Studiu asupra funcției neuroendocrine-imunitare a Cistanche Deserticola și a produselor sale de aburire a vinului de orez în modelul de șobolan indus de glucocorticoizi-Ⅱ

3.2.4. Imunohistochimie

Apoptoza neuronală este controlată de multe gene apoptotice și antiapoptotice, în principal gena Bax care promovează apoptoza și genele antiapoptotice ale familiei de gene Bcl-2. Bcl-2 este localizat în organele reactive producătoare de oxigen, cum ar fi mitocondriile, reticulul endoplasmatic și membranele nucleare. Bcl-2 are un impact redus asupra radicalilor liberi de oxigen, dar poateprevine deteriorarea oxidativă a celulelor. Bax transportă din citoplasmă la membrana mitocondrială, modifică structura membranei mitocondriale și promovează eliberarea citocromului c și inducerea apoptozei.

TUBULOSĂ NATURALĂ DE CISTANCHE PENTRU ÎMBUNĂTĂŢIREA FUNCŢIEI SEXUALE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

A existat o expresie în citoplasma suprarenală a proteinei Bax și Bcl-2. Colorația a arătat toate particulele galbene. În comparație cu cea a grupului BC, densitatea optică medie a proteinei Bax în grupul MC a crescut semnificativ (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Figura 5(b) arată că, în comparație cu cea a grupului BC, densitatea optică medie a proteinei Bcl-2 din grupul MC a scăzut semnificativ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Proteina caspaza-3 este localizată în principal în citoplasmă, în forma sa originală, în țesuturile normale și are o expresie scăzută. Semnalele pozitive sunt galben pal sau galben maronie. În comparație cu cea a grupului BC, expresia caspazei-3 în grupul MC a crescut semnificativ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

În țesuturile normale, expresia genei Fas a fost redusă, iar semnalul pozitiv pentru hibridizarea in situ a fost galben maronie. După cum se arată în Figura 5(d), în comparație cu cea a grupului BC, densitatea optică medie a proteinei Fas din grupul MC a crescut (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

Proteina FasL este localizată în principal în membrana celulară sau citoplasmă, iar semnalele sale pozitive sunt maro. În comparație cu cea a grupului BC, densitatea optică medie a genei FasL în grupul MC a crescut semnificativ (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Rezultatele au demonstrat că CD și WCD ar puteainduce apoptoza în celulele inflamatoriiși reduce daunele suprarenale prin promovarea expresiei proteinei FasL și legarea de proteina Fas, activând proteina caspază-3 și declanșând o cascadă de caspaze. Efectul grupului WCD-HD a fost cel mai bun.

3.3. Determinarea funcției imune

3.3.1. Indicele organelor imune

Comparativ cu cei din grupul BC, coeficientul timusului și indicele splinei din grupul MC au scăzut semnificativ (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

TUBULOSĂ NATURALĂ DE CISTANCHE PENTRU ÎMBUNĂTĂŢIREA FUNCŢIEI SEXUALE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Detectarea subgrupurilor de limfocite T în sângele periferic

Procentul de celule CD4+ din cadranul din stânga sus și celulele CD8+ din cadranul drept inferior în BC și fiecare grup de medicamente a fost mai mare decât cel din grupul MC. Comparativ cu cel al grupului BC, raportul CD4+ThCD8+ a scăzut semnificativ în grupul MC (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Determinarea nivelului de IL-10, IL-6, IL{-2, TNF-Α și IFN-C în ser

Figura 8 arată că, comparativ cu cel al grupului BC, nivelul IL-6, TNF- și IFN-c a crescut semnificativ (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Rezultatele experimentului de observare cu microscopul țesutului Lymus

Figura 9 arată că în grupul BC, un număr mare de limfocite au fost prezente. Limfocitele și reticulocitele au fost aranjate lejer în centru, cu timocite împrăștiate rotunde sau ovale. Nu a existat necroză, nicio infiltrație de celule inflamatorii și nicio modificare anormală.

Grupul MC a arătat o cantitate mare de țesut de necroză limfoidă, cu un aranjament dezordonat al limfocitelor și reticulocitelor în centru. Timocitele rotunde sau ovale au dispărut, degenerarea celulară masivă sau necroza a fost evidentă și a existat infiltrație celulară inflamatorie cu modificări patologice anormale.

În loturile CD, caracteristicile morfologice ale limfocitelor au revenit la normal, iar aranjarea limfocitelor centrale și a reticulocitelor a fost aproape normală. Timocitele rotunde sau ovale și-au revenit, dar au rămas un număr mic de limfocite degenerative sau necrotice și celule inflamatorii infiltrante.

În loturile WCD și grupul PC, caracteristicile morfologice ale limfocitelor au fost mai bine reparate. Limfocitele și reticulocitele din centru erau bine aliniate, timocitele rotunde sau ovale erau aproape normale, dar a rămas un număr mic de limfocite infiltrante și degenerative.

3.4. Expresia genei proteinei CaM

Valoarea RQ (ARNm CaM - ARNm actină) a fost considerată pentru a examina expresia ARNm CaM. RQ-ul grupului BC a fost 1. Expresia ARNm CaM în hipotalamus în grupul MC a crescut semnificativ (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Discutie

Farmacopeea Chineză [2] înregistrează că CD și WCD pot fi folosite în clinică ca principalele tipuri de piese de decoctat. După ce a fost aburit cu vin de orez, celefecte anti-îmbătrânire și tonifiante rinichi-yangau fost îmbunătățite. Prin UPLC-QqQ-MS, am detectat modificările cantitative ale bazei de material chimic în timpul procesului de aburire a vinului de orez. Glicozidele iridoide au fost instabile și conținutul acestor glicozide a scăzut, devenind chiar nedetectabile. Conținutul de feniletanol glicozide s-a modificat, de asemenea, ceea ce ar putea induce modificări în farmacodinamica și efectul clinic.

TUBULOSĂ NATURALĂ DE CISTANCHE PENTRU ÎMBUNĂTĂŢIREA FUNCŢIEI SEXUALE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Modelul clasic de deficit de rinichi-yang a fost replicat prin injectarea subcutanată de corticosteron [19]. Supradozajul de corticosteron ar putea inhiba secretul CRH din hipotalamus. Între timp, secretul ACTH a fost de asemenea inhibat. Nivelul hormonului cortexului suprarenal a scăzut și, astfel, funcția axei HPA a fost redusă. Hipofuncția axei HPA este o caracteristică comună a deficienței rinichi-yang [20]. Apoi, șobolanii prezintă fenomene de „epuizare” și simptomele sunt în acord cu cele ale deficienței de rinichi-yang din clinică.

În grupul MC, nivelul de CRH, ACTH, T și CORT în serul de șobolan a scăzut semnificativ (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Modularea proporției de membri ai familiei Bcl-2 este unul dintre mecanismele de bază prin care FasThFasL mediază calea receptorului morții, iar familia Bcl-2 reglează calea mitocondrială [21]. Factorul de inhibare a apoptozei Bcl-2 și factorii care induc apoptoza, cum ar fi Bax, toți aparțin familiei Bcl-2 [22]. Apoptoza celulară poate fi determinată de raportul relativ dintre factorii de inhibare a apoptozei și factorii care induc apoptoza [23]. Mitocondriile au funcția de puncte centrale de control pentru multe forme de apoptoză [24]. Studiul de față a arătat că CD-MD și WCD-urile ar putea deduce expresia lui Bax și pot crește Bcl-2 laameliorează deficitul de rinichi-yang. Fas este receptorul major al morții care induce apoptoza prin legarea cu ligandul Fas (FasL) [25]. Expresia Fas și FasL în grupul MC a crescut, în timp ce această expresie a crescut semnificativ în grupul WCD-MD (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Deficiența funcției imune este una dintre manifestările importante ale deficienței de rinichi-yang [28]. În acest studiu, am constatat că indicele splinei și timusului grupului WCD-MD sa recuperat semnificativ (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

Axa HPA este cel mai important sistem de reglare deoarece reglează secreția de glucocorticoizi și sistemul endocrin pentru a menține funcția secretorie a cortexului suprarenal [32]. Supraexprimarea ARNm CaM în țesutul hipotalamusului a fost legată de deficiența yang-ului renal. CD și WCD ar putea bloca canalele de calciu, inhiba expresia ARNm CaM în hipotalamus și scădea afluxul de calciu, scăzând astfel activitatea complexului Ca2+·CaM.

Formarea deficitului de rinichi-yang este un proces de dezvoltare a bolii cronice. Rinichiul nu mai este un concept pur anatomic, ci este un termen general pentru sistemele neuroendocrine-imunitare și genito-urinar. Rețeaua neuroendocrino-imună (NEI) este un important sistem de reglementare integrat [33]. CD și WCD pot regla funcția axei HPAT și pot îmbunătăți recuperarea deficienței de rinichi-yang. Acest rezultat oferă baza experimentală pentru prevenirea clinică și tratamentul deficienței de rinichi-yang.

TUBULOSĂ NATURALĂ DE CISTANCHE PENTRU ÎMBUNĂTĂŢIREA FUNCŢIEI SEXUALE PHGS75% ECH 30% ACT 12%