Acțiunea promitotică a Oenothera Biennis asupra fibroblastelor dermice umane senescente Partea 2

3. Discuție

În acest studiu, am investigat efectul unui extract de celule hidrofile de Oenothera biennis (ObHEx) asupra senescenței celulare, deoarece a arătat proprietăți anti-îmbătrânire a pielii atunci când a fost testat în modele in vitro și ex vivo [18]. Am folosit un model senescent similar de NHDF supus SIPS pentru tratamentul cu H2O2 [21,22].

Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. prin radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate robustă de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și capacitatea de a elimina speciile reactive de oxigen și de a preveni radicalii liberi.

a indus degradarea colagenului și are, de asemenea, un efect de reparare bun asupra distrugerii anionilor de radicali liberi de timină.

Faceți clic pe De unde pot cumpăra Cistanche

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Pentru a înțelege mecanismul de acțiune al ObHEx asupra fibroblastelor dermice umane senescente, prin dezvăluirea căilor biologice modificate de extract, am efectuat o abordare proteomică ultra-profundă de spectrometrie de masă independentă de date. Ne-a permis să obținem cea mai completă analiză de proteom a celulelor senescente până în prezent și, pentru prima dată, cuantificarea simultană a numeroși markeri de senescență.

În primul rând, pentru a evalua inducerea senescenței prin tratamentul cu H2O2 pe celulele NHFD, am cuantificat markerii de senescență cunoscuți. Datele noastre de proteomică au confirmat inducerea senescenței de către stresul oxidativ: într-adevăr, am observat niveluri modificate ale markerilor de senescență deja cunoscuți legate de creșterea conținutului lizozomal (GLB1 și FUCA1), deteriorarea ADN-ului (ATR, ATM, MACROH2A1 și MACRO2A2) și ciclul celular în faza G2. arestare (CDK1NA și MKI67). Mai mult decât atât, analiza de îmbogățire a căii celor mai reduse proteine ​​din H2O2 tratate față de celulele de control indică mitoză, reflectând stoparea proliferării senescente.

Comparând proteomul celulelor SIPS NHDF tratate cu ObHEx față de cele netratate, am constatat că tratamentul cu extract a fost capabil să restabilească parțial nivelurile de proteine ​​și complexe care joacă roluri cruciale în mai multe etape ale mitozei. Incubarea ObHEx a crescut nivelurile de CDK1, o proteină mitotică cheie care declanșează intrarea în mitoză prin formarea unui complex cu ciclina B [34]. Mai mult, toate cele cinci subunități ale complexului condensin I au fost reglate în sus. Acest complex este compus din două subunități de întreținere structurală a cromozomilor (SMC), SMC2 și SMC4, și trei subunități non-SMC, NCAPD2, NCAPH și NCAPG. În prometafaza, funcția complexului condensin I este de a promova condensarea de tip a cromozomilor prin introducerea de superbobine pozitive în ADN într-o manieră dependentă de ATP [35]. În plus, extractul a suprareglat KNTC1, NUF2 și TRIP13, care sunt trei proteine ​​asociate cu kinetocorul, un complex mare care, în timpul prometafazei, conectează cromatina centromerică la microtubulii de la poli opuși ai fusului pentru a favoriza segregarea cromatidelor surori. 36,37]. Restabilirea parțială a nivelurilor de proteine ​​MCM a fost de asemenea detectată. Aceste proteine ​​sunt în centrul complexului helicaza de replicare care desfășoară ADN-ul dublu catenar pentru a oferi catene simple ca șabloane pentru ADN polimeraza. Complexul MCM este transformat într-o helicază activă în timpul fazei S, dar este deja încărcat pe cromatină în timpul telofazei [38,39]. Extractul a crescut și nivelurile de IQGAP3, PBK și DHFR. Primul, IQGAP3, este un regulator important al progresiei mitotice deoarece promovează activitatea cdk7, esențială pentru activarea Cdc2 [40,41]; PBK este o kinază activă numai în mitoză; când este fosforilat, interacționează cu p53, destabilizandu-l și atenuând calea de deteriorare a ADN-ului [42]; iar DHFR este o enzimă cheie în biosinteza ADN-ului ale cărei niveluri sunt atenuate semnificativ în fibroblastele umane senescente [43].

Testele bio-ortogonale au arătat, de asemenea, capacitatea ObHEx de a inversa parțial semnele distinctive ale senescenței, și anume activitatea lizozomală și oprirea ciclului celular. Într-adevăr, pentru a verifica dacă restabilirea expresiei proteinei mitotice de către ObHEx se traduce prin reactivarea ciclului celular, am efectuat experimente FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) pe celule SIPS NHDF tratate sau nu cu extract. Ei au arătat că ObHEx a fost capabil să reducă fracția de celule blocate în faza G2 și să promoveze reintrarea acestora în ciclul celular al celulelor senescente.

4. Materiale și Metode

4.1. Cultură de celule

Fibroblastele dermice umane normale (NHDF; Promocell) au fost cultivate în Mediu Eagle Modificat Dulbecco (DMEM; Gibco) suplimentat cu 10% ser fetal bovin (FBS; Gibco) și 500 U/mL de penicilină-streptomicina (Gibco) în aer 95% , 5 la sută CO2 și o atmosferă umidificată la 37 ◦C.

4.2. Inducerea senescenței premature induse de stres (SIPS)

Un total de 10 1200 000 celule NHDF au fost însămânțate în fiecare dintre plăcile de cultură celulară de 60 mm, cu o zi înainte de incubarea lor cu 100 µM H2O2 la 37 ◦ C timp de 2 ore [21,22]. Ulterior, H2O2 a fost spălat cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS; Gibco) pentru a termina tratamentul și celulele au fost crescute într-un mediu normal timp de 4 zile. Pentru celulele nesenescente, utilizate ca martor, celulele 2240 000 NHDF au fost însămânțate în fiecare dintre plăcile de cultură celulară de 60 mm. Experimentul a fost realizat în 5 replici biologice.

4.3. Preparat pentru extractul hidrofil de Oenothera Biennis (ObHEx).

Extractul a fost preparat în laboratoarele Arterra Bioscience SpA [18]. Culturile celulare au fost obținute din frunzele plantelor Oenothera biennis (furnizate de GEEL Floricultura ss) prin inducerea proliferării celulelor meristematice pe plăci solide de agar până la calusurile obținute. Celulele au fost transferate în mediul lichid de creștere (Gamborg B5, suplimentat cu acid 2,4 diclorofenoxiacetic (1 mg/L), adenină (1 mg/L) și kinetină (0,01 mg/L). )) și crescute sub formă de culturi în suspensie sub agitare orbitală. Odată ce au fost obținute culturi de aproximativ 150 g/L, celulele au fost colectate și lizate în PBS la pH 7,4 pentru a prepara un extract solubil în apă. După liofilizare, pulberea obţinută a fost dizolvată în apă sau mediu de cultură celulară la concentraţiile adecvate pentru testare.

4.4. Tratament cu extract hidrofil Oenothera Biennis (ObHEx).

Celulele NHDF au fost incubate timp de 24 de ore cu 0.{01 la sută (p/v) ObHEx într-un mediu complet. Ulterior, celulele au fost spălate de trei ori cu PBS și tratate pentru încă 24 de ore cu 0,01 procente (p/v) ObHEx într-un mediu fără ser. Au fost apoi detașate prin tripsinizare, centrifugate la 500 g timp de 10 minute la 4 °C și spălate de două ori cu PBS. Celulele martor netratate au suferit aceleași incubații fără ObHEx.

4.5. Pregătirea probelor pentru analiza proteomică

Peleții au fost resuspendați în 60µL de tampon pentru testarea radioimunoprecipitării (RIPA) și lizat prin sonicare. Concentrația proteinei lizatelor celulare a fost cuantificată utilizând un kit DC™ Protein Assay (Biorad; #5000112). Digestia pe coloană micro spin S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, SUA) a fost efectuată pe 50 ug de lizate celulare conform instrucțiunilor producătorului. Pe scurt, probele au fost reduse cu 20 mM tris(2-carboxietil)fosfină (TCEP) și alchilate cu 50 mM tioacetamidă (CAA) timp de 15 minute la temperatura camerei. Acid fosforic apos a fost apoi adăugat la o concentraţie finală de 2,5% urmată de adăugarea unui tampon de legare S-Trap (metanol apos 90%, TEAB 100 mM, pH 7,1). Amestecuri au fost apoi încărcate pe coloane S-Trap. Au fost efectuate cinci etape suplimentare de spălare pentru eliminarea completă a SDS. Apoi, lizatele celulare au fost digerate cu 2,5 pg de tripsină (Promega) la 47 ◦ C timp de 1 oră. După eluare, peptidele au fost uscate în vid, resuspendate în 2% ACN, 0,1% FA și cuantificate prin Nanodrop.

4.6. Identificarea și Cuantificarea proteinelor nanoLC-MS/MS

Un total de 400 ng din fiecare probă au fost injectați pe un sistem de cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC) cu nanoplate (Bruker Daltonics, Bremen, Germania) cuplat la un timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Bremen). , Germania) spectrometru de masă. Separarea HPLC (Solvent A: {{30}},1% acid formic în apă; Solvent B: 0,1% acid formic în acetonitril) a fost efectuată la 250 L/min folosind o coloană cu emițător compact (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Australia) folosind gradient de eluare (2 până la 13 procente de solvent B timp de 41 de minute; 13 până la 20 de procente timp de 23 de minute; 20 de procente până la 30 de procente timp de 5 minute; 30 de procente până la 85 la sută timp de 5 minute și, în final, 85 la sută timp de 5 minute pentru a spăla coloana). Datele spectrometrice de masă au fost obținute utilizând metoda de achiziție cu fragmentare în serie cu acumulare paralelă (diaPASEF) de analiză independentă de date. Setările scutecului au fost: intervalul de masă de la 400 la 1200 Da, intervalul de mobilitate de la 0,60 la 1.43 1/k0, numărul de fereastră de mobilitate de 1, durata de ciclu estimată de 1,79 s, pași de masă pe ciclu de 32.

4.7. Procesarea datelor MS și analiză bioinformatică

Analiza datelor a fost efectuată folosind software-ul DIA-NN (versiunea 1.8) [44]. O căutare în baza de date umană UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (lansare în februarie 2021, 20.408 intrări) a fost efectuată folosind un flux de lucru fără bibliotecă. În acest scop, opțiunile „FASTA digest for library free search/library generation” și „Deep learning spectre, RTs, and IMs prediction” au fost verificate pentru generarea de ioni precursori. Au fost permise maxim 2 clivajuri omise ale tripsinei, iar modificarea variabilă maximă a fost setată la 5. Carbamidometilarea (Cys) a fost setată ca modificare fixă, în timp ce excizia metioninei N-terminală a proteinei, oxidarea metioninei și acetilarea N-terminală au fost setate ca variabile. modificări. Intervalul de lungime a peptidei a fost setat la 7–30 de aminoacizi, intervalul de încărcare precursor 2–4, intervalul m/z precursor 300–1800 și intervalul de ioni de fragment m/z 200–1800. Pentru a căuta masa părinte și ionii de fragment, acuratețea a fost dedusă automat de DIA-NN și a fost stabilită în jurul valorii de 13 ppm pentru fiecare analiză. Ratele de descoperire falsă (FDR) la nivelurile de proteine ​​și peptide au fost stabilite la 1 la sută. Meciul între runde a fost permis. Pentru strategia de cuantificare, Robust LC (de înaltă precizie) a fost utilizat conform indicațiilor din documentația software-ului, în timp ce setările implicite au fost păstrate pentru ceilalți parametri ai algoritmului.

Analiza statistică și bioinformatică a fost efectuată cu software-ul Perseus (versiunea 1.6.15) disponibil gratuit pe site-ul web (accesat pe 22 iunie 2021) [45] și R/R Studio și RStudio versiunea 20 21.09.1 30 (accesat pe 12 noiembrie 2021). Toate analizele statistice R au fost efectuate folosind pachetul R stats. S-a utilizat matricea raportului pg de DIA-NN și intensitățile au fost transformate log2 pentru analiza statistică. Pentru comparația statistică, am stabilit patru grupuri, fiecare conținând 5 replici biologice. Apoi am filtrat datele pentru a păstra doar proteinele cu cel puțin 3 valori valide în cel puțin un grup. Apoi, datele au fost imputate pentru a completa punctele de date lipsă prin crearea unei distribuții gaussiene a numerelor aleatoare cu o abatere standard de 33 la sută în raport cu abaterea standard a valorilor măsurate și o deviație standard de 1,8 în jos a mediei pentru a simula distribuția scăzută. valorile semnalului. Testul t al lui Student a fost efectuat între SEN și CTRL FDR < 0,05, S0=0.1 pentru a confirma prezența markerilor specifici senescenței. Apoi, pentru a investiga dacă diferența de mărime a efectului dintre absența sau prezența tratamentului este aceeași pentru celulele în care senescența a fost indusă sau nu, interacțiunea dintre ambii factori (adică, Inducerea și Tratamentul) a fost investigată folosind ANOVA bidirecțională. în R. Apoi, valorile p obținute pentru interacțiunea ambilor factori au fost ajustate pentru teste multiple folosind metoda Benjamini–Hochberg [46] pentru a controla rata de descoperire falsă (FDR). În cele din urmă, analiza post-hoc Tukey HSD a fost efectuată pe proteine ​​care prezintă o valoare q < 0,05. Datele proteomice ale spectrometriei de masă au fost depuse la Consorțiul ProteomeXchange prin intermediul depozitului partener PRIDE [47] cu identificatorul setului de date PXD034222.

4.8. Colorarea cu ß-galactozidază asociată senescenței

Activitatea ß-galactozidazei (SA-ß-gal) asociată senescenței a fost evaluată folosind un kit de colorare Cell Signaling Technology (#9860). Un total de 1250 000 celule NHDF/godeu au fost însămânțate într-o placă de 6-godeuri cu o zi înainte de SIPS; în timp ce, ca control, 250 000 celule/godeu. După 4 zile într-un mediu normal, celulele au fost incubate sau nu cu 0,01 procente (p/v) ObHEx timp de 48 de ore. Ulterior, au fost spălate cu PBS și tratate cu soluția de fixare timp de 15 min. După două spălări cu PBS, celulele au fost incubate cu soluția de colorare cu ß-gal (pH final de 6,0) care conține 5-bromo-4-cloro-3-indolil- -D-galacto -piranozidă (X-Gal) la 37 ◦C într-un incubator uscat timp de 20 ore. Celulele pozitive sunt albastre. Culoarea se datorează clivajului X-Gal în galactoză și 5-Bromo-4-cloro-3-indoxil (X) de către SA-ß-gal. Indoxilul este oxidat la 5,50 -dibromo-4,40 -dicloro-indigo care formează un precipitat albastru intens. Procentul de celule pozitive din totalul celulelor a fost evaluat prin numărarea a 100-150 de celule în 5 imagini selectate aleatoriu capturate de microscop, pentru fiecare condiție. Celulele au fost numărate folosind software-ul ImageJ. Experimentul a fost realizat în trei exemplare.

4.9. Analiza sortării celulelor activate prin fluorescență

Un total de {{0}} celule NHDF/godeu au fost însămânțate într-o placă de 6-godeuri cu o zi înainte de SIPS; în timp ce, ca control, 50 000 celule/godeu. După 4 zile într-un mediu normal, celulele martor și senescente au fost tratate sau nu cu 0,01 procente (p/v) ObHEx timp de 72 de ore. Apoi, celulele au fost incubate în prezența a 5 ug/mL de Hoechst 33342 timp de 30 de minute la 37 °C. După tripsinizare și centrifugare la 500 g timp de 2 minute, acestea au fost resuspendate în 200 uL de PBS. În cele din urmă, fluorescența celulară a fost măsurată cu un analizor de celule BD LSRFortessa. Datele au fost analizate folosind software-ul FlowJo v10.8.1. Experimentul a fost realizat în trei exemplare.

5. Concluzii

Profilarea proteomului global asociată senescenței profunde obținută aici oferă sute de proteine ​​dereglate de SIPS care pot fi exploatate de comunitatea științifică pentru a înțelege în continuare senescența și pentru a evalua efectele noilor potențiali modulatori. Mai mult, munca noastră dovedește un mecanism de acțiune pro-mitotic al ObHEx asupra fibroblastelor dermice umane senescente: prin creșterea expresiei proteinei mitotice, promovează restabilirea proliferării celulelor senescente. Astfel, pe baza acestor rezultate, propunem ObHEx ca un adjuvant puternic împotriva senescenței asociate cu îmbătrânirea pielii.

Contribuții ale autorului:Conceptualizare, SC, MCM și ICG; metodologie, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) și ICG; software, KR; investigație, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP și CC (Corinne Cordier); resurse, MCM și ICG; redactare — pregătirea proiectului original, SC și ICG; scriere – revizuire și editare, SC, MCM și ICG Toți autorii au citit și au fost de acord cu versiunea publicată a manuscrisului.

Declarație de disponibilitate a datelor:Datele proteomice ale spectrometriei de masă au fost depuse în Consorțiul ProteomeXchange prin intermediul depozitului partener PRIDE [47] cu identificatorul setului de date PXD034222 (Detaliile contului examinatorului: Nume utilizator: recenzor_pxd034222@ebi.ac.uk; Parola: fK9Pjv90) .

Mulțumiri: Acest studiu a fost susținut de Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I „Capitale Umano”, Azione I.1 „Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale”. Mulțumim celorlalți membri ai platformei Proteomics Necker Vincent Jung și Joanna Lipecka pentru sprijinul lor științific neprețuit și sugestiile fructuoase.

Referințe

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Senescența celulară în îmbătrânire: de la mecanisme la oportunități terapeutice. Nat. Pr. Mol. Cell Biol. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Baker, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Un ghid pentru evaluarea senescenței celulare in vitro și in vivo. FEBS J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak- ˙Zmijewska, A.; Mosieniak, G. Ce este și ce nu este senescența celulară. Postepy Biochim. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, E.-G. Veziculele extracelulare derivate din fibroblaste senescente atenuează efectul dermic asupra diferențierii keratinocitelor. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello, S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Fibroblastele senescente promovează creșterea celulelor epiteliale și tumorigeneza: o legătură între cancer și îmbătrânire. Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 2001, 98, 12072–12077. [CrossRef]

6. Wlaschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Tesutul conjunctiv și senescența fibroblastelor în îmbătrânirea pielii. J. Invest. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [CrossRef]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. țintirea celulelor senescente în medicina translațională. EMBO Mol. Med. 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Intervenții terapeutice pentru îmbătrânire: cazul senescenței celulare. Drug Discov. Astăzi 2017, 22, 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E.; Birar, VC; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, EL; et al. Modularea cu molecule mici a expresiei factorului de îmbinare este asociată cu salvarea din senescența celulară. BMC Cell Biol. 2017, 18, 31. [CrossRef]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS O revizuire actualizată a activităților farmacologice și a constituenților fitochimici ai primrozei de seară (genul Oenothera). Pac asiatic. J. Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [CrossRef]

11. Timoszuk, M.; Bielawska, K.; Skrzydlewska, E. Evening Primrose (Oenothera biennis) Activitate biologică dependentă de compoziția chimică. Antioxidanți 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, K.-M.; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Efectele protectoare ale Oenothera Biennis împotriva stresului oxidativ indus de peroxid de hidrogen și a morții celulare în cheratinocitele pielii. Viața 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. Granica, S.; Czerwi ´nska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja, M.; Kiss, AK Compoziția chimică, activitatea antioxidantă și antiinflamatoare a extractelor preparate din părțile aeriene ale Oenothera Biennis L. și Oenothera Paradoxa Hudziok Obținute după cultivarea semințelor. J. Agric. Food Chim. 2013, 61, 801–810. [CrossRef]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Pavel, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, CA; et al. Screeningul fitochimic și biologic al Oenothera Biennis L. Extract hidroalcoolic. Biomolecule 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Suplimentarea cu ulei de primulă în dermatita atopică: efect asupra acizilor grași din neutrofile și epidermă. Lipide 1991, 26, 557–560. [CrossRef]

16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Culturi de celule vegetale ca sursă de ingrediente active cosmetice. Cosmetice 2014, 1, 94–104. [CrossRef]

17. Cezar, LK; Cech, NB Sinergia și antagonismul în extractele de produse naturale: când 1 plus 1 nu este egal cu 2. Nat. Prod. Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello, S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Un extract de culturi celulare Oenothera Biennis dotat cu activitate anti-îmbătrânire a pielii îmbunătățește proprietățile mecanice celulare. Metaboliți 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewitz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, triterpenele pentaciclice GG de la Terminalia Arjuna prezintă multiple beneficii asupra pielii îmbătrânite și uscate. Skin Pharmacol. Physiol. 2014, 27, 71–81. [CrossRef]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Influența acidului asiatic, acidului madecasic și asiaticozidei asupra sintezei colagenului uman I. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. Efectele stresului oxidativ asupra inducerii senescenței în fibroblastele umane. J. Carol de Sud. Acad. Sci. 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Metode de inducție a senescenței celulare folosind stresul oxidativ. Metode Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle, S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. -Fucozidaza ca un biomarker nou convenabil pentru senescența celulară. Ciclul celular 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Han, JA; eu, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Beta-galactozidaza asociată senescenței este beta-galactozidaza lizozomală. Aging Cell 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Episcop, C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; et al. Senescența celulară: definirea unei căi înainte. Cell 2019, 179, 813–827. [CrossRef]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ER; Hurov, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; et al. Analiza substratului ATM și ATR dezvăluie rețele extinse de proteine ​​care răspund la deteriorarea ADN-ului. Știință 2007, 316, 1160–1166. [CrossRef]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Disecția moleculară a formării focarelor de heterocromatină asociate senescenței. Mol. Cell Biol. 2007, 27, 2343–2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, MD; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Noi activități funcționale pentru familia P21 de inhibitori CDK. Genes Dev. 1997, 11, 847–862. [CrossRef]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Proteina Ki-67: Din cunoscut și necunoscut. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [CrossRef]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Metode de sortare celulară a celulelor tinere și senescente. Metode Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Rolurile cruciale ale fosfolipidelor în îmbătrânirea și reglementarea duratei de viață. Față. Physiol. 2021, 12, 1998. [CrossRef]

32. Dashty, M. Calea de semnalizare a ariciului este legată de boli legate de vârstă. J. Diabetes Metab. 2014, 5, 2. [CrossRef]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; et al. Izolarea celulelor senescente premature vii folosind tehnologia FUCCI. Sci. Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Lesage, B.; Bollen, M. Cdk1 Comandă evenimente mitotice prin coordonarea unui comutator de fosfatază asociată cu cromozomi. Nat. comun. 2015, 6, 10215. [CrossRef]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, EP; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I și II conduce la compactarea extensivă dependentă de ATP a ADN-ului legat de nucleozomi. Mol. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Crowning the Kinetochore: The Fibrous Corona in Chromosome Segregation. Trends Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Funcționează în stabilirea punctului de control al ansamblului axului prin completarea O-MAD2. Cell Rep. 2018, 22, 1439–1450. [CrossRef]

38. Kuipers, MA; Stasevici, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Încărcarea foarte stabilă a proteinelor Mcm pe cromatina în celulele vii necesită replicare pentru a se descărca. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [CrossRef]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; El, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Studiul proteomic al celulelor fibroblastice ale pielii umane trecute în serie dezvăluie reglarea în jos a proteinelor complexului cromozom Condensin implicate în senescența replicativă. Biochim. Biophys. Res. comun. 2018, 505, 1112–1120. [CrossRef]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, HK; Suter, B. Cdk7 este esențial pentru mitoză și pentru activitatea kinazei activatoare in vivo de Cdk. Genes Dev. 1998, 12, 370–381. [CrossRef]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Gründl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz, S.; et al. IQGAP3, o țintă YAP, este necesar pentru o progresie adecvată a ciclului celular și pentru stabilitatea genomului. Mol. Cancer Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, Punctul de control pentru atenuarea daunelor ADN-ului prin PBK, o nouă kinază mitotică, implică interacțiunea proteină-proteină cu supresorul tumoral P53. Biochim. Biophys. Res. comun. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Bun, L.; Dimri, medic generalist; Campisi, J.; Chen, KY Reglarea expresiei genei dihidrofolat reductazei și a componentelor E2F în fibroblastele diploide umane în timpul creșterii și senescenței. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [CrossRef]

44. Demichev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Neural Networks and Interference Correction Enable Deep Proteome Coverage in High Throughput. Nat. Metode 2020, 17, 41–44. [CrossRef]

45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MELE; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Platforma de calcul Perseus pentru analiza cuprinzătoare a datelor (Prote)Omics. Nat. Metode 2016, 13, 731–740. [CrossRef]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Controlul ratei false de descoperire: O abordare practică și puternică a testării multiple. JR Stat. Soc. Ser. B (Metodol.) 1995, 57, 289–300. [CrossRef]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakash, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; et al. Resurse ale bazei de date PRIDE în 2022: un centru pentru dovezile proteomice bazate pe spectrometrie de masă. Acizi nucleici Res. 2021, 50, D543–D552. [CrossRef]

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】