Stabilizarea simultană a citoscheletului de actină în mai multe celule specifice nefronului protejează rinichiul de leziuni diverse Ⅱ

Stabilizarea farmacologică a actinei corticale prin dinamină ameliorează AKI.

Pierderea marginii periei tubilor renali din cauza dezasamblarii cortexului de actomiozină este o caracteristică predominantă a AKI2,29. Un medicament anticancer utilizat pe scară largă care duce adesea la AKI este cisplatina30. O consecință esențială a leziunii cu cisplatină în celulele renale este o creștere a nivelului speciilor reactive de oxigen (ROS)31. Mai mult, nivelurile crescute de ROS conduc la o scădere a dinamicii actinei32, care provoacă perturbarea membranei mitocondriale; asta mai departeexacerba ROSproducție33,34. Astfel, am examinat dacă stimularea farmacologică a dinaminei'capacitatea de reticulare a s este suffieficient pentru a contracara leziunile induse de cisplatină.

După cum s-a văzut înainte de 35, cisplatina a scăzut înălțimea celulei MDCK, numărul de microvilli și lungimea și a afectat polaritatea celulei fără a afecta endocitoza (Tabelul 1, Fig. 7a-d suplimentară). Analiza TEM a sugerat că aceste fenotipuri ar putea fi atribuite pierderii F-actinei induse de cisplatină (Fig. 4a). Adăugarea de Bis-T- 23 înainte de cisplatină și-a abrogat efectele prin stabilizarea cortexului de actomiozină împotriva leziunilor induse de cisplatină (Fig. 4a-c). Fenotipuri similare au fost observate la porcinetubul proximal al rinichiului(LLC-PK1) celule (Figura 8 suplimentară). Împreună, aceste date oferă dovezi că Bis-T-23 păstrează cortexul actomiozin de la dezasamblarea indusă de cisplatină.

Într-o abordare complementară relevantă din punct de vedere fiziologic36, Bis T-23 a contracarat capacitatea cisplatinei de a reduce rezistența electrică transepitelială (TER) măsurată în monostratul epitelial viu folosind un sistem de cultură transwell (Fig. 4d). Deoarece TER măsoară integritatea joncțiunilor strânse în cultura celulară, aceste date stabilesc în continuare efectul benefic al Bis-T-23 asupra integrității celulelor epiteliale la leziuni.

CLICK AICI PENTRU CISTANCHE PENTRU CKD

Deoarece dinamica alterată a actinei poate îmbunătăți și mai mult producția de ROS, am examinat în continuare dacă stabilizarea rețelei de actină de către Bis-T-23 poate contracara stresul oxidativ în celulele lezate cu cisplatină. Am ales să evaluăm starea carbonililor biomoleculei celulare, un biomarker stabil al daunelor oxidative produse de niveluri ridicate de ROS, folosind senzorul nostru fluorescent recent dezvoltat TFCH37 (Fig. 4e). Într-adevăr, adăugarea de Bis-T-23 înainte de cisplatină a diminuat parțial creșterea carbonilării indusă de cisplatină (Fig. 4f). Tendințe similare în ceea ce privește carbonilarea au fost observate după tratamentul cu Bis-T -23 și depolimerizatorul de actină LatA (Fig. 9a suplimentară). Împreună, aceste date oferă dovezi că stabilizarea rețelelor de actină poate contracara bucla de feedback dintre stresul oxidativ și starea actinei în celulele lezate.

Un șobolan ex vivomodel de rinichia fost utilizat apoi pentru a vizualiza conservarea condusă de BisT-23-a cortexului de actomiozină la marginea periei. Cisplatina a indus o pierdere semnificativă a colorării cu F-actină la marginea periei a tubilor proximali (Fig. 4g). O pierdere similară de F-actină la marginea pensulei la debutul leziunii severe de ischemie-reperfuzie a fost observată recent folosind imagistica intravirală38. Tratamentul prealabil cu Bis-T-23 a protejat parțial pierderea indusă de cisplatină a F-actinei la marginea perie a tubilor renali (Fig. 4g), demonstrând în continuare efectul Bis-T-23 asupra actomiozinei cortexul la nivelul membranei apicale a celulelor epiteliale renale. După cum s-a văzut în cultura celulară, Bis-T-23 nu a afectat endocitoza în feliile de țesut (Figura suplimentară 9b), demonstrând în continuare că Bis-T{-23 nu afectează rolul dinaminei în endocitoza renală. tubii proximali.

În cele din urmă, am examinat efectul reno-protector al Bis-T-23 într-un model de șoarece de AKI39 indus de cisplatină. Șoarecii BL6 au fost injectați fie cu Bis-T-23, fie cu DMSO o dată pe zi, începând cu 24 de ore înainte de injectarea cu cisplatină. După cum s-a văzut înainte40, nivelurile de creatinine serice (SCr) și de azot din urină din sânge (BUN) au crescut semnificativ la 3 zile după injectarea cu cisplatină (Fig. 4h). DMSO a prezentat o reno-protecție ușoară, așa cum s-a văzut înainte41, datorită capacității sale de eliminare a oxidanților42. Administrarea zilnică de Bis-T-23 a depășit DMSO în ceea ce privește reno-protecția (Fig. 4h). Deoarece toate animalele au fost sacrificate în ziua 5 din cauza toxicității sistemice a cisplatinei (Figura suplimentară 9c), nu am putut examina beneficiile pe termen lung ale Bis-T-23 pefunctia rinichilor. Împreună, aceste studii demonstrează în mod persuasiv că păstrarea integrității celulelor renale prin stabilizarea cortexului de actomiozină la nivelul membranei apicale contracarează nefrotoxicitatea indusă de cisplatină.

Stabilizarea rețelelor de actină contracarează AKI indusă de iohexol.

Deși mecanismul exact al AKI indusă de colorant de contrast nu este pe deplin descifrat, acesta rămâne o cauză principală a AKI dobândită în spital43. Din punct de vedere fiziologic, colorantul de contrast crește sarcina osmotică, scade fluxul sanguin renal și induce constricția arterială renală44. La nivel celular, ROS este un jucător critic în contrast cu AKI45 indus de colorant. Având în vedere rolul ROS în reglarea citoscheletului de actină și ipoteza noastră că stabilizarea cortexului de actomiozină poate contracara deteriorarea oxidativă, am examinat efectele Bis-T-23 asupra unui colorant de contrast, indus de iohexol AKI46.

Efectele celulare ale iohexolului au fost examinate la omrinichi tubular proximal(HK-2) celule. După cum sa văzut pentru cisplatină, iohexolul a indus pierderea de F-actină, care a fost însoțită de o creștere semnificativă a nivelului de molecule carbonilate, o consecință ireversibilă a nivelurilor crescute de ROS (Fig. 5a, b). Ambele fenotipuri au fost contracarate parțial prin pre-tratament cu Bis-T-23, stabilind în continuare sinergia dintre starea citoscheletului de actină și nivelul stresului oxidativ din aceste celule. În plus față de testele pe bază de celule, administrarea zilnică de Bis T-23 a păstrat funcția renală pe baza nivelurilor Scr și BUN la șoarecii BL6 provocați cu colorant de contrast (Fig. 5c). Un răspuns mult râvnit al ratei de supraviețuire îmbunătățită a fost observat și la animalele care au primit Bis-T-23 împreună cu colorantul de contrast (Fig. 5d).

Am arătat recent că nivelurile serice crescute ale receptorului de activator al plasminogenului de tip urokinază solubilă (suPAR) sensibilizează rinichiul la AKI47 indus de iohexol. În continuare, am investigat dacă protecția celulelor tubulare mediată de dinamină poate oferi și reno-protecție la șoarecii BL6 care exprimă niveluri ridicate de suPAR din țesutul adipos (suPAR-Tg)48. După cum era de așteptat47, șoarecii suPAR-Tg au prezentat o scădere a funcției renale la 24-48 de ore după injectarea cu iohexol (Fig. 5e). În schimb, animalele care au primit o doză zilnică de Bis-T-23 au prezentatfuncția renală semnificativ mai bunăîn ciuda provocării colorantului de contrast (Fig. 5e). În special, a fost observată o scădere semnificativă a ratei mortalității în cohorta de șoareci care a primit Bis-T-23 (Fig. 5f). După cum era anticipat, gradul de deteriorare oxidativă (carbonilarea biomoleculei) în celulele HK-2 tratate concomitent cu Bis-T-23 a fost semnificativ mai mic decât în ​​celulele care au primit doar o combinație de suPAR și Iohexol (Fig. 9d).

Fig. 4 Agonistul dinamină protejează tubii renali de leziunile induse de cisplatină prin stabilizarea cortexului de actomiozină la nivelul membranei apicale. o imagine PR-EM a lamelipodiului în celulele MDCK tratate cu DMSO (0,1%) sau Bis-T-23 (5 µM, 0,1% DMSO) timp de 1 oră înainte la adăugarea de cisplatină (35 pM) timp de 23 ore. Cortexul de actomiozină a fost colorat în galben. b Imagini cu mărire mai mare ale regiunilor în casete din (a). Niveluri distincte de grosime sunt codificate pe culori. Panourile superioare și inferioare prezintă rețele formate din filamente mai scurte și, respectiv, filamente mai lungi. c Grafic care ilustrează densitatea filamentelor de actină la marginea anterioară (caseta galbenă în (a); 18–20 zone numărate). d Grafic cu bare care ilustrează rezistența electrică transepitelială relativă (%) în celulele MDCK vii tratate așa cum este menționat la (a), cu excepția concentrațiilor de cisplatină (50 µM) și Bis-T{-23 (30 µM) (12 citiri per probă). Datele sunt reprezentate grafic ca medie ± SEM (***P < 0,001, ****P < 0,0001, test t cu două cozi nepereche). ns, nu este semnificativ. e Reprezentare schematică a detectării carbonilării induse de stres oxidativ folosind testul TFCH. f Imagini care arată nivelurile de carbonili biomolecule determinate de TFCH. Celulele au fost tratate așa cum este descris în (a), cu excepția concentrației de cisplatină (5 pM). Bară de scară, 20 µm. Grafic care ilustrează nivelurile relative de fluorescență TFCH asociate cu biomoleculele carbonili pe celulă (punctele de date (n)=83-116; fiecare punct reprezintă intensitatea medie de 4-9 celule). g Sobolanfelii de rinichicolorat cu anticorp anti-actină.Felii de rinichiau fost incubate în tampon, DMSO (0,1%) sau Bis-T-23 (30 uM) timp de 1 oră înainte de a adăuga cisplatină (200 uM) sau tampon timp de 8 ore. Regiunile pătrate albe au fost mărite. Bare de scară, 40 µm. Grafic care arată intensitatea actinei F la marginea periei per tub (100-236). Pentru c, f, g, datele sunt reprezentate grafic ca medie ± SD (valorile P sunt raportate în figură, ANOVA unidirecțional cu testul de comparație multiplă al lui Tukey). h Diagrame cu puncte de dispersie care arată AKI indusă de cisplatină determinată de nivelul de azot ureic din sânge (BUN) sau creatinina serică (SCr). Animalele au fost injectate fie cu DMSO (1%), fie cu Bis-T-23 (20 mg/kg) (n=12, pe condiție pentru SCr; n=17, pe condiție pentru BUN) o dată pe zi, începând cu 24 de ore înainte de injectarea cu cisplatină (15 mg/kg). Măsurătorile au fost efectuate la orele indicate. Datele sunt reprezentate grafic ca medie ± SEM (valorile P sunt raportate în figură, test t cu două cozi nepereche). ns, nu este semnificativ.

Spre deosebire de leziunea celulară mediată de ROS cauzată de cisplatină și iohexol, suPAR promovează lezarea celulelor tubulare parțial prin creșterea ratei de consum de oxigen (OCR)47. Pentru a lega efectul fiziologic al Bis-T-23 la șoarecii transgenici suPAR de efectul său asupra metabolismului celular, am examinat dacă stabilizarea rețelei de actină prin dinamină scade OCR-ul condus de suPAR. OCR a fost măsurat în timp real în celule HK-2 în condiții bazale și ca răspuns la injecții secvențiale de inhibitori mitocondriali folosind un analizor de flux extracelular Seahorse XFe24 (Fig. 5g). Adăugarea unui anticorp anti-suPAR sau a ameliorării suPAR determinate de Bis-T-23 crește respirația bazală mitocondrială, producția de ATP, rata maximă de respirație și capacitatea respiratorie de rezervă (Fig. 5f). Aceste date demonstrează efectele pozitive ale Bis-T-23 asupra metabolismului celular la leziuni. Împreună, aceste studii afirmă în continuare fezabilitatea protecției împotriva mai multor tipuri de AKI și, prin urmare, îmbunătățirea ratei de supraviețuire la modelele de rozătoare prin dinamină ca proxy.

Stabilizarea simultană a actinei încelule renale distincteatenuează leziunea nefronică. Am arătat anterior că activarea farmacologică a polimerizării actinei determinate de dinamină a restabilit structura și funcția podocitelor în diverse modele murine de CKD12. În acest studiu, am demonstrat capacitatea dinaminei de a păstra integritatea celulelor tubulare la leziuni acute prin legarea încrucișată a citoscheletului de actină. Împreună, aceste perspective ne-au determinat să ne imaginăm posibilitatea de a contracara simultan atât leziunile glomerulare, cât și cele tubulare, prin țintirea farmacologică a dinaminei.

Pentru a testa această ipoteză, am examinat dacă Bis-T-23 ar putea întârzia pierdereafunctia rinichilorîn modelul de șoarece al sindromului Alport (AS). AS este o formă moștenită deinsuficienta renala progresivadin cauza mutațiilor în genele COL4A3, COL4A4 sau COL4A5 care codifică împreună colagenul de tip IV, o componentă majoră a membranei bazale glomerulare (GBM)49,50. Deși defectul primar în SA este ștergerea procesului piciorului și proteinuria.

Pentru a testa această ipoteză, am examinat dacă Bis-T-23 ar putea întârzia pierdereafunctia rinichilorîn modelul de șoarece al sindromului Alport (AS). AS este o formă moștenită deinsuficienta renala progresivadin cauza mutațiilor în genele COL4A3, COL4A4 sau COL4A5 care codifică împreună colagenul de tip IV, o componentă majoră a membranei bazale glomerulare (GBM)49,50. Deși defectul primar în SA este ștergerea procesului piciorului și proteinuria.

Discuții De la identificarea interacțiunilor directe dinamină-actină10, un număr tot mai mare de dovezi stabilește această GTPază ca unul dintre regulatorii majori ai citoscheletului de actină din celulă. Spre deosebire de ABP-urile canonice, mecanismele prin care dinamina influențează actina sunt atât foarte versatile, cât și specifice tipului celular. Acest lucru se datorează combinației stărilor multiple de oligomerizare ale dinaminei și capacității sale de a lega F-actina prin două situsuri de legare diferite. Interacțiunile F-actină cu inele și elice de dinamină prin intermediul PRD-ului C-terminal au ca rezultat fascicule și hiper-mănunchiuri de actină, care au fost implicate în formarea filopodiilor56 și a proeminențelor membranei în timpul fuziunii mioblastelor28. Interacțiunile dintre domeniul mijlociu al dinaminei și F-actina au fost implicate în reglarea rețelelor de actină în lamelipodii26, organizarea citoscheletului postsinaptic și dezvoltarea joncțiunii neuromusculare27, rigiditatea fasciculului de actină în endozomi în timpul fuziunii mioblastelor25 și formarea proceselor podocitelor picior12. În timp ce formarea proceselor piciorului este condusă de polimerizarea actinei stimulată de dinamină, acest studiu sugerează că mecanismul molecular prin care dinamina influențează aceste alte procese conduse de actină s-ar putea datora în parte capacității sale de a lega F-actina în rețele ramificate. . Studiul nostru actual extinde rolul formării rețelelor dependente de dinamină pentru a include formarea cortexului de actomiozină la membrana apicală a celulelor epiteliale polarizate și stabilirea rigidității celulelor.

Discuții De la identificarea interacțiunilor directe dinamină-actină10, un număr tot mai mare de dovezi stabilește această GTPază ca unul dintre regulatorii majori ai citoscheletului de actină din celulă. Spre deosebire de ABP-urile canonice, mecanismele prin care dinamina influențează actina sunt atât foarte versatile, cât și specifice tipului celular. Acest lucru se datorează combinației stărilor multiple de oligomerizare ale dinaminei și capacității sale de a lega F-actina prin două situsuri de legare diferite. Interacțiunile F-actină cu inele și elice de dinamină prin intermediul PRD-ului C-terminal au ca rezultat fascicule și hiper-mănunchiuri de actină, care au fost implicate în formarea filopodiilor56 și a proeminențelor membranei în timpul fuziunii mioblastelor28. Interacțiunile dintre domeniul mijlociu al dinaminei și F-actina au fost implicate în reglarea rețelelor de actină în lamelipodii26, organizarea citoscheletului postsinaptic și dezvoltarea joncțiunii neuromusculare27, rigiditatea fasciculului de actină în endozomi în timpul fuziunii mioblastelor25 și formarea proceselor podocitelor picior12. În timp ce formarea proceselor piciorului este condusă de polimerizarea actinei stimulată de dinamină, acest studiu sugerează că mecanismul molecular prin care dinamina influențează aceste alte procese conduse de actină s-ar putea datora în parte capacității sale de a lega F-actina în rețele ramificate. . Studiul nostru actual extinde rolul formării rețelelor dependente de dinamină pentru a include formarea cortexului de actomiozină la membrana apicală a celulelor epiteliale polarizate și stabilirea rigidității celulelor.

Este bine stabilit căCKD și AKI, deși distincte din punct de vedere mecanic, sunt strâns interconectate, AKI fiind recunoscută ca un factor de risc pentru dezvoltarea și progresia IRC 66. În prezent, AKI rămâne nemedicamentabilă67. Acest lucru este deosebit de relevant în lumina actualei pandemii de coronavirus 2019 (COVID-19), în care pacienții spitalizați cu COVID-19 și un nivel plasmatic suPAR crescut dezvoltă AKI la rate alarmante. Nivelurile crescute de suPAR au fost legate atât de AKI47, cât și de CKD69, întărind și mai mult legătura moleculară dintre aceste douăboli de rinichi distincte. Prin urmare, devine din ce în ce mai esențial să se dezvolte terapii care să poată proteja împotriva unei game de injurii renale pe mai multe tipuri de celule70. Aici raportăm efectul reno-protector al unui agonist de dinamină într-un model genetic de SA, care prezintă leziuni atât la podocite, cât și la celulele tubulare. Studiul nostru stabilește o abordare cuprinzătoare pentru dezvoltarea de noi terapii care se implică în rețeaua de actină în mai multe tipuri de celule din nefron și tratează o multitudine deboli de rinichiindiferent de locul leziunii.

Metode Cultură celulară. Celulele MDCK (rinichi canin Madin-Darby) (ATCC CCL-34) și celulele conductei colectoare medulare interne de șoarece (mIMCD-3) (ATCC CRL-2123) au fost crescute în DMEM/F12 (ThermoFisher). Științific) care conține 10% ser fetal bovin (FBS) și 1X Antibiotic-Antimicotic (penicilină, streptomicina și Amfotericină B; Gibco). Celulele LLC-PK1 (Lilly Laboratories Cell-Porcine Kidney 1) (ATCC CL- 101) au fost crescute în DMEM cu 4,5 g/L glucoză, L-glutamină, piruvat de sodiu (Corning), 10% FBS și 1X Antibiotic - Antimicotic. Celulele MDCK și LLC-PK1 au fost crescute timp de ~ 24 ore și, respectiv, ~ 72 de ore, înainte de inițierea experimentelor. HK-2 (Rinichiul uman 2) celulele tubulare proximale (ATCC CRL-2190) au fost cultivate în mediu F12 DMEM/Ham (Corning) care conține 10% FBS, 100 U/ml penicilină și 100 ug/ml streptomicina atunci când sunt utilizate pentru experimente bioenergetice. Pentru a analiza starea citoscheletului de actină și a carbonilării celulare, celulele HK-2 au fost crescute în DMEM F-12 (ATCC) care conține 10% FBS, 1X Antibiotic-Antimicotic și 1X ITS (insulină, transferină și selenit de sodiu) supliment de mediu lichid (Sigma-Aldrich). Pentru a stabili linia celulară de dezactivare a dinaminei 2 (Dyn2) (mIMCD Dyn2KD), celulele au fost infectate cu lentivirusuri purtătoare de shRNA care codifică gena DNM2 (5′CGGCCTAGTGGACATGACAATGAACTCGAGTTCATTGTCATGTC CACTAGGTTTTTG3′)10 sau medii scrambled (scrambled) 10 sau scrambled poly (scrambled) ug/ml). După 24 de ore, mediul a fost înlocuit o dată la două zile cu mediu care conține puromicină pentru a selecta transfectanți stabili. Amploarea distrugerii Dyn2 a fost evaluată prin western blot. Toate liniile celulare au fost crescute pe lamele de sticlă acoperite cu colagen.

Fig. 6 Activarea farmacologică a dinaminei vizează simultan citoscheletul de actină din două celule distincte ale nefronului. un șoareci Col4a3-/- au fost injectați cu DMSO (1%) sau Bis-T-23 (20 mg/kg) o dată pe zi la vârsta de 42 de zile (Ziua 0). A fost utilizat un număr egal de șoareci tratați cu DMSO sau Bis-T-23 (n=10 pentru ACR; n=8 pentru BUN). Graficul cu puncte de împrăștiere arată nivelul de proteinurie (raportul albumină la creatinina, ACR) șileziuni renaledeterminat de nivelul BUN. Bare de eroare, medie ± SD (valorile P sunt raportate în figură, test t cu două cozi nepereche). b Testul Log-Rank (Mantel-cox) a fost efectuat pentru a analiza curbele de supraviețuire ale celor două grupuri de tratament. c Histopatologia reprezentativă a rinichiului determinată prin colorare periodică cu acid Schiff (PAS) și H&E pe probe obținute de la șoareci Col4a3-/- descriși în (a). Animalele aveau 62 de zile (ziua 20 de tratament cu Bis-T-23 sau DMSO). Glomerulopatia la animalele tratate cu Col4a3-/- DMSO a fost caracterizată prin expansiune mezangială observată pe colorarea PAS (săgeată neagră), celularitate crescută și o creștere a spațiului lui Bowman. Modificările degenerative ale tubulilor au inclus formarea de gips (*) și prezența sclerozei tubulare. Tratamentul cu Bis-T-23 timp de 20 de zile a păstrat parțial morfologia glomerulilor (diminuarea expansiunii mezangiale) și a tubilor (absența gipsurilor). d Schematics of the nefron (imagine credited the National Institute of Diabetes and Digestive andBoli de rinichi, National Institutes of Health) și mecanismul implicat în renoprotecția reglată de dinamină. În celulele epiteliale polarizate ale tubilor renali, dinamina stabilește polaritatea celulară prin reticulare a filamentelor de actină în rețele (acest studiu). Capacitatea Dynamin de a lega filamentele în fascicule este implicată în formarea microvilozităților. Leziunea acută crește producția de ROS, alterează metabolismul celular și perturbă dinamica actinei, ceea ce îmbunătățește și mai mult producția de ROS, ducând la o deteriorare oxidativă celulară mai pronunțată (carbonilarea biomoleculei). O creștere a capacității de reticulare a dinaminei în cortexul de actomiozină păstrează integritatea celulelor tubulare, care le protejează parțial de insultele oxidative. În plus, dinamina este esențială pentru structura și funcția podocitelor. Activarea farmacologică a dinaminei restabilește procesele piciorului prin inducerea polimerizării actinei. Studiul nostru arată că activarea farmacologică a oligomerizării dinaminei prezintă un dublu efect benefic asupra nefronului prin țintirea a două mecanisme moleculare distincte: păstrarea integrității podocitelor (polimerizarea actinei) și a celulelor tubulare renale (reticulare a filamentelor de actină).

Referințe

1. Basile, DP, Anderson, MD și Sutton, TA Fiziopatologia leziunii renale acute.Compr. Physiol. 2, 1303–1353 (2012).

2. Bonventre, JV & Yang, L. Fiziopatologia celulară a leziunii renale acute ischemice.J. Clin. Investi. 121, 4210–4221 (2011).

3. Campanale, JP, Sun, TY & Montell, DJ Dezvoltarea și dinamica polarității celulare dintr-o privire.J. Cell Sci. 130, 1201–1207 (2017).

4. Salbreux, G., Charras, G. & Paluch, E. Mecanica cortexului actinei și morfogeneza celulară.Trends Cell Biol. 22, 536–545 (2012). 

5. Vicente-Manzanares, M., Ma, X., Adelstein, RS & Horwitz, AR Miozina II nonmusculară ocupă centrul adeziunii și migrației celulare.Nat. Pr. Mol. Cell Biol. 10, 778–790 (2009). 

6. Chugh, P. şi colab. Arhitectura cortexului de actină reglează tensiunea de suprafață celulară.Nat. Cell Biol. 19, 689–697 (2017). 7. Nguyen, LT & Hirst, LS Polimorfismul rețelelor F-actină foarte reticulate: sondarea scalelor de lungimi multiple.Fiz. Rev. E Stat. Nonlin Soft Matter Phys. 83, 031910 (2011).

Serviciul de asistență al Wecistanche-Cel mai mare exportator de cistanche din China:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Magazin:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop