Cum Cistanche poate ajuta la sănătatea oaselor?

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

[Abstract]Obiectiv:Pentru a studia diferențierea direcțională a celulelor stem mezenchimale din măduva osoasă (MSC) indusă de medicina tradițională chineză de tonifiere a rinichilor și pentru a elabora teoria „rinichiului guvernează oasele și măduva”. Metodă: lichid de medicină tradițională chineză

Cistancheechinacozidpoate ușuraosteoporoza

Șobolanii SD au fost administrați intragastric timp de 4 zile și apoi a fost colectat sânge din aorta abdominală pentru a prepara serul medicamentos. M SC de generația a 4-a au fost inoculate în două plăci 6-godeuri la 5×106, fiecare cu 6 godeuri, împărțite în grupuri martor,

grupul Morinda officinalis, grupul eucommia ulmoides, grupul psoralen,cistanchegrup, grup epimediu. Când celulele cresc la 80 la sută, fiecare grup de medicină tradițională chineză este adăugat cu mediu LD M EM seric care conține medicament și mediul original al grupului martor este continuat să fie cultivat; în a 10-a zi de inducție, o placă de 6-godeuri este scoasă pentru colorarea ALP; celălalt este 6-bine în a 20-a zi Patat cu roșu alizarina. Rezultate: grupul Morinda officinalis, grupul Eucommia ulmoides,Cistanchegrupul Epimedium a prezentat colorație ALP pozitivă în a 10-a zi, noduli albi de calciu au fost observați în jurul a 14-a zi, iar colorarea roșie cu alizarina a fost pozitivă în a 20-a zi. Concluzie: „Rinichi

Ghidată de teoria „osului și măduvei principale”, medicina chineză de tonifiere a rinichilor poate induceoscelulele stem mezenchimale ale măduvei pentru a se diferenția în osteoblaste.

Cuvinte cheie: celule stem mezenchimale ale măduvei osoase; osteoblaste; diferențiere dirijată

Medicina tradițională chineză consideră că rinichii dominăoase, stochează esența și produc măduvă. Atât studiile clinice, cât și cele experimentale au confirmat semnificația clinică de ghidare a acestei teorii, dar nu au fost efectuate cercetări privind inducerea diferențierii celulelor stem mezenchimale din măduva osoasă (MSC). M SC sunt un fel de celule stem adulte pluripotente, care există în principal în măduva osoasă, dar și în țesuturile extraoase de origine mezenchimală în perioada embrionară, cum ar fi fibroblastele pielii, celulele stem adipoase, celulele satelite ale mușchilor scheletici și celulele endoteliale vasculare. . M SC de măduvă osoasă (BM SC) sunt componente ale stromei măduvei osoase. După ce au fost izolate și cultivate in vitro, în anumite condiții de inducție, au capacitatea de a se diferenția în osteoblaste, condrocite, celule nervoase, adipocite, cardiomiocite etc., în multe feluri. Principalele surse de celule semințe în ingineria țesutului osos sunt osteoblastele și BMSC. Deși osteoblastele au o activitate osteogenă bună, ele sunt limitate ca sursă, greu de izolat și de obținut în cantități mari și au potențialul insuficient de expansiune pe scară largă in vitro, care sunt greu de îndeplinit nevoile aplicațiilor clinice în ingineria țesutului osos; SC BM nu numai că au un potențial bun de diferențiere a osteoblastelor și un potențial ridicat de diferențiere. Activitatea osteogenă, potențialul puternic de proliferare și sursa convenabilă pot satisface ingineria țesuturilor autologe.

Cistancheechinacozidpoate trataosteoporoza

1 Material și metode

1.1 Material

1.1.1 Animale experimentale

Doisprezece șobolani SPF SD, cântărind 120 g ~ 150 g, nu se limitează la masculi și femele, furnizați de Centrul Experimental al Universității de Medicină Tradițională Chineză din Guangzhou.

1.1.2 Reactivi și echipamente Haiclone L-DM EM mediu, Haiclone South American Fetal Bovine Serum (FBS), Morinda officinalis, Psoralen, Eucommia, Cistanche, Epimedium Chinese Pudder medicinal, DM SO (sigma), Alizarin red (Guangzhou Weijia), colorare de fosfatază alcalină (Nanjing Jiancheng Biological Co., Ltd.), 0,25% pancreatină (compania GI BCO). 0 Filtru seringă de 22μm (MI LL Ipo re), balon de cultură de 75 cm2, 96-placă pentru godeuri, 6-placă pentru godeuri (corning). Evaporator rotativ, cititor de microplaci (Thermo), centrifuga frigorifica (sigma 3K 15), incubator cu CO2 (compania SH ELDO NA).

1.2 Metoda

1.2.1 Prepararea serului care conține medicina tradițională chineză

Luați 150 g de pulbere medicinală chinezească brută, adăugați de 10 ori cantitatea de 70% etanol, încălziți la reflux de două ori, 1 oră de fiecare dată, filtrați, combinați filtratul, concentrați filtratul sub presiune redusă la 300 ml, se răcește la temperatura camerei și se păstrează la frigider la 4 grade pentru utilizare ulterioară. Se diluează lichidul din medicina tradițională chineză la 0,3 g de medicament brut/ml și se gavajează, de fiecare dată, de două ori pe zi, după administrare continuă timp de 4 zile, se recoltează sânge din aorta abdominală, după precipitare peste noapte, centrifugat la 2500r timp de 20 min. , colectați supernatantul și acul Sterilizați prin filtru și depozitați la grade -20 .

1.2.2 Separarea și cultura MSC-urilor

După ce șobolanii SD au fost anesteziați prin cavitatea abdominală, femurul și tibia ambelor membre inferioare au fost scoase în condiții aseptice, iar țesuturile moi au fost curățate, capetele osoase au fost tăiate cu rongeurs, cavitatea medulară a fost expusă și cele 10. Seringa ml a fost folosită pentru a suge L-DM EM care conține 10% ser fetal bovin. Spălați cavitatea medulară cu mediu în mod repetat până când osul devine alb și transmiterea luminii crește. Se colectează lichidul de spălare al cavităţii medulare într-un balon de cultură de 75 cm2 şi se pune într-un incubator de 37 de grade, 5% CO2. Schimbați lichidul la fiecare 2 până la 3 zile.

1.2.3 Trecerea MSC-urilor

Când celulele sunt pline cu 90 procente din fundul sticlei, ele sunt digerate cu 0,25% tripsină, apoi pipetate într-o suspensie celulară și trecute într-un raport de 1:3.

1.2.4 MSC-urile induc diferențierea

Când celulele P4 sunt supraîncărcate cu 90 la sută, ele sunt digerate cu 0,25 la sută tripsină pentru a prepara o suspensie celulară. Celulele sunt însămânțate în plăci de 2 6-godeuri cu o densitate celulară de 5×106 per godeu, cu 6 godeuri pe placă. Împărțit în grup martor, grup Morinda officinalis, grup Psoralen, grup Eucommia ulmoides, grup Cistanche cistanche, grup epimedium. Când celulele au fost pline cu 80% din fundul sticlei, mediul a fost schimbat. Mediul original al grupului martor a continuat să fie cultivat, iar grupului de medicină chineză a fost adăugat 10% mediu EM L-DM care conține ser care conține medicament chinezesc.

1.2.5 Colorarea cu fosfatază alcalină

În a 10-a zi a culturii de inducție, o placă de 6-godeuri a fost scoasă și colorată conform metodei trusei de colorare cu fosfatază alcalină. Observați rezultatele la microscop.

1.2.6 Colorarea roșie de alizarină

În a 2-a zi de cultură de inducție, se scoate o placă de 6-godeuri, se aspiră soluția de inducție a osteoblastelor, se spală de 3 ori cu P BS, se fixează cu alcool 95% timp de 10 minute, se adaugă 0,1% Alizarin Red-Tr is-HCl (pH 8,3), baie de apă la 37 de grade timp de 30 min, observați rezultatele la microscop.

Cistancheechinacozidpoate rezista apoptozei și poate promovaoscreştere

2 Rezultate

2.1 Observarea morfologiei celulare

MSC-urile sunt celule asemănătoare fibroblastelor, care formează un fusiform după atașarea de perete (vezi Figura 1). După adăugarea soluției de inducție, celulele din grupul martor nu s-au schimbat semnificativ; începând cu a 3-a zi, celulele din grupul Morinda officinalis, grupul Eucommia ulmoides, grupul Cistanche deserticola și grupul Epimedium au prezentat o creștere agregată a celulelor și volumul celular ușor crescut (vezi Figura 2), 14 zile mai târziu, s-a observat formarea evidentă de noduli sub microscopul din spate (vezi Figura 3). Nu a existat nicio schimbare evidentă în celulele grupului psoralen.

2.2 Colorarea cu fosfatază alcalină

În a 10-a zi, grupul Morinda officinalis, grupul Eucommia ulmoides, grupul Cistanche cistanche și grupul Epimedium au fost colorați cu fosfatază alcalină. S-a văzut că zona de agregare a celulelor a devenit violet și negru (vezi Figura 4), iar dispersia celulară a fost albastră (vezi Figura 5). ). Grupul psoralen și grupul martor au fost negative.

2.3 Colorarea roșie de alizarina

În a 21-a zi, grupul Morinda officinalis, grupul Eucommia ulmoides, grupul Cistanche, grupul Epimedium Alizarin Red s-au colorat cu substanță granulară albă în partea de jos a plăcii 6-godeurilor și roșu închis după colorare. Grupul Jitian, grupul psoralen, grupul eucommia, grupul cistanche, grupul epimedium. La microscop, în zona de agregare celulară există particule roșii, care sunt noduli de calciu (Figura 6). Grupul psoralen și grupul martor au fost negative.

3 Discuție

3.1 Prepararea serului care conține medicina tradițională chineză

Compoziția medicinei tradiționale chineze este complexă și este dificil să studiezi fiecare componentă. Farmacologia serului poate depăși într-o oarecare măsură interferența factorilor nesiguri, cum ar fi proprietățile fizice și chimice ale preparatelor din medicina tradițională chineză, asupra rezultatelor experimentale și este relativ aproape de adevărata biotransformare a medicamentului în organism.

Procesul propriu-zis. Adică, are două avantaje majore: ① Reflectă efectul de transformare biochimică al compusului în organism;

②Depășiți interferența directă a proprietăților fizice și chimice ale medicamentului în sine în experiment [1].

Atât preparatul de ser, cât și animalele derivate din M SC sunt șobolani SD, iar animalele omoloage sunt utilizate pentru prepararea serului, ceea ce poate reduce răspunsul imun cauzat de diferențele dintre specii și poate îmbunătăți fiabilitatea rezultatelor experimentale [2], ținând cont de metabolismul animal. . Diferite, luați greutatea, metoda de conversie a suprafeței corporale de administrat. Unii oameni cred că există multe enzime, anti-corp, complement, citokine și alte substanțe biologic active, care pot avea un impact direct asupra celulelor, virușilor, agenților patogeni și țesuturilor și organelor utilizate pentru experimentele in vitro, care pot interfera cu rezultatele experimentelor și afectează evaluarea obiectivă a eficacității medicamentului. Interferență farmacologică după inactivarea serului [3]. Cu toate acestea, componentele medicinei tradiționale chineze sunt complexe, iar efectele farmacologice asupra organismului sunt complicate. Serul neinactivat poate reflecta mai bine efectele medicamentului în organism și nu au fost observate efecte citotoxice în timpul experimentului.

3.2 Efectul inductor al medicinei chineze de tonifiere a rinichilor asupra diferențierii direcționate a MSC

M SC de măduvă osoasă (BM SC) sunt componente ale stromei măduvei osoase. După ce au fost izolate și cultivate in vitro, în anumite condiții de inducție, au capacitatea de a se diferenția în osteoblaste, condrocite, neurocite, adipocite, cardiomiocite etc., în multe feluri. Studiile experimentale au arătat că atât medicina tradițională chineză unitară [4], cât și medicina chineză compusă care tonifică rinichii [5] au efectul de a induce MSC-urile să se diferențieze în osteoblaste. În experiment, cele cinci seruri medicinale chinezești preparate din cele cinci medicamente care au efecte de „tonificare a rinichilor și de întărire a oaselor și a mușchilor”, cu excepția psoralenului, pot induce diferențierea M SC-urilor în osteoblaste, dar mecanismul specific rămâne. pentru a fi studiat în continuare.

3.3 Semnificația clinică a serului care conține medicina tradițională chineză tonifiantă a rinichilor pentru a induce MSC-urile să se diferențieze în osteoblaste.

Ingineria țesutului osos are perspective largi pentru aplicații clinice și a devenit un punct fierbinte de cercetare în ortopedia modernă. BM SC, ca semințele cele mai ideale pentru ingineria țesutului osos în prezent, pot elimina influența acestor factori de interferență asupra rezultatelor experimentale și pot ajuta la reducerea conținutului necelular al serului. Sarcina centrală a cercetării asupra efectului său este cum să o faci în cele mai simple condiții posibile. Se diferențiază direct în osteoblaste și apoi se transformă în celule osoase mature. În prezent, inductorii utilizați în mod obișnuit pentru diferențierea M SC în osteoblaste sunt dexametazona, este compusă din vitamina C și -glicerofosfat de sodiu. Din punct de vedere clinic, dexametazona are efecte secundare precum infecția, osteonecroza și osteoporoza și are un efect inhibitor semnificativ asupra proliferării celulare in vitro [6, 7], ceea ce va limita utilizarea MSC ca inductor in vivo după transplant. Medicina chineză de tonifiere a rinichilor are efectul de a induce MSC-urile să se diferențieze în osteoblaste. În aplicarea clinică pe termen lung, efectele toxice și secundare ale medicinei chineze de tonifiere a rinichilor nu au fost observate. Prin urmare, utilizarea sa ca inductor in vivo are o perspectivă largă de aplicare clinică.

Pe scurt, cea mai mare parte a cercetării actuale privind MSC ca celule semințe pentru ingineria țesutului osos este încă în stadiu experimental. În prezent, se studiază modul de a obține suficiente M SC într-un timp scurt și de a le induce să se diferențieze în osteoblaste prin metode simple. Concentrează-te. Deși medicamentele tradiționale chinezești cu efecte de revigorare a rinichilor și de întărire a oaselor și mușchilor pot determina M SC să se diferențieze în osteoblaste, are un viitor strălucit ca inductor de diferențiere al M SC pentru tratamentul consolidarii întârziate, lipsei de consolidare și osteoporozei fracturilor. . Mecanismul de acțiune rămâne de studiat în continuare.

Cistanche echinacosidepoate rezista apoptozei și poate promovacreșterea osoasă