Isoastilbina inhibă apoptoza neuronală și stresul oxidativ în modelul Arat de leziuni de ischemie-reperfuzie în creier: implicarea SIRT1/3/6

Pentru mai multe informații Emailtina.xiang@wecistanche.com

Abstract

Fundal.S-a demonstrat că are izoastilbină (IAB).antioxidantși funcții anti-apoptotice. Un studiu recent a constatat că IAB se poate reduceoxidativstres în boala Alzheimer. Cu toate acestea, rămâne necunoscut dacă funcția antioxidantă a IAB este și protectoare în alte boli ale creierului.
Obiective.Pentru a investiga rolurile și mecanismele de bază ale IAB în reperfuzia de ocluzie a arterei cerebrale medii (MCAO/R) la șobolani.
Materiale și metode.Șobolanii masculi Wistar au fost împărțiți aleatoriu în 5 grupuri: grup simulat, grup MCAO/R și 3 grupuri MCAO/R cărora li sa administrat IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg sau 80 mg/kg) o dată pe zi timp de 3 zile. Dimensiunea infarctului, Scorul de severitate neurologică modificat (mNSS),oxidativstresmarkeri și markeri de apoptoză neuronală au fost utilizați pentru a testa funcția IAB.
Rezultate.Comparativ cu grupul MCAO/R, administrarea IAB a redus dimensiunea infarctului și scorurile mNSS la șobolanii MCAO/R. De asemenea, izoastilbina a scăzut nivelul de malondialdehidă (MDA) și a îmbunătățit activitatea catalazei (CAT), superoxid dismutază (SOD) și glutation peroxidază (GSH-PX). Tratamentul cu izoastilbină a atenuat neuronal indus de MCAO/Rapoptozacomparativ cu grupul MCAO/R, așa cum este indicat de rezultatele testelor X-dUTP nick-end (TUNEL) mediate de deoxinucleotidă transferază terminală și Western blot. Isoastilbin a inversat, de asemenea, reglarea în jos indusă de MCAO/R a expresiei proteinei SIRT1/3/6.
Concluzii.Aceste observații sugerează că IAB protejează împotrivaoxidativstresul și apoptoza neuronală la șobolani în urma leziunilor cerebrale cu ischemie-reperfuzie (I/R) prin reglarea în sus a SIRT1/3/6, indicând faptul că IAB ar putea fi un agent terapeutic promițător pentru leziunile cerebrale I/R.
Cuvinte cheie:apoptoză, stres oxidativ, izoastilbină, ischemie cerebrală focală-leziune de reperfuzie

fundal

Accidentul vascular cerebral ischemic și hemoragic se numără printre principalele cauze de dizabilitate și deces în întreaga lume.1,2 Accidentul vascular cerebral ischemic este cauzat de obstrucțiile vaselor de sânge, punând astfel organele țintă la risc de moarte celulară. restabilirea aportului de sânge, terapia trombolitică poate crește dimensiunea infarctului și poate agrava leziunea de ischemie-reperfuzie (I/R) în creier.1,4 Prin urmare, există o nevoie urgentă de a dezvolta noi medicamente pentru tratamentul leziunilor cerebrale I/R.

Leziunea de ischemie-reperfuzie la nivelul creierului implică o fiziopatologie complexă, inclusiv aparițiaoxidativstres, apoptoza și epuizarea adenozin trifosfat (ATP), toate acestea pot duce la leziuni neuronale.5 Speciile reactive de oxigen (ROS) sunt produse în timpul ischemiei, ducând la apariția neuronelor.apoptozași disfuncția neurologică.6 Mai exact, NADPH oxidazele generează ROS în timpul leziunii I/R, ceea ce provoacăoxidativstres. Acest stres este marcat de creșterea peroxidării lipidelor, scăderea activității catalazei (CAT) și superoxid dismutază (SOD) și a nivelului scăzut de glutation (GSH).7–11 Niveluri ridicate de ROS șioxidativstresva declanșa, la rândul său, moartea celulelor prin calea apoptotică mitocondrială în urma leziunii cerebrale I/R.12 Porii de tranziție ai permeabilității mitocondriale se pot deschide ca o consecință a acumulării superflue de ROS, având ca rezultat un potențial transmembranar mitocondrial mai mic și o producție crescută de activatori ai caspazei, cum ar fi ca citocrom c, inițiind în cele din urmă cascada caspazei și ducând la moartea celulelor.12 Geng și colab. a propus că apoptoza celulelor neuronale este mediată cel puțin parțial de calea apoptozei mitocondriale în leziunea I/R cerebrală.13 În consecință, inhibarea sau inversarea stresului oxidativ și apoptoza neuronală sunt noi metode promițătoare pentru a atenua leziunea I/R cerebrală.

Pentru a explora mecanismul prin care IAB atenuează daunele induse de I/R, ne-am concentrat pe cascada de semnalizare SIRT. Studii recente au arătat un rol protector al SIRT1/3/6 în diferite boli, inclusiv degenerarea neuronală a creierului, inflamarea vaselor de sânge și acumularea de grăsime. Într-adevăr, am descoperit că tratamentul cu IAB crește nivelul de expresie SIRT în timpul leziunii I/R, indicând faptul că IAB poate proteja împotriva celulelor.apoptozaprin suprareglarea expresiei SIRT. Luate împreună, rezultatele noastre sugerează că IAB este un tratament potențial util pentru leziunile clinice I/R cerebrale.

Obiective

Scopul nostru general a fost să examinăm efectele și mecanismele de bază ale IAB în leziunile I/R utilizând modelul animal MCAO/R.

Materiale și metode

animale

Șobolanii masculi Wistar au fost achiziționați de la Shanghai Laboratory Animal Company (Shanghai, China). Șobolanii în vârstă de 60–90 de zile cu greutate corporală normală (200–250 g) au fost hrăniți ad libitum cu hrană și apă și menținuți într-un mediu consistent (25 ± 2 grade, 40 ± 10 la sută umiditate relativă și ciclu lumină/întuneric de 12 ore) . Animalele au fost manipulate conform instrucțiunilor pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator ale Colegiului Jiamusi, Universitatea de Medicină Tradițională Chineză Heilongjiang, China. Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor al Colegiului Jiamusi, Universitatea de Medicină Chineză din Heilongjiang a aprobat procedurile pentru animale (nr. de aprobare 20190815).

Stabilirea leziunilor MCAO/R și tratament IAB

Toxicitatea IAB a fost determinată așa cum a fost descris anterior.15 Isoastilbin (Chengdu Purechem-Standard Co., Ltd., Chengdu, China) a fost diluat la concentrații finale de 20 mg/kg, 40 mg/kg și 80 mg/kg în fosfat. -solutie tamponata (PBS). Animalele au fost randomizate în 5 grupuri: 1. simulare; 2. MCAO/R; 3. MCAO/R urmat de 20 mg/kg IAB; 4. MCAO/R urmat de 40 mg/kg IAB; și 5. MCAO/R urmat de 80 mg/kg IAB.

Șobolanii au fost anesteziați utilizând injecție intraperitoneală (ip.) de 50 mg/kg pentobarbital de sodiu (Sinopharm Chemical Reagent, Beijing, China). Pentru a introduce MCAO/R, am expus arterele carotide, și anume artera carotidă externă (ECA), artera carotidă comună dreaptă (CCA) și artera carotidă internă (ICA). ECA și CCA au fost ligate proximal. ICA a fost ligată folosind o sutură monofilament de 0,285 mm, introdusă în lumenul ICA timp de aproximativ 18 mm prin ciotul ECA pentru a obtura artera cerebrală medie (MCA). Un laserDoppler (USCN KIT INC., Wuhan, China) a fost folosit pentru a confirma că fluxul sanguin a fost redus la mai puțin de 20% din nivelul normal. Grupul de simulare a suferit aceeași operație; cu toate acestea, arterele nu au fost ligaturate. După 2 ore de ocluzie, arterele ligatate au fost reperfuzate și șobolanii au fost apoi gavați cu IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg sau 80 mg/kg) sau PBS zilnic timp de 3 zile consecutive. În cele din urmă, la 72 de ore după MCAO/R, a fost evaluată capacitatea neurologică a șobolanilor.

Evaluarea volumului infarctului cerebral de șobolan

După tratamentul cu IAB, creierele au fost cântărite rapid pentru a-și măsura greutatea umedă. Ulterior, creierul a fost deshidratat la 100 de grade timp de 24 de ore pentru a-și evalua greutatea uscată. Concentrația de apă din creier a fost calculată ca: ((greutate umedă ‒ greutate uscată)/greutate umedă) × 100 la sută.

Scorul de severitate neurologică modificat (mNSS)

Funcțiile neurologice senzoriale, motorii, de echilibru și reflexe au fost evaluate la 72 de ore după intervenția chirurgicală MCAO folosind mNSS.17 Severitatea deficitelor neurologice a fost clasată pe o scară de la 0 la 10, cu un scor mai mare indicând leziuni mai severe ale sistem nervos.

Măsurarea superoxid dismutazei (SOD), malondialdehidei (MDA), catalazei (CAT) și glutation peroxidazei (GSH-PX)

După tratamentul cu IAB, conținutul de proteine ​​a fost determinat din țesuturile creierului. Concentrația proteică a omogenatelor corticale a fost determinată folosind kituri BCA (Beyotime, Shanghai, China). SOD, MDA, CAT și GSH-PX au fost detectate folosind kiturile corespunzătoare (nr. catalog A003-1, A001-3, A007 și A005; Institutul de Bioinginerie Nanjing Jiancheng, Nanjing, China). Pe scurt, a fost colectat supernatantul omogenatului cortical. Pentru SOD, probele au fost incubate cu soluție de lucru WST-8/enzimă la 37 de grade timp de 30 de minute. Absorbția a fost măsurată la o lungime de undă de 450 nm. O unitate de activitate enzimatică (U) SOD a fost definită ca cantitatea de probă necesară pentru a obține o rată de inhibare de 50% a colorantului formazan WST-8. Pentru MDA, probele au fost amestecate cu o soluție de lucru și apoi încălzite la 100 de grade timp de 15 minute. Absorbția supernatantului a fost măsurată la o lungime de undă de 532 nm. Pentru CAT, probele au fost amestecate cu tampon de detecție CAT și soluție de peroxid de hidrogen și apoi incubate la 25 de grade timp de 5 minute. Absorbția a fost detectată la o lungime de undă de 520 nm. Pentru GSH-PX, probele au fost amestecate cu GSH la 37 de grade timp de 5 minute. Absorbția supernatantului a fost măsurată la o lungime de undă de 412 nm. O unitate (U) de activitate enzimatică a fost definită ca cantitatea de GSH-PX în 1 mg de proteină care a catalizat consumul de 1 μmol/L GSH în timp ce deduce efectul reacției non-enzimatice.

Colorare terminală de deoxinucleotidil transferază dUTP nick end labeling (TUNEL).

Țesuturile cerebrale ale emisferei ipsilaterale au fost izolate, fixate în paraformaldehidă 4% și încorporate în parafină. Țesuturile au fost apoi tăiate în felii de 5-μm și antigenul a fost expus după 10 minute de încălzire cu microunde în tampon citrat. Apoptoza neuronală a fost evaluată folosind testul TUNEL (In Situ Cell Death Detection Kit; Roche, Penzberg, Germania), conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, feliile de creier au fost plasate în paraformaldehidă 4% rece ca gheață timp de 30 de minute și apoi au fost incubate la întuneric cu amestecul de reacție TUNEL la 37 de grade timp de 1 oră. Ulterior, nucleele au fost colorate cu 6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma-Aldrich). Probele au fost fotografiate și indicele de apoptoză a fost calculat ca numărul de celule pozitive TUNEL împărțit la numărul total de celule.

Western blot

Țesuturile creierului de șobolan au fost lizate utilizând tampon pentru testul de radio-imunoprecipitare (RIPA) (Beyotime, Dalian, China). Proteinele au fost supuse electroforezei pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă cu 12-15% (SDS-PAGE) și apoi transferate pe membrane de fluorură de poliviniliden (PVDF) (Millipore, Billerica, SUA). Membranele au fost blocate folosind lapte fără grăsimi 5% și incubate cu anticorpi primari la 4 grade peste noapte. Anticorpii secundari conjugați cu peroxidază de hrean (HRP) au fost ulterior incubați la temperatura camerei timp de 2 ore. Semnale specifice ale proteinelor marcate au fost detectate folosind un sistem de chemiluminiscență. -actina a fost utilizată pentru a normaliza nivelurile de expresie a proteinei Bcl-2, Bax și Sirtuin (SIRT1/3/6). Imaginile au fost analizate folosind software-ul ImageJ.

analize statistice

Datele sunt prezentate ca medie ± abaterea standard (SD) de la 3 experimente independente. S-a confirmat că datele din fiecare grup urmează o distribuție normală folosind testul Shapiro-Wilk. Diferențele dintre grupuri au fost analizate utilizând analiza unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul post-hoc al lui Tukey folosind software-ul Prism v. 8 (GraphPad Software, San Diego, SUA). O valoare a p< 0.05 indicated="" statistical="" significance.="" a post="" hoc="" power="" analysis="" was="" performed="" using="" g*power="" 3.1.9.7="" software="" (heinrich="" heine="" university,="" düsseldorf,="">

Rezultate

Isoastilbina protejează neuronii de leziunile induse de MCAO/R

Pentru a explora dacă IAB a protejat neuronii supuși I/R cerebrale, au fost analizate concentrația de apă din creier și volumul infarctului. La animalele martor, nu a existat infarct și concentrația de apă a fost relativ scăzută (Fig. 1B, C; grup simulat). După intervenția chirurgicală MCAO/R, am observat creșteri semnificative ale dimensiunii infarctului și ale concentrației de apă (Fig. 1B, C). Infarctul și edemul ischemic indică faptul că abordarea noastră a generat cu succes modelul I/R la șobolani. Interesant este că atunci când am aplicat diferite concentrații de IAB (20 mg/kg, 40 mg/kg și 80 mg/kg) imediat după leziune, am observat recuperarea dependentă de doză a infarctului și a edemului cerebral ischemic (Fig. 1B, C). Acest rezultat sugerează că IAB protejează împotriva leziunilor cerebrale induse de ischemie. Apoi, am examinat celulaapoptozafolosind testul mNSS. După cum se arată în Fig. 1D, șobolanii operați de simulare nu au prezentat deficite neurologice evidente, în timp ce șobolanii MCAO/R au prezentat scoruri mNSS semnificativ crescute. În conformitate cu modificările morfologice prezentate în Fig. 1B și Fig. 1C, tratamentul cu IAB a scăzut semnificativ scorul mNSS al șobolanilor MCAO/R (Fig. 1D). Luate împreună, aceste rezultate oferă dovezi că IAB are o funcție neuroprotectoare într-un model de rozătoare Vivo de leziuni cerebrale I/R. Având în vedere că o concentrație mai mare de IAB a avut efecte de protecție mai bune fără efecte secundare evidente, am folosit 80 mg/kg pentru următoarele experimente.

Isoastilbina atenuează stresul oxidativ la șobolanii MCAO/R

Pentru a evalua influența IAB asuprastresul oxidativ, nivelurile GHS-PX, MDA, SOD și CAT au fost evaluate după tratamentul cu IAB. Datorită creșterii stresului oxidativ, șobolanii supuși la MCAO/R au avut niveluri mai mari de MDA în comparație cu șobolanii simulați. Acest efect a fost atenuat de tratamentul cu IAB (Fig. 2A). În plus, nivelurile CAT, SOD și GHS-PX au scăzut la șobolanii MCAO/R în comparație cu șobolanii simulați (Fig. 2B, D). Tratamentul cu IAB a crescut nivelurile de CAT, SOD și GHS-PX la șobolanii MCAO/R (Fig. 2B, D), sugerând că IAB a protejat împotriva leziunilor cerebrale I/R prin atenuarea stresului oxidativ.

Izoastilbina inhibă apoptoza neuronală la șobolanii MCAO/R

Apoi, am folosit testul TUNEL pentru a evalua neuronaleapoptozadupă leziune cerebrală I/R. Așa cum este descris în Fig. 3A, a existat un număr crescut de celule TUNEL-pozitive la șobolanii MCAO/R, care a fost redus prin tratamentul IAB (Fig. 3A). Pentru a explora mecanismele de bază ale protecției IAB, am examinat expresia proteinelor de apoptoză Bax și Bcl-2 folosind Western blot. La șobolanii supuși la MCAO/R, expresia lui Bax (marker pro-apoptotic) a fost reglată în sus, în timp ce cea a Bcl-2 (marker anti-apoptotic) a fost reglată în jos, în comparație cu grupul simulat (Fig. 3B, C). ). Cu toate acestea, tratamentul cu IAB a prevenit modificările induse de MCAO/R (Fig. 3B, C). Aceste rezultate sugerează că IAB a inhibat apoptoza neuronală la șobolanii MCAO/R.

Isoastilbin reglează expresia SIRT

Apoi, am căutat să examinăm modul în care IAB protejează neuronii destresul oxidativ. S-a descoperit că SIRT, o deacetilază dependentă de NAD plus, localizată în principal în mitocondrii, este asociată cu supraviețuirea și apoptoza celulară, metabolismul celular și răspunsul la stres. SIRT poate activa semnale și căi mitocondriale pentru a promova proliferarea mitocondriilor și generarea de ATP. De asemenea, participă la inflamație, într-un mod în care reducerea SIRT duce la creșterea factorilor de inflamație cronică, cum ar fi activitatea NFκB și RelA/p65.18–20 Interesant, mai multe studii au descoperit că SIRT exercită un efect protector neuronal și atenuează oxidarea. stresul în patofiziologia leziunii cerebrale I/R.21 Aici, am investigat expresia cerebrală a SIRT1/3/6 la șobolani supuși la MCAO/R. Am descoperit că leziunea MCAO/R a scăzut nivelurile de proteine ​​ale SIRT1/3/6, în timp ce tratamentul cu IAB a atenuat aceste efecte (Fig. 4A-D). Aceste date sugerează că IAB ar putea fi protector la șobolanii MCAO/R prin reglarea pozitivă a expresiei SIRT1/3/6 în protecția împotriva stresului oxidativ.

Discuţie

Concentrația ROS crește până la un vârf, ceea ce poate induce apoptoză sau necroză celulară.25–28 Există câțiva markeri bine stabiliți ai stresului oxidativ. De exemplu, MDA, un compus citotoxic produs prin peroxidarea lipidelor,29 este crescut în cardiomiocitele de șobolan după deteriorarea I/R.30 Enzimele antioxidante SOD, CAT și GHS-PX joacă un rol important în eliminarea superoxizilor și prevenirea daunelor oxidative.31, 32 Mai mult, modificările activității acestor enzime sunt, de asemenea, legate de stresul oxidativ. Atenuarea stresului oxidativ este o modalitate potențială de a proteja țesuturile de leziuni I/R.

Un studiu recent a demonstrat că efectul neuroprotector al IAB s-ar putea datora modulării stresului oxidativ. Mai exact, studiul a constatat că IAB a inhibat generarea de ROS și a indus SOD și GSH-PX pentru a ameliora daune oxidative într-un model AD de șoarece. În studiul de față, am demonstrat că IAB atenuează cu succes leziunea I/R cerebrală prin reducerea volumului infarctului și a deficitelor neurologice după leziunea MCAO/R. Pentru a testa dacă efectele IAB se datorează atenuării speciilor ROS, am măsurat mai mulți markeri ai stresului oxidativ. S-a constatat că tratamentul cu izoastilbină după MCAO/R scade nivelul de MDA, dar crește activitatea CAT, SOD și GSH-PX. Aceste rezultate sugerează că mecanismul de bază al neuroprotecției mediate de IAB împotriva leziunii I/R este prin reducerea stresului oxidativ.

Într-adevăr, I/R cerebral este capabil să induce apoptoza neuronilor.33,34 Activarea proteinelor pro-apoptotice (Bax și Bak) și inactivarea paralelă a proteinelor anti-apoptotice (cum ar fi Bcl-2) au avut loc în timpul cerebral. leziune I/R. Atât Bcl-2, cât și Bax se găsesc în partea exterioară a membranei mitocondriale și participă la modularea apoptozei celulare.35–37 Studiile anterioare au arătat că supraexpresia Bcl{-2 blochează moartea neuronală in vitro și in vivo.38Erfani et al. a constatat că raportul Bax/Bcl-2 a crescut în timpul leziunii cerebrale I/R, contribuind la apoptoza neuronală.39 Mai mult, reglarea în sus a Bax și reglarea în jos a Bcl-2 au fost găsite la creierele de șoareci supuse la MCAO/R. 40 În plus, s-a descoperit că IAB modulează nivelurile de exprimare a proteinei atât ale Bcl-2 cât și ale Bax pentru a îmbunătăți sistemul redox la șoarecii cu AD, indicând rolul anti-apoptotic al IAB în această afecțiune.15 În prezent Studiul, am arătat că administrarea de IAB a redus apoptoza neuronală indusă de I/R in vivo prin reglarea în jos a Bax și reglarea în sus a Bcl-2. Aceste constatări implică faptul că capacitatea neuroprotectoare a IAB este dependentă de activitatea sa anti-apoptotică la șobolani. Cu toate acestea, I/R poate duce, de asemenea, la necroză, care nu este mediată de stresul oxidativ.25–28 Este de mare interes să se examineze dacă IAB poate funcționa și prin inhibarea necrozei pentru a atenua leziunea I/R.

Pentru a examina mecanismul prin care IAB atenuează stresul oxidativ, ne-am concentrat pe proteinele SIRT. Un raport anterior a constatat că supraexprimarea SIRT3 a inhibat fisiunea mitocondrială pentru a proteja împotriva leziunilor cerebrale I/R. Mai mult, SIRT6 poate proteja creierul împotriva leziunilor I/R prin suprimarea stresului oxidativ.2 Aici, am descoperit că SIRT1/3/ 6 a fost redus în mod semnificativ la șobolanii MCAO/R, în timp ce administrarea de IAB a crescut expresia SIRTl/3/6. Din câte cunoștințele noastre, acest studiu este primul care demonstrează că IAB poate crește expresia proteinei SIRT1/3/6 pentru a atenua stresul oxidativ și apoptoza neuronală indusă de leziuni cerebrale I/R.

Limitări

Există multe căi diferite de protecție împotriva stresului oxidativ. Aici, am demonstrat că mecanismul de semnalizare al protecției IAB este prin SIRT 1/3/6. Cu toate acestea, alte mecanisme împotriva stresului oxidativ sau a leziunii cerebrale I/R ar trebui elucidate în continuare. În timpul leziunii I/R, sunt implicate atât apoptoza, cât și necroza; cu toate acestea, ne-am concentrat doar pe apoptoză. Astfel, vor fi necesare cercetări suplimentare asupra rolului IAB în necroză pentru a explica pe deplin funcția de protecție a IAB în timpul leziunii I/R.

Concluzii

Aici, am demonstrat că IAB poate atenua stresul oxidativ și apoptoza neuronilor la șobolanii supuși I/R cerebrale. Mai mult, stresul antioxidant și funcțiile anti-apoptotice ale IAB ar putea apărea prin reglarea expresiei SIRT1/3/6. Luate împreună, datele noastre sugerează că IAB este un tratament candidat pentru leziuni cerebrale I/R.

ORCID ids Lifeng An  https://orcid.org/0000-0002-4835-1817 Dandan Zhu  https://orcid.org/0000-0001-9119-9956 Xin Zhang  https://orcid.org/0000-0002-9496-1691 Jingwen Huang  https://orcid.org/0000-0001-6449-5362 Guangbao Lu https://orcid.org/0000-0002-2465-8996

Lifeng An1,B,D, Dandan Zhu2,B, Xin Zhang2,C, Jingwen Huang1,C, Guangbao Lu1,A,F

1 Colegiul Jiamusi, Universitatea de Medicină Chineză Heilongjiang, China

2 Școala absolventă, Universitatea de Medicină Chineză Heilongjiang, Jiamusi, China

A – conceptul de cercetare și design; B – colectarea și/sau asamblarea datelor; C – analiza și interpretarea datelor;

D – redactarea articolului; E – revizuirea critică a articolului; F – aprobarea finală a articolului

Referințe

1. Rossi DJ, Brady JD, Mohr C. Metabolismul și semnalizarea astrocitelor în timpul ischemiei cerebrale. Nat Neurosci. 2007;10(11):1377–1386. doi:10.1038/ nn2004
2. Ribeiro PW, Cola PC, Gatto AR, et al. Relația dintre disfagie, scorul National Institutes of Health Stroke Scale și predictorii pneumoniei după accidentul vascular cerebral ischemic. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2015; 24(9):2088–2094. doi:10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2015.05.009
3. Hu X, De Silva TM, Chen J, Faraci FM. Boala vasculară cerebrală și leziunea neurovasculară în accidentul vascular cerebral ischemic. Circ Res. 2017;120(3):449–471. doi:10.1161/circresaha.116.308427
4. Tabassum R, Vaibhav K, Shrivastava P, et al. Alcoolul perilil îmbunătățește rezultatele funcționale și histologice împotriva leziunilor de ischemie-reperfuzie prin atenuarea stresului oxidativ și reprimarea COX-2, NOS{-2 și NF-kB la șobolanii cu ocluzie a arterei cerebrale medii. Eur J Pharmacol. 2015;747:190–199. doi:10.1016/j.ejphar.2014.09.015
5. Woodruff TM, Thundyil J, Tang SC, Sobey CG, Taylor SM, Arumugam TV. Fiziopatologia, tratamentul și modelele animale și celulare ale accidentului vascular cerebral ischemic uman. Mol Neurodegener. 2011;6(1):11. doi:10.1186/1750- 1326-6-11
6. Gonzalez-Rodriguez PJ, Xiong F, Li Y, Zhou J, Zhang L. Hipoxia fetală crește vulnerabilitatea leziunii cerebrale hipoxic-ischemice la șobolanii neonatali: Rolul receptorilor de glucocorticoizi. Neurobiol Dis. 2014;65:172–179. doi:10.1016/j.nbd.2014.01.020
7. Rodrigo R, Fernández-Gajardo R, Gutiérrez R, et al. Stresul oxidativ și fiziopatologia accidentului vascular cerebral ischemic: noi oportunități terapeutice. SNC Neurol Disord Drug Targets.2013;12(5):698–714. doi:10.2174/ 1871527311312050015
8. Zhang C, Ling CL, Pang L, et al. Livrarea directă a medicamentelor macromoleculare în zona de ischemie cerebrală folosind nanoparticule mediate de neutrofile. Teranostice. 2017;7(13):3260–3275. doi:10.7150/thno.19979
9. Kahles T, Luedike P, Endres M, et al. NADPH oxidaza joacă un rol central în deteriorarea barierei hematoencefalice în accidentul vascular cerebral experimental. Accident vascular cerebral. 2007;38(11):3000–3006. doi:10.1161/strokeaha.107.489765
10. Chen H, Song YS, Chan PH. Inhibarea NADPH oxidazei este neuroprotectoare după ischemie-reperfuzie. J Cereb Blood Flow Metab. 2009; 29(7):1262–1272. doi:10.1038/jcbfm.2009.47
11. Kapoor M, Sharma N, Sandhir R, Nehru B. Efectul apocininei inhibitorului de oxidază NADPH asupra leziunii hipocampului ischemie-reperfuzie în creierul șobolanului. Biomed Pharmacother. 2018;97:458–472. doi:10.1016/j. biopha.2017.10.123
12. Yu S, Wang C, Cheng Q și colab. O componentă activă a polipeptidelor Achyranthes bidentata oferă neuroprotecție prin inhibarea căii apoptotice dependente de mitocondrii în neuronii de cultură și în modelele animale de ischemie cerebrală. Plus unu. 2014; 9(10):e109923. doi:10.1371/journal.pone.0109923
13. Geng HX, Li RP, Li YG și colab. 14,15-EET suprimă apoptoza neuronală în ischemie-reperfuzie prin calea mitocondrială. Neurochem Res.2017;42(10):2841–2849. doi:10.1007/s11064-017-2297-6
14. Du Q, Li L, Jerz G. Purificarea astilbinei și izoastilbinei în extractul de rizom smilax glabra prin cromatografie în contracurent de mare viteză. J Chromatogr A. 2005;1077(1):98–101. doi:10.1016/j.chroma. 2005.04.072
15. Yu H, Yuan B, Chu Q, Wang C, Bi H. Rolurile protectoare ale izoastilbinei împotriva bolii Alzheimer prin intermediul antioxidării și anti-apoptozei mediate de Nrf2-. Int J Mol Med.2019;43(3):1406–1416. doi:10.3892/ijmm. 2019.4058
16. Zhou X, Xu Q, Li JX, Chen T. Revizuirea structurală a două glicozide de flavanonol din Smilax glabra. Planta Med. 2009;75(6):654–655. doi:10. 1055/s-0029-1185360
17. Morimoto J, Yasuhara T, Kameda M, et al. Stimularea electrică îmbunătățește capacitatea de migrare a celulelor stromale de măduvă osoasă transplantate într-un model de accident vascular cerebral ischemic de rozătoare. Cell Physiol Biochim. 2018; 46(1):57–68. doi:10.1159/000488409
18. Torrens-Mas M, Pons DG, Sastre-Serra J, Oliver J, Roca P. Silenția SIRT3 sensibilizează celulele canceroase de sân la tratamente citotoxice printr-o creștere a producției de ROS. J Cell Biochim. 2017;118(2):397–406. doi:10.1002/jcb.25653
19. Nassir F, Arndt JJ, Johnson SA, Ibdah JA. Reglarea proteinei trifuncționale mitocondriale modulează boala ficatului gras nealcoolic la șoareci. J Lipid Res. 2018;59(6):967–973. doi:10.1194/jlr.M080952
20. Torrens-Mas M, Hernández-López R, Oliver J, Roca P, Sastre-Serra J. Silenciarea Sirtuin 3 îmbunătățește eficacitatea oxaliplatinei prin acetilarea MnSOD în cancerul de colon. J Cell Physiol. 2018;233(8):6067–6076. doi:10.1002/jcp.26443
21. Hernández-Jiménez M, Hurtado O, Cuartero MI, et al. Regulatorul de informare silențios 1 protejează creierul împotriva leziunilor ischemice cerebrale. Accident vascular cerebral. 2013;44(8):2333–2337. doi:10.1161/strokeaha.113.001715
22. Chen GY, Nuñez G. Inflamație sterilă: detectarea și reacția la deteriorare. Nat Rev Immunol. 2010;10(12):826–837. doi:10.1038/nri2873
23. Eltzschig HK, Eckle T. Ischemia și reperfuzia: de la mecanism la translație. Nat Med. 2011;17(11):1391–1401. doi:10.1038/nm.2507
24. Dziedzic T. Inflamația sistemică ca țintă terapeutică în AVC ischemic acut. Expert Rev Neurother.2015;15(5):523–531. doi:10.1586/ 14737175.2015.1035712
25. Yemisci M, Gursoy-Ozdemir Y, Vural A, Can A, Topalkara K, Dalkara T. Contracția pericitului indusă de stresul oxidativ-nitrativ afectează refluxul capilar în ciuda deschiderii cu succes a unei artere cerebrale ocluse. Nat Med. 2009;15(9):1031–1037. doi:10.1038/nm.2022
26. Chen H, Yoshioka H, ​​Kim GS și colab. Stresul oxidativ în afectarea ischemică a creierului: mecanisme de moarte celulară și potențiale ținte moleculare pentru neuroprotecție. Semnal antioxid Redox. 2011;14(8):1505–1517. doi:10.1089/ars.2010.3576
27. Olmez I, Ozyurt H. Specii reactive de oxigen și boala cerebrovasculară ischemică. Neurochem Int. 2012;60(2):208–212. doi:10.1016/j. neuint.2011.11.009
28. Guo J, Cheng C, Chen CS, et al. Supraexprimarea Fibulinei-5 atenuează leziunile de ischemie/reperfuzie după ocluzia arterei cerebrale medii la șobolani. Mol Neurobiol. 2016;53(5):3154–3167. doi:10.1007/s12035- 015-9222-2
29. Qiang M, Xu Y, Lu Y și colab. Autofluorescența proteinelor modificate cu MDA ca sondă in vitro și in vivo în analiza stresului oxidativ. Celula proteică. 2014;5(6):484–487. doi:10.1007/s13238-014-0052-1
30. Hou S, Zhao MM, Shen PP și colab. Efectul neuroprotector al acizilor salvianolici împotriva ischemiei cerebrale/leziunilor de reperfuzie. Int J Mol Sci. 2016;17(7). doi:10.3390/ijms17071190
31. Adibhatla RM, Hatcher JF. Oxidarea și peroxidarea lipidelor în sănătatea și boala SNC: de la mecanisme moleculare la oportunități terapeutice. Semnal antioxid Redox. 2010;12(1):125–169. doi:10.1089/ ars.2009.2668
32. Staroń A, Mąkosa G, Koter-Michalak M. Stresul oxidativ în eritrocite de la pacienții cu artrită reumatoidă. Rheumatol Int. 2012; 32(2):331–334. doi:10.1007/s00296-010-1611-2
33. Aşcı S, Demirci S, Aşcı H, Doğuç DK, Onaran İ. Efectele neuroprotectoare ale pregabalinei asupra ischemiei și reperfuziei cerebrale. Balkan Med J. 2016;33(2):221–227. doi:10.5152/balkanmedj.2015.15742
34. Tao T, Li CL, Yang WC și colab. Efectele protectoare ale propofolului împotriva întregii leziuni ale ischemiei/reperfuziei cerebrale la șobolani prin inhibarea căii factorului care induce apoptoza. Brain Res.2016;1644: 9–14. doi:10.1016/j.brainres.2016.05.006
35. Martinou JC, Youle RJ. Mitocondriile în apoptoză: membrii familiei Bcl-2 și dinamica mitocondrială. Dev Cell. 2011;21(1):92–101. doi:10.1016/j.devcel.2011.06.017
36. Borner C, Andrews DW. Porul apoptotic de pe mitocondrii: ne străpungem sau încă ne blocăm? Moartea celulară diferă. 2014;21(2):187–191. doi:10.1038/cdd.2013.169
37. Siddiqui WA, Ahad A, Ahsan H. Misterul familiei BCL2: proteinele Bcl-2 și apoptoza. O actualizare. Arch Toxicol. 2015;89(3):289–317. doi:10.1007/s00204-014-1448-7
38. Maes ME, Schlamp CL, Nickells RW. BAX la elementele de bază: Cum familia de gene BCL2 controlează moartea celulelor ganglionare retiniene. Prog Retin Eye Res. 2017;57:1–25. doi:10.1016/j.preteyeres.2017.01.002
39. Erfani S, Khaksari M, Oryan S, Shamsaei N, Aboutaleb N, Nikbakht F. Nampt/PBEF/visfatin exercită efecte neuroprotective împotriva ischemiei/leziunilor de reperfuzie prin modularea raportului Bax/Bcl-2 și prevenirea caspazei{ activare {2}}. J Mol Neurosci. 2015;56(1):237–243. doi:10.1007/s12031-014-0486-1

40. Chen L, Cao J, Cao D și colab. Efectul protector al dexmedetomidinei

împotriva ischemiei/reperfuziei cerebrale exacerbate de hiperglicemie diabetică: un studiu in vivo și in vitro, Life Sdi,2019:235:116553.doi; 10.1016/ilfs.2019116553

41. Zhao H, Luo Y, Chen L, și colab. Sirt3 inhibă afectarea ischemiei-reperfuzie cerebrală prin normalizarea căii Wnt/-cateninei și prin blocarea fisiunii mitocondriale. Chaperoni de stres celular. 2018;23(5):1079–1092. doi:10.1007/s12192-018-0917-y

42. Zhang W, Wei R, Zhang L, Tan Y, Qian C. Sirtuin 6 protejează creierul de ischemia cerebrală/leziunea de reperfuzie prin activarea NRF2. Neuroscience.2017;366:95–104. doi:10.1016/j.neuroscience.2017.09.035