MiARN-uri unice și partajate ale celor trei tipuri de exozomi

Apoi, am investigat rolul miARN-urilor unice din cele trei tipuri de exozomi în reglarea semnalului. Diagrama Venn a dezvăluit 16, 27 și 61 de miARN-uri unice în hESC-Exos, hiPSC-Exos și, respectiv, hUC-MSC-Exos, și 70 de miARN-uri partajate (Fig. 6A). Rețeaua de reglementare a interacțiunilor miARN-proteină a fost evaluată prin țintirea miARN-urilor unice. În hESC-Exos, s-a descoperit că cei 16 miARN unici reglează autofagia, PI3K-AKT, Foxo, HIF-1, ErbB, mTOR, longevitatea, calea AMPK etc. (Fig. 6B). Pentru cele 27 de miARN-uri unice din hiPSC-Exos, analiza KEGG a dezvăluit multiple ontologii semnificative, inclusiv metabolismul xenobioticelor, semnalizarea AGE-RAGE, semnalizarea mTOR, metabolismul retinolului, senescența celulară, semnalizarea MAPK etc. (Fig. 6C). În hUC-MSC-Exos, s-a descoperit că cei 61 de miARN unici participă la reglarea semnalizării PI3K-AKT, infecției cu papilomavirus uman, semnalizării cGMP-PKG, senescenței celulare, semnalizării Ras, semnalizării mTOR, semnalizării JAK-STAT, NF-κB semnalizare etc. (Fig. 6D).

Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. de radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate puternică de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și are capacitatea de a elimina speciile reactive de oxigen și de a preveni degradarea colagenului indusă de radicalii liberi și, de asemenea, are un efect de reparare bun asupra daunelor anionilor de radicali liberi de timină.

Faceți clic pe Suplimentul Cistanche Deserticola

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Componentele miARN contribuie indirect foarte mult la căi multiple de semnalizare. Pentru a investiga interacțiunea dintre clusterele unice de miARN și căile canonice, am efectuat o analiză a rețelei de reglementare folosind baza de date IPA. Rezultatele IPA au dezvăluit că miARN-urile de top citire (P<0.05, abundance>1000) din rețeaua de reglementare au fost mapate la mai multe căi de semnalizare canonică. miARN-urile și căile lor corespunzătoare sunt enumerate în fișierul suplimentar 5. Folosind miARN-uri hESC-Exos ca exemple, mai multe miARN-uri cu abundență mare, inclusiv has-miR-95-3p, has-miR-30a{{8} }p, has-miR- 181-5p, has-miR-183-3p și has-miR-301a{-3p, au fost implicați în AMPK, autofagie, ErbB, longevitate reglementare și calea de semnalizare FOXO, printre altele. Cytoscape a fost folosit pentru a desena rețeaua de miARN unici din cele trei tipuri de exozomi și căile lor de semnalizare reglate (fișier suplimentar 1: Fig. S11).

Profilele miARN legate de reglarea pluripotentei

To investigate the regulatory effect of exosome-derived miRNAs on the pluripotency of stem cells, we predicted the target genes and screened the miRNAs involved in regulating the above process. Pluripotency-related miRNAs (abundance>1000) în cele trei tipuri de exozomi sunt enumerate (Fig. 7A–C). Primele trei miARN din cele trei tipuri de exozomi au fost has-miR-302b{-3p, has-miR-302a-5p și has-miR{{9} }d-3p (hESC-Exos), has-miR-372-3p, has-miR-371a-5p și has-miR-221-3p (hiPSC-Exos) și has-miR-21-5p, has-miR{-146a-5p și has-miR{- 320a-3p ( hUC-MSC-Exos). În plus, am descris rețeaua de reglementare a primilor zece miARN-uri din exozomi și genele țintă ale acestora implicate în reglarea pluripotității (Fig. 7D-F). Analiza diagramei Venn a dezvăluit 12 miARN-uri suprapuse, ceea ce a indicat că ar putea fi seturi de miARN esențiale în reglarea pluripotenței celulelor stem (Fig. 7G-H).

Proteine ​​specifice și miARN în cele trei tipuri de exozomi

Pentru a verifica în continuare expresia reală a proteinelor specifice în cei trei exozomi, am efectuat western blot pentru a detecta proteinele candidat în diferite căi (Fig. 8A și B). Pentru ciclul celular, trei factori de reglare cruciali, MCM5, PCNA1 și CDK1, au fost mai puternic exprimați în hESC-Exos și hiPSCExos decât în ​​hUC-MSC-Exos. PRKAA1, aparținând familiei ser/thr protein kinazei, este o energie celulară, factor conservat în toate celulele eucariote și a prezentat o încărcare similară în cei trei exozomi. SYK este exprimat pe scară largă în celulele hematopoietice și este implicat în cuplarea imunoreceptorilor activați la evenimentele de semnalizare din aval. BTK joacă un rol crucial în dezvoltarea celulelor B și imunoreglarea. Încărcăturile proteice ale SYK și BTK au fost crescute în hUC-MSCExos în comparație cu cele din hESC-Exos sau hiPSC-Exos. Wnt5 este un membru al familiei de gene Wnt, care a fost implicată în procesele de dezvoltare, inclusiv în reglarea sorții și modelarea celulelor în timpul embriogenezei. hESC-Exos au fost cele mai îmbogățite în Wnt5, urmate de hiPSC-Exos și hUC-Exos. RHEB este vital în reglarea creșterii și a progresiei ciclului celular, având în vedere rolul său în calea de semnalizare mTOR/S6K. Western blot a indicat că cele trei tipuri de exozomi au o încărcare similară RHEB. EGFR este o proteină de suprafață celulară care leagă factorul de creștere epidermic, inducând astfel dimerizarea receptorului și autofosforilarea tirozinei, ducând la proliferarea celulară. Atât hESC-Exos, cât și hUC-MSC-Exos au avut niveluri EGFR mai mari decât hiPSC-Exos. ICAM2 este un membru al familiei molecule de adeziune intercelulară (ICAM) și mediază interacțiunile adezive importante pentru răspunsul imun specific antigenului, clearance-ul mediat de celulele NK, recirculația limfocitelor și alte interacțiuni celulare importante pentru răspunsul imun și supravegherea. Dintre cei trei exozomi, hUC-MSC-Exos a avut cel mai înalt nivel ICAM2. În plus, primele cinci miARN din cele trei tipuri de exozomi au fost evaluate prin RT-qPCR, iar expresia lor a fost în concordanță cu rezultatele secvențierii ARN (Fig. 8C).

Discuţie

EV-urile sunt bogate în diferite substanțe biologic active și sunt compuse în principal din proteine, nucleotide și lipide [3, 17]. În ultimele decenii, comunitatea de cercetare a inaugurat epoca de aur a tehnicilor analitice pentru proteine, nucleotide și lipide. Printre aceste tehnici, spectrometria de masă [14, 20] și secvențierea de mare debit [6, 54] permit screening-ul la scară largă și identificarea componentelor EV. Două baze de date, Vesiclepedia (https://microvesicles.org) [28] și Expedia (https://evpedia.info) [29], sunt actualizate continuu și oferă un rezumat al componentelor vehiculelor electrice pentru mamifere și, respectiv, non-mamifere. . Ca EV, exozomii diferă de MV în ceea ce privește originea lor biologică și dimensiunile fizice [46]. Odată cu progresele continue în domeniul EV-urilor, noi metode sunt în mod constant optimizate pentru a facilita izolarea și purificarea exozomilor, îndeplinind rigoarea necesară analizei comparative. Pentru a completa bazele de date de exozomi și a extinde domeniul de aplicare al aplicațiilor lor clinice, în acest studiu, descriem cadrul component al exozomilor din hESC și hiPSC, care nu a fost încă raportat. De asemenea, am comparat compoziția și funcțiile biologice ale acestora cu cele ale exozomilor derivați de hUC-MSC. În acest scop, am arestat exozomi din EV-uri la dimensiuni recunoscute folosind ultracentrifugarea combinată cu filtrare, excluzând MV-urile și corpurile apoptotice, ceea ce a facilitat rafinarea componentelor exozomilor. În timpul fazei de creștere logaritmică a celulelor, CM colectate au fost gata pentru prepararea exozomilor. Sa constatat că concentrația de particule de hESC-Exos este semnificativ mai mare decât cea a hUC-MSC-Exos, dar similară cu cea a hiPSC-Exos. Rezultate similare au fost obținute la compararea concentrațiilor de proteine. În schimb, ARN-urile totale au prezentat o scădere semnificativă a gradienților de la hESC-Exos și hiPSC-Exos la hUC-MSC-Exos. Aceste rezultate indică faptul că hESCs (H9) pot juca un rol central în activitatea de replicare și au o capacitate mai puternică de a secreta exozomi printre cele trei celule stem.

În studiile anterioare, cercetătorii s-au concentrat pe accesibilitatea exozomilor [1, 11, 58] în timp ce se limitau la domeniul lor de cercetare. Ca urmare, s-a acordat mai puțină atenție analizei diferenței dintre exozomi derivați din surse diferite. Deși au fost efectuate unele proteomice EV a celor trei celule stem, cercetătorii nu au rafinat încă dimensiunea exozomilor [19, 32, 59], iar metoda de analiză se bazează în general pe o singură tehnică de spectrometrie de masă. În studiul de față, au fost utilizate atât metodele TMT, cât și LFQ pentru a măsura și cuantifica componentele proteice ale exozomilor izolați. Analiza bioinformatică a arătat că proteinele foarte încărcate ar putea coordona procesele de dezvoltare, repararea daunelor și metabolismul prin intermediul căilor de semnalizare Wnt, AMPK, VEGF și ciclului celular care intervin, ceea ce a fost în concordanță cu un raport anterior [19]. În mod similar, hiPSC-Exos ar putea participa și la procesele biologice de mai sus prin afectarea semnalelor colaterale. Cu toate acestea, proteomica EV a hiPSC-urilor induse din HFF-uri a arătat o imagine de ansamblu diferită a ontologiei genelor, concentrându-se mai mult pe procesele de replicare a ADN-ului și catabolismul ARN [45]. Prin urmare, am dedus că exozomii secretați de hiPSC-uri derivate din țesuturi diferite pot avea profiluri proteice diferite. În ceea ce privește hUC-MSCs-Exos, componentele sale s-au amestecat în multe activități imunomodulatoare prin reglarea sistemului complementului, a infecției microbiene, a semnalizării NF-κB și așa mai departe și au afectat multiple semnale metabolice, cum ar fi metabolismul colesterolului, metabolismul fosfolipazei D și purina. metabolism, oferind rezultate similare cu cele din rapoartele anterioare [1, 59].

În studiul de față, am comparat proteomii a trei tipuri de exozomi perechi și am analizat în continuare proteinele lor exclusive în ceea ce privește căile funcționale și rețelele de reglementare. HiPSC-urile sunt un tip de celule stem pluripotente care pot fi generate prin reprogramarea celulelor somatice pentru a imita pluripotența hESC-urilor [48], ceea ce arată că aceste celule sunt similare într-o anumită măsură. Deși proteinele lor exozomale se suprapuneau foarte mult, cele ale hESC-Exos s-au îmbogățit în reglarea dezvoltării și funcțiile ciclului celular, ceea ce indică faptul că hESC-Exos ar putea avea o capacitate mai puternică de a regla pluripotența decât hiPSC-Exos în studiul nostru. Pluripotența hUC-MSC-urilor este inferioară celei a hiPSC-urilor și a hESC-urilor, așa cum se reflectă prin profilele lor proteice semnificativ diferite. Proteomul hUC-MSC-Exos a fost diferit de cel al hESC-Exos și hiPSC-Exos în imunoreglare, fiind îmbogățit în proteine ​​care reglează activitățile celulelor natural killer și ale sistemului complement. În plus, bioinformatica proteinelor împărtășite de cele trei tipuri de exozomi a dezvăluit că reglarea în sus a proteinelor hESC-Exos sau hiPSC-Exos s-a concentrat mai mult pe funcțiile de metabolism, dezvoltare și proliferare celulară, interferând cu căile de semnalizare clasice, cum ar fi AMPK, Wnt, mTOR. , și ciclul celular. În comparație, proteinele suprareglate ale hUC-MSC-Exos nu s-au îmbogățit numai în semnalizarea imună, inclusiv în sistemul complementului, infecția microbiană, semnalizarea NF-κB și semnalizarea receptorului celulelor B, ci și în procese metabolice, cum ar fi semnalizarea PPAR. , metabolismul colesterolului și semnalizarea MAPK.

Încărcăturile exozomale au origini tisulare și celulare unice și conțin miARN [16]. Prezentul studiu a arătat, de asemenea, că exozomii izolați din CM produse in vitro de hESC, hiPSC și hUC-MSC-uri conțineau semnături miARN distinctive și specifice. Am descoperit că fiecare miARN exosomal avea un peisaj unic. Expresia miARN și interacțiunea cu 3’ sau 5’ UTR a genelor lor țintă sunt implicate în activități fiziologice și fiziopatologice complexe[18]. MiARN-urile încărcate de sus ale celor trei tipuri de exozomi reglează o serie de procese biologice, inclusiv ciclul celular și semnalizarea Hippo, Wnt, AMPK și TGF. Cu toate acestea, profilurile miARN ale hUC-MSC-Exos au avut o capacitate imunomodulatorie mai puternică decât cea a hESC-Exos sau hiPSC-Exos în ceea ce privește comportamentul celulelor B și T, precum și semnalizarea TNF, JAK-STAT și NF-κB. În special, majoritatea profilurilor unice de miARN au fost legate de reglarea autofagiei, longevității, semnalizării PI3K-Akt, mTOR, AMPK și p53, indicând faptul că aceste grupuri de miARN pot modula îmbătrânirea, bolile legate de îmbătrânire, repararea țesuturilor după leziuni și metabolismul. . MiRNA-urile unice ale hiPSC-Exos reglează semnalizarea mTOR, senescența celulară, metabolismul retinolului și semnalizarea TNF, care contribuie, de asemenea, la senescența și reglarea metabolismului. Pe lângă semnalizarea mTOR și senescența celulară, miRNA-urile unice ale hUC-MSC-Exos reglează semnalizarea Foxo, Jak-STAT și NF-κB, care pot contribui la remodelarea micromediului metabolic și imunitar. Analiza miARN-urilor partajate între cele trei tipuri de exozomi a susținut și mai mult aceste diferențe în reglarea semnalizării. În general, grupurile de miARN din hESC-Exos sau hiPSC-Exos au coordonat apariția mai multor evenimente, cum ar fi dezvoltarea, ciclul celular și diferențierea celulară. Setul de miARN al hiPSC-Exos pare să joace un rol mai puțin important în aceste funcții decât cel al hESC-Exos, dar un rol mai important decât cel al hUCMSC-Exos. În ceea ce privește hUC-MSC-Exos, profilurile miARN găsite indică capacitatea lor superioară de a regla mediul imunitar, în special în vindecarea rănilor și a infecțiilor.

În biologia dezvoltării, exosomii derivați din celule stem pluripotente promovează menținerea stării pluripotente. Prin urmare, miARN-urile care intră în micromediul celular contribuie semnificativ la menținerea stemness [4, 32]. Cele trei tipuri de exozomi din studiul de față au conținut diferite grupuri de miARN care reglează semnalizarea pluripotentă. Cu toate acestea, cele 12 miARN împărtășite între cele trei tipuri de exozomi pot fi cruciale pentru reglarea pluripotenței, inclusiv miR- 21-5p, miR-92a-3p și miR-221-3p. Această ipoteză rămâne de testat și mai multe tipuri de celule stem trebuie investigate. În plus, miARN-urile suprapuse între hESC-Exos și hiPSC-Exos pot fi implicate în diferențierea și reprogramarea celulelor, așa cum este indicat de rezultatele analizelor mai detaliate. De exemplu, familia miR-302 a fost foarte îmbogățită și exclusivă pentru hESC-Exos și hiPSC-Exos și a contribuit în mare măsură la influențarea comportamentului celulelor stem prin modularea reprogramarii [33, 50]. Acest punct se potrivește indirect cu cercetările anterioare privind unicitatea miR-302 în ESC-urile umane și de șoarece [33, 50]. Analiza expresiei clusterelor de miARN care au fost foarte exprimate în ESC-uri în timpul fazei inițiale de reprogramare a relevat inducerea miR-17 [41] și miR-106a/106b [37]. Supraexprimarea miR-93 a promovat o creștere a numărului de colonii de iPSC [35].

Rețeaua de semnalizare stabilită de încărcăturile exozomale conduce evenimente intracelulare, intervenind în continuare într-o serie de procese patologice și fiziologice [3]. Exozomii hESC-urilor conțin numeroase proteine ​​încărcate și miARN-uri care se preconizează că reglează peisajul dezvoltării, metabolismului și anti-îmbătrânire prin amestecarea în căile de semnalizare AMPK, mTOR și Wnt și reglarea autofagiei, longevității și ciclului celular. Mai multe studii au evidențiat funcțiile hESCEV-urilor în întinerirea hipocampului îmbătrânit [25, 26], a măduvei osoase [19] și a celulelor endoteliale [10], precum și în atenuarea osteoartritei recurente prin eliberarea de proteine ​​​​sau miARN specifice [58]. Descoperirile noastre susțin, de asemenea, cercetările anterioare, în care EV-urile derivate din ESC s-au dovedit a avea implicații pozitive în restabilirea funcției cardiovasculare afectate [5]. Vehiculele electrice derivate din ESC au permis menținerea stâncii ESC-urilor, fiind astfel capabile de reprogramare [4], ceea ce este în conformitate cu rezultatele noastre pentru încărcăturile hESC-Exos. În studiul nostru, hiPSC-urile reprogramate din celulele cordonului ombilical au avut funcții biologice similare cu cele ale hESC-Exos; cu toate acestea, niciun raport nu a susținut în mod specific această teorie. În comparație, hUC-MSC-Exos au primit mai multă atenție, iar diverse studii preclinice și clinice au clarificat efectul lor terapeutic asupra mai multor boli [51]. Deși hUC-MSC-Exos contribuie la regenerarea și remodelarea țesuturilor, aceste abilități sunt inferioare celor ale hESC-Exos și hiPSC-Exos. Analiza noastră a arătat că hUC-MSC-Exos a prezentat o capacitate excelentă de reglare imună. Aceste descoperiri oferă o bază pentru cercetări ulterioare privind bolile legate de inflamație, cum ar fi COVID-19 [2].

Concluzii

În general, hESC-Exos este remarcabil în reglarea dezvoltării, metabolismului și anti-îmbătrânire, hiPSC-Exos are funcții biologice similare, dar este inferior hESC-Exos. În comparație, hUC-MSC-Exos contribuie mai mult la reglarea imunității. Analiza noastră extinde domeniul de aplicare al hESC-Exos, hiPSC-urilor și hUC-MSC-Exos și evidențiază avantajele lor respective în intervenția semnalizării legate de boală. După cunoștințele noastre, acest studiu este primul care raportează o analiză sistematică și cuprinzătoare a proteomicelor exozomilor și a profilurilor miARN ale hESC-urilor, hiPSC-urilor și hUC-MSC-urilor. Studiul nostru îmbogățește în continuare bazele de date actuale EV, facilitând extragerea de date mai valoroase pentru identificarea terapiilor acelulare adecvate în medii clinice. Acești exozomi se adresează, de asemenea, dezvoltării de medicamente ca un sistem alternativ de livrare pentru a înlocui sistemele de eliberare a virusului, cum ar fi adenovirusul [7]. Deși previziunile actuale nu au o validare substanțială, aceste constatări ar putea dezvălui alte aplicații individuale sau comune ale celor trei exozomi în cercetarea preclinică sau clinică. Mai mult, cercetările viitoare ar putea fi efectuate și prin analiza diferențială integrată a încărcăturilor exozomale cu vehicule electrice, precum și a componentelor celulelor în sine.

Abrevieri

MSC: Celulă stem mezenchimală; hESCs: celule stem embrionare umane; hiPSCs: celule stem pluripotente induse de om; hUC-MSC: celule stem mezenchimale ale cordonului ombilical uman; TMT: Etichetă de masă tandem; LFQ: Cuantificare relativă a peptidei fără etichetă; hESC-Exos: exozomi derivati ​​din celule stem embrionare umane; hiPSC-Exos: exozomi derivati ​​din celule stem embrionare umane; hUC-MSC-Exos: exozomi derivați de celule stem mezenchimale din cordonul ombilical uman; EVs: vezicule extracelulare; MVs: Microvezicule; Alix: proteina X care interacționează 2-genă legată de apoptoză; TSG101: Gena de susceptibilitate tumorală 101; HFF: fibroblaste ale preputului uman; CAM: Molecule de adeziune celulară; TEM: Microscopie electronică cu transmisie; PDI: Polidispersitate; TEAB: Bromură de tetraetilamoniu; DEPs: proteine ​​exprimate diferențial; FDR: Rate false de descoperire.

Mulțumiri

Suntem recunoscători lui Xueke Tan, Zhongshuang Lv și Xixia Li pentru că ne-au ajutat cu pregătirea probelor de microscopie electronică și pentru realizarea de imagini TEM la Centrul pentru Imagistica Biologică (CBI), Institutul de Biofizică, Academia Chineză de Științe. Autorii îi mulțumesc, de asemenea, Dr. Baohua Zou de la Institutul de Biofizică a Academiei Chineze de Științe pentru ajutorul amabil în lecturi și sugestii esențiale.

Contribuții ale autorului

YB, YZ și JG au conceput și proiectat experimentele. YB și XQ au efectuat izolarea și identificarea exozomului. YB, XQ, QL, SS, KZ, XQ, XZ, CJ, HW și ZY au contribuit la analiza bioinformatică. YB, YZ și JG au scris lucrarea. Toți autorii au citit și au aprobat manuscrisul.

Finanțarea

Această lucrare a fost susținută de granturi de la Proiectul național de cercetare și dezvoltare cheie (2019YFA0110400 la GJ), Fundația Națională de Științe și Tehnologie (31971051, 31771562 la GJ) și de la Dalian municipal Dengfeng Clinical Medicine Grant Support (2021024 la YZ).

Disponibilitatea datelor și materialelor

Toate seturile de date utilizate și/sau analizate în timpul studiului curent sunt disponibile de la autorul corespunzător, la cerere rezonabilă. Toți autorii au confirmat că a fost inclusă o citare pentru datele disponibile în secțiunea referințe.

Declarații

Aprobarea etică și acordul de participare

Autorii nu declară niciun potențial conflict de interese.

Consimțământ pentru publicare

Nu se aplică.

Detalii autor

1 Laborator cheie de cercetare interdisciplinară, Institutul de Biofizică, Academia Chineză de Științe, Beijing 100101, China. 2 Universitatea din Academia Chineză de Științe, Beijing 100049, China. 3 Departamentul de Oncologie Medicală, Al doilea Spital Afiliat al Universității Medicale Dalian, Dalian 116023, China. 4 Al șaselea departament de boli hepatice, Dalian Public Health Clinical Center, Dalian Medical University, Dalian 116023, China.

Referințe

1. Abbaszadeh H, Ghorbani F, Derakhshani M, Movassaghpour A, Yousef M. Vezicule extracelulare derivate din celule stem mezenchimale ale cordonului ombilical uman: o nouă paradigmă terapeutică. J Cell Physiol. 2020;235(2):706–17.

2. Abdelgawad M, Bakry NS, Farghali AA, Abdel-Latif A, Lotfy A. Terapia bazată pe celule stem mezenchimale și exosomi în COVID-19: tendințe și perspective actuale. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):469.

3. Abels ER, Breakefeld XO. Introducere în veziculele extracelulare: biogeneză, selecția încărcăturii de ARN, conținut, eliberare și absorbție. Cell Mol Neurobiol. 2016;36(3):301–12.

4. Baumann K. EV-urile promovează stemness. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021;22(2):72– 3.

5. Bei Y, Das S, Rodosthenous RS, Holvoet P, Vanhaverbeke M, Monteiro MC, Monteiro VVS, Radosinska J, Bartekova M, Jansen F, Li Q, Rajasingh J, Xiao J. Vezicule extracelulare în teranostici cardiovasculare. Teranostice. 2017;7(17):4168–82.

6. Bellingham SA, Coleman BM, Hill AF. Secvențierea profundă a ARN-ului mic dezvăluie o semnătură distinctă de miARN eliberată în exozomi din celulele neuronale infectate cu prioni. Acizi nucleici Res. 2012;40(21):10937–49.

7. Bi Y, Gu L, Wang J, Chang Y, Jin M, Mao Y, Wang H, Ji G. Un sistem nou pentru construcția rapidă simplă a vectorului adenoviral pentru a facilita editarea genomului mediată de CRISPR/Cas9-. CRISPR J. 2021;4(3):381–91.

8. Bi Y, Guo X, Zhang M, Zhu K, Shi C, Fan B, Wu Y, Yang Z, Ji G. Celula stem mezenchimală derivată din măduva osoasă îmbunătățește ficatul gras asociat diabetului prin transformarea mitocondriilor la șoareci. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):602.

9. Bissels U, Wild S, Tomiuk S, Holste A, Hafner M, Tuschl T, Bosio A. Cuantificarea absolută a microARN-urilor prin utilizarea unei referințe universale. ARN. 2009;15(12):2375–84.

10. Chen B, Sun Y, Zhang J, Zhu Q, Yang Y, Niu X, Deng Z, Li Q, Wang Y. Exozomii derivați de celule stem embrionare umane promovează vindecarea ulcerului de presiune la șoarecii în vârstă prin întinerirea celulelor endoteliale senescente. Stem Cell Res Ther. 2019;10(1):142.

11. Chen L, Xiang B, Wang X, Xiang C. Exozomii derivați din celulele stem derivate din sângele menstrual uman ameliorează insuficiența hepatică fulminantă. Stem Cell Res Ther. 2017;8(1):9.

12. Chiang HR, Schoenfeld LW, Ruby JG, Auyeung VC, Spies N, Baek D, Johnston WK, Russ C, Luo S, Babiarz JE, Blelloch R, Schroth GP, Nusbaum C, Bartel DP. MicroARN de mamifere: evaluare experimentală a genelor noi și adnotate anterior. Genes Dev. 2010;24(10):992–1009.

13. Choi DS, Choi DY, Hong BS, Jang SC, Kim DK, Lee J, Kim YK, Kim KP, Gho YS. Proteomica cantitativă a veziculelor extracelulare derivate din celulele cancerului colorectal primar și metastatic uman. J Vezicule extracelulare. 2012.

14. Choi DS, Kim DK, Kim YK, Gho YS. Proteomica veziculelor extracelulare: exozomi și exozomi. Mass Spectrom Rev. 2015;34(4):474–90.

15. Colombo M, Moita C, van Niel G, Kowal J, Vigneron J, Benaroch P, Manel N, Moita LF, Théry C, Raposo G. Analiza funcțiilor ESCRT în biogeneza, compoziția și secreția exozomului evidențiază eterogenitatea extracelulară vezicule. J Cell Sci. 2013;126(Pt 24):5553–65.

16. Colombo M, Raposo G, Théry C. Biogeneza, secreția și interacțiunile intercelulare ale exosomilor și altor vezicule extracelulare. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014;30:255–89.

17. Dai J, Su Y, Zhong S, Cong L, Liu B, Yang J, Tao Y, He Z, Chen C, Jiang Y. Exosomes: key players in cancer and potential therapeutic strategy. Transductul de semnal țintă Ther. 2020;5(1):145.

18. Gangaraju VK, Lin H. MicroARNs: key regulators of stem cells. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(2):116–25.

19. Gong L, Chen B, Zhang J, Sun Y, Yuan J, Niu X, Hu G, Chen Y, Xie Z, Deng Z, Li Q, Wang Y. ESC-sEV-urile umane ameliorează pierderea osoasă legată de vârstă prin întinerire celule stem mezenchimale derivate din măduva osoasă senescente. J Vezicule extracelulare. 2020;9(1):1800971.

20. Haraszti RA, Didiot MC, Sapp E, Leszyk J, Shafer SA, Rockwell HE, Gao F, Narain NR, DiFiglia M, Kiebish MA, Aronin N, Khvorova A. Analiza proteomică și lipidomică de înaltă rezoluție a exosomilor și microveziculelor din surse celulare diferite. J Vezicule extracelulare. 2016;5:32570.

21. He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Exosome theranostics: biology and translational medicine. Teranostice. 2018;8(1):237–55.

22. Hessvik NP, Llorente A. Cunoștințe actuale despre biogeneza și eliberarea exozomilor. Cell Mol Life Sci. 2018;75(2):193–208.

23. Hinna A, Steiniger F, Hupfeld S, Stein P, Kuntsche J, Brandl M. Filterextruded liposomes revisited: a study in size distributions and morphologis about lipide-composition and process parameters. J Lipozomi Res. 2016;26(1):11–20.

24. Hsu C, Morohashi Y, Yoshimura S, Manrique-Hoyos N, Jung S, Lauterbach MA, Bakhti M, Grønborg M, Möbius W, Rhee J, Barr FA, Simons M. Regulament of exosome secretion by Rab35 and its GTPase- proteinele activatoare TBC1D10A-C. J Cell Biol. 2010;189(2):223–32.

25. Hu G, Xia Y, Chen B, Zhang J, Gong L, Chen Y, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV-urile întineresc NSC-urile hipocampale îmbătrânite prin transferul SMAD-urilor pentru a reglementa MYT1-Egln{ {3}}Axa Sirt1. Mol Ther. 2021;29(1):103–20.

26. Hu G, Xia Y, Zhang J, Chen Y, Yuan J, Niu X, Zhao B, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV-urile întineresc NSC-urile hipocampale senescente prin activarea lizozomilor pentru a îmbunătăți disfuncția cognitivă în demența vasculară. Adva Sci. 2020;7(10):1903330.

27. Huang H, Xiong Q, Wang N, Chen R, Ren H, Siwko S, Han H, Liu M, Qian M, Du B. Semnalizarea Kisspeptin/GPR54 restricționează răspunsul imun înnăscut antiviral prin reglarea activității calcineurin fosfatazei. Sci Adv. 2018;4(8):9784.

28. Kalra H, Simpson RJ, Ji H, Aikawa E, Altevogt P, Askenase P, Bond VC, Borràs FE, Breakefeld X, Budnik V, Buzas E, Camussi G, Clayton A, Cocucci E, Falcon-Perez JM, Gabrielsson S, Gho YS, Gupta D, Harsha HC, Hendrix A, Hill AF, Inal JM, Jenster G, Krämer-Albers EM, Lim SK, Llorente A, Lötvall J, Marcilla A, Mincheva-Nilsson L, Nazarenko I, Nieuwland R , Nolte-'t Hoen EN, Pandey A, Patel T, Piper MG, Pluchino S, Prasad TS, Rajendran L, Raposo G, Record M, Reid GE, Sánchez-Madrid F, Schifelers RM, Siljander P, Stensballe A, Stoorvogel W, Taylor D, Thery C, Valadi H, van Balkom BW, Vázquez J, Vidal M, Wauben MH, Yáñez-Mó M, Zoeller M, Mathivanan S. Vesiclepedia: un compendiu pentru vezicule extracelulare cu adnotare comunitară continuă. PLoS Biol. 2012;10(12): e1001450.

29. Kim DK, Kang B, Kim OY, Choi DS, Lee J, Kim SR, Go G, Yoon YJ, Kim JH, Jang SC, Park KS, Choi EJ, Kim KP, Desiderio DM, Kim YK, Lötvall J, Hwang D, Gho YS. Expedia: o bază de date integrată de date cu randament ridicat pentru analize sistemice ale veziculelor extracelulare. J Vezicule extracelulare. 2013.

30. Kim KI, van de Wiel MA. Efectele dependenței în problemele de testare multiplă de dimensiuni înalte. BMC Bioinf. 2008;9:114.

31. Kingham E, Orefo RO. Celule stem pluripotente embrionare și induse: înțelegerea, crearea și exploatarea nano-nișei pentru medicina regenerativă. ACS Nano. 2013;7(3):1867–81.

32. La Greca A, Solari C, Furmento V, Lombardi A, Biani MC, Aban C, Moro L, García M, Guberman AS, Sevlever GE, Miriuka SG, Luzzani C. Vezicule extracelulare din celule stem mezenchimale derivate de celule stem pluripotente dobândesc un model proteomic modulator stromal în timpul diferențierii. Exp Mol Med. 2018;50(9):1–12.

33. Li HL, Wei JF, Fan LY, Wang SH, Zhu L, Li TP, Lin G, Sun Y, Sun ZJ, Ding J, Liang XL, Li J, Han Q, Zhao RC. miR-302 reglează pluripotența, formarea teratomului și diferențierea în celulele stem printr-o manieră dependentă de AKT1/OCT4-. Moartea celulară Dis. 2016;7(1): e2078.

34. Li P, Kaslan M, Lee SH, Yao J, Gao Z. Progrese în tehnicile de izolare a exozomilor. Teranostice. 2017;7(3):789–804.

35. Li Z, Yang CS, Nakashima K, Rana TM. Reglarea mică mediată de ARN a generării celulelor iPS. EMBO J. 2011;30(5):823–34.

36. Liang G, Zhang Y. Celula stem embrionară și celula stem pluripotente indusă: o perspectivă epigenetică. Cell Res. 2013;23(1):49–69.

37. Lüningschrör P, Hauser S, Kaltschmidt B. Kaltschmidt C (2013) MicroARN în pluripotency, reprogramare și inducerea destinului celular. Biochim Biophys Acta. 1833;8:1894–903.

38. Maas SLN, Breakefeld XO, Weaver AM. Vezicule extracelulare: vehicule unice de livrare intercelulară. Trends Cell Biol. 2017;27(3):172–88.

39. Martínez-Greene JA, Hernández-Ortega K, Quiroz-Baez R, ResendisAntonio O, Pichardo-Casas I, Sinclair DA, Budnik B, Hidalgo-Miranda A, Uribe-Querol E, Ramos-Godínez MDP, Martínez-Martínez E Analiza proteomică cantitativă a subgrupurilor de vezicule extracelulare izolate printr-o metodă optimizată care combină precipitarea pe bază de polimeri și cromatografia de excludere a mărimii. J Vezicule extracelulare. 2021;10(6): e12087.

40. Mathieu M, Martin-Jaular L, Lavieu G, Théry C. Specificități ale secreției și absorbției exosomilor și altor vezicule extracelulare pentru comunicarea celulă la celulă. Nat Cell Biol. 2019;21(1):9–17.

41. Mogilyansky E, Rigoutsos I. Clusterul miR-17/92: o actualizare cuprinzătoare privind genomica, genetica, funcțiile sale și rolurile din ce în ce mai importante și numeroase în sănătate și boli. Moartea celulară diferă. 2013;20(12):1603–14.

42. Nguyen HQ, Lee D, Kim Y, Bang G, Cho K, Lee YS, Yeon JE, Lubman DM, Kim J. Analiza proteomică cantitativă fără etichete a veziculelor extracelulare serice care diferențiază pacienții cu boli hepatice grase alcoolice și nealcoolice. J Proteomica. 2021;245:104278.

43. Pittenger MF, Discher DE, Péault BM, Phinney DG, Hare JM, Caplan AI. Perspectiva celulelor stem mezenchimale: biologia celulară la progresul clinic. NPJ Regen Med. 2019;4:22.

44. Pocsfalvi G, Stanly C, Vilasi A, Fiume I, Capasso G, Turiák L, Buzas EI, Vékey K. Mass spectrometrie of extracellular vesicles. Mass Spectrom Rev. 2016;35(1):3–21.

45. Questa M, Romorini L, Blüguermann C, Solari CM, Neiman G, Luzzani C, Scassa MÉ, Sevlever GE, Guberman AS, Miriuka SGa. Generarea liniei iPSC iPSC-FH2.1 în condiții hipoxice din fibroblastele prepuțului uman. Celulele stem Res. 2016;16(2):300–3.

46. ​​Raposo G, Stoorvogel W. Vezicule extracelulare: exosomi, microvezicule și prieteni. J Cell Biol. 2013;200(4):373–83.

47. Ela S, Mäger I, Breakefeld XO, Wood MJ. Vezicule extracelulare: biologie și oportunități terapeutice emergente. Nat Rev Drug Discov. 2013;12(5):347–57.

48. Shi Y, Inoue H, Wu JC, Yamanaka S. Tehnologia celulelor stem pluripotente induse: un deceniu de progres. Nat Rev Drug Discov. 2017;16(2):115–

49. Skotland T, Sandvig K, Llorente A. Lipids in exosomes: Current knowledge and the way forward. Prog Lipid Res. 2017;66:30–41.

50. Subramanyam D, Lamouille S, Judson RL, Liu JY, Bucay N, Derynck R, Blelloch R. Țintele multiple ale miR-302 și miR{-372 promovează reprogramarea fibroblastelor umane la celulele stem pluripotente induse. Nat Biotechnol. 2011;29(5):443–8.

51. Tang Y, Zhou Y, Li HJ. Progrese în exozomii celulelor stem mezenchimale: o revizuire. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):71.

52. Théry C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, Antoniou A, Arab T, Archer F, Atkin-Smith GK, Ayre DC, Bach JM, Bachurski D, Baharvand H, Balaj L, Baldacchino S, Bauer NN, Baxter AA, Bebawy M, Beckham C, Bedina Zavec A, Benmoussa A, Berardi AC, Bergese P, Bielska E, Blenkiron C, Bobis-Wozowicz S, Boilard E, Boireau W, Bongiovanni A, Borràs FE, Bosch S, Boulanger CM, Breakefeld X, Breglio AM, Brennan M, Brigstock DR, Brisson A, Broekman ML, Bromberg JF, Bryl-Górecka P, Buch S, Buck AH, Burger D, Busatto S, Buschmann D, Bussolati B, Buzás EI, Byrd JB, Camussi G, Carter DR, Caruso S, Chamley LW, Chang YT, Chen C, Chen S, Cheng L, Chin AR, Clayton A, Clerici SP, Cocks A, Cocucci E, Cofey RJ, Cordeiro- da-Silva A, Couch Y, Coumans FA, Coyle B, Crescitelli R, Criado MF, D'Souza-Schorey C, Das S, Datta Chaudhuri A, de Candia P, De Santana EF, De Wever O, Del Portillo HA, Demaret T, Deville S, Devitt A, Dhondt B, Di Vizio D, Dieterich LC, Dolo V, Dominguez Rubio AP, Dominici M, Dourado MR, Driedonks TA, Duarte FV, Duncan HM, Eichenberger RM, Ekström K, El Andaloussi S , Elie-Caille C, Erdbrügger U, Falcón-Pérez JM, Fatima F, Fish JE, Flores-Bellver M, Försönits A, FreletBarrand A, Fricke F, Fuhrmann G, Gabrielsson S, Gámez-Valero A, Gardiner C, Gärtner K , Gaudin R, Gho YS, Giebel B, Gilbert C, Gimona M, Giusti I, Goberdhan DC, Görgens A, Gorski SM, Greening DW, Gross JC, Gualerzi A, Gupta GN, Gustafson D, Handberg A, Haraszti RA, Harrison P, Hegyesi H, Hendrix A, Hill AF, Hochberg FH, Hofmann KF, Holder B, Holthofer H, Hosseinkhani B, Hu G, Huang Y, Huber V, Hunt S, Ibrahim AG, Ikezu T, Inal JM, Isin M, Ivanova A, Jackson HK, Jacobsen S, Jay SM, Jayachandran M, Jenster G, Jiang L, Johnson SM, Jones JC, Jong A, Jovanovic-Talisman T, Jung S, Kalluri R, Kano SI, Kaur S, Kawamura Y, Keller ET, Khamari D, Khomyakova E, Khvorova A, Kierulf P, Kim KP, Kislinger T, Klingeborn M, Klinke DJ, Kornek M, Kosanović MM, Kovács ÁF, Krämer-Albers EM, Krasemann S, Krause M, Kurochkin IV, Kusuma GD, Kuypers S, Laitinen S, Langevin SM, Languino LR, Lannigan J, Lässer C, Laurent LC, Lavieu G, Lázaro-Ibáñez E, Le Lay S, Lee MS, Lee YXF, Lemos DS, Lenassi M, Leszczynska A , Li IT, Liao K, Libregts SF, Ligeti E, Lim R, Lim SK, Linē A, Linnemannstöns K, Llorente A, Lombard CA, Lorenowicz MJ, Lörincz ÁM, Lötvall J, Lovett J, Lowry MC, Loyer X, Lu Q, Lukomska B, Lunavat TR, Maas SL, Malhi H, Marcilla A, Mariani J, Mariscal J, Martens-Uzunova ES, Martin-Jaular L, Martinez MC, Martins VR, Mathieu M, Mathivanan S, Maugeri M, McGinnis LK , McVey MJ, Meckes DG Jr, Meehan KL, Mertens I, Minciacchi VR, Möller A, Møller Jørgensen M, Morales-Kastresana A, Morhayim J, Mullier F, Muraca M, Musante L, Mussack V, Muth DC, Myburgh KH, Najrana T, Nawaz M, Nazarenko I, Nejsum P, Neri C, Neri T, Nieuwland R, Nimrichter L, Nolan JP, Nolte-'t Hoen EN, Noren Hooten N, O'Driscoll L, O'Grady T, O' Loghlen A, Ochiya T, Olivier M, Ortiz A, Ortiz LA, Osteikoetxea X, Østergaard O, Ostrowski M, Park J, Pegtel DM, Peinado H, Perut F, Pfaf MW, Phinney DG, Pieters BC, Pink RC, Pisetsky DS , Pogge von Strandmann E, Polakovicova I, Poon IK, Powell BH, Prada I, Pulliam L, Quesenberry P, Radeghieri A, Rafai RL, Raimondo S, Rak J, Ramirez MI, Raposo G, Rayyan MS, Regev-Rudzki N, Ricklefs FL, Robbins PD, Roberts DD, Rodrigues SC, Rohde E, Rome S, Rouschop KM, Rughetti A, Russell AE, Saá P, Sahoo S, Salas-Huenuleo E, Sánchez C, Saugstad JA, Saul MJ, Schifelers RM, Schneider R, Schøyen TH, Scott A, Shahaj E, Sharma S, Shatnyeva O, Shekari F, Shelke GV, Shetty AK, Shiba K, Siljander PR, Silva AM, Skowronek A, Snyder OL 2nd, Soares RP, Sódar BW, Soekmadji C, Sotillo J, Stahl PD, Stoorvogel W, Stott SL, Strasser EF, Swift S, Tahara H, Tewari M, Timms K, Tiwari S, Tixeira R, Tkach M, Toh WS, Tomasini R, Torrecilhas AC, Tosar JP, Toxavidis V, Urbanelli L, Vader P, van Balkom BW, van der Grein SG, Van Deun J, van Herwijnen MJ, Van Keuren-Jensen K, van Niel G, van Royen ME, van Wijnen AJ, Vasconcelos MH, Vechetti IJ Jr , Veit TD, Vella LJ, Velot É, Verweij FJ, Vestad B, Viñas JL, Visnovitz T, Vukman KV, Wahlgren J, Watson DC, Wauben MH, Weaver A, Webber JP, Weber V, Wehman AM, Weiss DJ, Welsh JA, Wendt S, Wheelock AM, Wiener Z, Witte L, Wolfram J, Xagorari A, Xander P, Xu J, Yan X, YáñezMó M, Yin H, Yuana Y, Zappulli V, Zarubova J, Žėkas V, Zhang JY, Zhao Z, Zheng L, Zheutlin AR, Zickler AM, Zimmermann P, Zivkovic AM, Zocco D, Zuba-Surma EK. Informații minime pentru studiile veziculelor extracelulare 2018 (MISEV2018): o declarație de poziție a societății internaționale pentru veziculele extracelulare și o actualizare a ghidurilor MISEV2014. J Vezicule extracelulare. 2018;7(1):1535750.

53. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S. Exosomes: composition, biogenesis, and function. Nat Rev Immunol. 2002;2(8):569–79.

54. Tosar JP, Gámbaro F, Sanguinetti J, Bonilla B, Witwer KW, Cayota A. Evaluarea sortării ARN-ului mic în diferite fracțiuni extracelulare relevate de secvențierea cu randament mare a liniilor celulare mamare. Acizi nucleici Res. 2015;43(11):5601–16.

55. Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, Rajendran L, Wenzel D, Wieland F, Schwille P, Brügger B, Simons M. Ceramide declanșează înmugurirea veziculelor exozomale în endozomi multiveziculari. Ştiinţă. 2008;319(5867):1244–7.

56. Vader P, Mol EA, Pasterkamp G, Schifelers RM. Vezicule extracelulare pentru administrarea medicamentelor. Adv Drug Deliv Rev. 2016;106(Pt A):148–56.

57. van Niel G, D'Angelo G, Raposo G. Aruncarea lumină asupra biologiei celulare a veziculelor extracelulare. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018;19(4):213–28.

58. Wang Y, Yu D, Liu Z, Zhou F, Dai J, Wu B, Zhou J, Heng BC, Zou XH, Ouyang H, Liu H. Exozomii din celulele stem mezenchimale embrionare ameliorează osteoartrita prin echilibrarea sintezei și degradarii cartilajului matrice extracelulara. Stem Cell Res Ther. 2017;8(1):189.

59. Wang ZG, He ZY, Liang S, Yang Q, Cheng P, Chen AM. Analiza proteomică cuprinzătoare a exozomilor derivați din măduva osoasă umană, țesutul adipos și celulele stem mezenchimale din cordonul ombilical. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):511.

60. Xie C, Mao X, Huang J, Ding Y, Jianmin W, Dong S, Kong L, Gao G, Li CY, Wei L. KOBAS 2.0: un server web pentru adnotarea și identificarea căilor și bolilor îmbogățite. Acizi nucleici Res. 2011;39(suppl_2): W316–22.

61. Xu R, Rai A, Chen M, Suwakulsiri W, Greening DW, Simpson RJ. Vezicule extracelulare în cancer: implicații pentru îmbunătățirile viitoare în îngrijirea cancerului. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(10):617–38.

62. Yáñez-Mó M, Siljander PR, Andreu Z, Zavec AB, Borràs FE, Buzas EI, Buzas K, Casal E, Cappello F, Carvalho J, Colás E, Cordeiro-da Silva A, Fais S, Falcon-Perez JM , Ghobrial IM, Giebel B, Gimona M, Graner M, Gursel I, Gursel M, Heegaard NH, Hendrix A, Kierulf P, Kokubun K, Kosanovic M, Kralj-Iglic V, Krämer-Albers EM, Laitinen S, Lässer C, Lener T, Ligeti E, Linē A, Lipps G, Llorente A, Lötvall J, Manček-Keber M, Marcilla A, Mittelbrunn M, Nazarenko I, Nolte-'t Hoen EN, Nyman TA, O'Driscoll L, Olivan M, Oliveira C, Pállinger É, Del Portillo HA, Reventós J, Rigau M, Rohde E, Sammar M, Sánchez-Madrid F, Santarém N, Schallmoser K, Ostenfeld MS, Stoorvogel W, Stukelj R, Van der Grein SG, Vasconcelos MH, Wauben MH, De Wever O. Proprietățile biologice ale veziculelor extracelulare și funcțiile lor fiziologice. J Vezicule extracelulare. 2015;4:27066.

Nota editorului

Springer Nature rămâne neutră în ceea ce privește revendicările jurisdicționale în hărțile publicate și afilierile instituționale.

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】