A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Glicozidele feniletanoide de Cistanche tubulosa induc apoptoza în celulele de carcinom hepatocelular H22 prin căi de semnalizare atât extrinseci, cât și intrinseci

Pengfei Yuan¹ et al

Abstract

fundal: Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight este un medicament tradițional chinezesc care parazitează rădăcinile plantei Tamarix și a fost folosit pentru a trata impotența masculină, sterilitatea, slăbiciunea corpului și ca tonic. Cu toate acestea, efectul său antitumoral asupra carcinomului hepatocelular este încă evaziv. Aici, am investigat efectul antitumoral alCistanche tubulosa glicozide feniletanoide(CTPG) asupra celulelor de carcinom hepatocelular H22 atât in vitro, cât și in vivo și mecanismele acestuia.

Metode:Morfologia, viabilitatea,apoptoza, ciclul celular și potențialul membranei mitocondriale (Δψm) ale celulelor H22 au fost analizate prin microscopie inversată, test MTT și, respectiv, citometrie în flux. Expresia și activarea proteinelor înapoptozaau fost detectate prin Western blot. Efectul antitumoral in vivo a fost evaluat într-un model de șoarece tumoral stabilit folosind șoareci masculi Kunming.

Rezultate:Tratamentul CTPG a suprimat semnificativ creșterea celulelor H22 într-o manieră dependentă de doză și timp, ceea ce a fost corelat cu creștereaapoptozași oprirea ciclului celular la fazele G0/G1 și G2/M. Mai mult, s-a observat condensare cromozomială în celulele H22 tratate cu CTPG. Tratamentul CTPG a crescut semnificativ raportul Bax/Bcl-2, a redus Δψm și a îmbunătățit eliberarea citocromului c. Nivelurile de caspază scindată-8 și caspază{-9 în căile de semnalizare extrinseci și intrinseci au fost semnificativ crescute, astfel încât caspaza activată secvenţial{-7 și-3 pentru a scinda PARP. În cele din urmă, CTPG a inhibat creșterea celulelor H22 la șoareci și a îmbunătățit rata de supraviețuire a șoarecilor tumorali.

Concluzii: Aceste rezultate au sugerat că CTPG a suprimat creșterea celulelor H22 atât prin extrinseci, cât și prin intrinseciapoptozacăi.

Cuvinte cheie: Cistanche tubulosa, Glicozide feniletanoide, Apoptoza, Cale de semnalizare, Model de șoarece tumoral

Cistanche tubulosaglicozide feniletanoide

fundal

Cancerul hepatic s-a clasat pe locul șase pentru incidența cancerului și pe locul patru pentru decesele cauzate de cancer la nivel mondial. Mai mult, s-a clasat pe locul patru pentru incidența cancerului și pe primul loc pentru mortalitatea prin cancer în țările cu indice socio-demografic scăzut [1]. În China, cancerul de ficat este a treia cauză de deces cauzat de cancer în 2015 [2]. Peste 90% din cancerele hepatice primare sunt carcinom hepatocelular (HCC) din lume [3]. În prezent, rezecția hepatică este principala opțiune pentru terapia HCC. Cu toate acestea, mai puțin de 30 la sută dintre pacienții cu HCC au îndeplinit criteriile rezecției hepatice curative și rata de supraviețuire generală 5-an este încă la 35-50 procente din cauza ratei ridicate de recurență [4, 5] . Disponibilitatea opțiunilor de tratament pentru pacienții cu HCC intermediar până la avansat este foarte limitată. Sorafenib, un medicament țintit molecular, a fost aprobat de FDA ca tratament de primă linie pentru HCC avansat. Cu toate acestea, sorafenib prelungește doar aproximativ 3 luni de supraviețuire, iar rata de răspuns este mai mică de 4% [6, 7]. Este urgent să se dezvolte noi medicamente sau strategii împotriva HCC.

Medicina tradițională chineză (MTC) singură sau combinată cu alte strategii a fost utilizată pentru a trata HCC și a demonstrat beneficiile clinice, inclusiv prelungirea timpului de supraviețuire, îmbunătățirea calității vieții, reducerea reacțiilor adverse și așa mai departe [8, 9]. Cistanche, un fel de MTC, are diverse funcții biologice, cum ar fi antioxidare, antiinflamație, anti-îmbătrânire și neuroprotecție [10, 11].Glicozide feniletanoideau fost considerate componentele active majore ale Cistanche, care au activități diverse, inclusiv antioxidare, antiinflamație, hepatoprotecție și neuroprotecție [12-15]. Grupul nostru a raportat astaCistanche tubulosa glicozide feniletanoide(CTPG) ar putea induceapoptozaîn celulele melanomului B16-F10 și inhibă creșterea tumorilor la șoareci [16]. În acest studiu, am măsurat efectul antitumoral al CTPG asupra celulelor HCC H22 atât in vitro, cât și in vivo și am investigat mecanismele acestuia. Am găsit că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)induseapoptozaîn celulele H22 prin căile de semnalizare atât extrinseci, cât și intrinseci și a suprimat creșterea tumorilor H22 la șoareci.

Metode

Linie celulara

Celulele de carcinom hepatocelular H22 de șoarece au fost obținute de la Xinjiang Cheie Laboratorul de Resurse Biologice și Inginerie Genetică, Universitatea Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, China) și cultivate în mediu RPMI 1640 (Gibco) suplimentat cu 100 U/ml penicilină și 100 ug/ml streptomicina și 10% ser fetal bovin inactivat termic (Gibco) la 37 de grade într-o atmosferă umidificată de 5% CO2.

Testul MTT

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a fost achiziționat de la Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian, Xinjiang, China) și compușii majori ai CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)au fost calificate și cuantificate prin cromatografie lichidă de înaltă performanță [16]. Viabilitatea celulară a fost evaluată de 3-(4, 5-dimetiltiazol{-2-il)-2, 5-bromură de difeniltetrazoliu (MTT) (Sigma, St. Louis, MO , SUA) test. Celulele H22 au fost inoculate în 96-plăci de godeuri la o densitate de 2 × 104 celule în 1{00 ul mediu per godeu și cultivate la 37 de grade. După 24 de ore, celulele au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG (0,100, 200, 300 și 400 ug/ml) sau 0,3% DMSO (egal cu cel din 400 ug/ml CTPG) timp de 24, 48 și, respectiv, 72 de ore. După centrifugare la 1000 rpm timp de 7 min, supernatantul a fost aruncat și 100 ul de soluție MTT (5 mg/ml în PBS) au fost adăugate în fiecare godeu. Plăcile au fost incubate la 37 de grade timp de 4 ore și s-au adăugat 100 ul DMSO pentru a dizolva cristalele de formazan formate. Valorile OD490 au fost detectate de un cititor de microplăci 96-godeuri (Bio-Rad Laboratories, CA, SUA). Viabilitatea celulară a fost calculată conform formulei: Viabilitatea celulară (procent)=(ODtratat/ODnetratat) x 100 la sută.

Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide

Detectarea apoptozei

Celulele H22 au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)({{0}}, 100, 200, 300 și 400 ug/ml) sau 0,3% DMSO timp de 24 de ore și apoi colorat cu anexină VFITC/iodură de propidiu (PI)ApoptozaKit de detectare (YEASEN, China) conform instrucțiunilor producătorului. Probele au fost analizate prin citometrie în flux (BD FACSCalibur, SUA).

Detectarea potențialului membranei mitocondriale

Celulele H22 au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)(0, 200 și 400 ug/ml) timp de 24 de ore și apoi colorat cu colorant JC-1 permeabil la membrană (Beyotime, China) timp de 20 de minute la 37 de grade. După spălare de două ori cu tampon JC-1, probele au fost resuspendate cu 300 ul de tampon JC-1 și analizate prin citometrie în flux (BD FACSCalibur, SUA).

Analiza ciclului celular

Celulele H22 au fost inoculate în vase de cultură de 60 mm și tratate cu diferite concentrații de CTPG (0, 1{00,200, 300 și 400 ug/ml) sau 0,3% DMSO timp de 24 de ore . Toate celulele au fost colectate și spălate de două ori cu PBS. Celulele au fost fixate în 70% etanol rece la gheață la -20 de grade timp de 2 ore și spălate de două ori cu PBS, apoi resuspendate în tampon de colorare cu iodură de propidiu/RNază de 300 ul (BD Biosciences). După 10 minute la temperatura camerei, probele au fost colectate prin citometrie în flux (BD FACSCalibur, SUA), iar distribuția ciclului celular a fost analizată cu software-ul ModFit LT 3.0.

glicozide feniletanoideînCistanche tubulosa

Colorare Hoechst 33.258

Modificările morfologice ale nucleelor ​​celulelor H22 au fost analizate prin colorarea Hoechst 33.258 cu colorant de legare a ADN-ului permeabil la membrană. Celulele H22 au fost însămânțate într-o placă de 6-godeuri la o concentrație de 1 × 105 celule/godeu într-un mediu de 2 ml. După confluență de 60% ~ 70%, celulele au fost tratate cu CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)(0, 100, 200, 300 și 400 ug/ml) timp de 24 de ore. Celulele au fost colectate și fixate cu 4% paraformaldehidă rece ca gheață la 4 grade timp de 10 minute. După spălare cu PBS, celulele au fost colorate cu Hoechst 33258 (Beyotime, China) la 4 grade timp de 10 minute. Probele au fost observate cu un microscop cu fluorescență inversată (Nikon Eclipse Ti-E, Japonia).

Western blot

Anticaspaza-3, caspaza anti-clivată-3, Anti-Bcl-2 și anti-Bax au fost achiziționate de la Beyotime Biotech Co., Ltd. (Shanghai, China). Anti-caspază-7, anti-caspază-clivată-7, anti-caspază-8, anti-caspază-clivată-8, anti-caspază-9, anti clivată-caspază-9, anti-PARP, anti-clivată PARP, anti-șoarece IgG-HRP și anti-iepure IgG-HRP au fost achiziționate de la Cell Signaling Technology. Anti- -actina a fost achiziționată de la Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (Beijing, China).

Celulele H22 au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)({{0}}, 100, 200, 300 și 400 ug/ml) sau 0,3 procente DMSO timp de 24 de ore. Celulele au fost colectate și lizate cu soluția de liză celulară RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) timp de 30 de minute pe gheață. Probele au fost centrifugate (12,000 g timp de 15 minute la 4 grade) pentru a colecta supernatanții, iar concentrațiile de proteine ​​au fost măsurate cu kit-ul BCA (Thermo Fisher Scientific, SUA). O cantitate egală de proteină din fiecare probă a fost izolată cu 12% SDS-PAGE și transferată pe membrane PVDF (Biosharp, China). După blocarea cu tampon TBST care conținea 5% lapte degresat, membranele au fost incubate cu anticorpi primari corespunzători și respectiv anticorpi secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP). După spălarea cu TBST, proteinele țintă au fost detectate prin trusa de analiză ECL (Beyotime, China).

Animale și declarație de etică

Șoarecii Kunming masculi de 6-8 săptămâni au fost achiziționați de la Centrul de laborator pentru animale, Universitatea Medicală Xinjiang (Urumqi, Xinjiang, China). Șoarecii au fost ținuți într-o unitate de animale standard, controlată cu temperatură, cu cicluri de lumină a Universității Xinjiang. Toate studiile pe animale au fost efectuate conform ghidurilor Comitetului de îngrijire și utilizare a animalelor de la Universitatea Xinjiang. Protocolul a fost aprobat de Comitetul pentru Etica Experimentelor pe Animale al Laboratorului Cheie de Resurse Biologice și Inginerie Genetică din Xinjiang (BRGE-AE001), Universitatea Xinjiang.

Studiu tumoral la șoarece

Pentru inducerea modelului de șoarece tumoral, șoarecii Kunming masculi au fost injectați subcutanat cu 1 × 106 celule H22 în 100 ul PBS în flancul drept. După 3 zile, șoarecii au fost împărțiți aleatoriu în 3 grupuri (7 șoareci/grup). Grupul de control a fost injectat cu 0,1 ml DMSO subcutanat în jurul tumorii. Grupurile CTPG-200 și CTPG-400 au fost injectate subcutanat cu 200 sau 400 mg/kg CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)în 0.1 ml DMSO în jurul tumorii. Șoarecii au fost tratați la fiecare 2 zile timp de până la 21 de zile. Dimensiunile tumorii au fost măsurate folosind șublere până la 25 de zile și volumul tumorii a fost calculat conform formulei: volumul tumorii (mm3)=(lungime x lățime2)/2. După 25 de zile, supraviețuirea șoarecilor tumorali a fost monitorizată în fiecare zi până la sfârșitul acestui studiu.

analize statistice

Semnificația statistică a fost calculată prin analiza unidirecțională a varianței între grupurile de tratament și de control. Toate datele au fost exprimate ca medie ± abaterea standard (SD). p < 0.05="" a="" fost="" considerat="" semnificativ="">

Rezultate

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a redus viabilitatea celulelor H22 in vitro

Pentru a explora efectul antitumoral al CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)pe HCC, celulele H22 au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG (0, 100, 200, 300 și 400 ug/ml) in vitro. După 24 de ore, morfologia celulelor H22 a fost observată folosind un microscop inversat. Am descoperit că morfologia celulelor H22 a fost schimbată dramatic prin tratamentul CTPG. Odată cu creșterea concentrației CTPG, celulele au devenit mici și rotunde, iar numărul de celule a fost, de asemenea, mult redus (Fig. 1a). Testul MTT a fost utilizat pentru a analiza viabilitatea celulelor H22 după tratamentul CTPG timp de 24, 48 și, respectiv, 72 de ore. CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a redus semnificativ viabilitatea celulelor H22 într-o manieră dependentă de doză și dependentă de timp (Fig. 1b). CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)la 300 ug/ml a ajuns la cea mai bună rată inhibitorie (Fig. 1c). Valorile IC50 ale CTPG pentru celulele H22 sunt 236 ug/ml la 24 ore și 169,8 ug/ml la 48 ore.

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)apoptoza indusă în celulele H22

Pentru a investiga dacă scăderea viabilității celulelor H22 este mediată de inducereaapoptoza, celulele H22 au fost tratate cu diferite concentrații de CTPG (0, 100, 200, 300 și 400 ug/ml) timp de 24 de ore și colorate cu PI și anexină V. Rezultatele citometriei în flux au arătat că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)induse semnificativapoptozade celule H22 (inclusiv timpurii și tardiveapoptoza) într-o manieră dependentă de doză (Fig. 2a). Deși doza mare de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)de asemenea, a crescut semnificativ necroza celulelor H22, necroza joacă un rol minor în inhibarea creșterii celulelor H22 datorită proporției sale mai mici (8,3 la sută) în comparație cu cea a celulelor H22.apoptoza(52,6 la sută). În plus, proteinele totale ale celulelor H22 au fost izolate după CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratamentul și expresiile limfomului 2 cu celule B anti-apoptotic (Bcl-2) și proteinei X asociate cu BCL-2-proapoptotic (Bax) au fost detectate prin Western blot. Datele de scanare în tonuri de gri au arătat că nivelurile de expresie ale Bax și Bcl-2 au fost crescute și, respectiv, scăzute. Raportul Bax/Bcl-2 a fost semnificativ crescut (Fig. 2b). Aceste rezultate sugerează că CTPG induceapoptozaîn celulele H22.

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)induce condensarea cromozomială și oprirea ciclului celular în celulele H22

S-a raportat că deteriorarea ADN-ului și oprirea ciclului celular induse de medicamente pot inhiba creșterea și cauza celulelor tumoraleapoptozaîn celulele tumorale [17, 18]. Pentru a detecta morfologia nucleelor ​​din celulele H22 după CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament timp de 24 de ore, celulele H22 au fost colorate cu Hoechst 33,342 și observate folosind microscopie fluorescentă inversată. CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)celulele tratate au prezentat o creștere dependentă de doză a cromatinei puternic condensate a nucleelor, în timp ce celulele netratate au prezentat nuclee colorate omogen (Fig. 3a). Distribuția ciclului celular în celulele H22 a fost analizată în continuare prin colorare PI după tratamentul CTPG timp de 24 de ore. După cum se arată în Fig. 3b, CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratamentul a crescut semnificativ proporția de celule în fază G{0/G{1- și G2/M și a scăzut semnificativ proporția de celule în fază S, sugerând că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a indus oprirea fazei G0/G1 și G2/M în celulele H22. Doza mare de CTPG a crescut semnificativ, de asemenea, proporția de celule sub G1.

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a scăzut potențialul membranei mitocondriale și a crescut eliberarea de citocrom c

calea dependentă de mitocondrii joacă un rol important în inducereaapoptoza[19, 20]. Modificările potenţialului membranei mitocondriale (Δψm) pot fi

monitorizat prin colorarea JC-1 datorită agregatului JC-1 (fluorescență roșie) se poate dezintegra în monomer (fluorescență verde) cu reducerea Δψm [21]. După CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament timp de 24 de ore, celulele H22 au fost colorate cu colorant JC-1. Datele de citometrie în flux au arătat că fluorescența roșie în canalul FL-2 și fluorescența verde în canalul FL{-1 au fost semnificativ scăzute și crescute la CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament. Proporția de PE-FITC plus celule a fost semnificativ crescută (Fig. 4a), sugerând că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a redus Δψm în celulele H22. Acest lucru este în concordanță cu raportul crescut Bax/Bcl-2. În consecință, am observat că eliberarea citocromului c a fost crescută semnificativ la CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament (Fig. 4b). Aceste rezultate au indicat că CTPG ar putea induce parțialapoptozaîn celulele H22 printr-o cale dependentă de mitocondrii (intrinsecă).

CTPG a activat calea caspazei și a prevenit repararea ADN-ului

Apoi, activarea caspazei indusă de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a fost analizată atât prin căi de semnalizare extrinseci cât și intrinseci. După CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament timp de 24 de ore, proteinele totale au fost izolate din celulele H22 și nivelurile de pro- și clivate-caspaze au fost detectate prin Western blot. Comparativ cu martorul netratat sau cu DMSO, CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratamentul a reglat în mod semnificativ nu numai nivelul caspazei scindate-8 (cale extrinsecă), ci și nivelul caspazei scindate-9 (calea intrinsecă) (Fig. 5). Secvenţial, caspaza activată-8 şi -9 au scindat pro-caspaza-3 şi -7 din aval care au fost observate în Fig. 5. Caspaza activată-3 a scindat ADN-ul enzimă de reparare a poli (ADP-riboză) polimerazei (PARP) pentru a preveni repararea ADN-ului și pentru a acumula deteriorarea ADN-ului, așa cum se observă în Fig. 3a. Aceste rezultate au indicat că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)induseapoptozaîn celulele H22 prin căi de semnalizare atât extrinseci cât și intrinseci.

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)suprimă creșterea HCC H22 in vivo și îmbunătățește rata de supraviețuire a șoarecilor tumorali

În cele din urmă, efectul antitumoral al CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)pe HCC a fost evaluat într-un model de șoarece tumoral, care a fost stabilit prin injectarea subcutanată a celulelor H22. După 3 zile de injectare cu celule H22, șoarecii tumorali au fost tratați cu CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)de 8 ori. Greutatea corporală a șoarecilor și dimensiunile tumorii au fost monitorizate la momentele de timp indicate. După cum se arată în Fig. 6a, greutatea corporală a șoarecilor din fiecare grup nu are nicio diferență semnificativă, ceea ce sugerează că dozele selectate de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)nu au efecte secundare evidente. Interesant, creșterea tumorii la șoarecii tratați atât cu 200 mg/kg, cât și cu 400 mg/kg de CTPG a fost inhibată semnificativ (Fig. 6b). Mai mult, cele două doze de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratamentul a îmbunătățit considerabil supraviețuirea șoarecilor tumorali (3/7, 3/7) în comparație cu grupul de control (0/7) la sfârșitul experimentului (Fig. 6b). De asemenea, am constatat că CTPG a îmbunătățit semnificativ proliferarea splenocitelor izolate de la șoarecii masculi Kunming într-o manieră dependentă de doză (Fig. 6c), sugerând că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)are efect imunostimulator.

Discuţie

TCM a fost folosită pentru a trata diferite boli, inclusiv cancere de o lungă istorie. S-a raportat că TCM poate induceapoptozaîn diferite tipuri de celule tumorale prin căi de semnalizare atât extrinseci (mediate de receptorul morții) cât și intrinseci (dependente de mitocondrii) pentru a exercita efecte antitumorale [22–25]. Cele două căi pot activa caspaza-8 și respectiv -9 [24, 26]. Aici, am găsit că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a suprimat semnificativ creșterea celulelor H22 prin inducerea apoptozei și oprirea ciclului celular. Nivelurile de caspază scindată-8 și -9 au fost reglate în mod semnificativ în sus de CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)tratament, sugerând că atât căile de semnalizare extrinseci, cât și intrinseci au fost implicate în inducereaapoptoza. Studiul nostru anterior a arătat că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a indus apoptoza în celulele melanomului B16-F10 printr-o cale dependentă de mitocondrii care a crescut nivelul de caspază scindată-9 dar nu caspaza-8 [16]. CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)ar putea activa căi de semnalizare distincte în diferite tipuri de celule tumorale.

Integritatea membranei mitocondriale este strâns reglementată de membrii familiei de proteine ​​BCL-2, inclusiv Bax și Bcl-2 [27, 28]. Raportul dintre Bax și Bcl-2 joacă un rol critic în mitocondriile dependenteapoptozacalea [29]. În celulele H22 tratate prin CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide), raportul Bax/Bcl-2 a fost reglat semnificativ, ceea ce ar putea cauza reducerea Δψm și eliberarea citocromului c observate în acest studiu. În consecință, pro-caspaza-9 a fost scindată și activată. În cele din urmă, inițiatorii caspazei active-8 și -9 au activat călăul caspazei-3 pentru a scinda PARP pentru a preveni repararea ADN-ului. Luate împreună, aceste rezultate au sugerat că CTPG a indusapoptozaîn celulele H22 prin căi de semnalizare atât extrinseci cât și intrinseci. Într-un model de șoarece tumoral, CTPG a suprimat în mod semnificativ creșterea HCC H22 și a îmbunătățit foarte mult supraviețuirea șoarecilor tumorali. Interesant, CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a promovat în mod dependent de doză proliferarea splenocitelor de la șoarecii Kunming, ceea ce este în concordanță cu studiul nostru anterior [16]. Aceste rezultate au sugerat că CTPG ar putea suprima creșterea H22 HCC la șoareci atât prin efectul antitumoral direct, cât și prin îmbunătățirea imunității indirecte.

Cistanche tululosaproduse

Concluzii

CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)a suprimat creșterea celulelor H22 atât in vitro, cât și in vivo și a indusapoptozaîn celulele H22 prin căi de semnalizare atât extrinseci cât și intrinseci. Aceste date au indicat că CTPG(Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide)ar putea fi un potențial candidat pentru tratamentul HCC.

Abrevieri

Bax: BCL-2-proteină X asociată; Bcl-2: limfom 2 cu celule B; CTPG:Cistanche tubulosa glicozide feniletanoide; HCC: carcinom hepatocelular; HRP: peroxidază de hrean; MTT: 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il)-2, 5-bromură de difeniltetrazoliu; PARP: enzimă de reparare a ADN-ului poli (ADP-riboză)polimerazei; MTC: medicina tradițională chineză; Δψm: potențialul membranei mitocondriale

Finanțarea

Această lucrare a fost susținută de Proiectul de introducere a talentelor la nivel înalt al Regiunii Autonome Xinjiang Uygur către JL, Grantul Fundației Naționale pentru Științe Naturale din China (31460241) pentru JL și Fondul de pornire a doctoratului al Universității Xinjiang (BS160261 la XW și BS150236 la YL).

Disponibilitatea datelor și materialelor

Datele brute pentru acest studiu sunt disponibile la cererea rezonabilă a autorului corespunzător.

Contribuții ale autorilor

JL și JL au conceput experimentele. PY, JL, AA și YY au efectuat experimentele. LX, XW și YL au analizat datele. PY, JL și JL au scris manuscrisul. Toți autorii au contribuit și au aprobat manuscrisul final.

Aprobare etică

Studiul pe animale a fost aprobat de Comitetul pentru Etica Experimentelor pe Animale al Laboratorului Cheie de Resurse Biologice și Inginerie Genetică din Xinjiang, Universitatea Xinjiang

Interese concurente

Autorii declară că nu au interese concurente.

Nota editorului

Springer Nature rămâne neutră în ceea ce privește revendicările jurisdicționale în hărțile publicate și afilierile instituționale.

Detalii autor

¹Xinjiang Cheie Laboratorul de Resurse Biologice și Inginerie Genetică, Colegiul de Științe și Tehnologie a Vieții, Universitatea Xinjiang, 666 Shengli Road, Urumqi, Xinjiang 830046, China.²College of Life Science, Xinjiang Normal University, 102 Xinyi Road, Urumqi 830054, Xinjiang, China.³Spitalul de tumori afiliat al Universității Medicale Xinjiang, Urumqi 830011, China.

Cistanche tululosaproduse

De la: 'Cistanche tubulosa glicozide feniletanoideinduceapoptozaîn celulele de carcinom hepatocelular H22 prin căile de semnalizare atât extrinseci, cât și intrinseci, de Pengfei Yuan1 și colab.

---Yuan și colab. BMC Complementary and Alternative Medicine (2018) 18:275 https://doi.org/10.1186/s12906-018-2201-1

Referințe

1. Global Burden of Disease Cancer Collaboration, Fitzmaurice C, Allen C, Barber RM, Barregard L, Bhutta ZA, Brenner H, Dicker DJ, Chimed-Orchid O, Dandona R și colab. La nivel mondial, regional și național Incidența cancerului, mortalitatea, ani de viață pierduți, ani trăiți cu dizabilități și ani de viață ajustați în funcție de dizabilități pentru 32 de grupuri de cancer, 1990 până în 2015: o analiză sistematică pentru studiul povara globală a bolii. JAMA Oncol. 2017;3:524–48.

2. Chen W, Zheng R, Baade PD, Zhang S, Zeng H, Bray F, Jemal A, Yu XQ, He J. Statistici despre cancer în China, 2015. CA Cancer J Clin. 2016;66:115–32.3. Asociația Europeană pentru Studiul Ficatului, Organizația Europeană pentru Cercetarea și Tratarea Cancerului. Ghidurile de practică clinică EASL-EORTC: managementul carcinomului hepatocelular. JHepatol. 2012;56:908–43.

4. Roayaie S, Obeidat K, Sposito C, Mariani L, Bhoori S, Pellegrinelli A, Labow D, Llovet JM, Schwartz M, Mazzaferro V. Rezecția cancerului hepatocelular Mai puțin sau egal cu 2 cm: rezultate din două centre vestice. hepatologie. 2013;57:1426–35.

5. Ting CT, Cheng YY, Tsai TH. Interacțiunea plante-medicament între formula tradițională hepatoprotectoare și Sorafenib asupra hepatotoxicității, histopatologiei și farmacocineticii la șobolani. Molecule. 2017;22:E1034.

6. Llovet JM, Ricci S, Mazzaferro V, Hilgard P, Gane E, Blanc JF, de Oliveira AC,Santoro A, Raoul JL, Forner A, et al. Sorafenib în carcinomul hepatocelular avansat. N Engl J Med. 2008;359:378–90.

7. Cheng AL, Kang YK, Chen Z, Tsao CJ, Qin S, Kim JS, Luo R, Feng J, Ye S, Yang TS și colab. Eficacitatea și siguranța sorafenibului la pacienții din regiunea Asia-Pacific cu carcinom hepatocelular avansat: un studiu de fază III randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. Lancet Oncol. 2009;10:25–34.

8. Shi Z, Song T, Wan Y, Xie J, Yan Y, Shi K, Du Y, Shang L. O revizuire sistematică și meta-analiză a medicamentelor tradiționale chinezești pentru insecte, chimioterapie combinată pentru terapia carcinomului hepatocelular nechirurgical. Sci Rep.2017;7:4355.

9. Yang Z, Liao X, Lu Y, Xu Q, Tang B, Chen X, Yu Y. Terapia suplimentară cu medicina tradițională chineză îmbunătățește rezultatele și reduce evenimentele adverse în carcinomul hepatocelular: o meta-analiză a studiilor controlate randomizate. Evid Based Complement Alternat Med. 2017;2017:3428253.

10. Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR. Activitate antinociceptiva si antiinflamatorie cauzata de Cistanche deserticola la rozatoare. J Etnofarmacol. 2002;83:177–82.

11. Wu CR, Lin HC, Su MH. Inversarea prin extracte apoase deCistanche tubulosade la deficite comportamentale în modelul de șobolan asemănător bolii Alzheimer: relevanță pentru depunerea de amiloid și funcția neurotransmițătorului central. Complement BMC Altern Med. 2014;14:202.

12. Jiang Y, Tu PF. Analiza constituenților chimici la speciile Cistanche. JChromatogr A. 2009;1216:1970–9.

13. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Oligoglicozide feniletanoide acilate cu activitate hepatoprotectoare din planta deșertuluiCistanche tubulosa.Bioorg Med Chim. 2010; 18:1882–90.

14. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF.Glicozide feniletanoidecu activitati antiinflamatorii din tulpinile de Cistanche deserticola cultivate in desertul Tarim. Fitoterapia.2013;89:167–74.

15. Deng M, Zhao J, Tu P, Jiang Y, Li Z, Wang Y. Echinacozidul reactivează celulele neuronale SHSY5Y din induse de TNFapoptoza. Eur J Pharmacol. 2004;505:11–8.

16. Li J, Li J, Aipire A, Gao L, Huo S, Luo J, Zhang F.Glicozide feniletanoidedinCistanche tubulosainhibă creșterea celulelor B16-F10 atât in vitro, cât și in vivo prin inducereaapoptozaprintr-o cale dependentă de mitocondrii. J Cancer. 2016;7:1877–87.

17. Shang HS, Chang CH, Chou YR, Yeh MY, Au MK, Lu HF, Chu YL, Chou HM, Chou HC, Shih YL și colab. Curcumina provoacă leziuni ale ADN-ului și afectează expresia proteinelor asociate în celulele umane de cancer de col uterin HeLa. Oncol Rep. 2016;36:2207–15.

18. Wang R, Zhang Q, Peng X, Zhou C, Zhong Y, Chen X, Qiu Y, Jin M, Gong M, Kong D. Stellettin B induce arestarea G1,apoptozași autofagie în celulele umane A549 de cancer pulmonar fără celule mici prin blocarea căii PI3K/Akt/mTOR. Sci Rep. 2016;6:27071.

19. Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Stresul oxidativ: căile dependente de mitocondrii și independente de mitocondrii aleapoptoza. Arch Toxicol. 2013; 87:1157–80.

20. Zhang YS, Shen Q, Li J. Medicina tradițională chineză care vizează mecanismele apoptotice pentru terapia cancerului esofagian. Acta Pharmacol Sin. 2016; 37:295–302.

21. Chong ZZ, Lin SH, Li F, Maiese K. Inhibitorul de sirtuină nicotinamida îmbunătățește supraviețuirea celulelor neuronale în timpul leziunii anoxice acute prin AKT, BAD, PARP și căile „anti-apoptotice” asociate mitocondriale. Curr Neurovasc Res. 2005;2:271–85.

22. Hu B, Wang SS, Du Q. Medicina tradițională chineză pentru prevenirea și tratamentul hepatocarcinomului: de la bancă la pat. Lumea J Hepatol. 2015;7:1209–32.

23. Hu B, An HM, Wang SS, Chen JJ, Xu L. Efectele preventive și terapeutice ale compușilor din plante chinezești împotriva carcinomului hepatocelular. Molecule. 2016;21:142.

24. Xu H, Zhao X, Liu X, Xu P, Zhang K, Lin X. Efectele antitumorale ale medicinei tradiționale chineze care vizează calea apoptotică celulară. Drug Des Devel Ther. 2015;9:2735–44.

25. Li-Weber M. Targetingapoptozacăi în cancer de către medicina chineză. Cancer Lett. 2013;332:304–12.

26. Xu G, Shi Y.Apoptozacăile de semnalizare și homeostazia limfocitelor. Cell Res. 2007;17:759–71.

27. Tait SW, Green DR. Mitocondriile și moartea celulară: permeabilizarea membranei exterioare și nu numai. Nat Rev Mol Cell Biol. 2010;11:621–32.

28. Galluzzi L, Kepp O, Kroemer G. Mitocondria: maeștri regulatori ai semnalizării pericolelor. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012;13:780–8.

29. Martinou JC, Youle RJ. Mitocondriile înapoptoza: Bcl-2 membri ai familiei și dinamica mitocondrială. Dev Cell. 2011;21:92–101.