PARTEA 2 Echinacoside inhibă eliberarea glutamat prin suprimarea dependente de tensiune Ca2 + intrare și proteină kinaza C în șobolan cerebrocortical terminale nervoase

Pentru mai multe informații, vă rugăm să contactați:Joanna.jia@wecistanche.com

CLICK AICI PENTRU A PARTEA 1

3. Discuții

În acest studiu, echinacozida, un compus activ înHerba Cistanche, inhibat4-aminopiridina-evocat glutamat eliberarea în șobolan cortexul cerebral terminale nervoase. Mecanismele posibile care stau la baza pentru inhibarea echinacozid mediate de eliberarea de glutamat sunt investigate în continuare și discutate aici.

Cistanche deserticola are multe efecte, click aici pentru a afla mai multe

3.1. Mecanisme care stau la baza Echinacoside mediate inhibarea glutamat eliberarea de glutamat eliberarea

evocată de 4-aminopiridină cuprinde două componente: o componentă dependentă de Ca2+ relevantă din punct de vedere fiziologic, care este produsă prin exocitoza veziculelor sinaptice care conțin glutamat; și o componentă independentă de Ca2+, care provine din depolarizarea prelungită, provocând o schimbare a membranei potențial mediată a statului stabil al transportatorului de glutamat spre direcția exterioară, afectând astfel efluxul de glutamat citosolic [31]. Aici, am observat căechinacozidănu a inhibat semnificativ eliberarea de glutamat 4-aminopiridina-evocat în prezența unui mediu ca2 +-free (Ca2 +-eliberare independentă). În plus, cu privire la observatechinacozidă-inhibarea mediată a eliberării de glutamat 4-aminopiridină a fost prevenită în mod eficient de bafilomicina A1 (care epuizează conținutul de glutamat al veziculelor sinaptice), dar nu și de DL-TBOA (care inhibă neselectiv toate subtipurile de transportor de aminoacizi excitatori). Aceste rezultate sugerează căechinacozidăafectează exocitoza dependentă de Ca2+ de eliberare de glutamat fără a afecta efluxul citosolic independent ca2 + de glutamat prin inversarea membranei plasmatice terminale nervoase transportator de glutamat. În terminalele sinaptice, inhibarea canalului Na+ sau activarea canalului K+ stabilizează excitabilitatea membranei și, prin urmare, a redus intrarea ca2+ evocată și eliberarea neurotransmițătorului [32,33]. Prin urmare, mecanismul potențial care stă la bazaechinacozidă-inhibarea eliberării glutamatului mediat implică o reducere a excitabilității sinaptozomale. Cu toate acestea, această posibilitate este de neconceput pe baza a două observații: (1) depolarizarea potențială a membranei 4-aminopiridină, măsurată cu membrana potențială colorant sensibil DiSC3(5) nu a fost afectată de adăugarea deechinacozidă; și (2) echinacozida nu a afectat eliberarea de glutamat 4-aminopiridină evocată ca2+-independentă, o componentă a eliberării care depinde numai de potențialul membranei [31]. Dacă efectul nu este cauzat de suprimarea excitabilității sinaptozomale, acesta se poate manifesta printr-o reducere a activității canalelor Cav2.2 (tip N) și Cav2.1 (tip P/Q) Ca2+ cuplate cu exocitoză glutamat în terminalele nervoase [34-36]. Prin utilizarea fura-2, demonstrăm căechinacozidăreduce semnificativ creșterea evocată de 4-aminopiridină a concentrației de Ca2+. În plus, datele noastre arată că efectul inhibitor alechinacozidăpe 4-aminopiridina-evocat glutamat eliberarea a scăzut de la 42.4% ̆ 2.3% la 12.1% ̆ 3.9% după expunerea la un blocant de Cav2.2 (N-tip) și Cav2.1 (P/Q-tip) Ca2 + canale. În plus, Curtea a observat căechinacozidăa continuat să inhibe în mod semnificativ 4-aminopiridina-evocat glutamat eliberarea în prezența intracelulare Ca2+ eliberarea inhibitori. Aceste rezultate indică faptul că suprimarea simultană a cav2.2 (N-tip) și Cav2.1 (P/Q-tip) Ca2 + activitatea canalului este mecanismul potențial care stau la bazaechinacozidă-inhibarea de eliberare glutamat mediate. Cu toate acestea, activarea combinată a activității canalului Cav2.2 (tip N) și Cav2.1 (tip P/Q) Ca2+ nu a putut bloca acțiuneaechinacozidăcomplet. Prin urmare, alte tipuri neidentificate de canale Ca2+ sau alte căi presinaptice pot fi implicate în inhibare. De exemplu, Receptorii GABAA sunt prezente la nivel presinaptic, și activarea lor a fost dovedit a inhiba Ca2+ afluxul și glutamat eliberarea [37]. În prezentul studiu, antagoniștii receptorilor GABAA SR95531 și bicuculline nu a blocat inhibarea echinacozid mediate de eliberarea de glutamat, sugerând că receptorii GABAA nu sunt implicate în reducerea dependente de tensiune Ca2 + activitatea canalului și în inhibarea ulterioară a eliberarea de glutamat.

Intrarea ca2+ prin canale Ca2+ dependente de tensiune activează mai multe kinaze proteice asociate cu eliberarea glutamatului în terminalele nervoase, inclusiv proteina kinază activată mitogen, protein kinaza C și protein kinaza A. Aici, demonstrăm că inhibitorii proteinei kinazei C au antagonizat eficientechinacozidă-inhibarea mediată a eliberării glutamatului; cu toate acestea, inhibitorul de proteină kinază activat mitogen PD98059 sau inhibitorul proteinei kinazei A H89 a fost ineficient. În plus, acest lucru. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1006 8 din 13 fosforilarea indusă de 4-aminopiridină a proteinei kinază C a scăzut în sinapsomi după pretratarea cuechinacozidăla o concentrație eficientă pentru inhibarea eliberării glutamatului. Prin urmare, calea de semnalizare aechinacozidă-inhibarea de eliberare glutamat mediate poate implica protein kinaza C. Protein kinaza C este un important sistem de semnalizare intracelulară, care este prezent la nivel presinaptic și are un rol crucial în neurotransmițător exocitoză. De exemplu, mai multe proteine sinaptice implicate în traficul de vezicule sinaptice sau recrutarea și exocitoza, cum ar fi substratul C kinazei bogat în alanin, sunt fosforilate de proteina kinază C [38,39]. Acest proces de fosforilare poate fi crescut prin intrarea ca2+ stimulată de depolarizare, ceea ce facilitează eliberarea glutamatului [40]. Prin urmare, putem specula în mod rezonabil că efectul inhibitor alechinacozidăpe Ca2 + intrare observate aici poate reduce activitatea proteinelor kinaza C și, prin urmare, eliberarea de glutamat.

3.2. Implicații terapeutice

Excitotoxicitatea, un proces patologic cauzat de eliberarea excesivă de glutamat și activarea receptorilor de glutamat, este cauza majoră a morții neuronale în tulburările cerebrale acute și cronice, cum ar fi accidentul vascular cerebral, leziunile cerebrale traumatice, Parkinson și bolile Alzheimer [13,41], iar strategiile terapeutice care implică inhibarea eliberării glutamatului pot fi strategii neuroprotectoare promițătoare pentru tratarea unor astfel de boli.Echinacosidea fost confirmat pentru a penetra bariera sange - creier (BBB) și prezintă efecte neuroprotectoare în diferite modele in vivo de neurotoxicitate [8,10-12,42]. Deși mecanismul acestor efecte neuroprotectoare nu este complet înțeles, au fost raportate mai multe mecanisme posibile, inclusiv inhibarea răspunsului inflamator, stabilizarea funcției mitocondriale, antioxidarea, curățarea radicalilor liberi și funcția neurotrofică care imită [5,9,12,42]. În studiul actual, capacitatea de echinacozidă de a reduce eliberarea de glutamat din terminalele nervoase poate explica, de asemenea, parțial mecanismul său neuroprotector. Cu toate acestea, dacă acest efect contribuie la potențialul terapeutic aparent de echinacoside în tulburări cerebrale asociate cu glutamat excitotoxicitate justifică cercetări suplimentare.

4. Materiale și metode

4.1. Produse chimice

Esterul fura-2-acetoximetil (Fura-2-AM) și 3',3',3'-dipropiltiadicarbocianină iodură[DiSC3(5)] au fost achiziționate de la Invitrogen (Carlsbad, CA, SUA). ω-conotoxina MVIIC, rottlerin,2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimidă (GF109203X), 5,6,7,13-tetrahidro-13-metil-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pyrrolo[3,4-c]carbazol-12-propanenitril (Go6976) și N-[2-(pbromocinnamylamino)etil]-5-izochinolinăesulfonamidă (H89) au fost achiziționate de la TocrisBioscience (Bristol, Marea Britanie). Echinacozidă, dantrolenă, DL-threo-beta-benzil-oxyaspartat (DL-TBOA),7-cloro-5-(2-clorofenol)-1,5-dihidro-4,1-benzotiazepin-2(3H)-one (CGP37157), 2-(2-amino-3-metoxifenil)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059), etilenglicol bis(β-aminoetil eter)-N,N,N1,N1,N1-acid tetraacetic (EGTA) și toți ceilalți reactivi au fost achiziționați de la Sigma-Aldrich Co.(St. Louis, MO, SUA).

4.2. Animale

Au fost folosiți șobolani sprague-Dawley de sex masculin în vârstă de două luni. Animalele au fost adăpostite în condiții standardizate de mediu (22 ̆ 1 ̋C; 50% umiditate relativă; 12 ore ciclu lumină/ întuneric) și a permis accesul nelimitat la alimente și apă. Animalele au fost ucise prin decapitare, iar cortexul cerebral a fost îndepărtat rapid la 4 ̋C. Procedurile experimentale au fost aprobate de Comitetul de îngrijire și utilizare instituțională Fu Jen (A10259), în conformitate cu Ghidul Institutelor Naționale de Sănătate pentru Îngrijirea și Utilizarea Animalelor de Laborator. S-au depus toate eforturile pentru a minimiza suferința animalelor și pentru a utiliza un număr minim de animale necesare pentru a produce rezultate fiabile.

4.3. Preparate sinaptozomale

Synaptozomii au fost purificați din cortexul cerebral al șobolanilor pe gradienti percolli discontinui, așa cum este descris anterior [43,44]. Pe scurt, țesutul a fost omogenizat într-un mediu care conține zaharoză 0,32 M (pH 7,4), omogenatul a fost centrifugat timp de 10 minute la 3000ˆ g (5000 rpm într-un rotor JA 25,5; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, SUA) și 4 ̋C, iar supernatantul a fost centrifugat din nou timp de 12 minute la 14.500ˆ g (11.000 rpm într-un rotor JA 25.5). Peletul a fost ușor resuspendat în zaharoză 0,32 M (pH 7,4), iar o parte alicotă din această suspensie sinaptozomală (2 ml) a fost plasată pe un gradient discontinuu Percoll de 3 ml care conține zaharoză 0,32 M, 1 mM EDTA, 0,25 mM DL-ditiotreitol și 3%, 10% și 23% Percoll (pH 7,4). După centrifugare la 32.500ˆ g (16.500 rpm într-un rotor JA 20.5) timp de 7 minute la 4 ̋C, sinapnostomii au fost recuperați între benzile 10% și 23% Percoll și au fost diluați într-un volum final de 30 ml de mediu tampon HEPES (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHCO3, 1 mM MgCl2 ̈ 6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glucoză și 10 mM HEPES (pH 7,4)). După centrifugarea ulterioară la 27.000ˆ g (15.000 rpm într-un JA 25,5) timp de 10 minute, peletul synaptosome a fost resuspendat în 3 ml de mediu tampon HEPES, iar conținutul de proteine a fost determinat cu ajutorul unui test Bradford. În cele din urmă, 0,5 mg din suspensia de sinaptozomi a fost diluată în 10 ml de mediu tampon HEPES și centrifugată la 3000ˆ g (5000 rpm într-un rotor JA 20.1) timp de 10 minute. Supernatantul a fost aruncat, iar peletele care conțineau synaptozomii au fost depozitate pe gheață și utilizate în decurs de 4-6 ore.

4.4. Glutamat de presă

Eliberarea de glutamat a fost testată de fluorimetrie online, așa cum este descris anterior [45,46]. Peletele sinaptozomale au fost resuspendate în mediu tampon HEPES (0,5 mg/ml) și preincubate la 37 ̋C timp de 10 minute în prezența albuminei serice bovine de 16 μM pentru a lega orice acizi grași liberi eliberați din sinaptozomi în timpul preincubării. O parte alicotă de 2 ml a sinaptozomilor a fost transferată într-o cuvă agitată care conține 2 mM NADP+, 50 de unități de glutamat dehidrogenază și 1,2 mM CaCl2, iar fluorescența FL a NADPH a fost măsurată într-un spectrofluorimetru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SUA) la lungimi de undă de excitație și emisie de 340 și 460 nm, Respectiv. Deoarece synaptozomii nu sunt supuși stimulării electrice, blocantul de canale de potasiu 4-aminopiridină a fost folosit pentru a stimula eliberarea glutamatului. 4-aminopiridina destabilizează potențialul membranei și este gandit pentru a provoca spontane repetitive Na + dependente de canal depolarizare care aproximează îndeaproape depolarizarea in vivo a terminalului sinaptic care duce la activarea dependente de tensiune Ca2 + canale și eliberarea de neurotransmitator [47]. Datele au fost obținute la intervale de 2 s. Un standard de glutamat exogen (5 nmol) a fost adăugat la sfârșitul fiecărui experiment. Valoarea modificării fluorescenței FL produsă de adăugarea standard a fost utilizată pentru a calcula glutamatul eliberat ca nanomol de glutamat per miligram de proteină sinaptozomală (nmol/mg). Valorile de eliberare citate în text sunt niveluri atinse în stare stabilă după 5 min de depolarizare (nmol/mg/5 min). Datele cumulate au fost analizate folosind foi de calcul Lotus 1-2-3 (IBM, White Plains, NY, SUA) și MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA).

4.5. Potențialul membranei plasmatice

Potențialul membranei plasmatice a fost determinat cu un colorant sensibil la potențialul membranei, DiSC3(5) [48]. Synaptozomii au fost resuspendați în mediu tampon HEPES, iar 2 ml de părți alicote au fost transferate într-o cuvette agitată care conține 5 μM DiSC3(5) la 37 ̋C într-un spectrofluorometru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SUA). După ce a permis amestecului să se echilibreze timp de 3 minute, fluorescența FL a fost determinată la excitație și lungimi de undă de emisie de 646 și, respectiv, 674 nm. Datele au fost colectate la intervale de 2 s. Datele cumulate au fost analizate folosind MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA) și exprimate în unități de fluorescență FL.

4.6. Concentrația citosolică de Ca2+ ([Ca2+]C)

[Ca2+]C a fost măsurat cu indicatorul Ca2+ fura-2. Synaptozomii (0,5 mg/ml) au fost preincubați în mediu tampon HEPES conținând 5 μM fura-2 și 0,1 mM CaCl2, timp de 30 min la 37 ̋C într-o eprubetă agitată. După încărcarea fura-2, synaptozomii au fost centrifugați într-un microcentrifug timp de 30 s la 3000ˆ g (5000 rpm). Peletele sinaptozomale au fost resuspendate într-un mediu tampon HEPES, iar suspensia sinaptozomală a fost agitată într-o cuvă termostatată într-un spectrofluorometru Perkin-Elmer LS-55 (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, SUA). CaCl2 (1 mM) a fost adăugat după 3 minute și alte completări au fost făcute după încă 10 min. Datele de fluorescență au fost acumulate la lungimi de undă de excitație de 340 și 380 nm (lungime de undă de emisie 505 nm) la intervale de 2 s. [Ca2 +] C (nM) a fost calculat utilizând procedurile de calibrare [49] și ecuațiile descrise anterior [50]. Datele cumulate au fost analizate folosind MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, SUA).

4.7. Western Blotting

Synaptosomes au fost omogenizate într-un tampon de liză (10 mM hepes tampon, pH 7.4), 1% Triton X-100, și amestec inhibitor de protează. Lizatele au fost clarificate prin centrifugare, iar concentrația proteinelor a fost determinată cu ajutorul unui kit de testare a proteinelor (Laboratoarele Bio-Rad, Hercules, CA, SUA). Cantități egale de proteine au fost separate de electroforeza gelului dodecil sulfat-poliacrilamidă de sodiu (SDS-PAGE) și transferate în membrana nitrocelulozei. Membranele au fost blocate cu soluție salină tamponată cu Tris, care conținea 5% lapte cu conținut scăzut de grăsimi și incubată cu anticorpi primari corespunzători (fosfo-protein kinază C (tigaie), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, SUA) peste noapte la 4 ̋C. După trei spălări în soluție salină tamponată tris, membrana a fost apoi tratată cu anticorpul secundar conjugat cu peroxidază de hrean (1:3000) timp de 1 h la temperatura camerei. Membranele au fost apoi spălate de cel puțin trei ori cu soluție salină tamponată tris și vizualizate folosind sistemul îmbunătățit de chemiluminescență (Amersham, Buckinghamshire, Marea Britanie). O parte alicotă de probe a fost încărcată și sondată cu un anticorp anti-PKC pentru detectarea PKC ca un control al sarcinii. Nivelul de expresie sau fosforilare a fost evaluat prin densitatea benzii, care a fost cuantificată prin densitometrie. Densitometricquantifification de benzi a fost analizat cu ajutorul software-ului Syngene (Synoptics, Cambridge, Marea Britanie).

4.8. Analiza statistică

Datele au fost obținute dintr-un singur preparat synaptosomal și nu au fost independente una de cealaltă. Pentru a testa semnificația efectului unui medicament versus control, a fost utilizat un test t student cu două cozi. Atunci când a fost necesară o comparație suplimentară (cum ar fi dacă un al doilea tratament a influențat acțiunea echinacozidei), a fost utilizată o ANOVA cu sens unic urmată de testul tukey. Analiza a fost finalizată prin intermediul software-ului SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, SUA). Datele sunt exprimate ca medie ̆ S.E.M.; semnificația a fost evaluată la p< 0.05="" for="" all="" statistical="">

5. Concluzii

Acesta este primul studiu care demonstrează căechinacozidăinhibă eliberarea glutamatului din sinapctomii cerebrocorticali de șobolan prin reducerea afluxului de Ca2+ prin canalele Cav2.2 și Cav2.1, iar această inhibare a eliberării depinde probabil de suprimarea căii proteinei kinazei C, cel puțin parțial. Descoperirea actuală este valoroasă deoarece oferă o perspectivă inedită asupra mecanismelor de acțiune ale echinacozidei din creier.

Aprecieri:Această activitate a fost susținută printr-un grant din partea Ministerului Științei și Tehnologiei (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autor Contribuții:Tzu Yu Lin și Su Jane Wang au conceput și proiectat experimentele; Cheng Wei Lu a efectuat experimentele; Cheng Wei Lu și Shu Kuei Huang au analizat datele; Su Jane Wang a scris ziarul.

Conflicte de interese:Autorii nu declară conflicte de interese.

Conflicte de interese: Autorii nu declară niciun conflict de interese.

Referinţe

1. Tu, P.F.; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, Z.G.; Lou, Z.C. Analiza glicozidelor feniletanoide aleHerba cistanchede RP-HPLC. Acta Pharm. Păcat. 1997, 32, 294-300.

2. Dalby-Brown, L.; Barrett, H.; Landbo, A.K.; Meyer, A.S.; Molgaard, P. Efecte antioxidative sinergice ale alkamidelor, derivaților acidului cafeic și fracțiunilor de polizaharidă din Echinacea purpurea asupra oxidării in vitro a lipoproteinelor umane cu densitate mică. J. Agric. Alimentare Chem. 2005, 53, 9413-9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Imunomodulare mediate de un sirop de plante care conțin un extract standardizat de radacina de Echinacea: Un studiu pilot la subiecții umani sănătoși pe expresia genei citokine. Fitomedicina 2014, 21,1406-1410. [CrossRef] [PubMed]

4. El, W.J.; Fang, T.H.; Tu, P.F. Progresul cercetării privind activitățile farmacologice ale echinacozidei. China J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476-479.

5. Deng, M.; Zhao, J.Y.; Tu, PF.; Jiang, Y; Li, Z.B.; Wang, Y.H. Echinacoside salvează celulele neuronale SHSY5Y din apoptoza indusă de TNFalpha. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505,11-18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, K.A.; Cântat, S.H.; Parc, J.H.; Kim, S.H.; Lee, K.Y.; Kim, Y.C. Activități neuroprotectoare in vitro ale glicozidelor feniletanoide din dihotomia Callicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, Y.H.; Xuan, Z.H.; Tian, S.; Du, G.H. Echinacoside protejeaza impotriva 6-Hydroxydopamine induse de disfuncție mitocondrială și răspunsuri inflamatorii în celulele PC12 prin reducerea producției de ROS. Evid. Complement bazat. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Expunerea tranzitorie la echinacozidă este suficientă pentru a activa semnalizarea Trk și pentru a proteja celulele neuronale de rotenone. J. Neurochem. 2013,124, 571-580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, X.; Tu, P.; Pu, X. Efectele neuroprotectoare ale echinacoside în modelul mptp mouse-ul bolii Parkinson. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66-74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, L.L.; Chen, H.; Jiang, Y; Tu, PF.; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, C.Y Efectele echinacoside pe nivelurile histiocentrale de masă activă în șobolani ocluzia arterei cerebrale medii. Biomed. Mediul înconjurător. Sci. 2012, 25, 238-244. [PubMed]

11. Wu, C.R.; Lin, H.C.; Su, M.H. Inversarea prin extracte apoase deCistanche tubulosade la deficite comportamentale în boala Alzheimer, cum ar fi modelul de șobolan: Relevanță pentru depunerea amiloid și funcția de neurotransmitator central. Complement BMC. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Neurotrofice și neurorescue efectele Echinacoside în modelul de șoarece mptp subacută a bolii Parkinson. Creierul Res. 2010, 1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS glutamat ca un neurotransmitator la nivelul creierului: o revizuire a fiziologiei și patologiei. J. Nutr. 2000, 130, 1007S-1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, M.S.; Kim, K.Y.; Noh, Y.H.; Kim, H.; Kim, S.Y.; Weinreb, R.N.; Ju, W.K. Coenzima Q10 inhibă excitotoxicitatea glutamatului și modificarea mitocondrială mediată de stres oxidativ într-un model de glaucom. Investig. Oftalmol. Vis. Sci. 2014, 55, 993-1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW calciu și excitotoxice leziuni neuronale. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1994, 747,162-171. [CrossRef] [PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Receptorii de glutamat, neurotoxicitate, și neurodegenerare. Pflugers. Arch. 2010, 460, 525-542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Mecanisme moleculare de glutamat receptor mediate excitotoxice moartea celulelor neuronale. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107-129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotecție de antagoniști ai receptorilor glutamat împotriva induse de sechestru excitotoxice moartea celulelor în creier imbatranire. Exp. Neurol. 2010, 224, 207-218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpoui; S.; Rastegar, K.; Namavar, R. Efectele neuroprotectoare ale NMDA și grupa I antagoniști ai receptorilor glutamat metabotropic împotriva neurodegenerare induse de homocisteina în hipocampus șobolan: Studiu in vivo. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551-557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Rolul excitotoxicității în boala neurodegenerativă: implicații pentru terapie. Pharmacol. Ther. 1999, 81,163-221. [CrossRef]

21. Muir, KW glutamat pe bază de abordări terapeutice: Studiile clinice cu antagoniști NMDA. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6, 53-60. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, J.C.; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, F.J.; Sanchez-Prieto, J.; Gandia, L.; Garcia, A.G.; Iordania, J.; Hernandez-Guijo, J.M. Minociclina neuroprotectoare deprimă glutamatergic neurotransmisia și Ca2 + semnalizare în hippocampal neuroni. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481-2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, C.W.; Lin, T.Y.; Wang, SJ Memantine deprimă eliberarea de glutamat prin inhibarea dependente de tensiune Ca2 + intrare și protein kinaza C în șobolan cortexul cerebral terminale nervoase: Un mecanism de receptori NMDA-independent. Neurochem. Int. 2010, 57,168-176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, S.J.; Sihra, T.S. Glutamat metabotropic necompetitiv 5 antagonist al receptorilor (E)-2-metil-6- stirril-piridină (SIB1893) deprimă eliberarea glutamatului prin inhibarea intrării ca2+ dependente de tensiune în terminalele nervoase cerebrocorticale de șobolan (synaptosomes). J. Pharmacol. Exp. Ther. 2004, 309, 951-958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR.; Jarvie, P.E.; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, J.A. O metodă rapidă de izolare a sinaptozomilor pe gradientii Percoll. Creierul Res. 1986, 372,115-129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, R.T.; Haydon, P.G. SNARE dependente de proteine glutamat eliberarea din astrocite. J. Neurosci. 2000, 20, 666-673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamat pe bază de abordări terapeutice: Direcționarea sistemul de transport glutamat. Curr. Opin. Pharmacol. 2006, 6,103-107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Reticulul sarcoplasmatic Ca2+ canal/receptor ryanodine: Modularea prin efectori endogeni, medicamente și stări de boală. Pharmacol. Apoc. 1997, 49,1-51. [PubMed]

29. Ventilator, Y.; Li, J.; Zhang, Y.Q.; Jiang, L.H.; Zhang, Y.N.; Yan, C.Q. Protein kinaza C delta mediat citotoxicitate de 6-Hydroxydopamine prin intermediul susținute extracelulare semnal-reglementate kinaza 1/2 activare în celulele PC12. Neurol. Res. 2014, 36, 53-64. [CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Muller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rincke, G.; Marks, F. Rottlerin, un nou inhibitor al proteinei kinazei. Biochem. Biofizică. Res. Comuniune. 1994, 199, 93-98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, D.G.; Sihra, T.S.; Sanchez-Prieto, J. Eliberarea dependentă de calciu și independentă de glutamat din synaptozomi monitorizați prin fluorometrie continuă. J. Neurochem. 1987, 49, 50-57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, R.A. Cuplarea receptorilor neurotransmițători la canalele ionice din creier. Știință 1988, 241, 545-551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, L.G.; Saggau, P. Inhibarea presinaptic de eliberarea de neurotransmitator elicited. Tendințe Neurosci. 1997, 20, 204-212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Caracterizarea farmacologică a canalelor de calciu presinaptice folosind măsurători biochimice subsecunde de neurosecreție synaptosomal. Neurofarmacologie 1995, 34, 1469-1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. Cuplare diferențială a canalelor de calciu de tip N- și P/Q la exocitoza glutamatului în cortexul cerebral de șobolan. Nevroci. Letonă. 2002, 330, 29-32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Modularea presinaptică de eliberare de glutamat vizează diferite canale de calciu în terminalele nervoase cerebrocortical șobolan. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009-2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Lung, P; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, T.S.; Jovanovic, J.N. Receptorii GABAA terminale nervoase activa Ca2+ /Calmodulin-dependente de semnalizare pentru a inhiba tensiunea-gated Ca2+ afluxul și glutamat eliberarea. J. Biol. Chem. 2009,284, 8726-8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, J.R.; Angle, J.M.; Negru, E.D.; Joyal, J.L.; Saci, D.B.; Madara, J.L. PKC-dependente de regulament de rezistență transepitelială: Roluri de MLC și MLC kinaza. AmJ Physiol. 1999, 277, C554-C562. [PubMed]

39. Vaughan, P.F.; Walker, JH; Peters, C. Reglarea secreției neurotransmițătorului prin protein kinază C. Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125-155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, E.T.; Sihra, T.S.; Nicholls, D.G.; Pocock, J.M. Fosforilarea sinapsinului I și MARCKS în terminalele nervoase sunt mediate de intrarea Ca2+ printr-un canal ca2+ sensibil la Aga-GI, care este cuplat la exocitoza glutamatului. FEBS Lett. 1994, 353, 264-268. [CrossRef]

41. Obrenovitch, T.P.; Urenjak, J. Modificat glutamatergic transmisie în tulburări neurologice: De la glutamat extracelular ridicat la eficacitatea sinaptică excesivă. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39-87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB Echinacoside inhibă fibrilizarea amiloid de HEWL și protejează împotriva neurotoxicitate induse de Ap. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243-253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, T.Y.; Lu, C.W.; Wang, C.C.; Lu, J.F.; Wang, SJ Hispidulin inhibă eliberarea de glutamat în terminalele nervoase cerebrocortical șobolan. Toxicol. Appl. Pharmacol. 2012, 263, 233-243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, C.Y.; Lin, T.Y.; Lu, C.W.; Huang, S.K.; Wang, Y.C.; Chou, S.S.; Wang, SJ Hesperidin inhibă eliberarea de glutamat și exercită neuroprotecție împotriva excitotoxicitate induse de acid kainic în hipocampus de șobolani. Neurotoxicologie 2015,2015,157-169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, D.G.; Sihra, TS Synaptosomes posedă un bazin exocytotic de glutamat. Natura 1986, 321, 772-773. [CrossRef] [PubMed]

46. Wang, C.C.; Kuo, J.R.; Wang, SJ Dimebon, un medicament antihistaminic, inhibă eliberarea glutamatului în terminalele nervoase cerebrocorticale de șobolan. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67-76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, G.R.; Barrie, A.P.; van Mieghem, F.J.; Mc-Mahon, H.T.; Nicholls, D.G. Potențiale repetitive de acțiune în terminale nervoase izolate în prezența 4-aminopiridina: Efecte asupra citosolice liber Ca2 + și glutamat eliberarea. J. Neurochem. 1989,53,1693-1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, K.E.; Scott, L.G.; Heikkila, J.E.; Heinonen, E. Dependența ionică de potențialul membranei și răspunsurile legate de receptorii glutamatului în sinaptoneozomi, măsurate cu un colorant de cianină, DiSC2(5). J. Neurochem. 1987, 48, 552-559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, T.S.; Bogonez, E.; Nicholls, D.G. Localizate Ca2 + intrare preferențial afectează proteine dephosphorylation, fosforilare, și eliberarea de glutamat. J. Biol. Chem. 1992, 267,1983-1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, R.Y. O nouă generație de indicatori Ca2+ cu proprietăți de fluorescență mult îmbunătățite. J. Biol. Chem. 1985, 260,3440-3450. [PubMed]