Extractul de Herba Cistanche îmbunătățește starea glutationului mitocondrial și respirația în inimile de șobolan, cu posibila inducție a proteinelor de decuplare

Ada Hoi-Ling Siu și Kam Ming Ko

Pentru a cita acest articol: Ada Hoi-Ling Siu & Kam Ming Ko (2010) Extractul de Herba Cistanche îmbunătățește starea glutationului mitocondrial și respirația în inimile de șobolan, cu posibilă inducere a proteinelor de decuplare, Pharmaceutical Biology, 48:5, 512-517, DOI: 10.3109/13880200903190985

Pentru a trimite la acest articol: https://doi.org/10.3109/13880200903190985

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com

Abstract

HerbaCistanche, o plantă chinezească derivată din întreaga plantă deCistanchedeserticolaS-a demonstrat că YC Ma (Orobanchaceae) îmbunătățește generarea de ATP mitocondrial și protejează împotriva leziunilor miocardice de ischemie/reperfuzie (I/R) ex vivo la șobolani. Pentru a defini rolul mitocondriilor în acțiunea cardioprotectoare a Herba Cistanche, am investigat efectul Herba.Cistanchetratament privind starea glutationului mitocondrial și parametrii funcționali în inimile de șobolan. Tratament cu extract metanolic de HerbaCistanchestarea îmbunătățită a glutationului mitocondrial, scăderea conținutului de Ca2 plus mitocondrial și creșterea potențialului membranei mitocondriale. În plus, a fost observată o creștere a respirației în starea 4, care indică respirația decuplată, în mitocondriile izolate din Herba.Cistanche-inimi de sobolan tratate. Îmbunătățirea statusului glutationului mitocondrial și a capacității funcționale, precum și inducerea presupusă a proteinelor de decuplare, pot fi legate de cardioprotecția oferită de Herba.Cistanchetratament care protejează împotriva leziunilor I/R.

Cistancheare multe beneficii pentru sănătate

Cuvinte cheie:HerbaCistanche; mitocondriile; glutation; calciu; potențial de membrană; respirația mitocondrială; decuplare

Introducere

Reperfuzia unui miocard anterior ischemic provoacă o serie de modificări mitocondriale, inclusiv creșterea producției de specii reactive de oxigen (ROS), supraîncărcare de Ca2 plus și o scădere a producției de adenozin trifosfat (ATP), toate putând duce la necroză și/sau apoptoză. moartea celulară mediată (Redegeld și colab., 1992; Lemasters și colab., 1998). Deoarece mitocondriile joacă un rol crucial în determinarea soartei cardiomiocitelor în urma provocării ischemiei/reperfuziei (I/R), protecția împotriva leziunilor miocardice I/R ar trebui, prin urmare, să fie orientată spre păstrarea integrității structurale și funcționale mitocondriale. Menținerea metabolismului energetic mitocondrial după provocarea I/R este deosebit de importantă deoarece funcția contractilă a inimii este aproape în întregime dependentă de ATP generat de mitocondrii. Cardiomiocitele care sunt în viață, dar care nu se contractă sunt de foarte puțină folos.

Herba Cistanche, întreaga plantă uscată a Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), este o plantă parazită care crește în principal în zonele deșertice din nordul și nord-estul Chinei. Herba Cistanche, clasificată drept o plantă „învigorătoare Yang” în medicina chineză, este prescrisă pentru deficiența rinichilor, sterilitatea feminină și constipația care rezultă din uscăciunea intestinului la pacienții senili (Chen, 1998). Studiile anterioare din laboratorul nostru au arătat că un extract cu metanol de Herba Cistanche crește capacitatea miocardică de generare a ATP (Leung & Ko, 2008) și protejează împotriva leziunilor miocardice I/R la șobolani (Leung, 2006). În timp ce stimularea capacității de generare a ATP a fost paralelă cu îmbunătățirea transportului de electroni mitocondriali (Leung & Ko, 2008), cardioprotecția împotriva leziunilor I/R oferite de tratamentul cu Herba Cistanche a fost asociată cu o scădere a epuizării ATP miocardice (Leung, 2006). În studiul de față, pentru a defini rolul mitocondriilor în acțiunea cardioprotectoare a Herba Cistanche, am investigat efectul tratamentului cu Herba Cistanche asupra statusului de glutation mitocondrial, conținutului de Ca2 plus, potențialului de membrană și ratei respirației, în inimile de șobolan.

cistanchebeneficii deserticola

Materiale și metode

Material pe bază de plante

Herba Cistanche a fost achiziționată de la un dealer local (din Hong Kong) de plante medicinale (Lee Hoong Kee). Planta a fost autentificată de furnizor și un exemplar de voucher (HKUST00301) a fost depus în Departamentul de Biochimie, Universitatea de Știință și Tehnologie din Hong Kong (HKUST). Extracția plantei cu metanol a fost efectuată, pe baza unor studii anterioare care indică faptul că un astfel de extract a îmbunătățit generarea de ATP mitocondrial și a protejat împotriva leziunilor I/R în inimile de șobolan (Leung, 2006; Leung & Ko, 2008). Pe scurt, Herba Cistanche (400 g) a fost tăiată în bucăți mici și extrasă prin încălzire la reflux în 300 ml de metanol la 60 de grade timp de 2 ore, așa cum s-a descris anterior (Leung & Ko, 2008). Procedura s-a repetat de două ori. Extractul reunit a fost uscat prin evaporarea solventului sub presiune redusă; randamentul a fost de 42 procente (g/g) referitor la cantitatea de plantă brută. Extractul a fost păstrat la 4 grade până la utilizare. Deși ierburile chinezești sunt în mod tradițional extrase cu apă pentru consumul oral, metanolul a fost folosit în studiul nostru anterior pentru comoditate în procesarea și depozitarea probelor (Yim & Ko, 2002) și am constatat că extracția cu metanol este satisfăcătoare din toate punctele de vedere.

Îngrijirea animalelor și tratamentul medicamentos

Femelele adulte de șobolan Sprague-Dawley (cu vârsta de 8–10 săptămâni; 2{{1{0}}0–230 g) au fost găzduite într-o cameră cu umiditate controlată, cu un întuneric/luminos de 12 ore ciclu, la aproximativ 22 de grade, și a permis mâncare și apă ad libitum. Animalele au fost repartizate aleatoriu în diferite grupuri, cu cinci animale în fiecare grup. Șobolanii au primit extract de Herba Cistanche intragastric (0,2 g/mL în apă) la 0,5 g/kg sau 1,0 g/kg timp de 3 zile consecutive. Animalele de control (netratate) au primit doar apă. La douăzeci și patru de ore după ultima dozare, țesut ventricular cardiac a fost obținut de la animale anesteziate pentru analiză biochimică. Toate protocoalele experimentale au fost aprobate de Comitetul de practică de cercetare, HKUST.

Prepararea fracțiilor mitocondriale

Țesuturile ventriculare ale inimii tocate (~{{0}},6 g) au fost omogenizate într-un exces de 10-ori (g/v) de tampon zaharoză rece ca gheața [0,32 M zaharoză, 1 mM acid etilen diamin tetraacetic (EDTA), 50 mM Tris/HCI; pH 7,4] folosind un omogenizator Teflon-sticlă, la 4000 rpm, cu 25–30 de curse. Pelete mitocondriale au fost preparate din omogenate de țesut prin centrifugare la 800 x g la 4 grade timp de 30 de minute, iar puritatea a fost determinată prin măsurarea activităților specifice relative ale succinat dehidrogenazei și, respectiv, lactat dehidrogenazei în supernatant și, respectiv, peletă, așa cum s-a descris anterior (Evans, 1992). Peletele mitocondriale au fost suspendate în 1 ml de tampon de omogenizare.

Măsurarea nivelurilor mitocondriale de glutation redus și glutation oxidat

Nivelurile mitocondriale reduse de glutation (GSH) au fost determinate enzimatic folosind 5,59-ditiobis(2- acid nitrobenzoic) (DTNB) și glutation reductază (GR), într-un protocol modificat de la Griffith (198{{17} }). O alicotă (210 µL) din fracția mitocondrială a fost amestecată cu 90 µL de 10 procente (v/v) 5-acid sulfosalicilic (SSA) și amestecul a fost centrifugat la 600 x g timp de 10 minute. Pentru a măsura nivelurile de glutation oxidat (GSSG), cantități de 100 µL de supernatanți SSA au fost amestecate cu 10 µL de vinilpiridină 20% (g/v) 2- și 10 µL 60% (v/v) trietanolamină în tuburi de microcentrifugă. Fiecare tub a fost lăsat să stea la temperatura camerei timp de cel puțin 1 oră. Un amestec de reacție care conține 0,63 mM DTNB și 0,053 mM NADPH (dinucleotidă redusă de nicotinamidă adenină fosfat) în tampon fosfat (0,1 M, cu 5 mM Na2 EDTA; pH 7,5) a fost preincubat la 30 de grade timp de 2 minute. O alicotă (30 µL) fie dintr-un supernatant de probă SSA (glutation total), fie dintr-o probă GSSG a fost adăugată într-un godeu al unei plăci de microtitrare 96-godeuri și 180 µL din amestecul de reacție preîncălzit, care conține 0,525U /mL GR, a fost adăugat în continuare. Modificările de absorbție la 412 nm au fost monitorizate spectrofotometric timp de 5 minute. Concentrațiile de GSH și GSSG au fost estimate din curbele de calibrare folosind GSH și GSSG [dizolvate în 3 procente (g/v) SSA] ca standarde și exprimate ca nmol/mg proteină. Nivelurile de GSH au fost estimate scăzând de două ori cantitatea de GSSG din cea a GSH total.

Măsurarea conținutului de Ca2 mitocondrial plus

Conținutul de Ca2 plus mitocondrial a fost măsurat utilizând o sondă de fluorescență sensibilă la Ca2 plus, ester fluo-5N AM (Molecular Probes, Eugene, OR) utilizând contorul Victor2 Multi-Label (Model 1420; PerkinElmer, Turku, Finlanda), așa cum este descris în Menze și colab. (2005). Constantele de disociere Ca2 plus (valorile Kd) au fost determinate folosind un kit de calibrare Ca2 plus valabil în intervalul de concentrație 1–1000 µM; valorile estimate ale Kd au fost de 90–100 µM, cu fiabilitate ridicată, conform datelor producătorului trusei. O alicotă (25 ui) din fracția mitocondrială (0,5 mg proteină/ml concentrație finală) a fost amestecată cu 25 ui tampon de incubare {100 mM KCI și 30 mM MOPS [3-(N-morfolino)propan sulfonic acid]; pH7,2} într-o placă de microtitrare neagră cu 96-godeuri. Amestecul a fost incubat la 25 de grade timp de 15 minute; S-au adăugat apoi 25 uL digitonină (50 ug/mL) și 25 uL ester fluo{30}}N AM (1 uM în 0,005 procente (g/v) Pluronic F-127). Prin facilitarea pătrunderii membranei, digitonina a mediat intrarea mitocondrială a colorantului fluorescent. Am descoperit că nivelurile de fluo-5N din preparatele mitocondriale ale inimii de șobolan au fost crescute de 20-ori în prezența digitoninei. Amestecuri de reacție au fost incubate la 25 de grade timp de 30 de minute, iar citirile de fluorescență au fost măsurate la o lungime de undă de excitare de 488 nm și o lungime de undă de emisie de 532 nm. Conținutul de Ca2 plus mitocondrial a fost estimat utilizând o curbă de calibrare și exprimat ca µmol/mg proteină.

Măsurarea potențialului membranei mitocondriale

Potențialul de membrană (ΔΨm) a fost evaluat printr-o metodă modificată față de cea a lui Bonavita și colab. (2003), folosind un colorant fluorescent, sonda cationică lipofilă 5.596,69-tetraclor{-1,193,39-iodură de tetraetil benzimidazolilcarbocianină denumită în mod obișnuit JC-1. Alicote (50 µL) de fracții mitocondriale (ajustate la 1 mg proteină/mL) au fost incubate la 37 de grade cu 50 µL de soluție de substrat (conținând 6 mM piruvat și 6 mM malat), 25 µL de soluție de adenozin difosfat (ADP) pretratată (30mM), și 25 µL de 3 µM JC-1, în întuneric. Valorile ΔΨm au fost obținute prin măsurarea fluorescenței la 535 nm (FL1) față de 580 nm (FL2), folosind Victor2 Multi-Label Counter. JC-1 formează agregat în mitocondrii, rezultând valori ridicate de fluorescență FL2 și indicând un potențial mitocondrial normal. Pierderea ΔΨm duce la o reducere a fluorescenței FL2 (agregate JC-1 într-o măsură mai mică) și o creștere concomitentă a fluorescenței FL1 (de la monomerii JC{-1). Datele au fost exprimate ca rapoarte ale valorilor fluorescenței FL1/FL2. Cianură de carbonil m-clorofenilhidrazona (CCCP), un agent de colaps ΔΨm, a fost utilizată pentru a valida testul.

Măsurarea respirației mitocondriale

Rata respirației mitocondriale a fost măsurată la 37 de grade folosind un instrument Hansatech Oxygraph-Plus echipat cu un electrod de oxigen de tip Clark (Sarasota, FL, SUA). Fracțiile mitocondriale (0,6 mg proteină/mL) au fost suspendate în tampon de respirație care conține 125 mM KCI, 20 mM MOPS, 10 mM Tris, 0,5 mM acid etilenglicol tetraacetic (EGTA) și 2 mM KH2 PO4; pH 7,2. După incubare la 37 de grade timp de 2 minute, fiecare probă a primit 50 uL soluție de substrat (5 mM piruvat și 5 mM malat). Ratele de respirație au fost măsurate în prezența (Starea 3) a 1 mM ADP și după fosforilarea întregului ADP la ATP (Starea 4). Raportul ratelor de respirație Stare 3:State 4 este indicele de control respirator, care indică etanșeitatea cuplării dintre respirație și fosforilare (Javadov și colab., 2005; Kuwabara și colab., 1997). Înainte de adăugarea soluției de substrat, rata de respirație în starea 1 a fost măsurată până la începutul respirației în starea 2, iar rata de respirație în starea 2 a fost estimată înainte de adăugarea de ADP.

analize statistice

Datele au fost analizate prin analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) pentru comparații cu mai multe grupuri. Valorile celei mai puțin semnificative diferențe (LSD) au fost utilizate pentru a identifica diferențele semnificative între cele două grupuri atunci când valorile p au fost <>

Cistanchearemedicinalvaloare

Rezultate

După cum se arată în figurile 1 și 2, tratamentul cu un extract metanolic de Herba Cistanche (0,5 sau 1,0g/kg/zi×3) a îmbunătățit semnificativ starea glutationului mitocondrial în inimile de șobolan, deoarece evidențiată de creșteri dependente de doză ale nivelurilor de GSH (11-30 la sută) și scăderi ale nivelurilor de GSSG (31 la sută).

Tratamentul cu Herba Cistanche a scăzut în funcție de doză nivelurile de Ca2 plus mitocondrial în inimile de șobolan, comparativ cu martorii; suprimarea a fost de 41 la sută la o doză de 1,0 g/kg (Figura 3).

Tratamentul cu Herba Cistanche a crescut ΔΨm mitocondrial, așa cum este demonstrat de o scădere (14-16 la sută) a raportului FL1/FL2. CCCP (100 uM) a provocat colapsul ΔΨm, așa cum este indicat de o creștere a raportului FL1/FL2 (Figura 4).

Tratamentul cu Herba Cistanche a îmbunătățit respirația mitocondrială, așa cum demonstrează o rată semnificativ mai mare a respirației în starea 3 (84 la sută) la animalele de testat în comparație cu martorii (Tabelul 1). Nivelurile de respirație în starea 2 și 4 au fost crescute cu 47 și, respectiv, 80 la sută, dar stimularea respirației în starea 4 a fost complet suprimată de guanozin-5'-difosfat 1 mM, un inhibitor al proteinei de decuplare 2/3. Tratamentul cu Herba Cistanche nu a afectat indicele de control respirator, estimat prin raportul ratelor respirației Stare 3/Starea 4.

Cistancheareneuroprotectorproprietăți

Discuţie

Mitocondriile izolate din inimile de șobolan tratate cu Herba Cistanche au prezentat o stare de glutation îmbunătățită, așa cum este indicat de nivelurile crescute de GSH și nivelurile scăzute de GSSG. Menținerea statusului redox al glutationului mitocondrial este esențială pentru cardioprotecția împotriva leziunilor I/R (Chiu & Ko, 2003). Conținutul de Ca2 plus citosolic crește în timpul ischemiei miocardice, prin absorbția de către membrana internă Ca2 plus uniporter (Ataka și colab., 1992; Grover și colab., 1990), conducând la acumularea de Ca2 plus mitocondrial. Rezultatele noastre indică faptul că tratamentul cu extracte de Herba Cistanche a îmbunătățit starea redox a glutationului mitocondrial și a scăzut nivelul de Ca2 plus mitocondrial, ceea ce poate oferi protecție împotriva leziunilor miocardice I/R (Leung, 2006). Incapacitatea tratamentului cu Herba Cistanche, la o doză mai mare de 1,0 g/kg, de a scădea în continuare nivelurile de GSSG și Ca2 plus poate fi legată de existența unui mecanism de reglare autolimitat care afectează potențialul redox al glutationului și starea calciului în mitocondrii.

Mitocondriile generează un gradient electrochimic de protoni de-a lungul membranei interioare, prin transportul de electroni. Acest gradient este utilizat de ATP sintaza pentru a fosforilează ADP în ATP. Scăderea potențialului membranei mitocondriale, ca în hipoxie/reoxigenare după lezarea cardiomiocitelor cultivate (Chiu și colab., 2008), are ca rezultat o reducere a generării de ATP. Tratamentul cu Herba Cistanche, care poate crește potențialul membranei mitocondriale miocardice, poate crește generarea de ATP, în special în timpul reperfuziei post-ischemice. Din nou, existența unui mecanism de reglare autolimitat poate explica de ce efectele tratamentului cu Herba Cistanche asupra potențialului membranei mitocondriale nu sunt dependente de doză.

Tratamentul cu Herba Cistanche a crescut foarte mult rata de respirație în starea 3 în mitocondriile inimii de șobolan, după cum este evaluată prin consumul de oxigen. Această constatare este în concordanță cu rezultatele obținute din măsurători in vitro și situ ale capacității de generare a ATP mitocondrial (Leung & Ko, 2008). În mod intrigant, deși tratamentul cu Herba Cistanche a redus nivelul la starea de echilibru al ATP miocardic (datele nu sunt prezentate), tratamentul a îmbunătățit generarea de ATP mitocondrial. Implicarea respirației decuplate poate explica aceste observații discrepante. Fosforilarea oxidativă necuplată are loc atunci când protonii sunt mutați prin membrana interioară mitocondrială înapoi în matricea mitocondrială, disipând astfel potențialul de membrană format de lanțul de transport de electroni. Aceasta are ca rezultat reducerea forței motrice de protoni care conduce la formarea ATP (Garvey, 2003). Ca o consecință, concentrația de Ca2 plus și producția de ROS în mitocondrii sunt atenuate dramatic (Teshima și colab., 2003). Această sugestie este în concordanță cu rezultatele studiului de față, care a arătat o scădere a nivelurilor mitocondriale de Ca2 plus în inimile tratate cu Herba Cistanche. În ceea ce privește respirația decuplată, sinteza proteinelor de decuplare (UCP) poate fi indusă prin tratamentul cu Herba Cistanche. Se știe că UCP-urile decuplează fosforilarea oxidativă și expresia UCP1 în inimile de șoareci transgenici sunt protejate împotriva leziunilor miocardice induse de I/R (Hoerter și colab., 2004). Efectul de decuplare al UCP-urilor a fost inhibat de difosfații și trifosfații de nucleotide purinice (cum ar fi ADP, ATP, guanozin difosfat (GDP) și GTP) (Echtay și colab., 2002). În studiul de față, parametrii mitocondriali, cum ar fi potențialul de membrană și rata de respirație, au fost măsurați în prezența ADP (ca substrat); efectul de decuplare al UCP-urilor a fost prin urmare inhibat. Cu toate acestea, atunci când rata de respirație mitocondrială în starea 4 a fost măsurată în absența ADP, această rată a fost mai mare în mitocondriile preparate din inimile tratate cu Herba Cistanche decât în ​​inimile martorilor netratate. Rata de respirație în starea 4 reflectă consumul de oxigen de către mitocondrii atunci când protonii se scurg înapoi în matricea mitocondrială printr-un mecanism care nu implică F1F0 -ATPaza (Garvey, 2003). Posibila implicare a UCP-urilor în creșterea indusă de Herba Cistanche a respirației în starea 4 este susținută de constatarea că această îmbunătățire a fost suprimată de PIB (Bento și colab., 2007).

În concluzie, tratamentul cu Herba Cistanche poate îmbunătăți starea glutationului mitocondrial, poate scădea nivelul de Ca2 plus mitocondrial și poate crește potențialul membranei mitocondriale și rata de respirație în inimile de șobolan. Îmbunătățirea statusului glutationului mitocondrial și a capacității funcționale și inducerea presupusă a UCP-urilor pot fi legate de cardioprotecția oferită de tratamentul cu Herba Cistanche după leziuni I/R.

Cistanchepoate creștemitocondrialerespiraţie rată

Declaratie de interes

Autorii nu raportează niciun conflict de interese. Autorii sunt responsabili pentru conținutul și scrierea lucrării.

Referințe

Ataka K, Chen D, Levitsky S, Jimenez E, Feinberg H (1992): Efectul îmbătrânirii asupra Ca2 plus intracelular, pHi și contractilitate în timpul ischemiei și reperfuziei. Circulație 86 II371–II376.

Bento LM, Fagian MM, Vercesi AE, Gontijo JA (2007): Efectele acidozei metabolice sistemice induse de NH4 Cl asupra cuplării mitocondriale renale și transportului de calciu la șobolani.

Nephrol Dial Transplant 22: 2817–2823. Bonavita F, Stefanelli C, Giordano E, Columbaro M, Facchini A, Bonafe F, Caldarera CM, Guarnieri C (2003): H9c2 cardiac myoblasts subgo apoptosis in a model of ischemia consisting of serum deprivation and hypoxie: inhibition by PMA. FEBS Lett 536: 85–91.

Chen P (1998): Ierburi tonice. Seria avansată TCM. Beijing, Science Press, pp. 233–320.

Chiu PY, Ko KM (2003): Îmbunătățirea dependentă de timp a statusului glutationului mitocondrial și a capacității de generare a ATP prin tratamentul cu schismdrină B scade susceptibilitatea inimilor de șobolan la leziuni de ischemie-reperfuzie.

Biofactori 19: 43–51. Chiu PY, Luk KF, Leung HY, Ng KM, Ko KM (2008): Stereoizomerii schisandrin B protejează împotriva apoptozei induse de hipoxie/reoxigenare și inhibă modificările asociate în tranziția permeabilității mitocondriale induse de Ca2 plus și potențialul membranei mitocondriale în cardiomiocitele H9c2. Life Sci 82: 1092–1101.

Echtay KS, Roussel D, St Pierre J, Jekabsons MB, Cadenas S, Stuart JA, Harper JA, Roebuck SJ, Morrison A, Pickering S, Clapham JC, Brand MD (2002): Superoxidul activează proteinele de decuplare mitocondriale. Natura 415: 96–99.

Evans WH (1992): Izolarea și caracterizarea membranelor și a organitelor celulare. În: Rickwood D, ed., Preparative Centrifugation. O abordare practică. New York, Oxford University Press, pp. 233–270.

Garvey WT (2003): Rolul proteinei de decuplare 3 în fiziologia umană. J Clin Invest 111: 438–441. Griffith OW (1980): Determinarea glutationului și disulfurei de glutation folosind glutation reductază și 2-vinilpiridină.

Anal Biochem 106: 207–212. Grover GJ, Dzwonczyk S, Sleph PG (1990): Roșu de ruteniu îmbunătățește funcția contractilă postischemică în inimile izolate de șobolan. J Cardiovasc Pharmacol 16: 783–789.

Hoerter J, Gonzalez-Barroso MD, Couplan E, Mateo P, Gelly C, Cassard-Doulcier AM, Diolez P, Bouillaud F (2004): Proteina de decuplare mitocondrială 1 exprimată în inima șoarecilor transgenici protejează împotriva daunelor ischemic-reperfuzie. Tirajul 110: 528–533.

Javadov S, Huang C, Kirshenbaum L, Karmazyn M (2005): Inhibarea NHE-1 îmbunătățește tranziția afectată de permeabilitate mitocondrială și funcția respiratorie în timpul remodelării postinfarct la șobolan. J Mol Cell Cardiol 38: 135–143.

Kuwabara M, Takenaka H, ​​Maruyama H, Onitsuka T, Hamada M (1997): Efectul ischemiei hipotermice prelungite și reperfuziei asupra consumului de oxigen și energiei mecanice totale în miocardul șobolanului: participarea fosforilării oxidative mitocondriale. Transplant 64: 577–583.

Lemasters JJ, Nieminen AL, Qian T, Trost LC, Elmore SP, Nishimura Y, Crowe RA, Cascio WE, Bradham CA, Brenner DA, Herman B (1998): Tranziția permeabilității mitocondriale în moartea celulelor: un mecanism comun în necroză, apoptoză și autofagie. Biochim Biophys Acta 1366: 177–196.

Leung HY (2006): Efectul Herba Cistanche asupra generării mitocondriale de ATP: o bază farmacologică a „vigorării Yang”. Teză MPhil, Universitatea de Știință și Tehnologie din Hong Kong, pp. 67–69.

Leung HY, Ko KM (2008): Extractul de Herba Cistanche îmbunătățește generarea de ATP mitocondrial în inimile de șobolan și celulele H9C2. Pharma Biol 46: 418–424.

Menze MA, Hutchinson K, Laborde SM, Hand SC (2005): Tranziția permeabilității mitocondriale în crustaceul Artemia franciscana: absența unui por reglat de calciu în fața depozitării profunde a calciului. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 289: R68–R76.

Redegeld FA, Moison RM, Koster AS, Noordhoek J (1992): Epuizarea ATP, dar nu a GSH afectează viabilitatea hepatocitelor de șobolan. Eur J Pharmacol 228: 229–236.

Teshima Y, Akao M, Jones SP, Marban E (2003): Supraexprimarea proteinei-2 de decuplare inhibă calea morții mitocondriale în cardiomiocite. Circ Res 93: 192–200.

Yim TK, Ko KM (2002): Activități antioxidante și imunomodulatoare ale plantelor tonificante chinezești. Pharm Biol 40: 329–335.