Studiile din partea 4 au arătat că autofagia joacă un rol important în reglarea depunerii celulare de LD

Vă rog contactațioscar.xiao@wecistanche.compentru mai multe informatii

2.14. Testul lactat dehidrogenazei (LDH).

Conform instrucțiunilor producătorului, celulele au fost plasate pe o placă de 96-godeuri la 5000 de celule/godeu și a fost colectat un mediu de cultură pentru a măsura nivelurile de LDH cu un kit de testare (Institutul de Bioinginerie Nanjing Jiancheng). Apoi absorbanța probelor a fost detectată de Multiskan Spectrum (Thermo Fisher Scientific) la 450 nm.

2.15. BODIPY493/503, BODIPY 581/591 C11 și colorare roșu intens MitoTracker

Celulele vii au fost spălate cu PBS și incubate cu 2 ug/ml BOD-IPY 493/503 (InvitrogenTM, Cat D3922) sau BODIPY 581/591 C11 (BD-C11）（2.0 μM, InvitrogenTM, Cat D3861）în PBS timp de 15 minute la 37 de grade. Pentru colorarea MitoTracker Deep Red, celulele vii au fost incubate cu 0,5 ug/ml MitoTracker Deep Red (InvitrogenTM, Cat M22426) în PBS timp de 30 de minute la 37 de grade. au fost spălate de două ori în PBS și fixate în 3,5% PFA timp de 10 minute, urmate de spălare și contracolorare cu Hoechst 3342 (Sigma, Cat B2261) timp de 10 minute înainte de a fi acoperite pe lame de sticlă pentru imagistica.câtă cistanche să iaImaginile au fost observate și fotografiile au fost surprinse prin microscopie cu fluorescență (Olympus, Tokyo, Japonia).

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

2.16.Hoechst și colorație PI

Celulele au fost colorate cu Hoechst 33.342 (1 ul diluat în 5 00 ul PBS, Sigma, Cat B2261) și （sau）PI （0,1 ul diluat în 500 ul PBS, Solarbio, (cistanche sleep) pentru 100 min și CA1020 apoi fixat și observat prin microscopie cu fluorescență (Olympus, Tokyo, Japonia).

2.17.Citometrie în flux

Celulele au fost digerate și clătite cu D-hank apoi colorate cu anexină V-FITC (5 ul diluat în 500ul PBS)/PI (0,1 ul diluat în 500ul PBS) kit de apoptoză (CA1020, Solarbio, Beijing, Chian) ) conform protocolului producătorului. După aceea, celulele apoptotice au fost analizate utilizând citometrie în flux (guava easyCyterM 8, Millipore, SUA). Măsurătorile ROS mitocondriale și potențialul membranei mitocondriale au fost efectuate așa cum a fost publicat 【12】. Celulele SH-SY5Y au fost colorate cu MitoSOX (2,5 μM, Invitrogen, SUA) sau cu JC1 (10 ug/ml, T-3168, Invitrogen, SUA) la 37 de grade timp de 30 de minute. După spălare cu PBS de două ori, celulele au fost apoi resuspendate în PBS rece care conține 1% FBS pentru analiza citometrică în flux. Datele au fost analizate cu software-ul FCS Express (Guava Easy CyterM8, Millipore, Hayward, CA, SUA).

2.18. Testele respirației căluților de mare

Funcția respiratorie mitocondrială în celulele SH-SY5Y vii a fost măsurată folosind analizorul de flux extracelular Seahorse (XFe96) (Agi-lent, Santa Clara, SUA) prin modificări ale ratei de consum de oxigen (OCR). Celulele SH-SY5Y însămânțate la 3 × 10³ celule/godeu au fost lăsate să adere la plăcile de cultură de celule Seahorse și să atingă o confluență de aproximativ 80% în momentul experimentului. (ceai de cistanche) În ziua următoare, celulele au fost pretratate cu Ka și apoi expus la MPP* pentru încă 24 de ore. OCR a fost detectat în condiții bazale, urmat de adăugarea secvențială a 1 μM oligomicină, 1 μM FCCP, precum și 1 μM rotenonă și antimicină A.

Cistanche poate îmbunătăți imunitatea

2.19. analize statistice

Datele au fost prezentate ca medie ± SEM. Semnificația diferenței a fost determinată de testul t Student, analiza bidirecțională a varianței sau analiza unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul post-hoc al lui Tukey. Diferența a fost considerată semnificativă la P<>

3. Rezultate

Rezultatul 1. Ka restabilește disfuncția motorie și crește nivelul de dopamină în striatul șoarecilor model MPTP/p PD

Pentru a investiga efectul neuroprotector al patogenezei Kaon PD, șoareci masculi C57BL/6 de 4-lună de vârstă au fost injectați cu neurotoxina MPTP pentru a stabili modelul MPTP/p PD și au fost tratați cu Ka (Fig. la). După inducția modelului, testul rotarod și testul polului au fost utilizate pentru a evalua performanța motrică și comportamentală a șoarecilor din diferitele grupuri. După cum se arată, timpul de performanță rotarod a fost redus semnificativ la șoarecii tratați cu MPTP, iar acest efect a fost prevenit de Ka (Fig. 1b). (beneficii cistanche tubulosa) Ka a restabilit, de asemenea, deficitele comportamentale induse de MPTP, așa cum este indicat de reducerea timpului de întoarcere și a timpului total în testul la pol (Fig. 1c și d), fără a afecta greutățile corporale ale șoarecilor (Fig. le). În plus, analiza HPLC a arătat că nivelul de dopamină din striat a fost semnificativ scăzut la șoarecii cu MPTP/p-provocați, iar acest nivel a fost restabilit prin tratamentul cu Ka (Fig. 1f). (Extract de cistanche tubulosa) Tratamentul cu Ka a atenuat, de asemenea, MPTP/ Reducerea indusă de p a nivelurilor de acid dihidroxi-fenil acetic (DOPAC, un metabolit al dopaminei) în striat (Fig.1g).supraman herbs cistancheAceste rezultate sugerează că Ka restaurează disfuncția motorie și crește nivelurile de dopamină în striat la șoarecii PD induși de MPTP.

Rezultatul 2. Ka atenuează pierderea neuronilor DA în SNpc la șoareci model MPTP/p PD

În continuare, pentru a evalua în continuare efectul neuroprotector al deteriorării neuronale DA indusă de Kaon MPTP/p, am examinat neuronii tirozin hidroxilazei (TH) din SNpc murin prin imunocolorare. După cum se arată în Fig. 2a și b, MPTP/p a indus o reducere semnificativă a numărului de neuroni TH, care a fost atenuată de tratamentul cu Ka. În plus, numărările stereologice ale totalului de neuroni din SNpc, așa cum sunt definite de Nissl

Fig.1. Tratamentul cu Ka ameliorează disfuncția motorie și crește nivelul de dopamină în striatul șoarecilor model MPTP/p PD.

(a) Diagrama schematică a designului experimental. (cistanche tubulosa reddit) (b) Timpul pe tijă a fost măsurat pentru testul cu tijei rotative pe trei zile consecutive. (cd) Timpul necesar pentru a se întoarce (timp de întoarcere) și a coborî un stâlp (timpul de urcare) a fost înregistrat pentru testul pe stâlp. (e) Greutățile corporale ale șoarecilor au fost măsurate la sfârșitul studiului. (fg) Dopamina (DA) și acidul dihidroxi-fenil acetic (DOPAC) în striat au fost analizate prin cromatografie lichidă de înaltă performanță. Datele sunt exprimate ca medie±SEM.n=9-10 pentru fiecare grup din (b,c,d);n=6-8 pentru fiecare grup din (f,g).ns, nesemnificativ,* P<><><0.001, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.="" mptp,1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine;="" ka,kaempferol.="" staining,="" verified="" that="" the="" loss="" of="" th+="" cells="" reflected="" cellular="" death="" but="" not="" the="" downregulation="" of="" th="" expression="" and="" showed="" that="" ka="" treatment="" restored="" the="" decrease="" in="" the="" number="" of="" nissl-positive="" neurons="" in="" the="" snpc="" of="" mptp-treated="" mice="" from="" 43.3%="" to="" 25.4%="" (fig.="" 2c="" and="" d).in="" addition,="">beneficiile bioflavonoidelorKa a ameliorat semnificativ reducerea indusă de MPTP a expresiei proteinei TH și DAT, măsurată prin Western blot (Fig. 2e-g). Aceste dovezi confirmă efectul neuroprotector al lui Kaon în modelul de șoarece PD.

Rezultatul 3. Ka reduce acumularea de vacuole LD și stresul oxidativ în SNpc la șoarecii tratați cu MPTP/p

Creșterea dovezilor a arătat implicarea LD-urilor în NDD [10], în mod constant, munca noastră anterioară a identificat LD-uri crescute în SNpc la șoareci PD induși de MPTP [12].LD-urile pot fi identificate cu ușurință și prezintă structuri rotunde, de densitate scăzută, cu omogenă. conţinuturi amorfe [28]. În mod normal, LD-urile pot fi degradate prin autofagie pentru a evita acumularea [29].cumpara cistanchePentru a investiga dacă Ka ar putea regla LD-urile în PD, acumularea LD-urilor a fost analizată prin microscopie electronică de transmisie (TEM) în SNpc de control, MPTP/p și MPTP/p ＋ șoarecii Ka. După cum sa arătat în lucrarea noastră anterioară [12], numărul și dimensiunea LD-urilor au fost

a crescut la șoarecii MPTP/p comparativ cu martorii tratați cu soluție salină (Fig. 3a și b) și au fost reduse semnificativ la șoarecii tratați cu Ka (Fig. 3c-e). Mai mult, la șoarecii tratați cu Ka, LD-urile au fost observate mai frecvent și în apropiere, închise în sau degradate de autolizozomi, care au fost definiți ca granule de lipofuscină densă la electroni. O colorare histologică ulterioară a neuronilor TH cu BODIPY, un colorant care etichetează în mod specific lipidele neutre și este utilizat în mod obișnuit pentru a detecta LD-urile [30], a arătat că atât numărul, cât și dimensiunea BODIPY plus LD-uri în SNpc au fost mai mari la șoarecii PD decât la martori, și au fost semnificativ scăzute prin tratamentul cu Ka (Fig.3f-h).

Dacă LD-urile nu pot fi degradate în timp util, LD-urile acumulate pot suferi peroxidare și pot contribui la stresul mediat de ROS mitocondrial [4],distanţăcare amplifică neurotoxicitatea și progresia bolii. Prin urmare, am examinat în continuare profilurile de expresie ale genelor asociate cu protecția împotriva toxicității FA libere (Gpx8), a speciilor oxidative neutralizante, a radicalilor superoxid (Sod3) și a peroxidului de hidrogen (Cat) și a metabolismului FA (Acsbg1 și Dbi), așa cum este raportat [31] , toate acestea au fost scazute izbitor în SNpc-ul șoarecilor tratați cu MPTP în comparație cu martori, iar aceste efecte au fost ameliorate la șoarecii PD tratați cu Ka (Fig. 3i). În mod similar, MPTP/p a crescut, de asemenea, nivelurile de expresie ARNm

Fig.2. Ka ameliorează pierderea neuronilor DA în SNpc al șoarecilor model MPTP/p PD.

(ab) Microfotografii ale neuronilor pozitivi cu tirozin-hidroxilază (TH) (a) și numărătoarea stereologică a neuronilor TH pozitivi din substanța nigra pars compacta (SNpc) (b). Barele de scară sunt cele indicate. (cd) Microfotografii ale celulelor pozitive cu violet cresil (c) și numărătoarea stereologică a celulelor pozitive cu violet cresil în SNpc (d). Bară de scară, 120 um. (de exemplu) analiza Western blot a expresiei proteinei TH și DAT în SNpc (e) și analiza cantitativă (f,g). Datele cuantificate sunt normalizate la grupul martor cu soluție salină. Datele sunt exprimate ca medie ± SEM.*P<><0.01, by="" one-way="" anova="" followed="" by="" tukey's="" post="" hoc="" test.n="4-5" for="" each="" group.="" ve,="" vehicle,="" ka,="" kaempferol;="" mptp,1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydroloyridine..="" (for="" interpretation="" of="" the="" references="" to="" color="" in="" this="" figure="" legend,="" the="" reader="" is="" referred="" to="" the="" web="" version="" of="" this="" article.="" of="" nadph="" oxidase="" subunits="" such="" as="" nox1,="" nox2,="" and="" nox4="" in="" the="" snpc="" of="" mptp/p="" mice,="" which="" were="" further="" blunted="" by="" ka="" treatment="" (fig.="" 3j).="" taken="" together,="" these="" data="" suggest="" that="" ka="" alleviates="" mptp/p-induced="" ld="" accumulation,="" peroxidation,="" and="" ros-mediated="">

Rezultatul 4. Ka protejează celulele SH-SY5Y împotriva apoptozei induse de MPP plus

MPP, metabolitul activ al MPTP, inhibă enzimele complexe mitocondriale și provoacă moartea celulară care este direct asociată cu PD [32]. Apoi am investigat dacă Ka ar putea preveni apoptoza neuronală indusă de MPPt in vitro. După cum se arată în Fig. 4a și b, MPPt (40 uM, 24h) a indus eliberarea de LDH din celulele SH-SY5Y, iar Ka (30 și 60 uM) a atenuat semnificativ eliberarea de LDH fără a afecta supraviețuirea celulei (Fig. 4a). Deoarece Ka a indus un efect protector substanțial la o concentrație de 30 μM (Fig. 4b), am folosit această concentrație în experimentele ulterioare. Rezultatele colorării Hoechst/PI au arătat, de asemenea, că Ka a redus semnificativ procentul de celule cu condensare a cromatinei indusă de MPPt (Fig. 4c și d) și apoptoză celulară, după cum evidențiază intensitatea crescută a fluorescenței Hoechst (Fig. 4c) și procentul de Celule colorate cu Hoechst/PI (Hoechst plus /PI') (Fig. 4e). De asemenea, așa cum sa detectat prin citometrie în flux, MPP plus apoptoza celulară indusă, evidențiată de procentul crescut de celule colorate cu anexină V (AV /PI și AV plus /PI plus) a fost protejată de Ka (Fig. 4f și g). În plus, Ka a inversat în mod notabil modificările induse de MPP în expresia proteinei legate de apoptoză, așa cum este evidențiată de reglarea în sus a Bcl-2, reglarea în jos a lui Bax (Fig. 4hi-j) și clivajul redus al caspazei-3 (Fig. 4h, k). Aceste date sugerează că Ka poate elimina efectele dăunătoare ale MPPt asupra supraviețuirii celulelor.

Rezultatul 5. Ka suprimă acumularea de LD indusă de MPPt și peroxidarea lipidelor, care mediază deteriorarea mitocondrială în celulele SH-SY5Y

Studii recente au arătat că acumularea neașteptată a LD poate duce la creșterea stresului mediat de peroxidarea lipidelor și poate accelera disfuncția mitocondrială, care promovează neurodegenerarea [10]. Lucrările noastre anterioare au arătat, de asemenea, că LD-urile crescute în SNpc au fost asociate cu patologia PD la șoareci [12]. Pentru a investiga dacă efectul protector al Ka a fost legat de acumularea LD in vitro, am efectuat mai întâi colorarea specifică LD în celulele SH-SY5Y folosind BODIPY 493/503 și am observat o depunere crescută de LD (niveluri sporite de lipide neutre)

Rezultatul 6. Ka promovează autofagia și scade producția de mtROS în celulele SH-SY5Y tratate cu MPP plus

În mod normal, LD-urile sunt livrate la lizozomi prin autofagie și pot fi descompuse în FA pentru a evita peroxidarea. Cu toate acestea, dovezile indică faptul că autofagia este afectată, ceea ce joacă un rol crucial în PD [2]. Când autofagia implică porționarea LD-urilor pentru a fi defalcate în lizozomi (Fig. 6a), procesul se numește în mod specific lipofagie [2]. Pentru a investiga dacă autofagia este implicată în efectul neuroprotector al Ka, am examinat nivelurile de proteine ​​asociate autofagiei. După cum se arată în Fig. 6b-d, în celulele SH-SY5Y cultivate, nivelul lanțului ușor al proteinei asociate cu microtubuli 3 (LC3)-II a fost redus semnificativ, în timp ce expresia p62 a fost crescută semnificativ în celulele tratate cu MPP plus, măsurată prin imunoblot, iar acest efect a fost inversat semnificativ de Ka. Am examinat în continuare modificările autofagiei prin imunocolorare pentru LC3. Pentru a permite autofagozomilor să se acumuleze în celule, a fost adăugată bafilomicina pentru a preveni fuziunea autofagozomilor cu lizozomii. După cum se arată, un număr crescut de LC3b puncta a fost detectat în celulele tratate cu MPP*, indicând degradarea autofagică afectată, iar acest efect a fost, de asemenea, inversat de Ka (Fig. 6e și f). Aceste rezultate indică faptul că LD-urile din celulele SH-SY5Y sunt mobilizate prin autofagie pentru o eventuală îndepărtare și că Ka poate promova autofagia pentru a reduce acumularea de lipide oxidate. Creșterea peroxidării lipidelor poate exacerba deteriorarea mitocondrială prin creșterea stresului oxidativ mitocondrial [4]. În plus, tratamentul cu Ka a redus semnificativ generația robustă de mtROS, determinată de colorarea MitoSOX (Fig. 6g și h) și a scăzut numărul de mitocondrii disfuncționale, așa cum este determinat de etichetele specifice mitocondriilor pentru a distinge respirația (MitoTracker deep red) și total ( MitoTracker verde) mitocondrii (Fig. 6i și j). În plus, pentru a avea o vedere directă a modificărilor mitocondriale, am detectat în continuare rata consumului de oxigen (OCR) de către analizorul Seahorse XF. După cum se arată în Fig. 6k, respirația mitocondriilor a fost redusă în celulele tratate cu MPPt, în timp ce tratamentul cu Ka inversează, evident, această daune cauzată de MPP plus (Fig. 6k).

Rezultat7. Inhibarea autofagiei inversează efectul supresor al acumulării Kaon LD, al disfuncției mitocondriale și al leziunii neuronale DA in vitro

Pentru a examina dacă autofagia este unul dintre principalele mecanisme prin care Ka mediază neuroprotecția DA, a fost utilizat inhibitorul de autofagie 3-MA. Am descoperit că efectele inhibitoare ale Ka asupra leziunii induse de MPP#, inclusiv scăderea acumulării LD (Fig. 7a și b), producția de mtROS redusă (Fig. 7c și d) și atenuarea disfuncției mitocondriale (Fig. 7e și f) în Celulele SH-SY5Y au fost blocate semnificativ de 3-MA. Deoarece oxidarea LD și disfuncția mitocondrială sunt strâns asociate cu moartea neuronală DA, am examinat în continuare neuronii DA cultivați primari. Am tratat mezencefalul cultivat TH plus neuronii cu Ka și/sau MPPf și am cuantificat numărul și lungimea proceselor TH plus neuronale prin imunocolorare. Analiza morfologică a arătat că numărul și lungimea proceselor neuronale au fost semnificativ scăzute de MPP plus și protejate de Ka, iar această protecție a fost inversată în continuare de 3-MA (Fig. 7g-i). Aceste date indică faptul că Ka atenuează daunele neuronale ale DA prin promovarea autofagiei.

Rezultatul 8. Reducerea la tăcere a Atg5 a abolit prevenirea mediată de Ka a pierderii neuronale in vivo

Pentru a confirma în continuare că Ka protejează împotriva TH indusă de MPTP/p plus pierderea neuronală într-o manieră dependentă de autofagie, am redus la tăcere Atg5 prin microinjectarea unui virus adeno-asociat (AAV) care exprimă un shARN caracterizat anterior împotriva Atg5 în mezencefalul bilateral (Fig. .8a) așa cum s-a descris anterior [25]. În experimentele preliminare, am observat că transfecția shRNA Atg5 timp de 2 săptămâni a atins o expresie GFP suficientă în neuronii TH plus (Fig. 8b) și a inhibat expresia ATG5 în SNpc-ul șoarecilor injectați (Fig. 8c). Am descoperit că atg5-knockdown a inversat efectul neuroprotector al Ka, așa cum este demonstrat de expresia proteică reglată în sus a TH (Fig. 8d și e) și numărul crescut de TH plus neuroni (Fig. 8f și g). Aceste date susțin în continuare contribuția autofagiei la efectul protector al Ka la șoarecii PD. În concluzie, am confirmat că Ka protejează împotriva leziunilor induse de MPTP/p prin reducerea oxidării LD și a disfuncției mitocondriale prin promovarea autofagiei.

4. Discutie

Studiul de față a arătat că molecula mică naturală Ka a fost un factor cheie prin care semnalizarea autofagică ar putea inhiba toxicitatea oxidativă a lipidelor. Rezultatele noastre au demonstrat că calea autofagiei este o buclă de reglare cheie prin care Ka atenuează peroxidarea LD și deteriorarea mitocondrială ulterioară și s-a concentrat pe rolul toxicității LD reglate de autofagie în atenuarea daunelor mitocondriale, prevenind în același timp neurodegenerarea din cauza stresului oxidativ excesiv (Fig. 9).

LD-urile sunt locurile intracelulare de stocare a lipidelor neutre [5] și sunt critice pentru metabolismul lipidelor și homeostazia energetică, în timp ce disfuncția LD a fost legată de multe boli [16]. Dovezile acumulate au sugerat că rolurile jucate de LD în biologie și patologie sunt semnificativ mai ample decât se credea anterior. În SNC, dovezile au arătat că LD-urile crescute în neuroni și glia sunt implicate în patologia neurodegenerativă [10,36]. În detaliu, LD-urile au fost detectate atât în ​​axonii neuronilor Aplysia cultivați in vitro [37], cât și în secțiunile creierului din Modelele de boală Huntington [38].În plus, s-a demonstrat că neuronii sunt deosebit de sensibili la toxicitatea lipidică, iar acumularea de LD care nu pot fi îndepărtate în timp util duce la peroxidarea accelerată a LD și poate da naștere la neurodegenerare [17].

Acumularea de lipide în neuronii hiperactivi este toxică nu numai din cauza susceptibilității acestor lipide la peroxidare. Mai mult, conținutul excesului de LD poate intra pe căile metabolice neoxidative, declanșând producția excesivă de ceramidă, care este toxică pentru celule [39]. Studii recente au arătat, de asemenea, că în celulele cu LD-defect, FA pot fi convertite în acilcarnitine, care apoi provoacă disfuncție mitocondrială și producerea de ROS [40]. Este posibil ca aceste procese să aibă consecințe specifice și profunde în neuronii hiperactivi, deoarece mitocondriile disfuncționale compromit capacitatea de consum de FA, iar producția de mtROS provoacă în continuare peroxidarea lipidelor membranare.

Astfel, homeostazia LD ar trebui să fie bine controlată în neuroni, ceea ce este esențial pentru evitarea toxicității și în cele din urmă menținerea sănătății creierului. În studiul de față, am descoperit că molecula naturală mică Ka inhibă toxicitatea neuronală LD care s-a manifestat ca acumulare crescută de LD, peroxidare crescută a lipidelor și expresie genică legată de toxicitatea lipidelor suprareglată în celulele SH-SY5Y insultate cu MPP#. Mai important, am arătat, de asemenea, că tratamentul cu Ka reduce 45]. În studiul de față, am observat autofagie/lipofagie defecte în celulele neuronale afectate de MPPt, inclusiv niveluri reduse de LC3-II și expresie crescută a p62 și o număr crescut de puncta LC3B depus în celule. Lipofagia defectuoasă în celulele SH-SY5Y lezate a fost inversată prin tratament cu Ka. Ca o consecință, Ka a scăzut acumularea de LD-uri oxidate, mitocondriile deteriorate și generarea de mtROS în celulele SH-SY5Y tratate cu MPP#. Este important că inhibarea autofagiei de către 3-MA a abolit eliminarea mediată de Ka a LD-urilor oxidate și a mitocondriilor deteriorate și atenuarea leziunii neuronilor DA in vitro. Mai mult, inhibarea autofagiei prin distrugerea Atg5 in vivo a inversat efectele protectoare ale degenerării neuronale Kaon DA în modelul de șoarece PD indus de MPTP. În mod colectiv, aceste constatări indică faptul că Ka inhibă deteriorarea mitocondrială legată de toxicitatea LD prin promovarea autofagiei într-un model experimental de PD.

Dovezile acumulate indică faptul că generarea crescută de mtROS este o caracteristică principală a neuronilor cu activitate ridicată și a fost observată în multe NDD, inclusiv PD [46]. Rapoartele despre dacă ROS este o cauză sau o consecință a formării LD sunt contradictorii [47,48]. Interesant, rezultatele noastre in vitro au demonstrat că inhibarea farmacologică a peroxidării LD cu o-tocoferol a prevenit generarea de mtROS și anomaliile potențialelor membranei mitocondriale și a atenuat reducerile mitocondriale, așa cum evidențiază colorarea Tomm20 în celulele SH-SY5Y, ceea ce susține ideea că peroxidarea LD joacă un rol important. rol cauzal în disfuncția mitocondrială indusă de MPP și generarea mtROS. Cu toate acestea, este posibil ca ROS crescut să accelereze inițial formarea LD și, ulterior, LD-urile să inducă generarea suplimentară de ROS și să exacerbeze nivelurile intracelulare și mitocondriale de ROS.

În studiul de față, am arătat că șoarecii cu PD indusă de MPTP au avut niveluri ridicate de acumulare LD, care a fost însoțită de pierderea crescută a neuronilor DA, stres accelerat mediat de ROS și deficite comportamentale. Tratamentul cu Ka a prevenit toxicitatea LD in vitro și a ameliorat pierderea neuronală DA și deficitele comportamentale în modelul de șoarece PD, iar aceste efecte au fost dependente de autofagie. Prin urmare, este rezonabil să concluzionăm că Ka promovează autofagia, iar această autofagie îmbunătățită scade acumularea de LD oxidată, reduce producția de mtROS și atenuează deteriorarea mitocondrială în neuronii DA, ceea ce contribuie la inhibarea toxicității LD, atenuând astfel patologia PD (Fig. . 9).

Finanțarea

Această cercetare a fost susținută de granturi de la Fundația Națională de Științe Naturale din China (Nr. 81903587), Proiectul finanțat de Fundația pentru Științe Postdoctorale din China (Nr.2019M661807), Fundația de Științe Naturale din Provincia Jiangsu (Nr. BK20190120) și Proiect deschis al disciplinei de primă clasă chineză Materia Medica a Universității de Medicină Chineză Nanjing (nr. 2020YLXK006) și proiectul major de inovare a medicamentelor (nr.2018ZX09711001-003-007).

Acest articol este extras din Redox Biology 41 (2021) 101911