Activitatea multidirecțională a Bakuchiolului împotriva mecanismelor celulare ale îmbătrânirii faciale - Dovezi experimentale pentru o abordare holistică de tratament Partea 1

Abstract

Obiectiv: Îmbătrânirea pielii este un proces multifactorial care implică formarea de specii reactive de oxigen, inflamație consecutivă cu viabilitate redusă a celulelor epidermice și dermice și deteriorarea rezultată a matricei extracelulare. Modalitățile eficiente de tratament dermo-cosmetic ar trebui să abordeze în mod ideal aceste semne distinctive într-o abordare holistică. Aici, am determinat profilul de activitate corespunzător al bakuchiolului, o meroterpenă derivată din plante, într-o serie de studii in vitro, ex vivo și in vivo și l-am comparat cu retinol, considerat în prezent standardul de aur în produsele cosmetice anti-îmbătrânire topice.

Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. prin radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate puternică de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și poate elimina speciile reactive de oxigen, poate preveni degradarea colagenului indusă de radicalii liberi și, de asemenea, are un efect bun de reparare asupra daunelor anionice a radicalilor liberi de timină.

Faceți clic pe Antioxidant Cistanche Tubulosa

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Metode: Capacitatea și puterea antioxidantă a bakuchiolului și retinolului au fost analizate prin măsurarea reducerii 2,2′-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) prin dezintegrarea de absorbție și, respectiv, prin spectroscopie de rezonanță a spinului electronic. Efecte asupra nivelurilor de prostaglandine E2 (PGE2), factor inhibitor al migrației macrofagelor (MIF), factor de creștere a fibroblastelor 7 (FGF7), colagen tip I și VII (COL1A1, COL7A1), nivelurile de fibronectină (FN), precum și metabolizarea tetrazoliului solubil în apă 1 (WST-1) au fost determinate în fibroblaste dermice umane. Regenerarea epidermică a fost evaluată utilizând un model de vindecare a rănilor in vitro. Nivelurile de proteină FN au fost analizate ex vivo după tratamentul cu o formulare care conține bakuchiol, retinol sau vehicul utilizând un lichid blister de aspirație. Îmbunătățirea stării pielii a fost determinată in vivo într-un studiu de comparație cu fețe separate după aplicarea bakuchiolului sau vehiculului.

Rezultate: Spre deosebire de retinol, bakuchiolul a demonstrat o eficacitate antioxidantă ridicată. Nivelurile de PGE2 și MIF au scăzut semnificativ atât de bakuchiol, cât și de retinol. Bakuchiol, dar nu retinolul, a crescut semnificativ nivelurile de proteină FGF7. Nivelurile de metabolizare a WST-1 au fost crescute semnificativ de bakuchiol și retinol. Aplicarea de Bakuchiol și retinol a dus la o creștere semnificativă a nivelurilor de proteine ​​COL1A1, COL7A1 și FN. Rănile suplimentate cu bakuchiol, dar nu cu retinol, au prezentat o creștere semnificativă a regenerării epidermei. Din punct de vedere clinic, zonele tratate cu o formulare care conține bakuchiol au prezentat o creștere semnificativă statistic a valorilor proteinei FN după o aplicare de 4-săptămână în comparație cu zonele netratate și zonele tratate cu vehicul.

Concluzie: Aceste date oferă dovezi pentru eficacitatea multidirecțională a bakuchiolului împotriva semnelor distinctive celulare ale îmbătrânirii pielii. Profilul său de activitate împărtășește unele caracteristici comune cu retinolul, dar demonstrează câteva efecte pozitive necunoscute până acum în studiile noastre, și anume stimularea componentei critice a matricei extracelulare FN și regenerarea epidermică accelerată și vindecarea rănilor.

CUVINTE CHEIE

anti-îmbătrânire, bakuchiol, susținere a revendicării in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fiziologia/structurile pielii

INTRODUCERE

Pielea îmbătrânită se caracterizează prin riduri, pigmentare neuniformă, rugozitate a pielii și laxitate. Aceste semne clinice sunt rezultatul modificărilor structurale și metabolice cauzate de procese de îmbătrânire intrinsecă și extrinsecă. Îmbătrânirea intrinsecă a fost atribuită unor factori precum scurtarea telomerilor, inflamația cronică, mutațiile unice ale ADN-ului mitocondrial și radicalii liberi [1]. Pielea îmbătrânită mai cuprinde o reducere a sistemelor sale antioxidante[2]. De asemenea, rata de proliferare celulară scade din cauza procesului biologic de îmbătrânire care duce la o pierdere a structurii și funcției pielii. Îmbătrânirea extrinsecă este declanșată în primul rând de iradierea UV și influențele mediului. Aceste insulte au ca rezultat leziuni ale pielii care întăresc declinul cronologic și accelerează îmbătrânirea cutanată. Pielea umană își pierde în continuare capacitatea de a face față condițiilor inflamatorii pe parcursul îmbătrânirii, rezultând o stare proinflamatoare cronică.

Aplicarea locală a retinoizilor, cum ar fi acidul retinoic, retina sau retinolul este considerată standardul clinic de aur pentru tratamentul anti-îmbătrânire eficient [3, 4]. Mecanismele moleculare ale retinoizilor au fost descrise pe larg [5–10]. Retinoizii topici reduc în mod eficient semnele vizibile de îmbătrânire, cum ar fi ridurile, laxitatea sau rugozitatea [4, 11] și scad depigmentarea pielii foto deteriorate, inclusiv livedo reticularis și lentiginele actinice [12]. Cu toate acestea, tratamentul topic cu retinoizi poate duce la uscarea și iritația pielii dependente de concentrație [13]. Deoarece aplicarea retinolului provoacă reacții adverse minore în comparație cu alți retinoizi precum acidul retinoic [6, 14], acesta este un activ utilizat pe scară largă în tratamentul cosmetic al îmbătrânirii faciale.

Spre deosebire de retinolul care a fost aplicat în produsele de îngrijire a pielii din 1984 [15], bakuchiolul a câștigat atenția doar recent ca un compus anti-îmbătrânire local. Bakuchiol este o meroterpenă (Figura 1) care este derivată din semințele de Psoralea corylifolia. A fost folosit în medicina tradițională indiană și chineză de secole [16, 17] și este bine tolerat [18]. S-a sugerat că Bakuchiol prezintă funcții asemănătoare retinolului, deoarece într-un model de înlocuitor al pielii, ambele substanțe prezintă modele similare de expresie a genelor in vitro [19] și o îmbunătățire a leziunii foto cutanate in vivo [20]. Prin urmare, a fost denumit și analog retinoid funcțional derivat din plante [21]. Studiile ulterioare au demonstrat efecte antioxidante [19, 22–24], antiinflamatorii [19, 25–27], antibacteriene [28] precum și efecte antiproliferative și antitumorale [29, 30] ale bakuchiolului.

Pentru a ameliora și a întârzia în mod eficient procesele multifactoriale de îmbătrânire a pielii, diferite mecanisme celulare trebuie abordate într-o abordare integrată. Bakuchiol modulează simultan diverse ținte făcându-l un compus promițător în acest sens. Deoarece stresurile oxidative și inflamatorii sunt strâns legate de îmbătrânirea cutanată, prevenirea lor prin bakuchiol ar putea promova starea generală a pielii. Cu toate acestea, calitatea dovezilor științifice actuale a fost recent evaluată critic [31]. În acest context, am determinat (i) capacitățile antioxidante și (ii) antiinflamatorii ale bakuchiolului și retinolului și am examinat capacitatea acestora de a îmbunătăți metabolismul celular și sinteza factorului de creștere 7 rezumat ca (iii) activitatea celulară. Am analizat în continuare dacă bakuchiolul și retinolul influențează expresia anumitor componente (iv) ECM și îmbunătățesc (v) regenerarea epidermică și reepitelizarea. În cele din urmă, a fost efectuat un studiu in vivo pentru a verifica capacitatea clinică anti-îmbătrânire a bakuchiolului în pielea umană.

MATERIALE ȘI METODE

Materiale de testare

Bakuchiol a fost obținut de la Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Statele Unite). Retinolul a fost achiziționat de la Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Statele Unite). Pentru experimentele de cultură celulară, ambele substanțe de testat au fost proaspăt diluate în DMSO (Merck, Darmstadt, Germania). Pentru soluțiile stoc de DMSO, concentrația aplicată a substanțelor de testat a fost de 1000-ori mai mare decât cea mai mare concentrație aplicată în cultura celulară, rezultând 0,1% DMSO în mediu sau tampon. Alte diluții au fost efectuate utilizând mediu sau tampon cu 0,1 procente DMSO. Prin urmare, toate experimentele de cultură celulară au fost efectuate în prezența a 0,1% DMSO. Pentru studiile in vivo, retinolul local a fost formulat în același vehicul ca bakuchiol.

Studii in vitro

Determinarea capacitatii antioxidante

Bakuchiol, retinolul (ambele aplicate la o concentrație finală de 100μM) sau troloxul standard înalt (Merck, concentrație finală de 25μM) au fost diluate în DMSO. Pe scurt, 30μL din acești compuși (concentrație de 10-ori mai mare decât concentrația finală a testului) au fost adăugați pe o placă cu fund plat de 96-godeuri. Ulterior, s-au adăugat rapid 270μL de 39ug/mL DPPH (Merck, diluat într-un amestec apă/etanol 1:1) în fiecare godeu, obținând o concentrație finală de 10% DMSO. Ca martor, soluția de DPPH a fost incubată cu DMSO fără substanțe de testat. În plus, controalele martor au fost efectuate prin incubarea bakuchiolului sau retinolului cu apă/etanol (1:1) sau numai amestecul apă/etanol (1:1) care conține 10% DMSO în absența DPPH. După 10, 30 și 60 de minute, absorbanța la 524 nm a fost măsurată folosind un cititor de microplăci multimod Spark (Tecan, Männedorf, Elveția). Semnalele controalelor goale au fost scăzute.

Determinarea puterii antioxidante

HDF-urile au fost însămânțate în plăci cu {{{0}}godeuri cu 150 000 celule/godeu într-un mediu de 2 ml care conține 10% ser de vițel și incubate timp de 24 de ore. Ulterior, mediul vechi a fost aruncat și celulele au fost tratate cu un mediu care conține 2% ser de vițel și bakuchiol sau retinol într-o concentrație finală de 10 μM. HDF-urile de control au fost suplimentate cu 0,1% DMSO lipsit de bakuchiol sau retinol. Controalele martor au fost efectuate prin incubarea unui mediu fără celule. După 24 de ore, mediul condiționat a fost transferat pe coloanele de centrifugare a concentratorului de proteine ​​Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Germania) și concentrat de aproximativ 10-ori. Volumele tuturor supernatantelor medii au fost egalizate prin readăugarea curgerii. Nivelurile de proteină FGF7 ale mediului condiționat concentrat au fost analizate utilizând un kit ELISA disponibil comercial, urmând instrucțiunile producătorului (Bio-Techne GmbH). Măsurătorile au fost efectuate folosind un cititor de microplăci multimod Spark (Tecan). Semnalele obținute de la controalele martor au fost scăzute și nivelurile de proteină FGF7 au fost normalizate la numărul total de celule care a fost determinat utilizând un contor de celule (Scepter, Merck).

Determinarea metabolizării WST-1

HDF-urile au fost însămânțate în plăci de {{{0}}godeuri cu 3000 celule/godeu în mediu de 100 μL care conține 10% ser de vițel și incubate timp de 24 de ore. Mediul epuizat a fost aruncat, iar celulele au fost tratate cu 100 μL mediu care conține retinol sau bakuchiol într-o concentrație finală de 1 μM sau, respectiv, 10 μM. HDF-urile de control au fost suplimentate cu 0,1% DMSO lipsit de bakuchiol sau retinol. Ca un control suplimentar, celulele au fost tratate cu 10% triton-X (Merck). Controalele martor au fost efectuate prin incubarea unui mediu fără celule. După 72 de ore, celulele au fost colorate folosind reactivul de proliferare celulară disponibil comercial WST-1 conform instrucțiunilor producătorului (Merck). Absorbanța a fost măsurată la 450 și 620 nm folosind un cititor de microplăci Tecan infinity M200 (Tecan). Diferența dintre aceste măsurători a fost utilizată pentru analiză. Semnalele controalelor goale au fost scăzute.

Determinarea nivelurilor de proteine ​​COL1A1 și COL7A1

HDF-urile au fost însămânțate în plăci cu {{{0}}godeuri cu 10  000 celule/godeu în mediu de 100μL care conține 10% ser de vițel și incubate timp de 24 de ore. Bakuchiol sau retinolul a fost diluat în mediu de 100 μL fără ser de vițel și suplimentat cu mediul prezent într-o concentrație finală de 1 μM sau, respectiv, 10 μM. Controlul a fost suplimentat cu 100μL de mediu fără ser, obținând o concentrație de 0,1% DMSO corespunzătoare tratamentului cu retinol și bakuchiol. Ca standard înalt, s-au aplicat 10 ng/mL factor de creștere transformant (TGF-) și 11 ug/mL ascorbat de sodiu (ambele Merck). Controalele martor au fost efectuate prin incubarea unui mediu fără celule. După 4 ore, nivelurile de proteine ​​COL1A1 și COL7A1 ale mediului condiționat au fost analizate utilizând truse ELISA disponibile comercial, urmând instrucțiunile producătorului (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Statele Unite). Măsurătorile au fost efectuate folosind un cititor de microplăci multimod Spark (Tecan). Semnalele controalelor goale au fost scăzute. Nivelurile de proteine ​​COL1A1 și COL7A1 au fost normalizate la cantitatea totală de proteină lizată celulară care a fost determinată utilizând un kit de analiză a acidului bicinconinic disponibil comercial (Thermo Fisher Scientific) conform instrucțiunilor producătorului. O condiție prealabilă pentru utilizarea rezultatelor a fost reacția pozitivă a celulelor la standardul înalt de TGF și ascorbat de sodiu.

Pentru analiza nivelurilor de proteină COL7A1 după un timp de incubare prelungit, HDF-urile au fost însămânțate în plăci de 96-godeuri cu 3000 de celule/godeu în mediu de 100 μL care conține 10% ser de vițel. Toate tratamentele, controalele și analiza au fost efectuate așa cum este descris mai sus, cu excepția faptului că bakuchiolul și retinolul au fost utilizate doar într-o concentrație finală de 10 μM. Celulele au fost recoltate când a fost atinsă subconfluența, în special, după 72 sau 96 de ore.

Determinarea nivelurilor de proteină FN

HDF-urile au fost însămânțate în plăci cu {{{0}}godeuri cu 10 000 celule/godeu în mediu de 100 μL care conține 10% ser de vițel și incubate timp de 24 de ore. Mediul vechi a fost înlocuit cu un mediu care conține 2% ser de vițel și bakuchiol sau retinol într-o concentrație finală de 10 μM. Martorul a fost suplimentat cu 0,1% DMSO lipsit de bakuchiol sau retinol. Controalele martor au fost efectuate prin incubarea unui mediu fără celule. După 24 de ore, nivelurile de proteină FN ale mediului condiționat au fost analizate folosind un kit ELISA disponibil comercial, urmând instrucțiunile producătorului (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Statele Unite). Măsurătorile au fost efectuate folosind un cititor de microplăci multimod Spark (Tecan). Semnalele controalelor goale au fost scăzute. Nivelurile de proteină FN au fost normalizate la cantitatea totală de proteină lizat de celule care a fost determinată așa cum s-a menționat mai sus.

Determinarea regenerării epidermice într-un model de vindecare a rănilor in vitro

Experimentele au fost efectuate așa cum s-a descris anterior [34]. Pentru tratamentul modelelor de vindecare a rănilor, bakuchiolul sau retinolul a fost diluat în DPBS și adăugat într-o concentrație finală de 100μM în regiunea plăgii (5 μL per rană). Rănile de referință au fost suplimentate cu aceeași cantitate de DPBS care conține 0,1% DMSO fără bakuchiol sau retinol. Rănile suplimentare au fost lăsate netratate ca un control suplimentar. Modelele de vindecare a rănilor au fost incubate timp de 43 de ore la 95% umiditate, 5% CO2 și 37 de grade. Ulterior, probele au fost congelate rapid în izopentan pre-răcit cu azot lichid și depozitate la -80 de grade. Reepitelizarea a fost evaluată în secțiuni de criostat colorate cu hematoxilină și eozină prin măsurarea lungimii epidermei regenerate folosind un microscop Leica DMLS (10×), o cameră CCD Leica MC 170 HD și software-ul Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Germania). Cuantificarea a fost efectuată într-un mod orb.

Studiile in vivo I și II

Pentru ambele studii in vivo, recomandările din versiunea actuală a Declarației de la Helsinki și ghidul Conferinței internaționale privind armonizarea bunelor practici clinice au fost respectate ca fiind aplicabile unui studiu cosmetic. Protocolul de studiu I a fost aprobat de Comitetul Independent de Etică Freiburg (cod feki 08/2610). În ambele studii, toți voluntarii au furnizat consimțământul scris și informat. Subiecții aveau pielea sănătoasă, aparțineau tipului de piele Fitzpatrick I până la III și începerea sau schimbarea medicației hormonale a fost un criteriu de excludere.

Pe parcursul unei perioade de precondiționare de 10-zi și pe întreaga perioadă de studiu, subiecților li sa cerut să se abțină de la expunerea la UV în zonele de testare. Activitățile de promovare a transpirației au fost interzise cu 24 de ore înainte de evaluările programate.

Un investigator a demonstrat aplicarea corectă a formulărilor folosind o cantitate, care corespundea regimului obișnuit de îngrijire a pielii subiecților.

Studiul I: Determinarea ex vivo a nivelurilor de proteină FN

Din 52 de subiecți de sex feminin, care au fost înscriși în acest studiu controlat cu vehicul, 33 de subiecți au finalizat studiul, iar datele a 31 de subiecți (30-64 de ani, vârsta medie: 50,9 ani) au fost incluse în analiza datelor. Abandonurile au apărut din cauza pandemiei SARS-CoV-2 și din motive personale (13 subiecți), precum și din cauza reacțiilor de incompatibilitate (cinci subiecți, cauzate de tratamentul cu retinol). Reacțiile de incompatibilitate mediate de retinol, precum și problemele de eșantionare au determinat un număr diferit de subiecți testați pentru fiecare afecțiune (a se vedea rezultatele pentru detalii).

Cu șapte zile înainte de evaluările programate, utilizarea produselor de îngrijire a pielii, demachiante și săpunuri pe antebrațe a fost interzisă. În prima zi de studiu, au fost stabilite patru zone de testare pe antebrațele interne. Pe două zone de testare, două formulări de verum au fost aplicate pentru a conține {{0}},5% bakuchiol sau, respectiv, 0,15% retinol. Într-un aviz publicat de Comitetul științific pentru siguranța consumatorilor în 2016, concentrația de retinol aplicată a fost considerată un tratament cosmetic [35]. În celelalte două zone de testare a fost folosit vehiculul corespunzător sau zona a fost lăsată netratată. Poziționarea locațiilor de tratament a fost modificată. După 4 săptămâni de aplicare de două ori pe zi a formulărilor de testare, voluntarii s-au întors la institutul de testare. În fiecare zonă de testare, au fost generate trei blistere de aspirație (7 mm în diametru) așa cum s-a descris anterior [36, 37]. Pe scurt, pe zonele de testare au fost puse ventuze cu blistere personalizate și a fost aplicat un vid de 550-850 mbar. După aproximativ 90–150 de minute, când s-au format blisterele de aspirație, vidul a fost eliberat, iar fluidul a fost aspirat din blister folosind un ac 24-calibre. Fluidele au fost congelate imediat la -80 de grade pe gheață carbonică până la analiză. Nivelurile de proteină FN au fost cuantificate în probele de lichid din blister de aspirație folosind un kit ELISA disponibil comercial (R&D Systems). Măsurătorile au fost efectuate folosind un cititor de microplăci multimod Spark (Tecan). Nivelurile de FN au fost normalizate la nivelurile totale de proteine ​​ale probelor de lichid de aspirație ale blisterelor care au fost determinate așa cum s-a menționat mai sus.

Studiul II: Determinarea in vivo a îmbunătățirii stării pielii

În total, 43 de femei voluntare au fost înscrise în acest studiu de comparație cu fețe despărțite controlat de vehicule. Conform evaluărilor medicale, subiecții au prezentat tipuri de piele mixte (uscat, normal, gras și mixt). 34 de subiecți (39–66 de ani, vârsta medie: 56,2 ani) au finalizat studiul și au fost incluși în analiză. Abandonurile au fost cauzate de probleme tehnice și de neconformitate (opt subiecți), precum și de reacții de incompatibilitate (un subiect, cauzate de vehicul și tratament cu bakuchiol).

Cu două săptămâni înainte de începerea studiului și pe toată perioada studiului, voluntarilor li sa cerut să se abțină de la utilizarea produselor autobronzante sau a tratamentelor cosmetice faciale intensive (de exemplu, îndepărtarea straturilor superficiale ale pielii). În timpul perioadei de precondiționare de 10-zi și pe tot parcursul studiului, subiecților li s-a cerut să se abțină de la efectuarea de machiaj permanent, tratamente pentru gene și sprâncene, măști pentru ochi și plasturi. Cu trei zile înainte de prima evaluare, subiecților li s-a cerut să se abțină de la utilizarea produselor de îngrijire a feței. În seara dinaintea notării programate, subiecții au fost obligați să oprească aplicarea produselor cosmetice decorative.

În primele 7 zile ale fazei de precondiționare de 10-zile, subiecții au primit un borcan de cremă care conținea crema vehiculului de studiu (lipsă orice informații despre conținut) și l-au aplicat de două ori pe zi pe întreaga lor față. La momentul inițial, voluntarii au efectuat o auto-evaluare. În special, ei au evaluat vizual aspectul general al pielii feței, observând prospețimea și strălucirea acesteia, precum și orice semne de îmbătrânire a pielii. Prin urmare, a fost aplicată o scară vizuală analogică variind de la 1 (foarte obosit, îmbătrânit) la 10 (foarte proaspăt, fără semne de piele îmbătrânită). Apoi, subiecții au primit două borcane de cremă orbite care conțineau verum (vehiculul care conține 0,5 la sută bakuchiol) sau, respectiv, vehiculul, fără nicio specificație privind conținutul. Pe parcursul perioadei de studiu de 12 săptămâni, o parte a feței a fost tratată de două ori pe zi cu verum, în timp ce cealaltă parte a feței a fost tratată de două ori pe zi cu vehicul. Alocarea tratamentelor la locurile de testare a fost permutată. După 12 săptămâni de utilizare obișnuită, voluntarii au efectuat din nou auto-evaluarea după cum s-a menționat mai sus.

analize statistice

Analizele statistice au fost efectuate folosind Microsoft Excel pentru Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Statele Unite), SAS Software Package pentru Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Germania) și GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego). , California, Statele Unite).

Distribuția normală a datelor a fost evaluată folosind un test Shapiro-Wilk. Dacă distribuția normală a fost confirmată, a fost efectuată o analiză a varianței cu măsură repetată (RM-ANOVA) cu comparație post-hoc pe perechi. Dacă ipoteza normalității a fost respinsă, rangurile transformate de Blom ale datelor originale au fost evaluate utilizând un RM-ANOVA cu comparație post-hoc pe perechi sau datele originale au fost evaluate utilizând un test de rang de semn Wilcoxon. Toate testele statistice au fost cu două fețe la un nivel de semnificație de alfa=0.05.

REZULTATE

Studii in vitro

Determinarea efectelor antioxidante

Pentru a analiza (i) efectele antioxidante ale bakuchiolului și retinolului, am efectuat două teste diferite folosind DPPH ca moleculă detector.

Capacitate antioxidantă

Capacitatea antioxidantă a fost determinată prin măsurarea reducerii DPPH prin degradarea sa de absorbție. Troloxul de standard înalt a arătat o capacitate antioxidantă semnificativ crescută în raport cu controlul (p=0.0000 pentru toate momentele de timp indicate), verificând măsurarea corespunzătoare (Figura 2a). În ceea ce privește controlul, absorbanța din probele tratate cu bakuchiol a fost, de asemenea, redusă semnificativ în toate momentele investigate (10 min: p=0.0003, 30 și 60 min: p=0.0000 ) demonstrând o capacitate antioxidantă crescută. În schimb, retinolul nu a arătat o capacitate antioxidantă semnificativă în comparație cu martor.

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】