Partea 2: Echinacozidul inhibă eliberarea de glutamat prin suprimarea Ca2 dependent de tensiune plus intrarea și protein kinaza C în terminalele nervoase cerebrale de șobolan

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 și Su Jane Wang 3*

Vă rugăm să faceți clic aici înapoi la partea 1

3.2 Implicații terapeutice

Excitotoxicitatea, un proces patologic cauzat de eliberarea excesivă de glutamat și activarea receptorului de glutamat, este cauza majoră a morții neuronale în tulburările cerebrale acute și cronice, cum ar fi accidentul vascular cerebral, leziunile cerebrale traumatice, bolile Parkinson și Alzheimer [13,41] și strategiile terapeutice. care implică inhibarea eliberării glutamatului poate fi strategii neuroprotectoare promițătoare pentru tratarea unor astfel de boli. S-a confirmat că echinacozidul pătrunde în bariera hemato-encefalică (BBB) ​​și prezintă efecte neuroprotectoare în diferite modele in vivo de neurotoxicitate [8,10-12,42]. Deși mecanismul acestor efecte neuroprotectoare nu este complet înțeles, au fost raportate câteva mecanisme posibile, inclusiv inhibarea răspunsului inflamator, stabilizarea funcției mitocondriale, antioxidarea, eliminarea radicalilor liberi și imitarea funcției neurotrofice [5,9,12,42]. În studiul actual, capacitatea deechinacozidpentru a reduce eliberarea de glutamat de la terminalele nervoase poate explica, de asemenea, parțial mecanismul său neuroprotector. Cu toate acestea, dacă acest efect contribuie la potențialul terapeutic aparent alechinacozidîn tulburările cerebrale asociate cu excitotoxicitatea glutamatului justifică cercetări suplimentare.

Efectele neuroprotectoare alecistancel echinacozid

4.Materiale și metode

4.1. Produse chimice

Esterul fura-2-acetoximetilic (Fura{-2-AM) și iodură de 3',3',3'-dipropiltiadicarbocianină [DiSC3(5)] au fost achiziționate de la Invitrogen (Carlsbad, CA, SUA). o-conotoxină MVIIC, rotlerin, 2-[1-({3-dimetilaminopropil)indol-3-il]{-3-(indol{-3-il)maleimidă ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro- 13-metil-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pirolo[3,{ {27}}c]carbazol-12-propanenitril (Go6976) și N-[2-(p-bromocinamilamino)etil]-5-izochinolinesulfonamidă (H89) au fost achiziționate de la Tocris Bioscience (Bristol, Marea Britanie) ).Echinacozidul, dantrolen, DL-treo-beta-benzil-oxiaspartat (DL-TBOA), 7-clor-5-({2-clorofen){-1,5-dihidro{ {10}},1-benzotiazepin{-2(3H)-onă (CGP37157), 2-({2-amino{-3- metoxifenil)-4H -1-benzopiran-4-one) (PD98059), etilenglicol bis(-aminoetil eter)-acid N,N,N/,N/-tetraacetic (EGTA) și toți ceilalți reactivi au fost achiziționați de la Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, SUA).

4.2. animale

S-au folosit șobolani Sprague-Dawley masculi de două luni. Animalele au fost găzduite în condiții de mediu standardizate (22 ± 1 oC; 50% umiditate relativă; 12 h ciclu de lumină/întuneric) și au permis acces nelimitat la hrană și apă. Animalele au fost ucise prin decapitare și cortexul cerebral a fost îndepărtat rapid la 4 oC. Procedurile experimentale au fost aprobate de Comitetul instituțional de îngrijire și utilizare a animalelor Fu Jen (A10259), în conformitate cu Ghidul Institutului Național de Sănătate pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator. Toate eforturile au fost făcute pentru a minimiza suferința animalelor și pentru a utiliza un număr minim de animale necesar pentru a produce rezultate fiabile.

4.3. Preparate sinaptozomale

Sinaptozomii au fost purificați din cortexul cerebral al șobolanilor pe gradienți discontinui Percoll așa cum s-a descris anterior [43,44]. Pe scurt, țesutul a fost omogenizat în mediu care conține 0,32 M zaharoză (pH 7,4), omogenatul a fost centrifugat timp de 10 min la 3000× g (5{{25} }0{0 rpm într-un rotor JA 25,5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, SUA) și 4 oC, iar supernatantul a fost centrifugat din nou timp de 12 min la 14.500 × g (11, 000 rpm într-un rotor JA 25,5). Peletul a fost resuspendat ușor în zaharoză 0,32 M (pH 7,4) și o parte alicotă din această suspensie sinaptozomală (2 mL) a fost plasată pe un gradient discontinuu Percoll de 3 mL care conține 0,32 M zaharoză, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiol și 0,25 mM. 3%, 10% și 23% Percoll (pH 7,4). După centrifugare la 32.500 x g (16.500 rpm într-un rotor JA 20,5) timp de 7 minute la 4 oC, sinaptozomii au fost recuperați din benzile Percoll de 10% și 23% și au fost diluați într-un volum final de 30 ml de Mediu tampon HEPES (140 mM NaCI, 5 mM KCI, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2-6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glucoză și 10 mM HEPES (pH 7,4)). După o centrifugare ulterioară la 27,000x g (15.000 rpm într-un JA 25,5) timp de 10 minute, peletul de sinaptozom a fost resuspendat în 3 mL de mediu tampon HEPES, iar conținutul de proteine ​​a fost determinat folosind un test Bradford. În cele din urmă, 0,5 mg de suspensie de sinaptozomi au fost diluate în 10 ml de mediu tampon HEPES și centrifugate la 3000 x g (5000 rpm într-un rotor JA 20.1) timp de 10 min. Supernatantul a fost aruncat, iar peletele care conțin sinaptozomii au fost depozitate pe gheață și utilizate în 4-6 ore.

iarbă de cistanche

4.4. Eliberarea de glutamat

Eliberarea de glutamat a fost testată prin fluorimetrie online așa cum a fost descris anterior [45,46]. Peletele sinaptozomale au fost resuspendate în mediu tampon HEPES (0.5 mg/mL) și preincubate la 37 oC timp de 10 minute în prezența a 16 uM albumină serică bovină pentru a lega orice acizi grași liberi eliberați din sinaptozomi în timpul preincubării. Un alicot de 2-mL din sinaptozomi a fost transferat într-o cuvă agitată care conține 2 mM NADP plus, 50 de unități de glutamat dehidrogenază și 1,2 mM CaCl2, iar fluorescența NADPH a fost măsurată într-un LS{{14} Perkin-Elmer. }} spectrofluorimetru (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SUA) la lungimi de undă de excitare și de emisie de 340 și, respectiv, 460 nm. Deoarece sinaptozomii nu sunt susceptibili de stimulare electrică, blocantul canalelor de potasiu 4-aminopiridina a fost folosit pentru a stimula eliberarea de glutamat. 4-aminopiridina destabiliza potențialul membranei și se crede că provoacă Na spontană repetitivă plus depolarizare dependentă de canal, care aproximează îndeaproape depolarizarea in vivo a terminalului sinaptic care duce la activarea canalelor de Ca2 plus dependente de tensiune și eliberarea neurotransmițătorului [47] ]. Datele au fost obținute la intervale de 2 s. Un standard de glutamat exogen (5 nmol) a fost adăugat la sfârșitul fiecărui experiment. Valoarea modificării de fluorescență produsă de adăugarea standard a fost utilizată pentru a calcula glutamatul eliberat ca nanomoli de glutamat per miligram de proteină sinaptozomală (nmol/mg). Valorile de eliberare citate în text sunt niveluri atinse la starea de echilibru după 5 min de depolarizare (nmol/mg/5 min). Datele cumulate au fost analizate folosind foi de calcul Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, SUA) și MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA).

4.5. Potentialul membranei plasmatice

Potențialul membranei plasmatice a fost determinat cu un colorant sensibil la potențialul de membrană, DiSC3(5) [48]. Sinaptozomii au fost resuspendați în mediu tampon HEPES și alicote de 2 mL au fost transferate într-o cuvă agitată care conține 5 uM DiSC3(5) la 37 oC într-un spectrofluorometru Perkin–Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA , STATELE UNITE ALE AMERICII). După ce a lăsat amestecul să se echilibreze timp de 3 minute, fluorescența a fost determinată la lungimi de undă de excitare și de emisie de 646, respectiv 674 nm. Datele au fost colectate la intervale de 2 s. Datele cumulate au fost analizate folosind MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA) și exprimate în unități de fluorescență.

4.6. Ca2 citosolic plus concentrația ([Ca2 plus ]C)

[Ca2 plus ]C a fost măsurat cu indicatorul Ca2 plus fura-2. Sinaptozomii (0,5 mg/mL) au fost preincubați în mediu tampon HEPES care conține 5 uM fura-2 și 0,1 mM CaCl2, timp de 30 min la 37 oC într-o eprubetă agitată. . După încărcarea fura-2, sinaptozomii au fost centrifugați într-o microcentrifugă timp de 30 s la 3000 × g (5000 rpm). Peletele sinaptozomale au fost resuspendate în mediu tampon HEPES, iar suspensia sinaptozomală a fost agitată într-o cuvă termostatată într-un spectrofluorometru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SUA). S-a adăugat CaCI2 (1 mM) după 3 min şi s-au făcut adiţii suplimentare după încă 10 min. Datele de fluorescență au fost acumulate la lungimi de undă de excitare de 340 și 380 nm (lungime de undă de emisie 505 nm) la intervale de 2 s. [Ca2 plus ]C (nM) a fost calculat folosind procedurile de calibrare [49] și ecuațiile descrise anterior [50]. Datele cumulate au fost analizate folosind MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA).

4.7. Western Blotting

Sinaptozomii au fost omogenizați într-un tampon de liză (tampon HEPES 10 mM, pH 7,4), 1% Triton X-100 și amestec de inhibitori de protează. Lizatele au fost clarificate prin centrifugare și concentrația proteinei a fost determinată folosind un kit de testare a proteinelor (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, SUA). Cantități egale de proteine ​​au fost separate prin electroforeză pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă (SDS-PAGE) și transferate pe membrana de nitroceluloză. Membranele au fost blocate cu soluție salină tamponată cu Tris care conținea 5% lapte cu conținut scăzut de grăsimi și incubate cu anticorp primar corespunzător (fosfo-protein kinaza C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, SUA) peste noapte la 4 oC. După trei spălări în soluție salină tamponată cu Tris, membrana a fost apoi tratată cu anticorpul secundar conjugat cu peroxidază de hrean (1:3000) timp de 1 oră la temperatura camerei. Membranele au fost apoi spălate de cel puțin trei ori cu soluție salină tamponată cu Tris și vizualizate folosind sistemul de chemiluminiscență îmbunătățit (Amersham, Buckinghamshire, Marea Britanie). O parte alicotă de probe a fost încărcată și testată cu un anticorp anti-PKC pentru detectarea PKC ca control de încărcare. Nivelul de expresie sau fosforilare a fost evaluat prin densitatea benzii, care a fost cuantificată prin densitometrie. Cuantificarea densitometrică a benzilor a fost analizată folosind software-ul Syngene (Synoptics, Cambridge, Marea Britanie).

4.8. Analize statistice

Datele au fost obținute dintr-un singur preparat sinaptozomal și nu au fost independente unele de altele. Pentru a testa semnificația efectului unui medicament față de control, a fost utilizat testul t Student cu două cozi. Când a fost necesară o comparație suplimentară (cum ar fi dacă un al doilea tratament a influențat acțiunea echinacozidei), a fost utilizat un ANOVA unidirecțional urmat de testul Tukey. Analiza a fost finalizată prin intermediul software-ului SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, SUA). Datele sunt exprimate ca medie ± SEM; semnificația a fost evaluată la p < 0.05="" pentru="" toate="" măsurile="">

cistanche

5. Concluzii

Acesta este primul studiu care demonstrează că echinacozidul inhibă eliberarea de glutamat de la sinaptozomii cerebrocorticali de șobolan prin reducerea afluxului de Ca2 plus prin canalele Cav2.2 și Cav2.1, iar această inhibare a eliberării este probabil dependentă de suprimarea căii proteinei kinazei C, cel puțin în parte. Prezenta descoperire este valoroasă, deoarece oferă o nouă perspectivă asupra mecanismelor de acțiune a echinacozidei în creier.

Mulțumiri: această lucrare a fost susținută de un grant de la Ministerul Științei și Tehnologiei (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Contribuții ale autorului: Tzu Yu Lin și Su Jane Wang au conceput și conceput experimentele; Cheng Wei Lu a efectuat experimentele; Cheng Wei Lu și Shu Kuei Huang au analizat datele; Su Jane Wang a scris lucrarea.

Conflicte de interese: Autorii declară că nu există conflicte de interese.

extract de plante de cistanche

Referințe

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Analiza glicozidelor feniletanoide ale Herba cistanchis prin RP-HPLC. Acta Pharm. Păcat. 1997, 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, Alaska; Meyer, AS; Molgaard, P. Efectele antioxidante sinergice ale alkamidelor, derivaților de acid cafeic și fracțiilor de polizaharide din Echinacea purpurea asupra oxidării in vitro a lipoproteinelor umane de joasă densitate. J. Agric. Food Chim. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodularea mediată de un sirop de plante care conține un extract standardizat de rădăcină de Echinacea: un studiu pilot la subiecți umani sănătoși asupra expresiei genei citokinelor. Phytomedicine 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. El, WJ; Fang, TH; Tu, PF Progresul cercetării privind activitățile farmacologice ale echinacozidei. China J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH Echinacoside salvează celulele neuronale SHSY5Y din apoptoza indusă de TNFalfa. EURO. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Activitățile neuroprotectoare in vitro ale glicozidelor feniletanoide din Callicarpa dichotoma. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH Echinacoside protejează împotriva 6-disfuncției mitocondriale induse de hidroxidopamină și a răspunsurilor inflamatorii în celulele PC12 prin reducerea producției de ROS. Evid. Complement pe bază. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Expunerea tranzitorie la echinacozidă este suficientă pentru a activa semnalizarea Trk și pentru a proteja celulele neuronale de rotenonă. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Efectele neuroprotective ale echinacozidei în modelul MPTP de șoarece al bolii Parkinson. EURO. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Efectele echinacozidei asupra nivelurilor histio-centrale ale masei active la șobolanii de ocluzie a arterei cerebrale medii. Biomed. Mediul. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Inversarea prin extracte apoase de Cistanche tubulosa din deficiențe comportamentale în modelul de șobolan asemănător bolii Alzheimer: Relevanța pentru depunerea de amiloid și funcția neurotransmițătorului central. Complement BMC. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Efectele neurotrofice și neurorescue ale echinacozidei în modelul de șoarece MPTP subacut al bolii Parkinson. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamatul ca neurotransmițător în creier: revizuire a fiziologiei și patologiei. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Nu, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK Coenzima Q10 inhibă excitotoxicitatea glutamatului și alterarea mitocondrială mediată de stresul oxidativ într-un model de șoarece de glaucom. Investig. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Calciu și leziune neuronală excitotoxică. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Receptorii de glutamat, neurotoxicitate și neurodegenerare. Pflugerii. Arc. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Mecanismele moleculare ale morții celulare neuronale excitotoxice mediate de receptorii de glutamat. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotecția prin antagoniști ai receptorilor de glutamat împotriva morții celulelor excitotoxice induse de convulsii în creierul îmbătrânit. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Efectele neuroprotectoare ale NMDA și ale antagoniștilor receptorilor de glutamat metabotropi de grup I împotriva neurodegenerării induse de homocisteină în hipocampul de șobolan: studiu in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Rolul excitotoxicității în boala neurodegenerativă: implicații pentru terapie. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Abordări terapeutice pe bază de glutamat: studii clinice cu antagonişti NMDA.Curr. Opinează. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordán, J.; Hernández-Guijo, JM Minociclina neuroprotectoare deprimă neurotransmisia glutamatergică și semnalizarea Ca2 plus în neuronii hipocampului. EURO. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantina deprimă eliberarea de glutamat prin inhibarea Ca2 dependentă de tensiune plus intrarea și protein kinaza C la terminalele nervoase ale cortexului cerebral de șobolan: un mecanism independent de receptorul NMDA. Neurochema. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Antagonistul necompetitiv al receptorului glutamat 5 metabotropic (E)-2-metil-6- stiril-piridina (SIB1893) deprimă eliberarea de glutamat prin inhibarea Ca2 dependentă de tensiune plus intrarea în terminalele nervoase cerebrocorticale de șobolan (sinaptozomi). J. Pharmacol. Exp. Acolo. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA O metodă rapidă pentru izolarea sinaptozomilor pe gradienți Percoll. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE eliberare de glutamat dependent de proteine ​​din astrocite.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Abordări terapeutice bazate pe glutamat: țintirea sistemului de transport al glutamatului.

Curr. Opinează. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Dovlecel, R.; Ronca-Testoni, S. Reticulul sarcoplasmatic Ca2 plus canal/receptor de rianodină: Modularea prin efectori endogeni, medicamente și stări de boală. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Protein kinaza C delta mediată citotoxicitatea 6-hidroxidopaminei prin activarea susținută a kinazei 1/2 reglată de semnal extracelular în celulele PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Ricke, G.; Marks, F. Rottlerin, un nou inhibitor al proteinei kinazei. Biochim. Biophys. Res. comun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, DG; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Calcium-dependent and-dependent release of glutamate from synaptosomes monitored by continuous fluorometrie. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Cuplarea receptorilor neurotransmițătorilor la canalele ionice din creier. Science 1988, 241.545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. Inhibarea presinaptică a eliberării neurotransmițătorilor provocate. Tendințe Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Caracterizarea farmacologică a canalelor presinaptice de calciu folosind măsurători biochimice subsecunde ale neurosecreției sinaptozomale. Neuropharmacology 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Cuplare diferențială a canalelor de calciu de tip N și P/Q la exocitoza glutamatului în cortexul cerebral de șobolan. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Modularea presinaptică a eliberării glutamatului vizează diferite canale de calciu în terminalele nervoase cerebrocorticale de șobolan. EURO. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Long, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN Receptorii terminali nervoși GABAA activează semnalizarea Ca2 plus/dependentă de calmodulină pentru a inhiba Ca2 dependent de tensiune plus eliberarea de influx și glutamat. J. Biol. Chim. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Unghi, JM; Negru, ED; Joyal, JL; Saci, DB; Madara, JL Reglarea dependentă de PKC a rezistenței transepiteliale: Rolurile MLC și MLC kinazei. A.m. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Reglarea secreției de neurotransmițători de către protein kinaza C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, DG; Pocock, JM Fosforilarea sinapsinei I și MARCKS în terminalele nervoase este mediată de intrarea Ca2 plus printr-un canal Ca2 plus sensibil la Aga-GI, care este cuplat cu exocitoza glutamatului. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, TP; Urenjak, J. Transmiterea glutamatergică alterată în tulburările neurologice: de la glutamat extracelular ridicat la eficacitatea sinaptică excesivă. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacozidul inhibă fibrilizarea amiloidă a HEWL și protejează împotriva neurotoxicității induse de A. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispidulina inhibă eliberarea de glutamat la terminalele nervoase cerebrocorticale de șobolan. Toxicol. apli. Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidin inhibă eliberarea de glutamat și exercită neuroprotecție împotriva excitotoxicității induse de acidul kainic în hipocampul șobolanilor. Neurotoxicologie 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, DG; Sihra, TS Sinaptozomii posedă un bazin exocitotic de glutamat. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, un medicament antihistaminic, inhibă eliberarea de glutamat la terminalele nervoase cerebrocorticale ale șobolanului. EURO. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Potențialele de acțiune repetitive în terminalele nervoase izolate în prezența 4-aminopiridinei: efecte asupra eliberării de Ca2 plus liber citosolic și de glutamat. J. Neurochem. 1989, 53,1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Dependența ionică a potențialului de membrană și a răspunsurilor legate de receptorul glutamat în sinaptoneurozomi măsurați cu un colorant cu cian, DiSC2(5).J. Neurochema. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Ca2 localizat plus intrarea efectuează preferabil defosforilarea proteinelor, fosforilarea și eliberarea de glutamat. J. Biol. Chim. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY O nouă generație de indicatori Ca2 plus cu proprietăți de fluorescență mult îmbunătățite. J. Biol. Chim. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]