Markeri de calitate ai Cistanches Herba pe baza relației dintre spectrul și efectul antioxidant Ⅱ

3. Rezultate

3.1 Stabilirea hărții de amprentă

Pregătiți 10 loturi de soluții de testare conform metodei de la punctul 2.1, utilizați condițiile cromatografice de la punctul 2.2 pentru detectare, obțineți amprentele fiecărui lot de probe (Figura 1) și selectați vârful nr. 11 (C11) ca vârf de referință al amprenta. Importați datele de fază lichidă.Fișierul AIA al amprentei produsului de testare Cistanche deserticola în software-ul „Sistemul de evaluare a similitudinii amprentelor cromatografice de medicină tradițională chineză” (versiunea 2012). Au fost calibrate șaptesprezece vârfuri cromatografice comune în modul comun și, în comparație cu spectrul standard de referință mixt (Figura 2), au fost identificate un total de 10 vârfuri comune.

3.2 Cercetări privind efectul antioxidant al Cistanche deserticola

3.2.1 Efectul Cistanche deserticola asupra viabilității celulelor HEK 293.

În comparație cu celulele din grupul normal, Cistanche deserticola nu a produs citotoxicitate la o concentrație de masă de 50~100 ug·mL–1, iar ratele de supraviețuire a celulelor au fost mai mari de 90%. Pe măsură ce concentrația de Cistanche deserticola a crescut, viabilitatea celulară a scăzut. Prin urmare, Cistanche deserticola cu o concentrație de masă de 100 µg·mL–1 a fost selectată pentru administrare ulterioară.

3.2.2 Efectul Cistanche deserticola asupra ROS indus de H2O2 în celulele HEK 293

ROS IC50 al Cistanche deserticola la diferite concentrații a fost calculat folosind software-ul GraphPad Prism 8. Rezultatele sunt prezentate în Figura 3 și Tabelul 2.

Pentru mai multe cunoștințe despre cistanche, să aruncăm o privire la cum să distingem calitatea cistanche. Calitatea Cistanche depinde de conținutul ingredientelor active Echinacoside și Acteoside, conținutul mai mare înseamnă o funcție mai puternică, astăzi luăm 30% Echinacoside și 12% Acteoside Suplimentele Cistanche ca exemplu pentru a ne oferi o explicație, numite în general cistanche în acest articol.

CÂT TIMP TREBUIE PENTRU CISTANCHEA?

3.2.3 Efectul Cistanche deserticola asupra SOD indus de H2O2-a celulelor HEK 293

După cum se arată în Figura 4, în comparație cu grupul normal, activitatea SOD în celulele grupului model a fost semnificativ redusă, iar activitatea SOD a grupului de administrare Cistanche deserticola a crescut în grade diferite (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Efectul Cistanche deserticola asupra CAT indusă de H2O2- în celulele HEK 293

După cum se arată în Figura 5, H2O2 poate provoca o scădere semnificativă a activității intracelulare a enzimei CAT (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Screeningul cu marker Q de Cistanche deserticola bazat pe analiza corelației eficienței spectrale

3.3.1 PCA utilizează valoarea proprie > 1 și rata de contribuție a variației cumulate > 85% ca standard pentru extragerea a 4 componente principale. Graficul scree (Figura 6) a primelor trei componente principale are o curbă mai abruptă, ceea ce înseamnă că rata de contribuție este mai mare. mare. Rata de contribuție a variației cumulate a celor patru componente principale este de 87,640%, indicând faptul că aceste patru componente principale pot reprezenta 87,640% din informațiile variabilelor originale. Valorile proprii inițiale și ratele de contribuție la variație sunt prezentate în Tabelul 3. Matricea componentelor rotite este obținută prin metoda de normalizare a variației maxime Kaiser, vezi Tabelul 4. În funcție de valoarea de încărcare a fiecărui vârf cromatografic pe cele patru componente principale, informațiile reflectate de fiecare componenta principală poate fi extrasă. Adică, cu cât valoarea încărcăturii este mai mare, cu atât influența vârfului cromatografic asupra componentei principale este mai mare. În componenta principală 1, vârfurile 1 până la 3, 5, 7, 11 și 13 până la 15 au cele mai mari încărcări absolute; în componenta principală 2, vârfurile 6 și 16 au cele mai mari încărcări absolute; vârful 17 explică informațiile componentei principale 3, vârful 8 are cel mai mare impact asupra componentei principale 4, astfel încât cele 13 componente chimice ale vârfurilor 1~3, 5~8, 11, 13~17 au fost selectate ca bază materială principală a Cistanche. deserticola pentru analiza ulterioară a eficienței spectrale.

3.3.2 PCC

ROS IC50 este un indicator negativ al eficacității medicamentului, deci un coeficient de corelație negativ înseamnă că variabila dependentă este corelată pozitiv cu eficacitatea medicamentului. Coeficienții de corelație a celor 13 vârfuri cromatografice ale Cistanche deserticola sunt toți negativi, indicând că toți sunt legați pozitiv de eliminarea ROS IC50, printre care vârfurile 14 și 3, 7, 11, 1 și 13 au fost extrem de puternic corelate cu ROSIC50. (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Combinând rezultatele PCC ale ROS IC50, SOD și CAT, vârfurile 1 ~ 3, 5, 7, 11 și 13 ~ 15 au fost selectate ca grup de ingrediente active pentru Cistanche deserticola pentru a exercita efecte antioxidante.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 sunt: ​​5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). Compușii reprezentați de vârfurile 1~3, 5, 7, 11 și 13~15 au fost eliminați ca potențiali componente antioxidante active în modelul PLS.

3.4 Verificarea activității markerului Q de Cistanche deserticola

3.4.1 Efectul ingredientelor active asupra citotoxicității HEK 293

Pe baza rezultatelor analizei corelației spectru-efect, 6 ingrediente, inclusiv acid genipinic, acid 8-epistricnoic, echinaceozidă, verbascozidă, antocinozidă A și isorbascozidă au fost selectate pentru verificarea activității. Cele șase ingrediente active ale Cistanche deserticola nu au prezentat citotoxicitate la concentrații cuprinse între 0,781 și 3,125 µmol·mL–1, iar ratele de supraviețuire a celulelor au fost toate mai mari de 90%. Pe măsură ce concentrația crește, viabilitatea celulară este inhibată. Prin urmare, concentrațiile de dozare ulterioare au fost selectate ca 0,781, 1,563 și 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Perechi de ingrediente active

Efectul antioxidant al celulelor HEK 293 induse de H2O2-a fost verificat prin detectarea efectului de captare al fiecărui ingredient activ asupra ROS intracelular și a capacității de a regla activitatea enzimelor SOD și CAT pentru a verifica dacă are efect antioxidant. În experimentul de eliminare a ROS, diferențele dintre grupurile de acid genipinic cu doze medii și mari și grupul model au fost semnificative statistic (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.