Acidul ascorbic reglează imunitatea, antioxidarea și apoptoza în abalone Haliotis Discus Hannai Ino Partea 2
Jul 31, 2023
3.5. Expresii ale genelor și proteinelor legate de imunitate în glanda digestivă și branhie de abalone
Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. prin radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate puternică de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și are capacitatea de a elimina speciile reactive de oxigen și de a preveni degradarea colagenului indusă de radicalii liberi și, de asemenea, are un bun efect de reparare asupra daunelor anionice a radicalilor liberi de timină.
Faceți clic pe Cistanche Reddit pentru Anti-Aging
【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】
Nivelurile de ARNm ale genelor pivot din calea de semnalizare a receptorului toll-like (TLR) din glanda digestivă a abalonei sunt prezentate în tabelele 6 și 7. Nivelurile de expresie ale tlr2 și tlr4 în glanda digestivă au fost semnificativ scăzute (p < { {5}}.05) și au avut cele mai scăzute niveluri la AA1000 și AA500{{43 }} grupuri, respectiv (Tabelul 6). Nivelul de ARNm al-a a fost reglat semnificativ (p < 0.05), iar -b nu a fost afectat de nivelurile gradate de AA din dietă (p > 0.05 ). Expresiile myd88, moleculă adaptor legată de călătorie (tram), kinaza 4 asociată receptorului interleukinei 1 (irak4) și factorul 6 asociat receptorului factorului de necroză tumorală (traf6) au fost reduse semnificativ după suplimentarea alimentară cu AA (p < 0,05). Traf4 nu a fost influențat de nivelul de suplimentare cu AA (p > 0,05). Nivelurile de ARNm ale iκb kinazei (ikk) și inhibitorului nf-kb (iκb) din glanda digestivă a abalonei nu au fost afectate de AA dietetic (p > 0,05) (Tabelul 7). Cu toate acestea, expresia proteinei kinazei activate de mitogen p38 (marca p38) și a gunoiului au fost reduse semnificativ odată cu creșterea AA din dietă (p <0,05). AA dietetic ar putea reduce semnificativ nivelurile de expresie ale nf-kb, proteina activatoare 1 (ap-1) și factorul de necroză tumorală (tnf-) (p < 0,05), iar nivelul interleukinei 16 (il 16) nu a fost supus dietei AA (p > 0,05). Expresiile proteice ale MyD88, JNK, IL-1 matur și NF-kB p65 nuclear sunt prezentate în Figura 2. Nivelurile de proteine ale MyD88, IL-1 matur și NF-kB p65 nuclear în sistemul digestiv glanda de abalone a fost redusă semnificativ de AA dietetic (p < 0,05). În schimb, nivelul proteic al JNK nu a fost influențat de AA (p > 0,05).
Nivelurile de ARNm ale tlr2, tlr4 și the-b din branhiile abalone nu au fost semnificativ diferite (p > 0.05), iar nivelul de gudron a fost redus semnificativ după niveluri gradate de AA dietetic (p < 0.05) (Tabelul 8). În plus, nivelurile de expresie ale myd88, irak4 și traf6 în branhiile de abalone au fost reduse semnificativ odată cu creșterea nivelului de AA din dietă (p <0.{{20}}5). În schimb, nu au fost observate diferențe semnificative în expresiile tramvaiului și a traficului4 (p > {{30}}.05). AA dietetic a redus în mod semnificativ nivelul ARNm al ikk (p < 0,05), iar expresiile iκb, marca p38 și junk în branhii nu au fost afectate de AA (p > 0,05) (Tabelul 9). O ANOVA unidirecțională a arătat că nivelurile de expresie ale nf-κb, ap-1 și tnf- au fost reduse semnificativ de AA din dietă (p < 0,05) și nu a fost observată nicio diferență semnificativă în nivelurile il 16 (p > 0,05). Nivelurile de proteină ale MyD88 și NF-κB p65 nuclear au fost reduse semnificativ de niveluri gradate de AA dietetic (p <0,05) (Figura 3). Cu toate acestea, expresiile proteice ale JNK și IL{38}} mature în branhiile abalone nu au fost afectate de AA dietetic (p > 0,05).
Expresiile -defensină, crearea de mituri 6 și arginaza-I în glanda digestivă și branhiile abalone sunt date în Tabelul 10. Nivelurile de -defensină și arginază-I din glanda digestivă au crescut semnificativ după AA din dietă (p < 0.05), în timp ce expresia miturii 6 nu a fost afectată de AA din dietă (p > 0,05). În contrast, nivelurile de ARNm de -defensină și arginază-I în branhii nu au fost semnificativ diferite, iar expresia miturii 6 a fost reglată în mod semnificativ de către AA dietetic (p < 0,05).
3.6. Expresii ale genelor imune în glanda digestivă ca răspuns la Vibrio Parahaemolyticus
Nivelurile de expresie a mai multor gene critice în calea de semnalizare TLR, care conțin tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 și tnf- în glanda digestivă a abalone după infecția cu V. parahaemolyticus sunt prezentate în Figura 4. Expresiile ARNm ale tlr4, myd88, tram, nf-κb, ap-1 și tnf- au fost semnificativ upregulate după administrarea V. parahaemolyticus (p <0.05). Modificarea pliului tlr4 a fost cea mai mare în grupul AA0 (10.{24-ori) la 24 de ore după infecție și, ulterior, cel mai înalt nivel a scăzut la 3.{{ 20}}ori în grupul AA5{000 la 6 ore. Nivelul ARNm al myd88 a fost reglat semnificativ la 12-72 de ore în grupul AA0 (de 6,86-ori) și la 6-12 ore în grupul AA5000 (de 3,88-ori) după V. infecție cu parahemolitic. Expresia tramvaiului în glanda digestivă a abalone după infecția cu V. parahaemolyticus a crescut semnificativ de la 12 ore la 72 ore în grupul AA0 și de la 12 ore la 24 ore în grupul AA5000. Schimbarea de ori a nf-kb a atins cel mai înalt nivel la 48 de ore în grupul AA0 (de 10,55-ori), urmată de o scădere a nivelului cel mai înalt la 12 ore în grupul AA5000 (3.{{48} }}schimbare de ori). Nivelul de expresie al ap-1 a fost crescut semnificativ de la 6 ore la 72 de ore în grupul AA0 și AA50 înainte de a reveni la nivelul normal la 72 de ore după suplimentarea continuă cu AA. Schimbarea de ori a TNF- a atins apogeul la 24 de ore după infecția cu V parahaemolyticus în grupurile AA0, AA50, AA100, AA200 și AA500 și a avut cel mai ridicat nivel la 12 ore în grupurile AA1000 și AA5000.
Rezultatele nivelurilor de -defensină și mithmaking 6 în glanda digestivă după infecția cu V. parahaemolyticus sunt prezentate în Figura 5. Nivelurile de expresie ale -defensin și mitmaking 6 în glanda digestivă a abalonei au fost semnificativ crescute după infecția cu V. parahaemolyticus ( p < 0.05). Nivelul ARNm de -defensină a crescut semnificativ în grupurile AA0, AA50, AA100 și AA200 la 12 ore și 24 de ore și a atins vârful la 12 ore în grupurile AA200, AA500, AA1000 și AA5000 cu 4 .51-pliază, 4.74-pliază, 5.20-pliază și respectiv 5.47-pliază. Schimbarea pliului de creare a miturilor 6 în glanda digestivă a abalone a fost reglată semnificativ de la 12 ore la 24 ore în grupurile AA0, AA50, AA100, AA200 și AA500 și de la 6 ore la 72 ore în grupurile AA1000 și AA5000. Cel mai înalt nivel de expresie de creare a miturilor 6 a fost observat la 12 ore în grupul AA5000 cu 5.82-ori.
3.7. Expresii ale genelor și proteinelor legate de antioxidare și apoptoză în glanda digestivă și branhie
Nivelurile ARNm ale factorului nf-e2-inrudit{-2 (nrf2), gpx, cat și cuznsod în glanda digestivă a abalone au fost semnificativ crescute cu niveluri gradate de AA dietetic (p < {{4 }}.05) (Tabelul 11). În schimb, ARNm și nivelurile de proteine ale Keap1 au fost reduse semnificativ după AA din dietă (p <0.05), iar glutation-s-transferaza (GST) nu a fost afectată de AA (Figura 6, Tabelul 11) (p > 0.05). În branhii, nivelurile de ARNm de nrf2 și gpx au fost semnificativ crescute de AA dietetic (p < 0,05) (Tabelul 11). Cu toate acestea, expresiile keap1, cat, GST și cuznsod din branhii nu au fost supuse nivelurilor gradate de AA dietetic (p > 0,05). Nu s-a observat niciun efect semnificativ al AA dietetic asupra expresiei proteinei Keap1 în branhiile abalone (p > 0,05) (Figura 6).
Ceea ce iese în evidență în Tabelul 12 este că nivelurile de expresie ale Bax și caspazei3 în glanda digestivă a abalone au fost semnificativ scăzute după niveluri gradate de AA dietetic (p < 0.05). Între timp, nivelul ARNm al bcl-2 a fost reglat în mod semnificativ (p <0.05). Cu toate acestea, expresia caspazei7 nu a fost afectată de AA dietetic (p > 0.{{20}}5). Proteina clivată caspază3 din glanda digestivă a fost redusă semnificativ după suplimentarea cu AA (p < 0,05) (Figura 6). În branhie, nivelurile de ARNm de caspază7 și bcl-2 au fost semnificativ scăzute și, respectiv, crescute după AA dietetic (p < 0,05) (Tabelul 12). Cu toate acestea, expresiile lui Bax și caspaze3 nu au fost semnificativ diferite între toate tratamentele (p > 0,05). În plus, expresia proteică a caspazei clivate3 în branhiile abalone nu a fost afectată de nivelurile gradate de AA dietetic (p > 0,05) (Figura 6).
4. Discutie
4.1. Conținutul de acid ascorbic în diferite țesuturi
În studiul de față, conținutul de AA din mușchi, branhii și glanda digestivă a crescut odată cu creșterea nivelului alimentar de AA. Un rezultat similar a fost găsit și în Vundu (fișiere de jurnal de Heterobranchus), anghilă japoneză și croakerul lui Chu (culoarea Nibea) [27,56,57]. Conținutul de AA a fost cel mai mare în branhii, urmat de glanda digestivă a abalone. Cu toate acestea, conținutul de AA din branhii, glanda digestivă și mușchiul abalonei nu a atins saturația după 4821,17 mg/kg de AA din dietă. La răpița chinezească (Myxocyprinus asiaticus), conținutul de AA din ficat a fost semnificativ crescut de AA din dietă [58]. Conținutul crescut de AA în ficatul răpiței chinezești după AA din dietă a fost corelat cu sănătatea ficatului. La crapul de iarbă, conținutul de AA din rinichi, splină și piele a fost semnificativ crescut odată cu creșterea suplimentelor alimentare de AA [35]. Rinichiul capului, splina și pielea sunt organele imune importante la animalele acvatice [59-61]. Aceste rezultate demonstrează că conținutul crescut de AA în glanda digestivă și branhiile abalone au fost strâns legate de sănătatea abalonei după AA din dietă și că acumularea de AA reflectă nivelurile de expunere la AA din dietă.
4.2. Rolul acidului ascorbic în reglarea imunității abalone
Hemocitele, ca componente celulare versatile ale hemolimfei la moluște, sunt responsabile pentru multe aspecte ale vieții moluștelor, cum ar fi răspunsul imun, biomineralizarea, comunicarea celulă-celulă și regenerarea [62,63]. Prin urmare, THC, RB și PA ale hemolimfei pot reflecta direct imunitatea organismului. AA a fost strâns asociat cu THC, RB și PA ale hemocitelor, ducând la activarea sistemului imunitar adaptativ [64,65].
În studiul de față, THC, RB și PA din hemolimfa abalone au fost semnificativ crescute de AA dietetic. Este indicat că nivelurile gradate de AA dietetic au reușit să sporească funcția imunitară la abalone. Rezultate similare au fost observate la tilapia de Nil și la creveții ierb (Penaeus monodon) [64,66]. RB din serul racului roșu de mlaștină (Procambarus clarkii) și PA din serul somnului hibrid sorubim (Pseudoplatystoma reticulatum × P. corpuscles) au fost semnificativ scăzute după un nivel ridicat de supliment alimentar cu AA (321,38 mg/kg și 850 mg/). kg, respectiv) [67,68]. Cu toate acestea, nu a fost observată nicio scădere semnificativă a THC, RB și PA a hemolimfei abalone în tratamentul cu niveluri ridicate de supliment alimentar cu AA (4821,17 mg/kg).
Lizozima, C3 și C4 joacă roluri esențiale în imunitatea înnăscută și protejează animalele de infecțiile patologice [69-71]. În studiul de față, LZM în CFH de abalone a fost semnificativ crescut după niveluri gradate de AA dietetic. Acest lucru a fost similar cu rezultatele studiilor anterioare la cobia (Rachycentron canadum), rockfish coreean (Sebastes schlegelii) și grupul (Epinephelus malabaricus) [29,72,73]. Deficiența de AA a scăzut conținutul de C3 și C4 la crapul de iarbă, iar AA dietetic ar putea crește semnificativ parametrii imunitari, cum ar fi C3 și C4 la bibanul de gură mare [35,74]. În studiul de față, totuși, conținutul de C4 din CFH al abalonei nu a fost influențat de nivelurile de AA din dietă. A existat o tendință de creștere a conținutului de C3 în CFH de abalone, deși conținutul de C3 nu a fost îmbunătățit semnificativ de AA dietetic. Aceste rezultate au arătat că suplimentarea alimentară cu AA ar putea îmbunătăți capacitatea de a elimina infecția agenților patogeni cu LZM și C3, nu C4, pentru a îmbunătăți barierele imune ale abalone.
Imunitatea înnăscută este vitală pentru abalone din cauza absenței imunității adaptive la nevertebrate [43,49]. TLR-urile joacă roluri vitale în sistemul imunitar înnăscut împotriva diverșilor microbi [75]. TLR-urile activate de PAMP recrutează molecule adaptoare specifice pentru a activa factorii de transcripție, cum ar fi NF-κB și AP-1, care determină rezultatul răspunsului imun înnăscut [76]. Semnalizarea TLR este clasificată în două căi distincte: MyD88- dependentă și MyD88-independentă, care induc diferite citokine, cum ar fi TNF- și IL{-1 la mamifere și alte animale acvatice [77,78] ]. În calea dependentă de MyD88-, MyD88 interacționează cu IRAK4 și apoi interacționează cu TRAF6 [79]. TRAF6 poate activa kinaza 1 activată de TGF- -(TAK1) și proteinele de legare TAK1-(TAB) [80]. TAK1 activează complexul IKK, care poate fosforila IkB care se leagă de subunitățile NF-kB (formate din p50 și p65) și fosforilează MAPK-uri și JNK, care promovează translocarea AP-1 în nucleu [81]. Distrugerea IkB facilitează translocarea nucleară a NF-kB [82]. NF-κB nuclear și AP{33}} vizează transcripția citokinelor, cum ar fi TNF- și IL-1, care sunt bine recunoscuți ca mediatori proinflamatori care au promovat inflamația [76,77,83] . În calea independentă MyD88-, TRAM-ul este necesar și ocupă un rol esențial în această cale [84]. Componentele intracelulare în aval de calea de semnalizare TLR sunt în mod obișnuit și foarte conservate între vertebrate și nevertebrate [60,85]. Expresia intrahepatică a TLR4 a fost reglată în jos la șoarecii administrați AA (Mus musculus) [86]. AA a exercitat o hepatoprotecție benefică împotriva leziunii hepatice imunologice induse de concanavalina A la șoareci prin inhibarea căii semnalului NF-κB [87,88]. Astfel, s-ar putea deduce din aceste rezultate că AA poate afecta calea de semnalizare TLR. Cu toate acestea, rămâne necunoscut modul în care AA reglează calea de semnalizare TLR la animalele acvatice, în special la moluște.
În studiul de față, nivelurile de ARNm ale tlr2 și tlr4 din glanda digestivă au fost reduse semnificativ de nivelurile gradate de AA dietetic. Se sugerează că calea de semnalizare TLR a fost declanșată de AA în glanda digestivă a abalone (Figura 7). Termenul-a și tlr-b au avut capacități mai largi de recunoaștere a modelelor și au fost implicați în imunitatea antibacteriană și antivirală a abalone [89]; cu toate acestea, mecanismul de bază al -a/b este încă necunoscut. Cu toate acestea, nivelul tlr-b nu a fost afectat de AA dietetic, iar tlr-a a fost reglat semnificativ de către AA în studiul de față. Sunt necesare investigații suplimentare. Expresiile myd88, irak4 și traf6 și expresia proteinei MyD88 în glanda digestivă a abalone au fost reglate în jos prin suplimentarea cu AA, iar nivelul de traf4 nu a fost influențat de AA dietetic. TRAF4 acționează ca un amortizor în semnalizarea mediată de TLR prin suprimarea TRAF6 [90]. Este indicat că inhibarea căii TLR de către AA dietetic nu a fost mediată prin traf4 din glanda digestivă a abalone. Nivelul ARNm de iκb din glanda digestivă nu a fost influențat de AA. Cu toate acestea, NF-kB poate fi transferat în nucleu numai după degradarea fosfatului IkB [91]. Expresiile ARNm ale nf-kb și expresia proteinei NF-kB p65 nucleare în glanda digestivă au fost reduse semnificativ de AA dietetic. Aceste rezultate au sugerat că AA ar putea suprima fosforilarea proteinei IkB pentru a reduce NF-kB nuclear. IKK poate activa NF-kB p65 pentru a declanșa calea canonică NF-kB, iar IKK poate activa NF-kB p52 pentru a declanșa calea necanonică NF-kB [92]. Este indicat că AA dietetic ar putea activa calea canonică NF-kB în glanda digestivă a abalone. În plus, expresiile ARNm ale tramvaiului, marca p38, junk, ap-1 și tnf- și nivelul proteic al IL-1 matur au fost reduse semnificativ de AA dietetic. Aceste rezultate sugerează că AA alimentar ar putea inhiba calea de semnalizare TLR prin calea dependentă de Myd88-prin NF-κB, p38 mark/ap-1 și JNK/ap-1 și Myd{{ 43}}căi independente pentru a atenua inflamația în glanda digestivă a abalone. În branhie, AA a afectat și calea de semnalizare TLR (Figura 7). Cu toate acestea, nivelurile de ARNm ale tramvaiului, marca p38 și junk și expresia proteinei IL-1 mature nu au fost semnificativ diferite. Aceste rezultate au indicat că AA dietetic ar putea suprima calea de semnalizare TLR prin calea dependentă de Myd88-, nu de MyD88-independent. Calea TLR inhibată a atenuat inflamația în branhiile abalone prin calea NF-κB și p38 mark/ap-1, nu calea JNK/ap{-1. AA dietetic a avut un efect mai puternic asupra căii TLR din glanda digestivă decât cea din branhiile abalone.
【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】
