Screeningul fitochimic și activitatea estrogenică a glicozidelor totale ale Cistanche Deserticola

Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstract

De-a lungul deceniilor, au existat eforturi continue pentru a îmbunătăți calitatea vieții umane. Sindromul postmenopauză este o preocupare serioasă pentru bunăstarea sănătății femeilor. Terapia hormonală este în prezent principalul tratament pentru această afecțiune. Cu toate acestea, această terapie ar putea duce la abuz de estrogeni, ducând la reacții adverse și efecte secundare. Ca urmare, terapia hormonală nu a avut succes în ameliorarea sindromului postmenopauză.Cistanche deserticolaeste o planta tonica clasica in medicina traditionala chineza. Prezintă activitate estrogenică semnificativă. Principalii compuși activi ai acestei plante sunt glicozidele. Într-un experiment anterior, au fost identificați trei factori importanți care contribuie la randamentul total de glicozide, randamentul actozidic și activitatea estrogenică, și anume, concentrația eluantului, pH-ul și volumul eluantului. În acest experiment, a fost determinat un proces optim de purificare utilizând o metodologie de suprafață compozită centrală de proiectare-răspuns pentru a obține glicozide din această plantă. O concentrație de eluent (etanol) de 85 la sută și un volum de 25 BV la un pH de 11 s-au dovedit a fi optime. Douăzeci și unu de compuși activi au fost identificați printr-un test de cromatografie lichidă de înaltă performanță/spectrometrie de masă cu timp de zbor cvadrupol. Acest studiu oferă perspective valoroase pentru cercetări ulterioare aprofundate care evaluează activitățile estrogenice ale glicozidelor totale aleCistanche deserticola.

Cuvinte cheie: Proiectare centrală compozită; Cistanche deserticola glicozide totale; LC/Q-TOF-MS; tehnologie de purificare; testul de creștere a uterului.

Introducere

Cistanche deserticolaeste o planta tonica clasica, comestibila. A fost menționat pentru prima dată în clasicul pe bază de plante al lui Shen Nong și a fost înrolat în clasa superioară. Este o plantă caldă și dulce. Are numeroase proprietăți medicinale, cum ar fi hrănirea ficatului și a rinichilor, întărirea mușchilor și a oaselor și îmbunătățirea reglării imune, împreună cu activități anti-îmbătrânire și antitumorale [1-4]. Unii compuși naturali au fost izolați și identificați din extractele acestei plante, principalii fiind glicozide feniletanoizi, lignanoizi, iridoizi, polizaharide și alcaloizi [5-8].

Medicamentele obținute din plante medicinale conțin diverși compuși activi, care sunt în primul rând responsabili pentru acțiunile lor terapeutice. Eficacitatea aceluiași medicament obținut din diferite surse de plante poate varia din cauza diferențelor de tip și cantitate de compuși activi prezenți în acesta. Astfel, este importantă identificarea și cuantificarea tuturor compușilor activi prezenți în medicamentele obținute din plante medicinale. Același lucru este valabil și pentru C. deserticola. Metodologia suprafeței de răspuns este o metodă experimentală de investigare a interacțiunii dintre diferiți factori simultan [9-10]. Poate fi utilizat pentru optimizarea parametrilor de extracție pentru fitofarmaceutice și estimarea cantitativă a compușilor activi din medicamente. Designul central compozit (CCD) este unul dintre modelele experimentale utile în metodologia suprafeței de răspuns. În comparație cu modelele ortogonale și uniforme, CCD are o precizie mai mare și o mai bună predictibilitate [11].

Sindromul postmenopauză poate reduce substanțial calitatea vieții la femei. În mod normal, estrogenul este utilizat pentru a trata această afecțiune. Cu toate acestea, utilizarea pe termen lung a estrogenului poate duce la abuz, provocând astfel diverse reacții adverse și efecte secundare. Prin urmare, este imperativ să alegeți o terapie alternativă, de preferință un medicament pe bază de plante care conține estrogen ca ingredient activ pentru tratamentul sindromului postmenopauză [12-13].

Într-un experiment preliminar, structurile diverșilor compuși naturali obținuți din C. deserticola au fost identificate folosind spectrometria de masă (MS) [14]. S-a confirmat că glicozidele sunt principalii compuși activi cu activitate estrogenică semnificativă [14-15]. Pentru a dezvolta un ingredient activ estrogenic sigur și eficient într-un medicament nou, este necesară o investigație aprofundată a TGCD după purificare. În acest studiu, CCD a fost utilizat pentru prima dată pentru a optimiza purificarea glicozidelor totale de C. deserticola (TGCD). Ulterior, testul de creștere a uterului a fost utilizat pentru a evalua activitățile estrogenice ale aceleiași glicozide. Cromatografia lichidă de înaltă performanță/spectrometria de masă în timp de zbor cu cvadrupol (HPLC/Q-TOF-MS) a fost utilizată pentru analiza calitativă a compușilor TGCD după purificare. Acest proces a fost aplicat pentru a demonstra în mod explicit prezența diferiților compuși activi cu activitate estrogenică în TGCD. Acest lucru poate oferi simultan baza pentru utilizarea sa clinică în sindromul postmenopauză care înlocuiește estrogenul.

Procedura experimentala

Instrumente

Sistem HPLC Agilent 1290 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, SUA), sistem LC/MS (Q-TOF) cu cvadrupol seria Agilent 6530 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, SUA) și HPLC chimic{ {5}}Stațiile de lucru D au fost folosite ca instrumente cromatografice pentru prelucrarea datelor. Pentru întregul studiu a fost folosită apă ultrapură Milli-Q. Balanta analitica electronica AR1140 (Ohaus International Ltd.); cititor de microplăci 680 (Bio-Rad Corporation); și centrifuga de mare viteză 64R (Beckman Coulter Allegra) au fost utilizate pentru prepararea probei.

Droguri și substanțe chimice

C. deserticola a fost achiziționat de pe piața medicamentelor și identificat de prof. Zhang Delian (Harbin University of Commerce, China). Dietilstilbestrol standard (99% pur, lot nr. 60518) a fost achiziționat de la Dr. Ehrenstorfer (Germania). Alte standarde actozidă (111530-200505) și echinacozidă (111670-200503) au fost obținute de la Institutul Național pentru Controlul Produselor Farmaceutice și Biologice, Beijing, China. Puritatea fiecărui standard a fost > 98 %. Acetonitril (ACN), metanol și acid formic (grad MS) au fost achiziționate de la Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, SUA). Apa ultrapură a fost obținută de la Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd. (Hangzhou, China). Toți reactivii disponibili comercial au fost de calitate analitică.

Prepararea glicozidelor totale ale soluției de purificare C. deserticola

După scufundare în etanol 75 la sută timp de 12 ore, pulberea brută de C. deserticola (100 g) a fost extrasă cu 800 ml de etanol 75 la sută (v/v) la 80 de grade timp de 150 min sub reflux. Apoi a fost filtrat printr-un filtru cu două etaje și ulterior extras cu 800 ml de etanol 75 la sută de două ori pentru încă 150 de minute. Ulterior, filtratele au fost combinate și concentrate în vid la 45 de grade. Extractul a fost obţinut prin îndepărtarea solventului. La extract a fost adăugată o anumită cantitate de apă distilată pentru a obține o concentrație de 0,5 g/mL, care a fost folosită pentru a verifica procesul de purificare.

Pentru adsorbție folosind rășină macroporoasă AB-8, pH-ul soluției de probă de testat a fost ajustat la 11. Mai întâi, s-a folosit apă distilată 2 BV pentru a îndepărta impuritățile. Apoi, eluentul la o concentraţie de 25 BV 85% etanol a fost eluat şi colectat. În cele din urmă, eluentul purificat colectat a fost fuzionat. La extract s-a adăugat o anumită cantitate de apă distilată pentru a obține o concentrație de 1,5 g/mL, care a fost folosită pentru administrare intragastrică. Pentru control pozitiv, soluția de dietilstilbestrol (20 ug/mL) a fost preparată cu pulbere de dietilstilbestrol.

Conform raportului de purificare ({{0}}.6), o anumită cantitate din extract (echivalent cu 1 g de C. deserticola) a fost transferată într-un balon cotat de 1{0 mL, dizolvat în soluție de metanol 50% (v/v) într-o baie cu ultrasunete timp de 5 minute și diluat la 10 ml. Soluția medicinală a fost obținută după filtrarea supernatantului printr-o membrană filtrantă de 0,45 μm. Acteozidul și echinacozidul (1 mg fiecare) au fost amestecate și dizolvate complet într-o soluție de metanol 50% (v/v) de 10 ml. În cele din urmă, soluția standard a fost filtrată printr-un filtru Millipore de 0,45 μm înainte de analiză.

Condiții LC-MS

Separarea prin cromatografie a fost efectuată într-un sistem HPLC (Agilent 129{{10}}), echipat cu un sistem de livrare cuaternar de solvenți, degazifiere în vid și detector cu matrice de fotodiode. Analiza MS/MS a fost efectuată într-un instrument Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS sistem, echipat cu o sursă de ionizare electrospray în ambele moduri de ioni pozitivi și negativi. Pentru separare a fost utilizată o coloană Waters Symmetry Shield RP C18 (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, SUA). Faza mobilă a cuprins 0,2% soluție apoasă de acid formic (v/v) (A) și ACN (B) și a fost pompată la un debit de 0,5 ml/min. Volumul de injectare al fiecărei probe a fost de 10 μL. Programul de eluare cu gradient a fost următorul: 5-23% B pentru 0-35 min, 23-25% B pentru 35-65 min și 25-5% B pentru 65-70 min. Temperatura coloanei a fost menţinută la 30 de grade. Cromatogramele au fost monitorizate și înregistrate la 330 nm. Presiunea gazului de atomizare a fost setată la 30 Psi, iar tensiunea capilară a fost de 3,5 kV. Debitul de gaz uscat a fost de 8 l/min la o temperatură de 30 de grade. Temperatura gazului de înveliș a fost setată la 400 de grade la un debit de 12 l/min. Energia de coliziune a fost setată la 10–20 eV pentru scanările cu energie scăzută și 30–50 eV pentru scanările cu energie înaltă. Datele spectrelor de masă au fost înregistrate în intervalul de scanare de 50-1000 Da în moduri de scanare cu ioni pozitivi și negativi. În acest studiu, o comparație rapidă și eficientă între TGCD și standarde a fost efectuată în aceeași condiție LC-MS.

Testul de creștere a uterului

Acest lucru a fost realizat în strictă conformitate cu recomandările Ghidului pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator al National Institutes of Health. Toate procedurile experimentale au fost revizuite și aprobate de Comitetul de etică a animalelor al Universității de Comerț din Harbin, China.

Șoarecii Kunming femele imaturi (aproximativ 21 zile de naștere, înțărcați) cu o greutate de 12 ± 2 g, au fost achiziționați de la Centrul pentru animale de laborator al bazei industriei biologice din Changchun (Changchun, China). Șoarecii au fost găzduiți într-o cameră cu temperatură reglată (22 ± 2 grade) cu hrană și apă ad libitum. Experimentarea pe animale a fost inițiată după cinci zile de aclimatizare. Şoarecii au postit peste noapte cu apă ad libitum înainte de administrarea intragastrică a soluţiei de testat.

Șoarecii au fost împărțiți aleatoriu în 22 de grupuri, cu 10 animale în fiecare grup. Li s-au administrat medicamente experimentale de același volum de două ori pe zi (dimineața și seara) timp de patru zile, după cum urmează:

Grupa 1: Glicozide totale intragastrice ale soluției de purificare C. deserticola (20 mL/kg), (volum soluție/greutate șoarece),

Grupa II: apă distilată intragastrică (grupul martor negativ) și

Grupa III: dietilstilbestrol intragastric (20 ug/ml) (grup de control pozitiv).

În a cincea zi, toți șoarecii au fost sacrificați. Uterele au fost imediat îndepărtate și cântărite și s-au calculat coeficienții uterini.

analize statistice

Un test t cu două cozi pentru eșantion pereche a fost utilizat pentru a identifica diferențele semnificative statistic în diferiții parametri din diferitele grupuri experimentale. Analiza a fost efectuată folosind software-ul statistic SPSS (SPSS pentru Windows v21.0, SPSS Inc., SUA). Diferențele au fost considerate semnificative statistic la un nivel de încredere de 95 la sută (p <>

rezultate si discutii

Linearitatea și corelarea randamentelor actozide și glicozide totale

Ecuația de regresie liniară a randamentului actozidei a fost y {{0}}x – 14,75 (unde x este concentrația de actozidă și y este aria de vârf corespunzătoare) cu un coeficient de corelație de r=1 în intervalul de concentraţie de 0.12−{{1{0}}.72 mg/mL. Aceasta a indicat o curbă de calibrare liniară. Ecuația de regresie liniară a randamentului total de glicozide a fost y=26.{074x plus 0,0866 (unde x este concentrația glicozidelor totale și y este aria maximă corespunzătoare) cu un coeficient de corelație de r { {12}}.9982 în intervalul de concentrație de 0,013−0,065 mg/mL. Aceasta a indicat, de asemenea, o curbă de calibrare liniară.

Investigarea metodologică

Precizia, reproductibilitatea, stabilitatea și recuperarea probelor au fost investigate în cadrul investigației metodologice. În experimentul de precizie, deviația standard relativă (RSD) a actozidei și a glicozidelor totale a fost de 1,43 la sută și, respectiv, de 0,05 la sută. În experimentul de reproductibilitate, RSD-ul actozidei și al glicozidelor totale a fost de 0,10 procente și, respectiv, de 1,44 la sută. În experimentul de stabilitate de 24 de ore, RSD-ul actozidei și al glicozidelor totale a fost de 0,14% și, respectiv, 0,90%. În experimentul de recuperare, recuperarea actozidei a fost de 100,50 la sută cu un RSD de 2,08 la sută, în timp ce recuperarea glicozidelor totale a fost de 99,12 la sută cu un DSR de 1,65 la sută. Toate valorile RSD au fost mai mici de 3 procente. Aceste rezultate au demonstrat o bună precizie și reproductibilitate. În plus, proba a fost stabilă timp de 24 de ore. Rezultatele recuperării sunt, de asemenea, în intervalul permis (95-105 la sută). Prin urmare, această metodă poate fi utilizată pentru determinarea actozidei și a randamentului total de glicozide după purificare.

Investigarea cu un singur factor a TGCD

Purificarea TGCD folosind rășină macroporoasă poate fi afectată de mulți factori, cum ar fi tipul de rășină, factorii statici de adsorbție (timpul de adsorbție, concentrația de scurgere și pH-ul soluției de probă) și condițiile de eluare (viteza curgerii, volumul și concentrația). Folosind capacitatea de adsorbție și ratele de desorbție și eluare a TGCD ca indici, starea experimentală a fost determinată pe baza rezultatelor experimentelor cu un singur factor. Folosind rășină de adsorbție macroporoasă de tip AB-8, s-au determinat următoarele condiții optime: soluție probă de 0,5 mg/mL, pH de 10, timp de adsorbție statică de 8 ore, 2 BV apă distilată pentru spălarea impurităților, 20 BV 80% etanol ca eluant și o viteză de curgere de 0,5 BV/min. Rezultatele specifice sunt prezentate în figurile 1-7.

CCD pentru optimizarea tehnologiei de purificare TGCD

Pe baza rezultatelor investigației cu un singur factor, au fost selectați ca indici trei factori care influențează semnificativ metoda de purificare, și anume pH-ul soluției de probă (x1), concentrația eluantului (x2) și volumul eluantului (x3). Conform principiului CCD, fiecare factor are cinci niveluri. Nivelurile maxime și minime ale acestor diverși factori au fost stabilite în funcție de rezultatele experimentului preliminar. Nivelurile factorilor sunt prezentate în Tabelul 1, iar rezultatele experimentale sunt prezentate în Tabelul 2.

Au fost determinate randamentele totale de glicozide și acteozide pentru a optimiza metoda de purificare pentru TGCD. În primul rând, randamentele totale de glicozide și acteozide au fost stabilite la criteriile numerice de dezirabilitate (d) între {{0}}-1. Apoi, dezirabilitatea globală (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, unde n este numărul indicelui] a fost calculată. SPSS21.{{10}} software-ul și software-ul expert în proiectare au fost utilizate pentru regresia liniară multiplă și potrivirea binomială a variabilelor independente și OD, cu p < 0.05="" a="" fost="" luat="" în="" considerare="" un="" standard="" semnificativ="" statistic="" al="" ecuației.="" ecuația="" cu="" o="" valoare="" r="" mai="" mare="" (coeficient="" de="" corelație="" multiplă)="" a="" fost="" selectată="" ca="" model="" de="" cea="" mai="" bună="" potrivire.="" ecuația="" liniară="" multivariată="" este="" reprezentată="" ca="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plus="" 0.{034x2="" plus="" 0.012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" p="0.004)." ecuația="" binomială="" este="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079x1="" plus="" 0,62914x2="" plus="" 0,041161x3="" plus="" 0,014972x1x2="" plus="" 2,06050*{10-4x1x3="" plus="" 8}2}{5}x3="" plus="" 8}2}{5}x3="" plus="" 8}2}{5}{56}="" x="" 8}2}{5}{56}="" {56}},78730="" ×="" 10-3x{22="" -="" 2,89446="" ×="" 10-3x32="" (r="0,91," p="0,012)." din="" ecuațiile="" de="" mai="" sus="" se="" poate="" observa="" că="" coeficientul="" de="" corelație="" al="" ecuației="" de="" regresie="" liniară="" multivariată="" este="" mai="" mic.="" corelația="" dintre="" variabilele="" independente="" și="" dependente="" este="" foarte="" scăzută="" și="" a="" fost="" considerată="" nefavorabilă="" de="" utilizare="" în="" modelul="">

Dar, coeficientul de corelație al ecuației binomiale a fost ridicat și a rezultat într-o potrivire bună. Prin urmare, a fost selectat modelul binom. Pe baza unei analize cuprinzătoare a figurii suprafeței și a hărții de contur combinate cu datele experimentale (valoarea DO aproape de {{0}}.6), a fost obținut intervalul optim al metodei de purificare. Din figura 8, se poate observa că valoarea maximă a DO a fost generată atunci când pH-ul soluției de probă (A) a fost în intervalul 9-10, iar concentrația de eluant (B) a fost în intervalul 79-85 la sută. . Figura 9 arată că valoarea maximă a DO a fost obținută atunci când valoarea pH-ului soluției de probă (A) a fost în intervalul 9-10, iar volumul de eluant (C) a fost în intervalul 20-25 BV. Figura 10 arată că valoarea maximă a DO a fost obținută atunci când concentrația de eluant (B) a fost în intervalul de 80-85 la sută, iar volumul de eluant (C) a fost în intervalul de 20-25 BV. Dintr-o analiză cuprinzătoare a acestor date, s-a determinat pH-ul soluției de probă, concentrația de eluant și volumul de eluant a fi în intervalul 9-10, 80-85 la sută și, respectiv, 20-25 BV. Pe baza ecuației binomiale multivariate pentru rezultatele derivate variabile și schema optimă, s-a găsit că cea mai bună metodă de purificare TGCD este la o concentrație de eluant (etanol) de 85% și un volum de 25 BV la un pH de 11. Valoarea OD corespunzătoare a fost 0,8332 , iar randamentul total de glicozide a fost de 73,0339 la sută . Impresia vizuală din cifre 8-10 identifică cea mai bună metodă ca fiind cea în care au fost luate în considerare interacțiunile dintre cei doi factori, deși cea mai bună metodă dedusă din formulă o recunoaște pe cea în care au fost incluse interacțiunile dintre cei trei factori. Cele două rezultate au fost diferite și metoda optimă de purificare a fost considerată a fi cu o concentrație de eluant (etanol) de 85 la sută și un volum de 25 BV la un pH de 11.

Măsurarea creșterii uterului

Coeficientul uterin al fiecărui grup este prezentat în Tabelul 3. În comparație cu grupul martor negativ, rezultatele celorlalte grupuri au fost semnificativ diferite. Sa constatat că TGCD obținut din 20 de metode de purificare diferite exercită toate acțiuni estrogenice.

Experiment de confirmare

Rezultatele complete ale testului CCD și de creștere a uterului au arătat că metoda optimă de purificare a fost considerată a fi cu o concentrație de eluant (etanol) de 85 la sută și un volum de 25 BV la un pH de 11.

procesul de validare, randamentul mediu al glicozidelor totale a fost de 70,9150 la sută. Abaterea medie între valorile prognozate și cele reale a fost de 2,1180%. Prin urmare, se poate sugera că predictibilitatea și credibilitatea experimentală a acestui model sunt bune.

Identificarea TGCD după purificare

Pe baza timpului de retenție și a datelor MS, s-au speculat 21 de constituenți naturali, inclusiv campneozida 1, 2′-acetillacteozidă, cistanozida A, cistanozida B, siringalida A 3'- - L-ramnopiranozida, tubulozida A, tubulozida B, salidrozida, cistanozid G, acid teniposid, decafeoilacteozid, 8-acid epiloganic, echinacozid, cistanozid F, cistantubulozidă B1, izoacteozidă, actozidă, cis-acteozidă, kankanozidă E, osmantuzidă B și cistanozidă C. Timpul de retenție, MS și MS/ Informațiile MS, formula și compușii speculați sunt prezentate în Tabelul 4.

Q-TOF-MS este deosebit de potrivit pentru identificarea structurală a componentelor moleculare complexe ale medicamentelor și alimentelor, deoarece poate oferi posibile compoziții elementare prin masa moleculară exactă și caracteristicile structurale ale ionilor fragmentului. Pentru a stabili o caracterizare structurală sistematică, pentru identificare au fost utilizate, de asemenea, Q-TOF-MS, date MS, căutarea bazelor de date și literatura de referință publicată. Formula moleculară a fiecărei componente țintă a fost dedusă din ionul părinte și a fost corelată cu compușii cunoscuți. Această formulă ar putea fi determinată în continuare din ionii săi fragmentați înrudiți. De exemplu, vârful 5 a arătat un ion deprotonat predominant la m/z 654 (C30H38O16), care a fost identic cu compoziția elementară a campneozidei 1. Pierderea de cafeoil s-a format dintr-un ion fragment la m/z 493 și pierderea de fragmentul rha a fost format dintr-un ion fragment la m/z 347.

Concluzie

Folosind o tehnologie LC-Q-TOF-MS, a fost dezvoltată și validată complet o metodă de analiză calitativă simplă și robustă pentru TGCD. Datele de validare pentru screening-ul și identificarea compușilor naturali din TGCD au fost satisfăcătoare. Douăzeci și unu de compuși bioactivi din TGCD au fost speculați după cum urmează: salidrozidă, cistanozida G, acid geniposidic, decafeoilacteozida, campneozida 1, 8-acidul epiloganic, 2'-acetilacteozida, cistanozida A, cistanozida B, siringalida A3′{{99} }}L-ramnopiranozidă, echinacozidă, cistanozidă F, cistantubulozidă B1, izoacteozidă, acteozidă, tubulozidă A, cis-acteozidă, kankanozidă E, osmantuzidă B, cistanozidă C și tubulozidă B. Caracterizarea structurală a acestor compuși poate oferi o bază experimentală pentru controlul calității lor și aplicarea clinică ulterioară datorită activității lor estrogenice. Aceasta poate oferi o opțiune terapeutică nouă și îmbunătățită pentru tratamentul sindromului postmenopauză, evitând astfel efectele secundare și reacțiile adverse ale terapiei cu estrogeni.

Abrevieri

TGCDCistanche deserticolaglicozide totale LC/Q-TOF-MS cromatografie lichidă/spectrometrie de masă cu timp de zbor cvadrupol

Metodologia suprafeței de răspuns RSM

Design compozit central CCD

Spectrometrie de masă MS HPLC/Q-TOF-MS Cromatografie lichidă de înaltă performanță/ Spectrometrie de masă în timp de zbor cu patrupol

ACN Acetonitril

Volumul patului BV

OD dezirabilitatea generală

LC-MS cromatografie lichidă-spectrometrie de masă

Q-TOF-MS spectrometrie de masă cu timp de zbor quadrupol

Medicamente tradiționale chinezești MTC

Abaterea standard relativă RSD

Mulțumiri

Acest proiect a fost susținut de Fundația Națională de Științe Naturale din China (nr. 81073015), Fundația Națională a Provinciei Heilongjiang (ZD2017014), Planul de formare a tinerilor talente inovatoare al Colegiului din Provincia Heilongjiang (UNPYSCT- 2017209). Autorii declară că nu există niciun conflict de interese cu privire la publicarea acestei lucrări.

Conflict de interese

Autorii nu declară niciun conflict de interese.

Referințe

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, Glicozide feniletanoide cu activități antiinflamatorii din tulpinile de Cistanche deserticola cultivate în deșertul Tarim, Fitoterapia, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Caracterizări preliminare, activitatea antioxidantă și hepatoprotectoare a polizaharidei din Cistanche deserticola, Jurnalul Internațional de Macromolecule Biologice , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, iridoizi antiinflamatori din tulpinile de Cistanche deserticola cultivate în deșertul Tarim, Jurnalul chinezesc de medicamente naturale, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Modificări ale nivelurilor de glicozide feniletanoide, activitate antioxidantă și alte trăsături de calitate în feliile de Cistanche deserticola prin procesare cu abur, substanțe chimice și Pharmaceutical Bulletin (Tokyo), 2016, 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, „Desert Ginseng”: a review, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., O strategie integrată pentru a diferenția cantitativ mușețelul întreCistanche deserticolași C. tubulosa folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță-hibrid cu spectrometrie de masă cu capcană de ioni liniară triplu cvadrupol, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Screening rapid și identificarea diferențelor dintre metabolițiiCistanche deserticolași extract de apă de C. tubulosa la șobolani prin analiza combinată de recunoaștere a modelelor UPLC-Q-TOF-MS, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., Identificarea bazată pe HPLC/Q-TOF-MS a constituenților absorbiți și a metaboliților lor în serul și urina de șobolan după administrarea orală de Cistanche deserticola Extract, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Eliminarea penicilinei G prin combinația de sonoliză și proces fotocatalitic (sono-fotocatalitic) din soluție apoasă: optimizarea procesului folosind RSM (Response Surface Methodology), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Optimization of Extraction Conditions for Maximal Phenolic, Flavonoid and Antioxidant Activity from Melaleuca bract data Leaves Using the Response Surface Methodology, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Alegerea extracției asistate cu ultrasunete cuplată cu spectrofotometrie pentru determinarea rapidă a acidului galic în probele de apă: Design central compozit pentru optimizarea variabilelor de proces, Ultrasonics Sonochemistry, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Caracterizarea structurală și identificarea glicozidelor feniletanoide dinCistanches deserticola YC Made UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Phytochemical Analysis, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Analiza cantitativă a Cistanches Herba folosind cromatografie lichidă de înaltă performanță cuplată cu detectarea matricei de diode și spectrometrie de masă cu rezoluție combinată cu metode chimiometrice. Journal of Separation Science, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, Screening of phyto-estrogenic effective extracts and doze ofCistanche deserticola, Chinese Herbal Medicines, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Rapid Identification of Cistanche via Fluorescence Spectrum Imaging Technology Combined with Principal Components Analysis and Fisher Distinction, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.