 2 până la 16 ore de incubație. După cum se arată în Figura 4, tratamentul cu Herba Cistanche a crescut ATP-GC într-o manieră dependentă de timp și bifazic în celulele H9c2, stimularea maximă (44% și, respectiv, 89%) observabilă după 8 ore de incubare pentru ambele concentrații de medicament. ATP-GC a revenit apoi la valorile de control netratate când timpul de incubare a fost prelungit la 16 ore. Debutul mai devreme al stimulării a avut loc atunci când celulele au fost tratate cu o concentrație mai mare (150 ug/mL) de extract de Herba Cistanche.

Dependenta de concentrare a lui Herba

Creșterea ATP-GC indusă de Cistanche în celulele H9c2

Celulele H9c2 au fost tratate cu concentrații crescânde (50–300 µg/mL) de extract de Herba Cistanche timp de 4 ore. Figura 5 arată că tratamentul cu Herba Cistanche a crescut ATP-GC într-o manieră dependentă de concentrație, cu stimularea maximă (82 la sută) observabilă la concentrația de 300 pg/mL.

Extractul de Cistanche crește producția de ATP

Discuţie

Reglarea în sus a activităților celulare pentru îmbunătățirea funcției corpului, cum ar fi contracția musculară și răspunsurile imune prin revigorarea Yang necesită creșterea consumului de ATP, care este la rândul său susținut de fosforilarea oxidativă mitocondrială. În studiul actual, s-a constatat că tratamentul cu Herba Cistanche crește în funcție de doză capacitatea de generare a ATP mitocondrial ex vivo în inimile de șobolan. Această observație este în concordanță cu descoperirea noastră anterioară conform căreia printre plantele tonifiante chinezești care revigorează Yang, tratamentul cu Herba Cistanche a produs o măsură relativ mai mare de stimulare a generării de ATP mitocondrial în inimile șoarecilor (Ko și colab., 2006). Îmbunătățirea generării de ATP mitocondrial a fost paralelă cu creșterea transportului de electroni mitocondriali condus de piruvat, dar nu de succinat, așa cum a fost evaluat prin reducerea MTT. Rezultatele obținute din măsurarea cinetică a complexului mitocondrial I–IV au indicat că activitățile ambelor complexe I și III au fost crescute în inimile tratate cu Herba Cistanche, gradul de stimulare a activității complexului I fiind mai mare decât cel al complexului III. Deoarece activitatea citrat sintetazei, o enzimă cheie a ciclului acidului tricarboxilic, nu a fost afectată, creșterea capacității mitocondriale de generare a ATP prin tratamentul cu Herba Cistanche poate fi atribuită în principal stimulării activităților complexe I și/sau III. Cele mai multe dintre cerințele de ATP ale inimii sunt îndeplinite de mitocondrii, care se bazează aproape în întregime pe oxidarea legată de complexul I (NADH) a acizilor grași și a glucozei (Stanley și colab., 1997; Taegtmeyer, 1998). Complexul I, care prezintă o activitate mai scăzută decât alte complexe respiratorii, este considerat un factor important în reglarea fosforilării oxidative. Astfel, stimularea sau inhibarea activității complexului I poate avea un impact mare asupra energeticii cardiace. Deși analiza Western blot nu a evidențiat nicio modificare a nivelului proteic al acestor două complexe (datele nu sunt prezentate), creșterea activității enzimatice poate rezulta din modificările stării proteinelor tiol și/sau mediului lipidic (Davey și colab., 1998; Paradies). et al., 2004).

Extract de Herba Cistanchear putea produce efectul de creștere a generării de ATP în celulele H9c2 cultivate in situ. Debutul relativ timpuriu al acțiunii stimulatoare produs de tratamentul cu Herba Cistanche, în special la doze mari, este în concordanță cu observația din studiile ex vivo care au indicat că sinteza proteinelor complexe I și III este puțin probabil implicată în creșterea generării de ATP. acțiune. Demonstrarea îmbunătățirii induse de Herba Cistanche în starea de generare a ATP in situ susține ideea că creșterea capacității de generare a ATP mitocondrial, așa cum este evaluată prin măsurarea ex vivo, poate reflecta doar un efect paralel produs de tratamentul medicamentos in vivo. Măsurarea generării de ATP în mitocondriile izolate și celulele cultivate folosind malat și glutamatul ca substrat este o măsură indirectă a respirației mitocondriale în starea 3 (Chen și colab., 2003). Folosind același test bioluminiscent ATP, rata de generare a ATP mitocondrial în diferite țesuturi de șobolani netratați, așa cum sa raportat mai devreme în laboratorul nostru (Leung și colab., 2005), a fost în acord cu datele publicate recent (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). Capacitatea de generare a ATP a fost estimată printr-o integrare în două etape a modificărilor dependente de timp ale nivelului de ATP atât în ​​testele ex vivo, cât și in situ. Efectul stimulator observat indus de medicament a fost prin urmare amplificat de dragul comparației. Îmbunătățirea capacității de generare a ATP prin tratamentul cu Herba Cistanche în mitocondriile inimii de șobolan ex vivo a fost paralelă cu stimularea generării de ATP în celulele H9c2 in situ. Având în vedere prezența activității de îmbunătățire a generării de ATP în ierburile tonificante chinezești care revigorează Yang, inclusiv Herba Cistanche, în inimile de șoareci ex vivo (Ko și colab., 2006), rezultatele sugerează că măsurarea capacității de generare a ATP în celulele H9c2 în situ poate fi folosit ca test farmacologic pentru ierburile tonificante chinezești care revigorează Yang sau formula pe bază de plante.

În concluzie, tratamentul cu extract de Herba Cistanche ar putea îmbunătăți capacitatea mitocondrială de generare a ATP în inimile de șobolan ex vivo și în celulele H9c2 in situ. Descoperirile susțin postularea noastră că baza farmacologică a revigorării Yang implică îmbunătățirea funcțiilor corpului prin stimularea producției de ATP mitocondrial.

Extractul de Herba Cistanche sporește capacitatea mitocondrială de generare de ATP

Referințe

Chen P (1998): Ierburi tonice. Seria avansată TCM. Beijing, China, Science Press, pp. 233–320.

Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Producția de specii reactive de oxigen de către mitocondrii: rolul central al complexului III. J Biol Chem 278: 36027–36031.

Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Boala Parkinson: O nouă legătură între monoaminoxidaza și fluxul de electroni mitocondriali. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.

Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Praguri de energie în mitocondriile creierului. Implicarea potențială în neurodegenerare. J Biol Chem 273: 12753–12757.

Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metodă pentru măsurarea producției de ATP în mitocondriile izolate: producția de ATP în mitocondriile creierului și ficatului la șobolani Fischer-344 cu restricție de vârstă și caloric. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.

Evan WH (1992): Izolarea și caracterizarea membranelor și a organitelor celulare. În: Rickwood D, ed. Centrifugarea pregătitoare: o abordare practică. New York, Oxford University Press, pp. 223–270.

Grad LI, Lemire BD (2004): Mutațiile complexului I mitocondrial la Caenorhabditis elegans produc deficit de citocrom c oxidază, stres oxidativ și acidoză lactică sensibilă la vitamine. Human Mol Genetics 13: 303–314.

Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Caracterizarea morfologică, biochimică și electrofiziologică a unei linii de celule clonale (H9c2) din inima de șobolan. Circ Res 69: 1476–1486.

Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Depleția de glutation care are ca rezultat inhibarea selectivă a complexului mitocondrial I în celulele dopaminergice se face printr-o cale mediată de NO care nu implică peroxinitrit: Implicații pentru boala Parkinson. J Neurochem 92: 1091– 1103.

Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): O acțiune farmacologică caracteristică a plantelor tonifiante chinezești „Yang-vigorating”: îmbunătățirea capacității miocardice de generare a ATP. Phytomedicine 13: 636– 642.

Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Baza farmacologică a „vigorării Yang” în medicina chineză. Trends Pharmacol Sci 25: 3–6.

Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Studiu asupra efectului anti-îmbătrânire al Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.

Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Metabolic regulation of phenylethanoid glycosides from Herba cistanches in dogs' gastrointestinal. Yao Xue Xue Bao 36: 432–435

Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): O formulă din plante chinezești revigorătoare Yang îmbunătățește capacitatea funcțională mitocondrială și capacitatea antioxidantă în diferite țesuturi de șobolani masculi și femele. Rejuven Res 8: 238–247.

Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Activitate antinociceptivă și antiinflamatoare cauzată de Cistanche deserticola la rozătoare. J Ethnopharmacol 83: 177– 182.

Lu MC (1998): Studii asupra efectului sedativ al Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.

Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Analiza activității complexului respirator mitocondrial în mitocondriile izolate din celule și țesuturi umane. Meth Cell Biol 65: 97–117.

Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Efectele elementelor pământurilor rare asupra creșterii celulelor Cistanche deserticola și producției de glicozide feniletanoide. J Biotech 102: 129–134.

Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Decrease in mitochondrial complex I activity in ischemic/reperfused rat heart: Involvement of reactive oxygen species and cardiolipin. Circ Res 94: 53–59.

Srere PA (1969): Citrat sintetaza. Ciclul acidului citric. Meth Enzymol 13: 3–11.

Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Reglarea metabolismului carbohidraților miocardici în condiții normale și ischemice. Potenţial pentru intervenţii farmacologice. Cardiovasc Res 33: 243–257.

Taegtmeyer H (1998): Metabolismul substratului energetic ca țintă pentru farmacoterapie în mușchiul cardiac ischemic și reperfuzat. Heart Metab 1: 5–9.

Tian XF, Pu XP (2005): Glicozidele feniletanoide din salsa Cistanches inhibă apoptoza indusă de ionul 1-metil-4- fenilpiridiniu în neuroni. J Ethnopharmacol 97: 59–63.

Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Un arabinogalactan izolat din tulpinile de Cistanche deserticola induce proliferarea limfocitelor cultivate. Int J Biol Macromol 37: 278–282.

Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Hepatoprotective activity of phenylethanoids from Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120– 125.

Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Efectele antioxidante ale feniletanoizilor din Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.