Oligoglicozide feniletanoide și oligozaharuri acilate cu activitate vasorelaxantă din Cistanche Tubulosa

pentru mai multe informații:ali.ma@wecistanche.com

Masayuki Yoshikawa și colab

Abstract

Extractul metanolic din tulpinile uscate aleCistanche tubulosa(Schrenk) S-a descoperit că R. Wight prezintă un efect inhibitor asupra contracțiilor induse de noradrenalină în benzi izolate de aortă de șobolan. Din extract, noi constituenți feniletanoid aminoglicozid, kancanozidele F și G și un oligo zahăr acilat, kancanoza, au fost izolați împreună cu 14 compuși cunoscuți. Structurile acestor noi compuși au fost determinate pe baza dovezilor lor chimice și fizico-chimice. În plus, constituenții principali, kankanozida F, kancanoza, echinacozida, acteozida și cistanozida F, au prezentat activitate vasorelaxantă și au fost clarificate mai multe cerințe structurale pentru activitate. 2006 Elsevier Ltd. Toate drepturile rezervate.

Click pentru produse cu efect Cistanche

Introducere

Planta parazita Orobanchaceae,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, este larg răspândit în Africa de Nord, Arabia și țările asiatice, iar tulpinile deCistanche tubulosa, precum și C. salsa și C. deserticola, au fost folosite în mod tradițional ca agent de promovare a circulației sanguine și pentru tratamentul impotenței, sterilității, lumbagoului, slăbiciunii corporale și tonicului. medicamente,1,4–14 am raportat izolarea și elucidarea structurii a cinci iridoizi, kancanozide A–D și kankanol și o monoterpenglicozidă, kankanozidă E, împreună cu 16 compuși cunoscuți din tulpinileCistanche tubulosa1 Ca o continuare a studiului asupra acestui medicament pe bază de plante, s-a constatat că extractul metanolic prezintă un efect inhibitor asupra contracțiilor induse de noradrenalina în benzi izolate de aortă toracică de șobolan. Din acest extract metanolic, am izolat suplimentar oligoglicozide feniletanoide, kancanozide F (1) și G (2) și oligo zahăr anacilat, kancanoză (3) și 14 compuși cunoscuți, echinacozidă (4), actozidă (5), izoacteozidă (6). ),20-acetillacteozidă (7), tubulozide A (8) și B (9), cistanozidă F (10), salidrozidă (11), (2R,3R)-butan-2,{{18 }}diol 2-ObD-glucopiranozid,Meso-butan-2,3-diol2-ObD-glucopiranozidă, etil bD-glucopiranozidă,3-metil butanol bD-glucopiranozidă, (plus )-pinorezinol40-ObD -glucopiranozidă și (plus)-siringarezinol 40-ObD-glucopiranozid. Această lucrare tratează elucidarea structurii compușilor noi (1–3), precum și efectele vasorelaxante ale constituenților principali (1, 3–6,10 și 11) asupra contracțiilor induse de benzile aortice de șobolan izolate cu noradrenalină pe baza aplicației tradiționale pentru circulaţia sângelui (fig. 1).

rezultate si discutii

2.1. Efectul vasorelaxant al extractului metanolic din tulpini deCistanche tubulosaasupra contracției induse de noradrenalina în aorta toracică izolată de șobolan

După cum se arată în tabelul 1, extractul metanolic din tulpini deCistanche tubulosa(achizitionat din Urumqi, provincia Xinjiang, China) a demonstrat activitate vasorelaxanta asupra contractiilor induse de noradrenalina in benzi izolate de aorta la sobolan, in functie de timp si concentratie (30–3{{10}} 0 lg/mL). Extractul metanolic a fost purificat în continuare prin cromatografie pe coloană în fază normală și inversă și în final HPLC pentru a da 1 (0.{016 la sută), 2(0.{{31} }25 la sută ), 3 (0.{020 la sută ), 4 (3.{09 la sută ),3 5 ({{64} },68 la sută),3 6(0.096 la sută),3 7 (0,017 la sută),3 8 (0,052 procente ),3 9 (0,0036 procente ),3 10(0,025 procente ),15 11 (0,044 procente ),16 (2R,3R)-butan-2,{{44 }}diol2-ObD-glucopiranozid (0,0087 la sută), 17 mezo-butan{-2, {3-diol {2-ObD-glucopiranozidă (0,0065 la sută), 17 etilb-D- glucopiranozidă (0,055 la sută), 17 3-metilbutanol bD-glucopiranozidă (0,0030 la sută), 17 (plus )-pinorezinol 40-ObD-glucopiranozidă (0,016 la sută), 18 și (plus )-siringarezinol{{81} }ObD-glucopiranozidă (0,022 la sută ).15

2.2. Structuri ale kancanozidelor F (1) și G (2)

Kankanozidul F (1) a fost obținut sub formă de pulbere albă cu rotație optică negativă (½a -28D -44.8- în MeOH). Spectrul IR de 1 a arătat benzi de absorbție la 156{{69} }, 1508 și 1458 cm-1 atribuibile unui inel aromatic și benzi puternice de absorbție la 3432, 1075 și 1044 cm-1, sugerând o structură aminoglicozidă. În pozitiv și FAB-MS cu ioni negativi de 1, au fost observate vârfuri de ioni cvasimoleculari la m/z 647 (M plus Na) plus și 623 (MH), iar analiza FAB-MS de înaltă rezoluție a arătat că formula moleculară a 1 este C26H40O17. Spectrele 1H și 13C RMN (CD3OD, Tabelul 2) ale lui 1, care au fost atribuite prin diferite experimente RMN,19 au arătat semnale atribuibile la două metilene [d 2,78 (2H, m, H2-7), 3,70, 4.{{ 39}} (1H fiecare, ambele m, H2-8)] și protoni aromatici de tip ABC orto și meta-cuplați [d 6,56 (1H, dd, J=1.9,7,9 Hz, H-6), 6,67 (1H, d, J=7,9 Hz, H{-5), 6,69 (1H, d, J=1,9 Hz, H{ {64}})] împreună cu trei fragmente de glucopiranoză [d 4,30 (1H, d, J=8,0 Hz, H{-10), 4,37 (1H, d, J=8). 0 Hz, H-1000), 5,16 (1H, br s, H{-100)]. Structura aminoglicozidelor din 1 a fost caracterizată prin experimentul de conectivitate heteronucleară cu legături multiple (HMBC), care a arătat corelații pe distanță lungă între următoarele perechi de protoni și carbon (H-10 și C-8; H{-100 și C-30; H{-1000 și C{-60), așa cum se arată în Figura 2. Deacilarea enzimatică a echinacozidei (4), a cărei stereostructură absolută a fost raportată anterior3, cu tannaza13,14 a dat 1. Pe baza dovezilor menționate mai sus, structura kankanozidei F a fost determinată a fi 2-(3,4- dihidroxifenil)etil OaL-ramnopiranozil(1-3)[bD-glucopiranozil({{1-6)]-b-D-glucopiranozid (1).

Kankanoside G (2) a fost, de asemenea, obținut sub formă de pulbere albă cu rotație optică negativă (½a-26D{-35.{0-în MeOH). Spectrul IR de 2 a arătat benzi de absorbție la 3432, 1709, 1638, 1518, 1447 și 1040 cm-1, atribuibile funcțiilor hidroxil, ester carbonil conjugat și eter și inelului aromatic. Formula moleculară, C29H36O14, de 2 a fost determinată din FAB-MS cu ioni pozitivi și negativi [m/z 631 (M plus Na) plus și 607(MH)-] și prin FAB-MS de înaltă rezoluție. Deacilarea enzimatică a lui 2 cu tanază a dat cistanozida G(12), a cărei stereostructură absolută a fost raportată anterior.16 La hidroliza alcalină a lui 2 cu 10% hidroxid de potasiu (KOH) - 50% 1,4-dioxan (1:1) v/v), acidul cafeic a fost identificat prin analiza HPLC. Spectrele 1H și 13C RMN (CD3OD, Tabelul 2) 19 din 2 au indicat prezența următoarelor funcții: 4-partea de alcool hidroxifeniletilic {două metilen [d 2,82 (2H, m, H2-7), 3,70, 3,96 ( 1H fiecare, ambele m, H{2-8)] și protoni aromatici de tip A2B{2-orto-cuplați [d 6,65, 7,03 (2H fiecare, ambele d, J=8,6 Hz,H{ {62}},5 și H{-2,6)]} și două fragmente de glucopiranoză [d4,33 (1H, d, J=7,9 Hz, H-10), 5,19 (1H, br s, H-100)]împreună cu o porțiune cafeoil {o trans-olefină [d 6,29,7,56 (1 H fiecare, ambele d, J=15,9 Hz, H{{84 }} și H-7)] și dihidroxibenzen de tip pirocatecol [d 6,78 (1H, d,J=8,3 Hz, H{-5), 6,89 (1H, dd, J {{{ 96}},9, 8,3 Hz, H-6), 7,04 (1H, d, J {= 1,9 Hz, H{{-2)]}. În experimentul HMBC pe 2, a fost observată o corelație pe distanță lungă între 60-protonul [d 4,36 (1H, dd, J=6.1, 11,6 Hz), 4,50 (dd, J {{ 119}}.8, 11,6 Hz)] și cafeoil carbonilcarbon (dC 169,1). În consecință, structura kancanozidei G a fost determinată a fi 4-hidroxifenil-OaL-ramnopiranosil(1 ! 3)-({6-O-cafeoil)-bD-glucopiranozid (2).

2.3. Structura kancanosei (3)

Kancanoza (3), ½a- 27D{-35.3- (MeOH), a fost, de asemenea, obținută sub formă de pulbere albă. Spectrul IR de 3 a arătat benzi de absorbție la 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 și 1{071 cm{-1, atribuibile hidroxil, ester conjugat carbonil și funcții eter și ciclu aromatic. FAB-MS cu ioni pozitivi și negativi din 3 au arătat vârfuri de ioni cuvasimoleculari la m/z 673 (M plus Na) plus și respectiv m/z 649 (MH). FAB-MS de înaltă rezoluție de 3 a dezvăluit formula moleculară a fi C27H38O18. Hidroliza alcalină a 3 cu 10 procente KOH–50 procente 1,4-dioxan a eliberat acid cafeic, care a fost identificat prin analiza HPLC, împreună cu un oligo zahăr. Hidroliza acidă a acestui oligo zahăr cu acid clorhidric 1,0 M (HCI) a eliberat L-ramnoză și D-glucoză, care au fost identificate prin analiza HPLC utilizând un detector cu rotație optică.1,13,14 Spectrele 1H și 13CNMR (CD3OD, Tabelul 3)19 din 3 au prezentat semnale atribuibile fragmentului de trizaharidă {d [5,11 (d,J=3,4 Hz), 4,57 (d, J{=7,9 Hz), amestec de forme a și b de H{ {52}} (cca. 1:1)], 4,25, 4,27 (ambele d, J=7,7 Hz, H{-1000), 5,13, ​​5,18 (ambele br s, H{{66 }})} împreună cu o grupă cafeoil [d 6,28, 6,29 (ambele d, J=15,9 Hz, H-9), 6,78 (d,J{=8,0 Hz, H -5), 6,96 (dd, J=2,0, 8,0 Hz, H-6), 7,06 (d, J {= 2,0 Hz, H{{90} }), 7,60 (d, J=15,9 Hz, H{-7)]. În experimentele HMBC pe 3, s-au observat corelații pe distanță lungă între 40-protonul [d 5,04, 4,99 (ambele dd,J{=9,5, 9,8 Hz)] și carbonil carbonil cafeoil (dC168,53 , 168,65). Pe baza dovezilor menționate mai sus, structura kancanozei a fost elucidată în bea-L-ramnopiranozil(1-3)[bD-glucopiranozil({1-6)]-O-({4- O-cafeoil)-D-glucopiranoză (3).

2.4. Efect vasorelaxant al constituenților principali (1, 3–6,10, 11) dinCistanche tubulosaasupra contracției induse de noradrenalină și K plus ridicat în aorta toracică izolată de șobolan

După cum se arată în tabelul 4 și în figura 3, efectele inhibitoare ale constituenților principali, kankanozida F (1) și kancanoza (3), echinacozida (4), actozida (5), izoacteozida (6), cistanozida F (10) și salidrozida ( 11) au fost examinate contracțiile induse de noradrenalină în aorta toracică de șobolan izolat. Ca rezultat, compușii 3–5 și 10 care au o grupă cafeoil în poziția 40-au inhibat semnificativ contracțiile, în funcție de timp și/sau de concentrație (10–100 lM), în timp ce 6 având 60- Franța O-cafeoil a prezentat o activitate slabă decât 4 și 5. Pe de altă parte, compusul 1 cu o grupă catecol a arătat o inhibare semnificativă, dar 11 cu o grupă fenol nu a arătat un astfel de efect. Aceste rezultate ne-au determinat să presupunem că fragmentul 40-O-cafeoil și fragmentul 10-O-dihidroxifenetil sunt esențiale pentru activitatea vasorelaxantă puternică. Pe de altă parte, compușii 1, 3-6 și 10 (100 lM) nu au prezentat niciun efect asupra contracțiilor induse de o concentrație mare de potasiucare (K plus ) diferită de nifedipină, un blocant al canalelor de calciu dependent de tensiune, în aceleași țesuturi (datele nu sunt afișate). Această descoperire a sugerat că acești constituenți activi au inhibat contracțiile prin intermediul canalului de calciu operat de receptor, dar nu prin canalul de calciu dependent de tensiune. Recent, Iizuka și colab. au raportat că un feniletanoid, forsitiazidă, din fructul Forsythia suspensa a inhibat contracțiile induse de noradrenalină în preparatele de inel aortic de șobolan și au sugerat că inhibarea de către forsitiazidă a contracției induse de noradrenalina se datorează parțial unei scăderi induse de noradrenalina. influxul de calciu.20 Cu toate acestea, în studiul de față, efectele relaxante ale constituenților activi au fost observate cca. 30 de minute după adăugarea noradrenalinei într-un mod diferit de cel al prazosinului, un antagonist al receptorului de adrenalină{42}}. Mecanismele de acțiune ale constituenților activi trebuie studiate în continuare.

3. Experimental

3.1. Procedura experimentală generală

Pentru obținerea datelor fizice au fost utilizate următoarele instrumente: rotații specifice, polarimetru digital Horiba SEPA-300 (l=5 cm); Spectre UV, spectrometru UV-1600Shimadzu; spectre IR, spectrometru Shimadzu FTIR-8100; Spectre 1H RMN, spectrometru JEOL JNM-LA500(500 MHz); Spectre 13C RMN, spectrometru JEOLJNM-LA500 (125 MHz) cu tetrametilsilan ca standard intern; FABMS și HR-FAB MS, spectrometru de masă JEOL JMS-SX 102A; Detector HPLC, Shimadzu RID-6Un indice de refracție și detectoare UV-vis SPD 10A. Coloana HPLC, coloanele YMC-PackODS-A (250 · 4,6 mm id) și (250 · 20 mm id) au fost utilizate în scopuri analitice și, respectiv, pregătitoare

Următoarele condiții experimentale au fost utilizate pentru cromatografie: cromatografie pe coloană cu silicagel în fază normală, silicagel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 mesh); cromatografie pe coloană cu silicagel în fază inversă, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100–200 mesh); TLC, plăci TLC pre-acoperite cu silicagel 60F254 (Merck, 0,25 mm) (fază normală) și silicagel RP-18 F254S (Merck, 0,25 mm) (fază inversă); HPTLC cu fază inversă, plăci TLC pre-acoperite cu silicagel RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); detectarea a fost realizată prin pulverizare cu 1% Ce(SO4)2-10% H2SO4 apos, urmată de încălzire.

Cistanche tubulosa

3.2. Material vegetal

Tulpini uscate deCistanche tubulosaau fost achiziționate de la Urumqi, provincia Xinjiang, China, în ianuarie 2005 prin intermediul EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japonia, așa cum este descris anterior.1

3.3. Extracție și izolare

Fracții {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=echinacozidă (4, 2595 mg, 0,44 la sută )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2,03 la sută ) și 5-6 (1453 mg) au fost obținute din extractul metanolic al tulpinilorCistanche tubulosaașa cum sa raportat anterior.1 Fracția 1–2 (590 mg) a fost purificată prin HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] pentru a da 3-metilbutanol bD-glucopiranozidă (18 mg , 0.0030 procente ), (plus )-pinorezinol 40-ObD-glucopyr anosidă (96 mg, 0. 016 la sută ) și (plus )-siringarezinol 40-O bD-glucopiranozidă (129 mg, 0.{022 la sută ) împreună cu cistanoclorină (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 la sută ). Fracția 2-1 (466 mg) a fost separată prin HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] pentru a da (2R,3R)-butan-2,{{40 }}diol 2-ObD-glucopiranozid(12 mg, {{1{{108}}4}}.0{087 la sută ), (2R, 3S)-butan-2,3-diol 2-ObD glucopiranozidă (9 mg, 0.{0{065 la sută ) și etil bD -glucopiranozidă (76 mg, 0.{055 la sută ) împreună cu uridină (0.0{069 la sută ). Fracția 2-2 (535 mg) a fost purificată prin HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)] pentru a produce salidrozidă (11, 41 mg, 0,022 la sută) împreună cu antirhid (15 mg, 0,0079 la sută) și6-deoxicatalpol (214 mg, 0,11 la sută). Fracția 2-3 (535 mg) a fost separată prin HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] pentru a furniza 11 (17 mg, 0,022 la sută) împreună cu partea gluro (110 mg, 0,14 la sută) și bartsiozidă (164 mg, 0,21 la sută). Fracția 3-3 (510 mg) a fost supusă HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] pentru a da actozidă (5, 257 mg, 0,31 la sută), izoacteozidă (6, 79 mg, 0,096 la sută) și 20-acetillacteozidă (7, 14 mg, 0,017 la sută). Fracția 3-4 (190 mg) a fost purificată suplimentar prin HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] pentru a da kancanozidă G (2, 17 mg, 0,0029 la sută) și tubulozidă B (9, 21 mg, 0,0036). procente). Fracția 4-6 (75 mg) a fost purificată prin HPLC [MeOH/H20 (35:65, v/v)] pentru a da 5 (18 mg, 0,065 procente). Fracția 5-2 (1114 mg) a fost supusă HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] pentru a da 2 (24 mg, 0,030 la sută). Fracția 5-3 (306 mg) a fost purificat prin HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] pentru a da kancanozida F (1, 13 mg, 0,016 procente). Fracția 5-4 (347 mg) a fost supusă HPLC[MeOH/H2O (10:90, v/v)] pentru a da kancanoză (3, 30 mg, 0,038 la sută) și cistanozidă F (10, 20 mg, 0,025). procente). Fracția 5-6 (530 mg) a fost purificată prin HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] pentru a da 4 (185 mg, 0,62 la sută), 5 (91 mg, 0,30 la sută) și tubulozidă A (8, 16 mg, 0,052 la sută).

3.3.1. Kankanoside F (1).

O pulbere albă, ½a{{0}D -44.8- (c0,50, MeOH). FAB-MSm/z cu ioni pozitivi de înaltă rezoluție: Calculat pentru C26H40O17Na (M plus Na) plus, 647,2163. Găsit: 647,2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3,83), 283 (3,37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044 cm-1. 1H RMN (500 MHz, CD3OD) d: date în Tabelul 2. Date 13C RMN (125 MHz, CD3OD) dC: date în Tabelul 2. FAB-MS cu ioni pozitivi m/z: 647 (M plus Na) plus. FAB-MS cu ioni negativi m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H1104)-, 623 (M-C6H1105)-, 623 (M-C12H2109)-.

3.3.2. Kankanoside G (2).

O pulbere albă, ½a{{0}D -35.0-(c 0,80, MeOH). FAB-MSm/z cu ioni pozitivi de înaltă rezoluție: Calculat pentru C29H36O14Na (M plus Na) plus, 631.2003. Găsit: 631.1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4,10).IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm{26}}. 1H RMN (500 MHz, CD3OD) d: date în Tabelul 2. Date 13C RMN (125 MHz, CD3OD) dC: date în Tabelul 2. FAB-MS cu ioni pozitivi m/z: 631 (M plus Na) plus ion negativ FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6H1104).

3.3.3. Kankanose (3).

O pulbere albă, ½a{{0}D -35.3- (c0,50, MeOH). FAB-MSm/z cu ioni pozitivi de înaltă rezoluție: Calculat pentru C27H38O18Na (M plus Na) plus, 673,1956. Găsit: 673,1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4,10), 247 (3,96), 333 (4,21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702,1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm-1. 1H RMN(500 MHz, CD3OD) d: date în Tabelul 3. Date 13C RMN (125 MHz, CD3OD) dC: date în Tabelul 3. FAB-MS cu ioni pozitivi m/z: 673 (M plus Na) plus. FABM-Sm/z cu ioni negativi: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325 (M-C15H18O8)-.

Cistanche tubulosa

3.4. Deacilare enzimatică a 2 și 4 cu tanază

O soluție de 2 (4,8 mg, 0.0{08 mmol) în H2O (1,{0 mL) a fost tratată cu tanază (3,7 mg, de la Aspergillus oryzae). , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japonia) și soluția a fost agitată la 37 de grade timp de 24 de ore. După ce s-a adăugat EtOH la amestecul de reacție, solventul a fost îndepărtat la presiune redusă și reziduul a fost purificat prin HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] pentru a furniza cistanozid G (12, 2,8 mg, 80 la sută).16. printr-o procedură similară, o soluție de 4 (9,2 mg, 0,012 mmol) în H20 (2,0 mL) a fost tratată cu tanază (7,5 mg) și soluția a fost agitată la 37 de grade timp de 24 de ore. Prelucrarea amestecului de reacţie aşa cum este descris mai sus a dat un reziduu, care a fost purificat prin HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] pentru a furniza 1 (4,7 mg, 62 la sută).

3.5. Hidroliza alcalină și acidă a 2 și 3

O soluție de 2 și 3 (fiecare 3,5 mg) în 50 procente 1,4-dioxan apos (1,0 mL) a fost tratată cu 10 procente KOH apos (1,{{30}} mL) și întregul a fost agitat la 37 C timp de 1 oră, respectiv. Eliminarea solventului la presiune redusă a dat un amestec de reacţie, care a fost supus analizei HPLC [coloana: YMC-Pack ODS-A, 250 · 4,6 mm id; fază mobilă: MeOH/H20 (30:70, v/v); detecție: UV (254 nm); debit: 1,0 mL/min] pentru a identifica acidul cafeic (tR: 13,1 min). Apoi amestecul de reacţie de la 3 a fost dizolvat în HCI 1 M (2,0 ml) şi încălzit la reflux timp de 3 ore. După răcire, amestecul de reacţie a fost extras cu EtOAc. Stratul apos a fost supus analizei HPLC în următoarele condiţii, respectiv: coloană HPLC, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4,6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japonia); detecție, rotație optică [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokyo, Japonia); fază mobilă, CH3CN/H20 (85:15, v/v); debit 0,8 mL/min]. Identificarea L-ramnozei și a D-glucozei prezente în stratul apos a fost efectuată prin compararea timpului lor de retenție și a rotației optice cu cele ale probelor autentice, tR: 9,9 min (L-ramnoză, rotație optică negativă) și 17,9 min (D-glucoză, rotație optică pozitivă).

3.6. Activitate vasorelaxanta

3.6.1. Pregătirea țesuturilor.

Șobolani masculi Sprague-Dawley cu greutatea de 250–35{0 g au fost sacrificați prin secționarea ambelor artere carotide sub anestezie, iar aorta toracică a fost izolată și tăiată în benzi elicoidale (2–3 mm ·15–2{{25). }} mm). Soluţia de sare fiziologică a conţinut NaCI (118,0 mM), KCI (4,7 mM), KH2P04 (1,2 mM), MgS04 (1,2 mM), CaCI2 (2,5 mM), NaHC03 (25,0 mM) şi D-glucoză (10,0 mM). Soluția a fost aerată cu un amestec gazos de 95% O2–5% CO2 și menținută la 37 de grade. Pentru a investiga răspunsul mecanic, fiecare preparat a fost suspendat într-o baie de organe (6 ml) și supus unei sarcini inițiale de aproximativ 1 g. O perioadă de echilibrare a fost permisă înainte de inițierea experimentelor. Contracțiile au fost măsurate izometric cu ajutorul unui traductor de deplasare forță (AD Instruments) și înregistrate pe un poligraf.

3.6.2. Efect inhibitor asupra contractiei induse de dl-noradrenalina sau K plus ridicat.

După echilibrare, s-a adăugat la baie dl-nor-adrenalină (concentrație finală: 1 lM) sau KCI 3 M (0,1 ml, concentrația finală de K plus: 54 mM). Țesuturile au fost spălate de trei ori și reechilibrate după ce contracția a atins nivelul maxim. Contracția susținută a fost indusă din nou prin adăugarea de dl-noradrenalina sau KCl și apoi compusul de testat a fost aplicat la 10-100 lM (noradrenalina) sau 100 lM (K plus). Răspunsul contractil înainte de aplicarea probei de testat s-a risipit a fi de 100%. Clorhidratul de prazosin și nifedipina au fost utilizați ca compuși de referință.

3.6.3. Analize statistice.

Valorile sunt exprimate ca medii± SEM. Pentru analiza statistică, a fost utilizată o analiză unidirecțională a varianței, urmată de testul Dunnett pentru analiza comparativă multiplă. Valorile probabilității (p) mai mici de 0,05 au fost considerate semnificative.

Mulțumiri

Această cercetare a fost susținută de cel de-al 21-lea Program COE, Proiectul Academic Frontier și de un Grant-in-Aid pentru cercetare științifică de la Ministerul Educației, Culturii, Sportului, Științei și Tehnologiei din Japonia.

Referințe și note

1. Această lucrare este numărul 19 în seria „Constituenți bioactivi din medicamentele naturale chinezești”. Pentru lucrarea numărul 18, vezi Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Farmacă. Taur. 2006, 54, 669–675.
2. Namba, T. În Enciclopedia Wakan-Yaku (medicamente tradiționale chino-japoneze) cu imagini color; Hokuryusha: Osaka, 1994; Vol II.
3. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Chem. Farmacă. Taur. 1987, 35, 3309–3314.
4. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Farmacă. Taur. 2002, 50, 208–215.

5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, I.; Ueda, K.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2002, 65, 1468–1474.

6. Tao, J.; Morikawa, T.; Toguchida, I.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Chim. 2002, 10, 4005–4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2003, 66, 638–645.
8. Tao, J.; Morikawa, T.; Ando, ​​S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Farmacă. Taur. 2003, 51, 654–662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847–855.
10. Soare, B.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2004, 67, 1464–1469.

11. Morikawa, T.; Soare, B.; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Farmacă. Taur. 2004, 52, 1194–1199.

12. Xie, H.; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Farmacă. Taur. 2005, 53, 1416–1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2006, 69, 881–886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Farmacă. Taur. 2006, 54, 506–513.
15. Kobayashi, H.; Karasawa, H.; Miyase, T.; Fukushima, S. Chem. Farmacă. Taur. 1985, 33, 1452–1457.

16. Karasawa, H.; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721–724.

17. Kitajima, J.; Ishikawa, T.; Tanaka, Y. Chem. Farmacă. Taur. 1998, 46, 1643–1646.
18. Chiba, M.; Hisada, S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335–336.
19. Spectrele RMN 1H și 13C ale 1–3 au fost atribuite cu ajutorul îmbunătățirii fără distorsiuni prin transfer de polarizare (DEPT), spectroscopie de corelație cu filtru cuantic dublu (DQF COSY) și coerență cuantică multiplă heteronucleară (HMQC), conectivitate heteronucleară a legăturilor multiple (HMBC) experimente.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219–224.