Polizaharidele de jujube au atenuat anemia la șobolani cu boală cronică de rinichi

Contact: emily.li@wecistanche.com

Shiying Huang, și colab

Abstract

Polizaharidele de jujube (JP) sunt unul dintre glicanii activi din alimente din fructele dietetice de Ziziphus jujuba, care a fost luat în considerare pentru tratamentul deficienței de sânge. În acest studiu, acronicrinichiboalaModelul de șobolan (CKD) a fost utilizat pentru a evalua efectul JP și mecanismul său asupra anemiei asociate cu CKD. La șobolanii CKD, tratamentul cu JP sa ameliorat semnificativrinichifuncţie, rinichipatologicrănireși parametrii hematologici, inclusiv creșterea eritrocitelor, hemoglobinei, hematocritului și numărului de trombocite. Mai mult, rezultatele metabolomice țintite LC-MS/MS au arătat că JP a promovat eliberarea de acizi grași cu lanț scurt (SCFA) la șobolanii CKD. În plus, JP a alternat nivelul eritropoietinei serice (EPO), ARNm EPO renal șirinichiProteina EPO prin semnalizare HIF. În mod colectiv, aceste rezultate oferă dovezi că efectul JP asupra anemiei asociate cu CKD poate fi implicat în reglarea eliberării SCFA și producția de eritropoietină, susținând dezvoltarea ulterioară a JP ca suplimente alimentare în tratarea anemiei asociate CKD.

Cuvinte cheie: polizaharide jujubeCronicrinichi boalaAnemie Eritropoietina Factor inductibil de hipoxie- Acizi grași cu catenă scurtă

Faceți clic aici pentru a obține mai multe informații despre Cistanche

1. Introducere

Cronicrinichi boala(CKD) este definită ca un sindrom clinic de anomalii structurale renale sau deficiențe funcționale și devine din ce în ce mai mult o povară pentru sănătatea publică la nivel mondial (Webster, Nagler, Morton și Masson, 2017). Anemia renală este printre cele mai frecvente complicații ale CKD care contribuie la creșterea riscului de deces (Locatelli et al., 2019). Insuficiența producției de eritropoietină (EPO) este un factor determinant major recunoscut al anemiei în CKD (Pappa, Dounousi, Duni și Katopodis, 2015). EPO este produsă în ficat șirinichi, care este esențial pentru producția de eritrocite (Lappin & Lee, 2019). În condiții hipoxice, factorul inductibil de hipoxie (HIF) poate activa expresia EPO (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Prin urmare, țintirea HIF pentru a induce producția de EPO a fost considerată o strategie terapeutică nouă pentru a trata anemia asociată cu CKD.

Jujube este fructele Ziziphus jujuba Mill. (Rhamnaceae), cunoscută și sub numele de curmal chinezesc. Jujube are o utilizare tradițională lungă de mii de ani ca plantă medicinală și supliment alimentar. Jujube este folosit ca supliment de sănătate pentru persoanele care au hematogen sau suferă de malnutriție cronică. Polizaharidele de jujube (JP), o componentă solubilă în apă compusă cu diferite proporții de monozaharide și acid uronic (Ji, Hou, Yan, Shi și Liu, 2020), este unul dintre ingredientele active din jujube (Ji et al., 2017). ), care a fost bine acceptat pentru a prezenta efect hepatoprotector și activitate imunomodulatorie și pentru a îmbunătăți funcția de barieră intestinală (Liu și colab., 2015, Yue și colab., 2015). Într-adevăr, JP este, de asemenea, considerat în mod obișnuit a avea efecte potențiale asupra anemiei. Cu toate acestea, mecanismul molecular al JP în tratarea anemiei este încă mai puțin cunoscut.

În ultimii ani, metabolomica a fost utilizată pe scară largă pentru a înțelege factorii potențiali care contribuie la progresia bolii. Metabolomica țintită a fost utilizată pe scară largă în identificarea markerilor moleculari ai bolilor umane complexe, cum ar fi CKD. S-a verificat că sulfatul de indoxil (IS) și sulfatul de p-crezil (PCS) sunt biomarkerul progresiei CKD (Meijers & Evenepoel, 2011), iar gradul crescut de trimetilamină-N-oxid (TMAO) ar putea duce direct la fibroză tubulointerstițială renală și disfuncție. (Tang și colab., 2015). Acizii grași cu lanț scurt (SCFA), metaboliții dependenți de microbii intestinali, sunt substraturile energetice cu capacitatea de a afecta diferite procese fiziologice (LeBlanc et al., 2017), iar reducerea SCFA a fost raportată că contribuie la progresia CKD. (Koh, De Vader, Kovatcheva-Datchary și B¨ ackhed, 2016, Wang și colab., 2019). Mai mult, SCFA au putut să protejeze structura rinichilor de deteriorare prin inhibarea stresului oxidativ (Li, Ma și Fu, 2017). Concomitent, s-a descoperit că SCFA prezintă un efect benefic asupra absorbției fierului și reglează expresia genei globinei embrionare/fetale, care induce eritropoieza și corectează anemia (Tako, Glahn, Knez și Stangoulis, 2014). Cu toate acestea, mecanismul SCFA în anemia renală este încă necesar să fie elucidat.

În acest studiu, emitem ipoteza că JP ar putea regla eliberarea de SCFA și ar putea stimula producția de EPO mediată de HIF, rezultatul căruia este corectarea anemia renală. Aici, vom investiga efectul JP în ameliorarea anemiei renale la 5/6 șobolani CKD induși de nefrectomizare, inclusiv funcțiile renale și parametrii hematologici. O abordare metabolomică țintită folosind LC-MS/MS este dezvoltată pentru a determina opt SCFA, inclusiv acid acetic, acid propanoic, acid izobutiric, acid butiric, 2-acid metilbutiric, acid izovaleric, acid valeric și acid hexanoic în fecale și probe de rinichi și nivelurile de SCFA țintite sunt evaluate la șobolani sănătoși și CKD. În plus, este dezvăluită și implicarea semnalizării HIF la șobolanii tratați cu JP.

Fig. 1. Cromatografia tipică GC-MS a JP. (A) Formule structurale de monozaharide după derivatizarea acetatului de aldononitril; (B) Profilurile reprezentative de cromatografie ionică mixtă GC-MS (MIC) ale amestecului standard de monozaharide și monozaharidelor hidrolizate JP. Picurile profilurilor cromatografice au corespuns cu markerul chimic prezentat în (A): 1. ramnoză, 2. arabinoză, 3. fucoză, 4. xiloză, 5. manoză, 6. glucoză, 7. galactoză, 8. inozitol (ISTD). ).

2. Materiale și metode

2.1. Prepararea polizaharidei de jujube

Fructele Z. jujuba au fost achiziționate de la Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd. Materialele au fost autentificate de Dr. Jianping Chen conform Farmacopeei Republicii Populare Chineze 2015 Edition. Exemplarele de voucher au fost păstrate la Spitalul de Medicină Tradițională Chineză din Shenzhen cu numărul 18100601.

JP brut a fost extras din jujube așa cum s-a descris anterior, cu modificări minore (Ji și colab., 2020). Pe scurt, jujuburi au fost incubate cu 10 vol. de apă (v/g) într-o baie de apă la 80 °C timp de 3 ore și extrase de 3 ori. După filtrare, se combină filtratele și se condensează această combinație într-un evaporator rotativ sub vid controlat. Soluția concentrată a fost precipitată în continuare prin adăugarea de patru ori de etanol (v/v) la 4°C timp de 12 ore. Precipitatul a fost colectat prin centrifugare şi a fost uscat sub presiune redusă la sec pentru a obţine JP brut. Puritatea JP a fost determinată a fi de 80 la sută prin utilizarea calorimetriei.

2.2. Caracterizarea compoziției monozaharidice a polizaharidei jujube

Un sistem Shimadzu GC–MS (Shimadzu GC–MS TQ804{0 interfațat cu Shimadzu GC 2010 plus) echipat cu sursă EI, coloană capilară SH-Rxi-5Sil MS (30 m × 0,25 mm ID, 0,25 µm grosimea filmului, Shimadzu) a fost utilizat pentru a determina derivatizarea monozaharidelor hidrolizate cu un raport de împărțire de 10:1. Temperatura de injecție, sursa de ioni și interfața au fost de 250 ◦C, 200 ◦C și 250 ◦C. Temperatura inițială a coloanei a fost menținută la 120 ◦ C timp de 1 min, apoi a crescut la 15 ◦ C/min la 160 ◦ C și s-a menținut timp de 4 min, 2 ◦ C/min la 165 ◦ C și s-a menținut timp de 2 min, 20 ◦C /

min la 195 ◦C, 5 ◦C/min la 250 ◦C și menținut timp de 3 min. Debitul gazului purtător de heliu a fost menținut la 46 cm/s și 2 μL din fiecare probă au fost injectați în instrument. Analiții au fost cuantificați în modul de monitorizare a ionilor selectați (SIM), ionul țintă: ramnoză (m/z 129.00), arabinoză (m/z 115.{00), fucoză (m/ z 103.00), xiloză (m/z 115.00), manoză (m/z 115.{00), glucoză (m/z 115.00 ), galactoză (m/z 115.00), inozitol (m/z 126.{00). Standardele de monozaharide au fost enumerate după cum urmează: L (plus)-arabinoză (1506–200202), fucoză (112014–201902), D-xiloză (111508–201605), D-glucoză (110833–201908), ramnoză (1111603) ), galactoză (100226–201807), D-manoză (140651–201805) au fost achiziționate de la National Institutes for Food and Drug Control. Inozitol a fost obținut de la Sigma (I7508-50 g).

JP extras (10 mg) a fost hidrolizat în monozaharide cu 10 mL de 2 mol/L acid trifluoracetic (TFA) la 105 °C timp de 3 ore, iar monozaharidele hidrolizate din JP au fost concentrate și spălate sub presiune redusă la 60 °C până la se îndepărtează TFA, iar reziduurile au fost reconstituite cu 2 mL apă. S-au adăugat 250 µL de 20 mg/mL soluție de clorhidrat de hidroxilamină/piridină în 100 µL de soluție de monozaharide hidrolizate și s-au păstrat într-o baie de apă la 90 °C timp de 45 de minute. Apoi s-au adăugat 250 µL de anhidridă acetică și s-au menținut într-o baie de apă la 90 °C pentru încă 45 de minute. La sfârșitul reacției, amestecul a fost extras cu 1 mL de ciclohexan de 5 ori, iar stratul de ciclohexan a fost concentrat la 1 mL. S-a injectat 1 µL de supernatant în GC–MS pentru analiză (Li & Shi, 2013).

2.3. animale

Toate experimentele au fost efectuate cu protocoale aprobate de Comitetul instituțional de utilizare pentru îngrijirea animalelor al Universității de Medicină Chineză din Guangzhou. Șobolani Sprague-Dawley, masculi și femele, cu o greutate de 180–220 g, au fost obținuți de la Centrul pentru animale de laborator medical din Guangdong (Foshan, China, permisiunea nr. SCXK (Yue) 2008–0002) și menținuți într-un anumit patogen (SPF). ) unitate de animale aflată într-un ciclu lumină-întuneric de 12 ore, cu hrană și apă libere.

Pentru insuficiența renală indusă, s-a efectuat nefrectomie 5/6 conform descrierii anterioare (Chen et al., 2019). Toată operația chirurgicală a fost efectuată sub anestezie cu 10% hidrat de cloral. Grupul de operații simulate (n=6) a făcut aceiași pași pentru a deschide cavitatea abdominală și a expus rinichiul. 5/6 șobolani cu nefrectomie au fost împărțiți aleatoriu în două grupuri. Șobolani fără tratament (grup CKD, n=6) și șobolani care primesc JP (grup CKD plus JP, n=6) ​​pe cale orală prin gavaj la o doză de 1,2 g/kg/zi. După 90 de zile de funcționare au început 90 de zile de administrare. A 90-a zi a fost timpul final de administrare a JP la șobolani, iar după 24 de ore animalele au fost sacrificate prin prelevarea de sânge din aorta abdominală, iar probele de urină, fecale, ser și rinichi au fost colectate de la fiecare șobolan. Toate probele au fost păstrate la - 80 ◦ C înainte de analiza ulterioară.

2.4. Analiza biochimică

Urmând instrucțiunile producătorului, azotul ureic din sânge (BUN) și creatinina serică (Scr) au fost măsurate prin trusa de detecție a creatininei ser și kitul de detecție BUN (WAKO, Ginza, Japonia), iar proteina urinară a fost măsurată cu trusa Elisa (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institution, Nanjing, China). Celulele roșii (RBC), hemoglobina (Hb), hematocritul (HCT) și numărul de trombocite (PLT) au fost analizate de Hematology Systems (Siemens 2021i, Erlangen, Germania) conform instrucțiunilor producătorului.

2.5. Examen histologic

Colorația periodică cu acid Schiff (PAS) și Masson au fost utilizate pentru a evalua leziunea patologică renală, printre acestea, colorația PAS a fost folosită pentru a evidenția atrofia tubulară renală și zona glomerulară, iar colorația Masson a fost pentru fibroza interstițială renală (Xie et al. , 2020). Metoda de analiză cantitativă a fost realizată conform studiilor anterioare (Chen et al., 2019). Pe scurt, scorul de atrofie tubulară în colorarea PAS a fost definit după cum urmează: 1. tubul atrofic unic rar; 2. mai multe grupuri de tubuli atrofici; 3. atrofie masivă. Aria glomerulară a fost măsurată cu software-ul ZEN 3.1 (Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Germania). Zona fibrotică în colorația Masson a fost măsurată folosind software-ul Image J (NIH, Bethesda, MD, SUA). Cel puțin zece câmpuri microscopice (200 ×) de 6 șobolani per grup au fost capturate aleatoriu pentru a măsura scorul de atrofie, zona glomerulară și zona fibrotică, cu cel puțin un glomerul în fiecare câmp microscopic.

2.6. Analiza imunohistochimică

Secțiunea de parafină renală (4 μm) din fiecare probă a fost deshidratată treptat de către xilen de două ori, iar etanol în gradient (100–95–90–80–70 la sută), antigenul a fost extras cu tampon de acid citric (pH 6,0). ) timp de 30 min, blocat cu 3% peroxid de hidrogen timp de 10 min și ser de capră timp de 30 min la temperatura camerei. Secțiunile de țesut au fost incubate separat cu anticorpul primar HIF-1 (Bioss, bs{-0737R, 1: 500, Lot: BA01279129), HIF{-2 (Bioss, bs{-1447 R, 1: 500, lot: BJ2044786) la 4 ◦C timp de 10 ore și anticorp secundar de capră anti-iepure conjugat cu HRP (Abcam, ab6712, 1:1000) la temperatura camerei timp de 30 de minute, DAB (diaminobezid în) a fost utilizat pentru detectează activitatea HRP, nucleul a fost contracolorat cu hematoxilină. cel. Imunohistochimia a fost analizată sub câmpuri microscopice de 400 × din fiecare grup și a fost fixată bara de scară=20 μm de Axio Scope A1, ZEISS, Jena, Germania. Nucleul a fost colorat cu albastru de hematoxilină și imunopozitivitatea DAB a fost maro, colorarea DAB mai profundă înseamnă o imunohistochimie mai puternică pozitivă.

2.7. Detectarea EPO

Conținutul de EPO seric a fost detectat de trusa ELISA (Abcam, ab274398), iar experimentul se referea la protocolul trusei ELISA. După cum s-a rezumat, s-a adăugat cocktail de anticorpi EPO în probă și s-a incubat timp de 1 oră. după incubare, s-a spălat fiecare godeu cu tampon de spălare de 3 ori, s-a adăugat TMB la cel de-al doilea incubat timp de 15 minute și s-a oprit reacția.

ARNm-ul total al rinichilor a fost extras din țesut renal înghețat folosind Trizol și s-a tradus ARNm în cADN. PCR în timp real a fost efectuată cu Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA, K0223) conform protocolului producătorului. Semnalul verde SYBR a fost dobândit și măsurat de sistemul de detectare a secvenței ABI Prism 7300 (Applied Biosystems, Foster City, CA). Primerii au fost: 5′-CCG TCC CAG ATA CCA AAG TC-3′ și 5′-ACC CGA AGC AGT GAA GTG-3′ pentru șobolani EPO (214 bps, NM_017001. 2); 5′- GTC GGT GTG AAC GGA TTT G-3′ și 5′-TCC CAT TCT CAG CCT TGA C{- 3′ pentru GAPDH (181 bps, NM{_017008.3), gens de menaj ca control intern în toate cazurile. Și cuantificarea relativă a expresiei genelor a fost calculată prin metoda expresiei genice normalizate (2− ΔΔCT).

Au fost încărcate cantități egale de proteine ​​din lizate de cortexuri renale și separate de gel SDS 10% și apoi transferate pe membranele de nitroceluloză. După ce au fost blocate în lapte negras 5% timp de 2 ore la temperatura camerei, membranele au fost incubate cu anticorp primar la 4 ◦ C peste noapte. Apoi membranele au fost incubate cu HRP (peroxidază de hrean) IgG anti-șoarece (Life Technologies) conjugată la temperatura camerei timp de 45 de minute. Activitatea HRP a fost vizualizată utilizând substratul Clarity Western ECL și analizată de sistemul de imagistică Tanon. În acest studiu a fost utilizat următorul anticorp primar: EPO monoclonal (B- 4) de la șoareci (Santa Cruz Biotechnology, sc-5290, diluție 1/500), -actin monoclonal de la șoareci (tehnologie de semnalizare celulară, 8H10D10, diluție 1/1000).

2.8. Analiza acizilor grași cu lanț scurt

Un sistem Shimadzu UHPLC-LCMS/MS (Shimadzu LC-MS 8045 interfațat cu Shimadzu LC-20AD) echipat cu sursă ESI.

Separările cromatografice au fost efectuate pe coloana Shim-pack GIST C18 (2,1 × 100 mm, 2 μm), utilizând {{1{0}},1 procente de acid formic în apă ( solventul A) și acetonitril (solventul B) la o viteză de curgere de 0,3 ml/min printr-o eluție în gradient: 0–9 min, 25–30 la sută B; 9–11 min, 30–40 la sută B; 11–20 min, 40–50 la sută B; 20–20,1 min, 50–100 la sută B; 20,1–23 min, 100 la sută B; 23,1 min–25 la sută B pentru reechilibrare. Temperatura coloanei a fost de 35 ◦ C, iar autosamplerul a fost menținut la 4 ◦ C în timpul analizei, 1 μL din fiecare probă a fost injectat în instrument. Detectarea analitului a fost efectuată în modul de monitorizare cu reacție multiplă (MRM), operat în modul ion pozitiv. Parametrii MS: Curgerea gazului de nebulizare: 3,0 L/min; Curgerea gazului de uscare: 10 L/min; Incalzire Gaz debit: 10 L/min; Temperatura DL: 250 ◦C; temperatura interfeței: 300 ◦C; Bloc incalzire: 400 ◦C. Tranzițiile MRM și energia de coliziune (CE) au fost selectate și optimizate prin infuzia directă a fiecărui derivat standard. Tranzițiile MRM cantităților de analiți au fost rezumate în Tabelul S1.

SCFA fecale: S-au adăugat 100 μL de 50% acetonitril în 3 mg de fecale liofilizate și s-au agitat timp de 2 minute. Apoi amestecul a fost centrifugat la 12000 rpm timp de 10 min la 4 °C și se pipetează supernatantul.

SCFA de rinichi: s-au cântărit 100 mg de țesut renal și s-au agitat pe gheață cu soluție salină de 4 ori normală (100 mg/400 μL) pentru a prepara omogenatul de țesut. S-a adăugat de 3 ori metanol rece în 300 μL de omogenat de țesut și s-a agitat timp de 2 minute, apoi amestecul a fost centrifugat la 12000 rpm timp de 10 minute la 4 °C și se pipetează supernatantul. Supernatantul a fost uscat cu N2 și reconstituit cu 100 μL 50% acetonitril.

S-a adăugat 500 mmol/L clorhidrat de N-(3-dimetil aminopropil)-Ń-etil carbodiimidă (EDC, Aladdin, Shanghai, China), 50 mmol/L 3H-[1,2,3]-Triazolo[4, 5-b] piridin-3-ol (HOAT, Aladdin, Shanghai, China) și 50 mg/mL 12C-Dansylhydrazină (12C-DnsHz, J&K, Beijing, China) în 20 μL din extracția probei în secvență cu același volum. EDC și HOAT au fost preparate cu acid etansulfonic proaspăt de 500 mmol/L 2-(N-Morpholino) (MES, Macklin, Shanghai, China). După incubare la 20 °C timp de 90 de minute, s-au adăugat la amestec 20 μL 50 mmol/L CuCl2 (Macklin, Shanghai, China) pentru a stinge reacția de derivatizare la 40 °C timp de 30 de minute (Zhao & Li, 2018). La sfârșitul derivatizării, amestecul a fost diluat de 10 ori cu 25% acetonitril. Înainte de analiză, 100 μL de supernatant au fost amestecați cu o soluție standard internă de 100 μL. Eticheta 13C-DnsHz a fost utilizată ca standarde interne (ISTD1-8) în conformitate cu aceeași reacție de derivatizare. Standardul SCFA: acid acetic (AA, A116173), acid propanoic (PA, P110446), acid izobutiric (IBA, I103524), acid butiric (BA, B110438), 2-acid metil butiric (2- BA, M107377), acid izovaleric (IVA, I108280), acid valeric (VA, V108271), acid hexanoic (HA, H103632) au fost furnizate de la Aladdin (Shanghai, China).

2.9. analize statistice

Datele fiecărui grup au fost exprimate ca medie ± abatere standard (SD). Semnificația statistică între grupuri a fost realizată prin ANOVA unidirecțională și analiză post-hoc cu testul Student-Newman-Keuls (SNK) sau testul T3 Dunnett. Valoarea lui P < 0.05="" a="" fost="" considerată="" semnificativă="" statistic.="" toate="" datele="" au="" fost="" realizate="" folosind="" software-ul="" de="" statistică="" spss="" (versiunea="" 22.0,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="">

3. Rezultate

3.1. JP a îmbunătățit funcția renală a șobolanilor CKD

Monozaharida JP a fost caracterizată înainte de tratamentul pe animale. JP utilizat în prezentul studiu a fost compus din șapte monozaharide, adică ramnoză (1,62 la sută), arabinoză (15,79 la sută), fucoză (0,21 la sută), xiloză (4,56 la sută), manoză (3. 00 procente), glucoză (73,44 la sută) și galactoză (4,99 la sută) (Fig. 1). Metoda noastră de analiză a fost validată prin liniaritate, precizie, repetabilitate, stabilitate și recuperare (Tabelele S2–S3). S-a confirmat că analiții sunt stabili la temperatura camerei timp de 24 de ore. Randamentul de JP ar trebui să fie mai mare de 8,63 la sută, iar puritatea nu trebuie să fie mai mică de 77,16 la sută. Analiza chimică menționată mai sus a JP a servit ca abordare de control al calității pentru a asigura reproductibilitatea studiilor pe animale de mai jos.

Scr, BUN și proteina urinară au fost cele mai reprezentative pentru funcțiile rinichilor. Scr, BUN și nivelurile de proteine ​​urinare la șobolanii CKD au fost semnificativ mai mari decât cele ale grupului simulat (P <{{0}},01). după="" 90="" de="" zile="" de="" tratament="" cu="" jp,="" nivelurile="" de="" scr,="" bun="" și="" proteine="" ​​​​urinale="" au="" fost="" scăzute="" în="" comparație="" cu="" grupul="" ckd="" (p=""><0,01) (fig.="">

3.2. JP a ameliorat leziunea patologică renală la șobolanii CKD

Greutatea întregului rinichi drept pentru grupul simulat și a rinichiului drept rămas pentru grupul CKD și CKD plus JP au fost utilizate pentru evaluarea morfologiei renale în funcție de greutatea rinichiului (KW) și greutatea rinichiului/greutatea corporală (KW/BW). La sfârșitul experimentelor, KW și KW/BW ale grupului CKD au fost crescute în comparație cu grupul simulat (toate P <{{0}}.05). în="" modelul="" ckd="" indus="" de="" nefrectomie="" 5/6,="" reducerea="" activităților="" proteinazei="" renale="" a="" determinat="" creșterea="" compensatorie="" a="" rinichilor,="" companiile="" cu="" hipertrofie="" renală="" (morton="" &="" griffiths,="" 1985),="" iar="" noi="" au="" confirmat="" această="" afirmație.="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" kw="" a="" fost="" scăzut="" semnificativ="" (p=""><0.05) și="" a="" fost="" închis="" la="" un="" grup="" simulat="" (p="" ˃="" 0,05);="" în="" timp="" ce="" kw/bw="" a="" fost="" ușor="" scăzut="" (p="" ˃="" 0,05).="" (fig.="">

Fig. 2. JP a protejat funcția rinichilor la șobolani CKD. Nivelul de Scr (A), BUN (B) și proteină urinară (C) în diferite grupuri. (D) greutatea rinichilor, (E) KW/BW. Datele au fost prezentate ca medii ± SD, n=6 per grup (**P < 0.01="" în="" comparație="" cu="" grupul="" simulat;="" #p="">< 0,05="" ,="" ##p=""><0,01 comparativ="" cu="" grupul="">

În grupul CKD, tubularul renal a prezentat atrofie masivă în comparație cu grupul simulat (P <{{0}}.01), iar="" zona="" glomerulului="" și="" fibroza="" interstițială="" renală="" au="" fost="" de="" aproape="" două="" ori="" mai="" mari="" decât="" cel="" al="" grupului="" simulat="" în="" analiza="" cantitativă="" (p="">< 0.01).="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" scorul="" de="" atrofie="" tubulară="" a="" fost="" scăzut="" de="" aproape="" două="" ori="" (p="">< 0,01),="" zona="" glomerulului="" a="" fost="" aproape="" recuperată="" într-un="" grup="" simulat="" (p="">< 0,01),="" iar="" fibroza="" interstițială="" renală="" a="" scăzut="" cu="" o="" treime="" (p="">< 0,01),="" deoarece="" comparativ="" cu="" grupul="" ckd="" (fig.="">

Fig. 3. JP a protejat structura rinichilor la șobolani CKD. (A) Colorare PAS. (B) Colorarea Masson. (C) Scorul de atrofie tubulară. (D) Zona glomerulară (E) Zona fibrotică. Toate imaginile sunt prezentate la mărire identică, 200×, bară de scară=100 μm. Datele au fost prezentate ca medii ± SD, n=6 per grup (**P < 0,01="" în="" comparație="" cu="" grupul="" simulat;="" #p=""><0,05, ##p=""><0,01 în="" comparație="" cu="" grupul="" ckd="">

3.3. JP a modulat parametrii hematologici la șobolanii CKD

Pentru analiza biochimică a parametrilor hematologici, au fost măsurate RBC, Hb, HCT și PLT. La șobolanii CKD, nivelul RBC a scăzut de la 9,06 la 7,20 × 1012 /L, Hb de la 15,28 la 13,22 g/dL, HCT de la 47,1 la 40,4% și PLT crescut de la 1012 la 1526 × 109 /L în comparație cu un grup simulat (P < 0,01),="" ceea="" ce="" a="" indicat="" că="" semnele="" de="" anemie="" au="" fost="" observate="" la="" șobolanii="" ckd.="" nivelurile="" scăzute="" de="" rbc,="" hb,="" hct="" și="" plt="" la="" șobolanii="" ckd="" tratați="" cu="" jps="" au="" fost="" restabilite="" (p=""><0,01) (fig.="">

Fig. 4. JP a reabilitat parametrii hematologici la șobolani CKD. Nivelul PLT (A), RBC (B), Hb (C), HCT (D). Datele au fost prezentate ca medii ± SD, n=6 per grup (**P < 0.01="" în="" comparație="" cu="" grupul="" simulat;="" #p="">< 0,05="" ,="" ##p=""><0,01 comparativ="" cu="" grupul="">

3.4. JP a stimulat expresia EPO

Comparativ cu grupul simulat, nivelul seric de EPO și cantitatea de ARNm EPO renală au fost semnificativ scăzute la șobolanii cu anemie CKD (P <0.01). analiza="" western="" blot="" a="" arătat="" că="" nivelul="" proteinei="" epo="" a="" prezentat="" scăderi="" ușoare="" în="" grupul="" ckd="" fără="" diferențe="" semnificative.="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" nivelul="" seric="" de="" epo,="" arnm="" epo="" renal="" și="" proteina="" au="" fost="" îmbunătățite="" semnificativ="" în="" comparație="" cu="" grupul="" ckd="" (p="">< 0.01="" sau="" p="">< 0,05)="" (fig.="">

În cortexul renal, HIF-1 a fost produs în principal de celulele epiteliale tubulare renale, HIF-2 a fost exprimat în principal în celulele endoteliale și fibroblastele interstițiale renale (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Analiza chimică imunohisto a arătat că, ca și pentru HIF-1, la șobolanii CKD, tuburile au fost colorate mai puternic decât grupul simulat. După tratamentul cu JP, tubularul renal a avut o zonă de colorare mai puternică și mai mare în comparație cu grupul CKD, așa cum este indicat de săgeata roșie în Fig. 5E. HIF-2 a prezentat o imunohistochimie relativ slabă pozitivă la interstițialul renal în grupul Sham. În grupul CKD, HIF-2 a prezentat imunohistochimie pozitiv. După tratamentul cu JP, HIF-2 a prezentat o imunohistochimie mai puternică în comparație cu grupul CKD (Fig. 5F).

Fig. 5. JP a stimulat expresia EPO. (A) Conținutul seric de EPO. (B)RinichiARNm relativ EPO. GAPDH a fost considerată genă menajeră. (C) Imaginile reprezentative Western blot ale expresiei proteinei EPO. (D) Analiza densitometrică a EPO. (E) Imunohistochimia HIF{{0}}. (F) Imunohistochimia HIF- 2 normalizată la conținutul de actină. Imaginile de imunohistochimie sunt prezentate la mărire identică, 400×, bară de scară=20 μm. Nucleul a fost colorat cu albastru de hematoxilină și imunopozitivitatea DAB a fost maro, colorarea DAB mai profundă înseamnă o imunohistochimie mai puternică pozitivă. Săgeata roșie indică imunohistochimie pozitiv. Datele au fost prezentate ca medii ± SD, n=6 per grup (*P < 0,05="" în="" comparație="" cu="" grupul="" simulat;="" #p="">< 0,05,="" ##p="">< 0,01="" în="" comparație="" cu="" grupul="">

3.5. JP a indus eliberarea de SCFA

A fost dezvoltată o abordare metabolomică țintită bazată pe LC-MS pentru a cuantifica eliberarea a opt SCFA în probele fecale. Metoda stabilită a fost validată prin evaluarea liniarității, sensibilității, preciziei, efectului de matrice, acurateței și stabilității. Probele de control al calității cu concentrație scăzută, medie și înaltă (LQC, QMC, HQC) pentru validarea sensibilității, preciziei, acurateții și stabilității, au fost selectate în funcție de punctele de concentrație cele mai scăzute, medii și mai ridicate ale curbei standard ale matricei și rezultatele au fost prezentate în tabelele S4–S6. S-a confirmat că analiții sunt stabili la 4 ◦ C timp de 48 de ore. Cromatograma LC-MS/MS a SCFA a fost prezentată în Fig. 6.

Fig. 6. Cromatografia UHPLC-MS/MS a SCFA. (A) Partea superioară a fost ecuația chimică de derivatizare a SCFA; formula structurală de sub a fost SCFA după derivatizarea dansilhidrazinei; (B) Cromatograma UHPLC/MRM-MS a standardelor de amestec și a probei fecale, vârfurile cromatografice din (B) au fost corelate cu markerul chimic prezentat în (A):1. acid 12C-acetic; 2. acid 13C-acetic (ISTD1); 3. acid 12C-propanoic; 4. acid 13C-propanoic (ISTD2); 5. Acid 12C-izobutiric; 6. Acid 12C-butiric; 7. Acid 13C-izobutiric (ISTD3); 8. Acid 13C-butiric (ISTD4); 9. acid metilbutiric 12C-2-; 10. acid 12C-izovaleric; 11. acid valeric 12C; 12. Acid 13C-2-metilbutiric (ISTD5); 13. Acid 13C-izovaleric (ISTD6); 14. Acid 13C-valeric (ISTD7); 15. Acid 12C-hexanoic; 16. Acid 13C-hexanoic (ISTD8).

În ceea ce privește proba de fecale, în grupul CKD, nivelurile de AA și PA au fost semnificativ scăzute de aproape 4 ori și de 5 ori în comparație cu un grup de simulare (P < 0.01);="" în="" timp="" ce="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" cantitățile="" de="" aa="" și="" pa="" au="" fost="" restabilite="" la="" 4/5="" din="" grupul="" simulat="" (p=""><{{10}}.01). în="" mod="" similar,="" nivelurile="" de="" ba="" și="" va="" au="" scăzut="" puternic="" de="" aproape="" 30="" ori="" și="" de="" 4="" ori="" în="" grupul="" ckd="" în="" comparație="" cu="" un="" grup="" simulat="" (p=""><0.01). tratamentul="" cu="" jp="" a="" arătat="" o="" tendință="" de="" creștere,="" dar="" nu="" o="" îmbunătățire="" semnificativă.="" conținutul="" iba,="" iva="" și="" 2-ba="" nu="" a="" arătat="" o="" schimbare="" notabilă="" între="" ckd="" și="" grupul="" de="" simulare.="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" nivelul="" iba,="" iva="" și="" 2-ba="" a="" fost="" crescut="" (p="">< 0,01).="" cu="" toate="" acestea,="" ha="" nu="" a="" arătat="" o="" schimbare="" evidentă="" între="" cele="" trei="" grupuri="" (fig.="" 7a).="" mai="" mult="" decât="" atât,="" în="" ceea="" ce="" privește="" țesutul="" renal,="" în="" grupul="" ckd,="" cantitățile="" de="" opt="" scfa="" au="" fost="" toate="" semnificativ="" scăzute="" (p="">< 0,01),="" în="" timp="" ce="" după="" tratamentul="" cu="" jp,="" nivelurile="" scfa="" au="" fost="" crescute="" cu="" excepția="" ba="" și="" ha="" (p="">< 0,01="" sau="" p="">< 0,01="" sau="" p="">< 0,01).="" 0,5).="" ba="" a="" fost="" ușor="" crescută="" fără="" semnificativ,="" iar="" ha="" nu="" a="" prezentat="" modificări="" după="" tratamentul="" cu="" jp="" (fig.="">

Fig. 7. Conținutul de SCFA în diferite grupuri. (A) SCFA fecale. (B) SCFA renale. Datele au fost prezentate ca medii ± SD, n=6 per grup (**P < 0.01="" în="" comparație="" cu="" grupul="" simulat;="" ##p=""><0. 01,="" #p=""><0,05 comparativ="" cu="" grupul="">

4. Discutie

În prezentul model de șobolan CKD cu nefrectomie 5/6,rinichifuncţieindicatorii (Scr, BUN și proteina urinară) au fost semnificativ măriți, a apărut hipertrofia renală remanentă și leziunea patologică renală, însoțită de modificarea parametrilor hematologici. Aceste date au fost în conformitate cu studiile anterioare (Garrido et al., 2015, Morton & Griffiths, 1985). Indicatorii de mai sus au arătat că șobolanii cu anemie CKD induși de nefrectomia 5/6 au fost stabiliți cu succes și ar putea fi verificați pentru efectul benefic al JP în tratarea șobolanilor cu anemie CKD. Curinichifuncţiedeteriorată și mai mult, anemia a fost recunoscută ca o complicație oportunistă cunoscută a IRC, care a afectat negativ calitatea vieții pacienților (Locatelli, Fishbane, Block și Macdougall, 2017). Înțelegerea factorilor de risc legați de evoluția anemiei renale va ajuta la dezvoltarea abordărilor terapeutice. În zilele noastre, legătura dintre boală și metabolismul microbiotei intestinale a atras din ce în ce mai mult atenția, în timp ce relația dintre SCFA și anemia renală este încă mai puțin cunoscută. SCFA, metabolizați în principal de Clostridium, Coprococcus și Bacteroides (Koh et al., 2016), vizează receptorii specifici legați de membrană, care joacă un rol important în menținerea echilibrului mediului intestinal și a sănătății întregului corp. S-a dovedit deja că SCFA au o relație inseparabilă cu CKD, iar nivelurile de acid acetic, acid propionic, acid butiric au fost reduse în CKD (Wang et al., 2019). La șobolanii CKD induși de adenină, abundența și diversitatea microbiotei intestinale au fost modificate semnificativ, companiile prin reducerea nivelului de acid propanoic, acid butiric și acid valeric (Lakshmanan, Al, Ali și Terranegra, 2021). Pe baza studiului nostru anterior, secvențierea 16S rDNA a arătat că disbioza microbiotei intestinale a fost afișată la 5/6 șobolani CKD induși de nefrectomizare, comparativ cu grupul simulat. Unele dintre SCFA care produc genuri, în special acid butiric din Clostridium, Coprococcus au avut diferențe la șobolanii CKD (Zheng și colab., 2020). În conformitate cu aceasta, rezultatele noastre au arătat că cantitățile de acid acetic, acid propionic, acid butiric, acid valeric au scăzut cu aproximativ 60%, 80%, 85% și 60% la șobolanii CKD, indicând că scăderea SCFA a corespuns. cu dezechilibrul mediului intestinal. De notat, tulburarea mediului intestinal indusă de CKD a declanșat metabolismul anormal al microbiotei intestinale (Feng și colab., 2019). În plus, am descoperit că, la șobolanii cu anemie CKD, nivelurile de SCFA au fost scăzute în opt tipuri. De exemplu, anomalia produșilor finali metabolici, adică SCFA, ar putea rezulta din progresia CKD.

Polizaharidele, unul dintre ingredientele active, au fost găsite în diferite plante medicinale, cum ar fi Dioscoreae Rhizoma, Schisandra Chinensis, Astragali Radix și Jujubae Fructus. Polizaharidele pot fi fermentate și degradate de microbiota intestinală. Ca rezultat, polizaharidele sunt prezentate ca un substrat pentru metabolizarea microbiotei intestinale în SCFA sau sunt considerate că posedă un efect asemănător prebioticului pentru a ameliora compoziția microbiotei intestinale pentru a facilita producția de SCFA (Cai et al., 2019). În acest studiu, descoperirile noastre au arătat că polizaharidele din jujube au stimulat eliberarea microbiotei intestinale de SCFA, cum ar fi acidul acetic, acidul propanoic, acidul izobutiric, 2-acidul metil butiric la șobolanii CKD. În plus, după tratamentul cu JP, nivelul SCFA în rinichii de șobolan cu anemie CKD a fost îmbunătățit, iar tendința de schimbare a fost în concordanță cu proba de fecale. Pe baza cercetărilor existente, relația dintre SCFA și CKD a devenit treptat clară. De exemplu, sa raportat că acidul acetic modulează sistemul imunitar și ameliorează acutarinichirănireprin inhibarea semnalizării NADPH oxidazei în celulele T (Al-Harbi și colab., 2018). S-a dovedit că acidul propanoic previne progresia CKD indusă de adenină prin receptorul 2 al acizilor grași liberi (FFA2) și FFA3 (Mikami și colab., 2020). Prin urmare, am dedus că recuperarea nivelului de SCFA la rinichi a fost benefică pentru un rinichi bolnav. S-a raportat că JP a crescut diversitatea microbiotei intestinale și crește abundența relativă a microbiotei active SCFA (Bacteroides) la șoarecii cu cancer colorectal (Ji și colab., 2020). În plus, JP a crescut concentrația de SCFA totale în probele fecale (Ji et al., 2019). Prin urmare, am dedus că JP ar putea stimula producția de SCFA pentru a atinge scopul de a întârzia progresia CKD. JP ar putea fi, de asemenea, un substrat de metabolism pentru microbiota dominantă SCFA pentru a stimula producția de SCFA în CKD, sau o componentă asemănătoare prebioticului pentru a restabili mediul intestinal, în special diversitatea microbiotei dominante SCFA, și pentru a promova în continuare eliberarea de SCFA, astfel încât previne progresia BRC.

În general, SCFA (fără carbon decât 6) cu greutate moleculară mică și polaritate chimică ridicată sunt dificil de analizat direct prin abordări cromatografice. O strategie de derivatizare chimică marcată cu izotopi a SCFA ar putea îmbunătăți sensibilitatea instrumentului și ar reduce erorile de analiză, ceea ce a oferit o strategie utilă pentru determinarea SCFA în analiza LC-MS/MS (Higashi & Ogawa, 2016). Recent, abordările marcate cu dansil hidrazină au fost utilizate în mod satisfăcător în detectarea metaboliților țintă din plasmă umană care conțin acid carboxilic (Chen & Zhang, 2020). În sprijinul acestui lucru, în acest studiu, am dezvoltat în continuare derivatizarea chimică bazată pe abordarea LC-MS/MS pentru determinarea a 8 SCFA în fecalele de șobolan. SCFA sunt produse de microbiota intestinală și aproape 10% SCFA sunt excretați prin fecale (Boets et al., 2015). Prin urmare, o analiză a probelor fecale de SCFA poate reflecta direct modificările mediului intestinal și are mai multă referință în analiza comună multi-omică între SCFA și microbiota intestinală. În special, validarea instabilității, am constatat că SCFA-urile marcate cu dansil hidrazină au fost instabile la temperatura camerei, iar intensitatea lor pe spectrul de masă a arătat o tendință de scădere în timp, dar ar putea rămâne stabilă timp de 48 de ore la 4 ◦ C. Astfel, după derivatizarea SCFA, analiții trebuie menținuți la 4 ◦C înainte de analiză.

În stadiile avansate de CKD 4-5, deficiența producției de EPO limitează eritropoieza, care contribuie la cel mai critic factor în dezvoltarea anemiei renale (Sakashita, Tanaka și Nangaku, 2019). Tratamentul de rutină cu agenți de stimulare a eritropoiezei (ESA) pentru anemie este sugerat de ghidurile de practică clinică. Cu toate acestea, siguranța ESA care este asociată cu un risc crescut de deces și cu evenimente cardiovasculare trebuie să fie îngrijorată (Thavarajah & Choi, 2019). La pacienții cu anemie renală, expresia EPO trebuia să fie consistentă sau crescută la vedere în comparație cu corpurile sănătoase (Babitt & Lin, 2012). Într-o etapă incipientă, nivelul EPO a prezentat tendința de upgrade, în timp ce în etapa târzie, nivelul EPO a arătat o tendință descendentă în comparație cu stadiul inițial, chiar mai scăzută decât în ​​mod normal (Panjeta, Tahirovic, Sofi, ´ Cori's și Derviˇsevi). ´c, 2017). Corespunzător experimentelor anterioare (Chen et al., 2019; Wang et al., 2020), rezultatele noastre au indicat că nivelul seric de EPO a fost scăzut la șobolanii cu anemie CKD. Am detectat, respectiv, ARNm EPO renal și nivelul proteinei la șobolanii CKD, iar nivelul proteinei EPO renale a fost ușor scăzut în comparație cu grupul simulat, în timp ce cantitatea de ARNm EPO renală a fost degradată și gradul său a fost mai mare decât nivelul EPO seric. Rinichiul este sursa primară de sinteza EPO la adulți și la pacienții cu ERSD.rinichipăstrează încă capacitatea de a produce eritropoietină (Bernhardt et al., 2010). Pentru a corecta nivelurile serice endogene de EPO și pentru a se adapta la anemie renală, producția de EPO renală a fost activată, deșirinichirănireexpresie redusă de ARNm EPO (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). După tratamentul cu JP, nivelul seric de EPO a fost crescut, precum și nivelurile de ARNm și proteine ​​​​ePO renale au fost ambele îmbunătățite. În studiul nostru anterior, JP ar putea stimula activitatea transcripțională HRE și a îmbunătățit gena EPO (Chen și colab., 2014). Prin urmare, am speculat că JP ar putea recupera nivelul EPO seric de șobolan CKD la anemie renală reglată, care poate fi contribuită prin expresia stimulată a genei EPO a rinichilor la nivel de ARNm.

În cortex, HIF-1 a fost găsit în principal în tubular și HIF-2 în interstițiul renal. Deoarece EPO este produsă în principal de fibroblaste în care HIF-2 este co-locat, acest lucru susține că HIF-2 poate fi luat în considerare pentru reglarea producției de EPO (Maxwell, 2003). În studiul nostru, am descoperit că HIF-1 și HIF-2 ar putea fi activate de CKD, iar tratamentul cu JP ar putea stimula activitatea HIF-1 și HIF{-2 în comparație cu șobolanii CKD . S-a dovedit că HIF-2 are un rol major în reglarea producției de EPO (Kapitsinou și colab., 2010), în timp ce reglarea HIF-1 poate juca un efect de protecție renală în rinichi (Jiang et al., 2010). al., 2020), care îmbunătățește indirect producția de EPO. Producția de EPO renală a fost reglată mai întâi la nivel de ARNm, sub anemie sau hipoxie, expresia ARNm EPO ar putea fi crescută prin stimularea proteinei HIF. Anterior, cercetările farmacologice au arătat că jujube a stimulat expresia EPO prin reglarea nivelului proteinei HIF în modelul celular (Chen și colab., 2014, Lam și colab., 2016). Prin urmare, am dedus că JP poate regla expresia ARNm EPO prin intermediul proteinei HIF pentru a atinge scopul de a atenua anemiei renale.

În plus, pe baza rezultatelor actuale, speculăm că reducerea SCFA poate avea roluri cruciale în exprimarea EPO mediată de HIF, care contribuie la anemie CKD. În concordanță cu aceasta, a fost ilustrat că nivelul crescut de acid acetic a fost benefic pentru acetilarea HIF-2 și generarea complexului de proteină care leagă CREB-HIF 2 și a indus expresia EPO în continuare (Xu și colab., 2014). Acidul propionic a atenuat perturbarea mitocondrială, apoptoza hipocampului și deficitele neurologice prin calea HIF-1/ERK (Cheng și colab., 2019). În plus, sa constatat că acidul butiric stabilizează HIF-1, genele țintă active HIF pe celulele colonului și atenuează răspunsul inflamator al colonului (Kelly și colab., 2015). În studiul nostru, am descoperit că nivelurile de acid acetic, acid propanoic și acid butiric au fost semnificativ scăzute însoțite de expresia anormală a proteinei HIF la șobolani CKD, ceea ce a indicat că stabilitatea HIF-ar putea fi legată de scăderea SCFA, iar SCFA-urile ar putea avea efectul de stabilizare a HIF pentru a regla expresia EPO.

5. Concluzii

În concluzie, am demonstrat că JP a îmbunătățit CKD și anemia asociată acesteia, al cărei mecanism a fost implicat în reglarea eliberării SCFA și producția de EPO. Și JP ar putea fi ingredientul bioactiv al jujubei pentru tratamentul anemiei. Aceste constatări pot oferi dovezi pentru dezvoltarea ulterioară a JP ca suplimente alimentare pentru tratamentul anemiei asociate cu CKD.

Declarație etică

Toate experimentele pe animale din cercetarea noastră au fost efectuate cu protocoale aprobate de Comitetul de etică al Universității de Medicină Chineză din Guangzhou și în conformitate cu Ghidul National Institutes of Health pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator (publicațiile NIH nr. 80-23, revizuită în 1996). Nu există nicio încălcare a liniilor directoare de mai sus în cercetarea noastră.

Mulțumiri

Această lucrare este susținută de Fundația de Științe Naturale din Provincia Guangdong (2018A030313305), Fundația de Științe Naturale din China (81804052, 81973577 și 82004248), Proiectul Planului de Științe și Tehnologie din Shenzhen (JSGG20191129102216637 și Biroul de Medicină Tradițională din Guangdong (provincia de Guangdong) 20191129102216637) 20201320).

Referințe

Al-Harbi, NO, Nadeem, A., Ahmad, SF, Alotaibi, MR, AlAsmari, AF, Alanazi, WA, … Ibrahim, KE (2018). Acidul gras cu lanț scurt, acetatul ameliorează sepsisul acut indusrinichirănireprin inhibarea semnalizării NADPH oxidazei în celulele T. International Imunopharmacology, 58, 24–31.
Babitt, JL și Lin, HY (2012). Mecanismele anemiei în CKD. Jurnalul Societății Americane de Nefrologie, 23(10), 1631–1634.
Bernhardt, WM, Wiesener, MS, Scigalla, P., Chou, J., Schmieder, RE, Günzler, V., … Eckardt, KU (2010). Inhibarea prolil hidroxilazelor crește producția de eritropoietină în ESRD. Jurnalul Societății Americane de Nefrologie, 21(12),
2151–2156.
Boets, E., Deroover, L., Houben, E., Vermeulen, K., Gomand, SV, Delcour, JA, … Verbeke, K. (2015). Cuantificarea producției de acizi grași cu catenă scurtă a colonului in vivo din inulină. Nutrienți, 7(11), 8916–8929.

Cai, Y., Liu, W., Lin, Y., Zhang, S., Zou, B., Xiao, D., … Xie, Z. (2019). Polizaharidele compuși ameliorează colita experimentală prin modularea compoziției și funcției microbiotei intestinale. Jurnalul de Gastroenterologie și Hepatologie, 34(9),1554–1562.

Chen, G. și Zhang, Q. (2020). Cuantificarea simultană a acizilor grași liberi și a acilcarnitinelor din probele de plasmă utilizând marcarea cu dansilhidrazină și cromatografia lichidă-spectrometrie de masă triplu quadrupol. Analitice și bioanaliticeChimie, 412(12), 2841–2849.

Chen, J., Lam, CT, Kong, AY, Zhang, WL, Zhan, JY, Bi, CW, … Tsim, KW (2014). Extractul de fruct Ziziphus jujuba (jujube) induce expresia eritropoietinei prin factorul inductibil de hipoxie-1 în celulele Hep3B cultivate. PlantaMedica, 80(17), 1622–1627.

Chen, J., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Li, Z., Qi, A., … Li, S. (2019). Decoctul Jian-Pi-Yi-Shen ameliorează anemia renală la 5/6 șobolani nefrectomizați: producția de eritropoietină prin semnalizarea factorului inductibil de hipoxie. Medicină complementară și alternativă bazată pe dovezi, 2019, 1–8.
Cheng, Y., Mai, Q., Zeng, X., Wang, H., Xiao, Y., Tang, L., … Ding, H. (2019). Propionatul ameliorează crizele induse de pentilenetetrazol, perturbarea mitocondrială, necroza neuronilor și deficitele neurologice la șoareci. Farmacologie biochimică, 169, articolul 113607.
Feng, YL, Cao, G., Chen, DQ, Vaziri, ND, Chen, L., Zhang, J., … Zhao, YY (2019). Microbiomul-metabolomica dezvăluie microbiota intestinală asociată cu metaboliții conjugați cu glicină și metabolismul poliaminei în boala cronică de rinichi. Cellular and Molecular Life Sciences, 76(24), 4961–4978.
Garrido, P., Ribeiro, S., Fernandes, J., Vala, H., Bronze-da-Rocha, E., Rocha-Pereira, P., … Reis, F. (2015). Dismetabolism fier-hepcidină, anemie și hipoxie renală, inflamație și fibroză în modelul de șobolan cu rinichi rămas. PLoS ONE, 10(4), articolul e124048.
Higashi, T. și Ogawa, S. (2016). Reactivi de derivatizare care intensifică ESI codificați cu izotopi pentru analiza diferențială, cuantificarea și profilarea metaboliților din probele biologice prin LC/MS: O revizuire. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 130, 181–193.
Ji, X., Hou, C., Gao, Y., Xue, Y., Yan, Y. și Guo, X. (2020). Analiza metagenomică a efectelor modulatoare ale microbiotei intestinale ale polizaharidelor jujube (Ziziphus jujuba Mill.) într-un model de șoarece cu cancer colorectal. Food & Function, 11(1), 163–173.
Ji, X., Hou, C., Yan, Y., Shi, M. și Liu, Y. (2020). Comparația caracterizării structurale și a activității antioxidante a polizaharidelor din fructele de jujube (Ziziphus jujuba Mill.). Jurnalul Internațional de Macromolecule Biologice, 149, 1008–1018.

Ji, X., Hou, C., Zhang, X., Han, L., Yin, S., Peng, Q., … Wang, M. (2019). Analiza microbiomemetabolomică a impactului Zizyphus jujuba cv. Consumul de polizaharide Muzao pe șoareci cu cancer colorectal microbiota fecală și metaboliți.Jurnalul Internațional de Macromolecule Biologice, 131, 1067–1076.

Ji, X., Peng, Q., Yuan, Y., Shen, J., Xie, X. și Wang, M. (2017). Izolarea, structurile și bioactivitățile polizaharidelor din fructele de jujube (Ziziphus jujuba Mill.): O revizuire. Food Chemistry, 227, 349–357.
Jiang, N., Zhao, H., Han, Y., Li, L., Xiong, S., Zeng, L., … Sun, L. (2020). HIF-1 ameliorează leziunea tubulară în nefropatia diabetică prin controlul mediat de HO-1-al dinamicii mitocondriale. Proliferare celulară, 53(11), articolul e12909.
Kapitsinou, PP, Liu, Q., Unger, TL, Rha, J., Davidoff, O., Keith, B., … Haase, VH (2010). HIF hepatic-2 reglează răspunsurile eritropoetice la hipoxie în anemia renală. Sânge, 116(16), 3039–3048.
Kelly, CJ, Zheng, L., Campbell, EL, Saeedi, B., Scholz, CC, Bayless, AJ, … Colgan, SP (2015). Diafonia dintre acizii grași cu lanț scurt derivați de microbiotă și HIF epitelial intestinal mărește funcția de barieră tisulară. Cell Host & Microbe, 17 (5), 662–671.
Koh, A., De Vadder, F., Kovatcheva-Datchary, P., & B¨ ackhed, F. (2016). De la fibre alimentare la fiziologia gazdei: acizi grași cu lanț scurt ca metaboliți bacterieni cheie. Cell, 165(6), 1332–1345.
Lakshmanan, AP, Al, ZM, Ali, BH și Terranegra, A. (2021). Influența gumei de salcâm prebiotice asupra compoziției microbiomului intestinal la șobolani cu boală renală cronică experimentală. Biomedicina & Farmacoterapia, 133, art
110992.
Lam, C., Chan, PH, Lee, P., Lau, KM, Kong, A., Gong, A., … Tsim, K. (2016). Evaluarea chimică și biologică a decocturilor din plante care conțin Jujube (Ziziphus jujuba): Inducerea expresiei eritropoietinei în culturi. Jurnalul de cromatografie Tehnologii analitice în științele biomedicale și ale vieții, 1026, 254–262.
Lappin, TR și Lee, FS (2019). Actualizare privind mutațiile în HIF: calea EPO și rolul lor în eritrocitoză. Analize de sânge, 37, articolul 100590.
LeBlanc, JG, Chain, F., Martín, R., Bermúdez-Humaran, ´ LG, Courau, S., & Langella, P. (2017). Efecte benefice asupra metabolismului energetic al gazdei a acizilor grași cu lanț scurt și vitaminelor produse de bacteriile comensale și probiotice. Fabrici de celule microbiene, 16 (1), 79.
Li, L., Ma, L. și Fu, P. (2017). Acizi grași cu lanț scurt și boli de rinichi derivați din microbiota intestinală. Drug Design Development and Therapy, 11, 3531–3542.
Li, L. și Shi, JY (2013). Analiza componentelor polizaharide și lipidice ale cortexului cinnamomi prin GC-MS. Zhong Yao Cai, 36(4), 578–580.
Liu, G., Liu, X., Zhang, Y., Zhang, F., Wei, T., Yang, M., … Zhao, Z. (2015). Efectele hepatoprotectoare ale polizaharidelor extrase din Zizyphus jujube cv. Huanghetanzao. Jurnalul Internațional de Macromolecule Biologice, 76, 169–175.

Locatelli, F., Fishbane, S., Block, GA și Macdougall, IC (2017). Factori inductibili de hipoxie pentru tratamentul anemiei la pacienții cu boli renale cronice. Jurnalul American de Nefrologie, 45(3), 187–199.

Locatelli, F., Hannedouche, T., Fishbane, S., Morgan, Z., Oguey, D. și White, WB (2019). Siguranța cardiovasculară și mortalitatea pentru orice cauză a metoxi polietilenei

Glicol-Epoetină beta și alți agenți de stimulare a eritropoiezei în anemiei CKD: un studiu randomizat de non-inferioritate. Jurnalul clinic al Societății Americane de Nefrologie: CJASN, 14(12), 1701–1710.
Maxwell, P. (2003). HIF-1: un sistem de răspuns la oxigen cu relevanță specială pentru rinichi. Jurnalul Societății Americane de Nefrologie, 14(11), 2712–2722.
Meijers, BK și Evenepoel, P. (2011). Axa intestin-rinichi: sulfat de indoxil, sulfat de p-crezil și progresia CKD. Nephrology Dialysis Transplantation, 26(3), 759–761.
Mikami, D., Kobayashi, M., Uwada, J., Yazawa, T., Kamiyama, K., Nishimori, K., … Iwano, M. (2020). Acidul gras cu lanț scurt atenuează boala renală cronică indusă de adenină prin căile FFA2 și FFA3. Biochimica Biophysica Acta-Molecular and Cell Biology Lipids, 1865(6), Articolul 158666.
Morton, DB și Griffiths, PH (1985). Orientări privind recunoașterea durerii, stresului și disconfortului la animalele de experiment și o ipoteză pentru evaluare. Fișă veterinară, 116(16), 431–436.
Panjeta, M., Tahirovi´c, I., Sofi´c, E., Cori´´c, J., & Derviˇsevi´c, A. (2017). Interpretarea nivelurilor eritropoietinei și hemoglobinei la pacienții cu diferite stadii de boală cronică de rinichi. Journal of Medical Biochemistry, 36(2), 145–152.
Pappa, M., Dounousi, E., Duni, A. și Katopodis, K. (2015). Mecanisme fiziopatologice mai puțin cunoscute ale anemiei la pacienții cu nefropatie diabetică. Urologie și nefrologie internațională, 47(8), 1365–1372.
Sakashita, M., Tanaka, T. și Nangaku, M. (2019). Inhibitori ai domeniului Factor Inductibil de Hipoxie-Prolil hidroxilază pentru a trata anemia în boala cronică de rinichi. Contributions to Nephrology, 198, 112–123. https://doi.org/10.1159/000496531.
Schodel, ¨ J. și Ratcliffe, PJ (2019). Mecanisme de semnalizare a hipoxiei: noi implicații pentru nefrologie. Nature Reviews Nephrology, 15(10), 641–659.
Tako, E., Glahn, RP, Knez, M. și Stangoulis, JC (2014). Efectul prebioticelor din grâu asupra populației bacteriene intestinale și a stării de fier a puilor de carne cu deficit de fier. Jurnalul de nutriție, 13, 58.
Tang, WH, Wang, Z., Kennedy, DJ, Wu, Y., Buffa, JA, Agatisa-Boyle, B., … Hazen, SL (2015). Calea N-oxidului de trimetilamină (TMAO) dependentă de microbiota intestinală contribuie atât la dezvoltarea insuficienței renale, cât și la riscul de mortalitate în boala cronică de rinichi. Cercetare în circulație, 116(3), 448–455.
Thavarajah, S. și Choi, MJ (2019). Utilizarea agenților de stimulare a eritropoiezei la pacienții cu CKD și cancer: o abordare clinică. Jurnalul American de Boli de Rinichi, 74(5), 667–674.
Wang, F., Yu, H., Huang, S., Zheng, L., Zheng, P., Zhang, S., … Chen, J. (2020). Jian-PiYi-Shen reglează expresia proteinelor de reciclare a EPO și a fierului la șobolanii anemici cu boală cronică de rinichi: acumularea factorului inductibil de hipoxie-2 prin semnalizarea ERK. Medicină complementară și alternativă bazată pe dovezi, 2020, 8894257.
Wang, S., Lv, D., Jiang, S., Jiang, J., Liang, M., Hou, F., … Chen, Y. (2019). Reducerea cantitativă a acizilor grași cu lanț scurt, în special butiratul, contribuie la progresia bolii cronice de rinichi. Clinical Science, 133(17), 1857–1870.
Webster, AC, Nagler, EV, Morton, RL și Masson, P. (2017). Boala cronică de rinichi. Lancet (Londra, Anglia), 389(10075), 1238–1252.
Xie, X., Yang, X., Wu, J., Ma, J., Wei, W., Fei, X., … Wang, M. (2020). Trib1 contribuie la recuperarea din leziunea renală acută indusă de ischemie/reperfuzie prin reglarea polarizării macrofagelor renale. Frontiers in Immunology, 11, 473.
Xu, M., Nagati, JS, Xie, J., Li, J., Walters, H., Moon, YA, … Garcia, JA (2014). Un comutator de acetat reglează eritropoieza de stres. Nature Medicine, 20(9), 1018–1026.
Yue, Y., Wu, S., Li, Z., Li, J., Li, X., Xiang, J., … Ding, H. (2015). Polizaharidele de jujube sălbatice protejează împotriva bolilor inflamatorii intestinale experimentale, permițând îmbunătățirea funcției de barieră intestinală. Food & Function, 6(8), 2568–2577.

Zhao, S. și Li, L. (2018). LC-MS de etichetare cu izotop de dansilhidrazină pentru profilarea submetabolomului acidului carboxilic complet. Analytical Chemistry, 90(22), 13514–13522.

Zheng, L., Chen, S., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Yang, X., … Chen, J. (2020). Răspunsurile distincte ale microbiotei intestinale la decoctul Jian-Pi-Yi-Shen sunt asociate cu rezultate clinice îmbunătățite la 5/6 șobolani nefrectomizați. Frontiers in Pharmacology, 11, 604.