Interleukina derivată din celulele T-22 conduce expresia CD155 de către celulele canceroase pentru a suprima funcția celulelor NK și a promova metastaza

REZUMAT

Deși celulele T pot exercita o imunitate anti-tumorală puternică, un subset de celule T helper (Th) care produc interleukină-22 (IL{-22) în tumorile de sân și plămâni este legat de rezultate sumbre ale pacientului. Aici, am examinat mecanismele prin care aceste celule T contribuie la boală. În modelele murine de cancer pulmonar și de sân, deleția constituțională și specifică celulelor T a Il22 a redus metastazele fără a afecta creșterea tumorii primare. Deleția receptorului IL-22 de pe celulele canceroase scade metastaza într-un grad similar cu cel observat la șoarecii cu deficit de IL{-22-. IL-22 a indus o expresie ridicată a CD155, care s-a legat de receptorul de activare CD226 de pe celulele NK. Activarea excesivă a condus la scăderea cantităților de CD226 și a celulelor NK afectate funcțional, ceea ce a crescut sarcina metastatică. Semnalizarea IL-22 a fost, de asemenea, asociată cu expresia CD155 în seturile de date umane și cu rezultate slabe pentru pacient. Luate împreună, descoperirile noastre dezvăluie un circuit imunosupresor activat de IL-22 derivată din celulele T care promovează metastaza pulmonară.

Beneficiile cistanche tubulosa-Antitumoral

INTRODUCERE

Semnul distinctiv major al progresiei neoplazice și cauza principală a mortalității cauzate de cancer este capacitatea celulelor canceroase de a se disemina în locuri secundare și de a forma metastaze.1,2 Formarea metastazelor poate fi prevenită prin imunosupraveghere care implică ucigașul natural (NK), citotoxic. , și celulele T helper (Th) 1.3,4 În schimb, celulele T reglatoare (Treg), monocitele circulante și IL-17A derivate din celulele Th formează un micromediu imunosupresor, permițând scăparea imună și promovând metastazele. 4–6 Prin urmare, este esențial să se identifice cascadele de semnalizare care definesc funcția celulelor imune pro- vs. anti-tumorigenice.7,8 Interleukina-22 (IL{-22) este o citokină produsă de Th17 și, la oameni, de asemenea, de subgrupul Th1, cunoscut pentru a promova creșterea celulelor canceroase, a spori migrarea, a proteja de apoptoză, a induce tranziția epitelială la mezenchimală și a menține stamnizarea celulelor maligne.9–13 De asemenea, promovează carcinogeneza timpurie, acționând asupra leziunilor precursoare sau a celulelor stem canceroase imature.14–18 Celule producătoare de IL-22-, în principal celule Th, dar și celule T gamma delta (gd), celule T invariante natural killer (iNKT) și celule limfoide înnăscute (ILC). ), au fost detectate în leziunile canceroase primare.19–24 IL-22 este exprimată la niveluri relevante din punct de vedere biologic în carcinomul de sân, colon, plămân, gastric și hepatocelular.9,11,12,25,26 În majoritatea studiilor , expresia sa este asociată cu un prognostic prost, stadiu mai ridicat al bolii și progresie mai rapidă a tumorii.13,22–24,27–29 IL-22 acționează exclusiv prin receptorul IL{-22 (IL{{40 }}R) format din două subunități, IL-22RA1 și IL{-10RB.30,31 Acțiunea IL{-22 secretată este modulată de un inhibitor, IL{{47} } proteina de legare (IL-22BP, IL{-22RA2), un omolog al IL{-22RA1, care este produsă în principal de celulele mieloide.32,33 În condiții de echilibru, IL -22 este o citokină homeostatică esențială la barierele epiteliale, cum ar fi intestinul, plămânul și pielea.34,35 În aceste locuri, IL-22 promovează protecția, regenerarea și repararea pentru a susține integritatea barierei,36, 37, iar absența sa exacerbează carcinogeneza indusă de inflamație.13,38 Împreună, aceste date evidențiază funcțiile largi, dependente de context, ale IL-22 atât în ​​condiții fiziologice, cât și patologice. La legarea receptorului, IL-22 declanșează kinazele Janus Jak1 și Tyk2 să fosforileze STAT3, STAT1 sau STAT5, dar IL-22 poate iniția alte căi în aval, inclusiv cascada proteine ​​kinazelor activate de mitogen (MAPK) sau semnalizarea PI3K-AktmTOR, în funcție de contextul celular.13,36,39-44 Această diversitate a căilor de semnalizare este reflectată de multitudinea de efecte fiziologice care au fost asociate cu semnalizarea IL-22, inclusiv cele descrise mai sus, precum și protecția împotriva daunelor genotoxice și inducerea de peptide antibacteriene, mucus, citokine pro și antiinflamatorii și chemokine.36,38,39,45,46 Celulele canceroase induc producția de IL-22 de la celulele Th la pacienții cu cancer mamar și pulmonar.12,47,48 Eliberarea IL-1b determinată de inflamazomul NLRP3 induce producția de IL-22 din celulele T din tumoră și ambele IL-22+ Celulele Th și o semnătură NLRP3-IL{-1b pot fi găsite în mostrele tumorale de cancer de sân și plămâni.48,49 Aici, ne-am propus să delimităm un mecanism prin care IL-22 promovează progresia cancerului de san si pulmonar. Am descoperit că IL-22 promovează răspândirea metastazelor în plămân, dezvăluind un circuit în care IL-22 a mediat imunosupresia în nișa metastatică prin promovarea expresiei CD155 pe celulele canceroase, care a fost asociată cu scăderea expresiei CD226. asupra celulelor NK și producția redusă de interferon-g (IFNg). Datele clinice indică faptul că activarea unor astfel de căi este legată de rezultatele pacientului.

REZULTATE

beneficii supliment cistanche-crește imunitatea

IL-22 influențează celulele canceroase diseminate în modelele de șoareci singenici de carcinom pulmonar și mamar

To understand the impact of the IL-22-IL-22R1 signaling axis on cancer progression, we analyzed syngeneic murine models of breast and lung carcinoma. As cancer patients mostly succumb to metastatic disease, we recapitulated this with phenotypically relevant models. We implanted either 4T1 breast cancer or Line-1 lung cancer cells subcutaneously (s.c.) in the right flank of wild-type mice (WT) and mice lacking IL-22 expression (Il22 / ) (Figure 1A). IL-22 did not impact the outgrowth of the primary tumors in either model (Figures 1B and 1C). Upon reaching pre-defined termination criteria (tumor >225 mm2 sau ulcerație), plămânii au fost principalul loc metastatic în modelul nostru, cu metastaze ocazionale găsite în altă parte (nu sunt prezentate). Il22 / șoarecii au demonstrat diseminarea metastatică scăzută a celulelor Line-1 și 4T1 în plămân în comparație cu animalele de tip sălbatic, independent de dimensiunea tumorii primare, folosind diferite metode de detectare a metastazelor (Figurile 1B, 1C și S1A). De asemenea, am observat un fenotip metastatic similar într-un model ortotopic de cancer de sân, în care celulele 4T1 au fost implantate în stratul de grăsime mamară (Figura S2B). Toate metodele utilizate de numărare macroscopică oarbă, teste clonogene sau histologie au arătat o consistență ridicată în detectarea sarcinii metastatice mai mici la Il22 / animale (Figurile 1B, 1C și S1C). Aceasta implică rolul esențial al IL-22 în procesul metastatic. Apoi, am forțat metastaza prin injectarea intravenoasă a celulelor canceroase, ceea ce ocolește necesitatea detașării și invaziei țesuturilor (Figura 1D). Injecțiile intravenoase (iv) ale ambelor linii celulare au reflectat fenotipul în modelul subcutanat. Am putea confirma într-adevăr o sarcină metastatică mai mică la Il22 / șoareci (Figurile 1E și 1F). Aceste rezultate indică un rol specific pentru IL-22 în celulele diseminate în circulație. Pentru a discerne efectele specifice tulpinii, am folosit un model de cancer de sân E0771 (Figura 1G).50,51 Injectarea intravenoasă a celulelor E0771- GFP a evidențiat o sarcină metastatică redusă în Il22 / animale validate prin citometrie în flux (Figurile 1H și S1D). În mod similar, am observat o sarcină metastatică mai mică în ficatul șoarecilor atunci când celulele E0771-GFP au fost injectate intrasplenic (Figura S1E). Întregul plămân stâng al șoarecilor injectați cu E0771-GFP a fost curățat optic urmând un protocol iDISCO pentru a cuantifica metastazele cu microscopie cu foiță luminoasă in situ (Figura 1I).52 Aici, Il22 / șoarecii au prezentat o tendință redusă de a dezvolta metastaze. , în timp ce dimensiunea metastazelor vizualizate nu a fost diferită și nu a avut un model specific de localizare a acestora (Figura 1J). În rezumat, IL-22 a acționat asupra celulelor canceroase diseminate, permițând metastazele cancerului mamar și pulmonar la plămân.

Celulele T sunt sursa relevantă de IL-22 în nișa metastatică din plămân

Am identificat anterior celulele CD4+ T ca sursă principală de IL-22 în tumorile pulmonare primare umane și probele de lavaj bronhoalveolar.12,47,48 Pentru a delimita sursa IL-22 în plămânii modelelor noastre, am injectat intravenos celule E0771 în animale reporter Foxp3mRFP Il17aGFPIl22sgBFP și am cuantificat celule IL-22+ folosind citometrie în flux (Figurile 2A și S2A).53 Populațiile au fost definite ca CD4+, CD{{15} }} și celulele T dublu negative (DN) (CD4 , CD8 ) ab (CD3+ gdTCR NK1.1 ), celulele T gd (CD{3+ gdTCR+ NK1.1 ) și CD{{ 26}} NK1.1+ și CD3 NK1.1+ celule (Figurile 2B și S2B). Am observat o creștere a fracției de celule CD{4+, CD{8+ T și celule NK11+ care au produs IL{-22 în plămânii animalelor injectate cu tumori ( Figurile 2C, S2C și S2D). Aici, celulele CD4+ și CD{8+ T au constituit majoritatea celulelor producătoare de IL-22-la șoarecii purtători de tumori (Figura 2C). Mai mult, am identificat că astfel de celule T CD4+ au produs IL-22 dar nu IL-17A (Figura 2D). Aceste celule aveau o expresie scăzută a CD44, confirmând fenotipul lor de memorie în conformitate cu observațiile noastre anterioare (Figura S2E).48 Pentru a explora în continuare aceste constatări pe modele, am folosit colorarea intracelulară pentru a evalua producția de IL-22 în linia{55} {56}} model sc, care a dat rezultate similare, cu excepția unei fracții reduse de producători de celule T CD{8+ IL-22 (Figurile S2F–S2I). De asemenea, am putut identifica că celulele IL-22+ nu au co-exprimat IFNg, ceea ce distinge producătorii IL-22 de șoarece de subsetul Th1 (Figura 2G).49 În plus, am folosit microscopia confocală pe tăierea cu precizie. felii de plămân de la animale reporter pentru a interoga distribuția lor spațială în plămânii șoarecilor injectați cu tumori. Aici, am putea identifica că astfel de producători de IL-22 și IL{-17A se localizează aproape exclusiv în focarele metastatice (Figura 2E). După cum s-a demonstrat prin citometria în flux, nu am găsit nicio corelație între IL-22 și IL-17O producție din celulele reporter din focarele metastatice, ceea ce indică faptul că IL{-22 și IL{-17 sunt într-adevăr produse de două subseturi celulare diferite. De asemenea, am confirmat că o mare parte a celulelor producătoare de IL-22-sun celule T CD4+ (Figura 2E). Deoarece aceste date au indicat un rol predominant pentru celulele T în producția de IL-22, am generat un șoarece Il22floxCd4cre cu o ștergere condiționată a Il22 în toate celulele T mature (Figura 2F). Când au fost provocați cu celule E{0771-GFP, șoarecii Il22floxCd4cre au avut o tendință redusă de a dezvolta metastaze în plămân, care amintește de fenotipul observat la Il22/animale globale (Figura 2F). Cu toate acestea, am putea confirma, de asemenea, că cre-recombinaza sub controlul promotorului CD4 a abolit complet producția de IL-22 nu numai în CD{4+, ci și în celulele T CD{8+ izolate din splină de șoareci Il22floxCd4cre și, prin urmare, acest model nu a putut fi utilizat pentru a identifica o sursă specifică de IL-22 (Figura S2J). Pentru a confirma rolul celulelor Th ca sursă crucială de IL-22 în modelul nostru, am transferat celule T de tip sălbatic și Il22 / CD4+ în animale Rag1 / II22/ care au primit ulterior E{{ 104}} Celule GFP iv (Figura 2G). Aici, am putea confirma că producția de IL-22 prin celulele T CD4+ transferate adoptiv este suficientă pentru a promova metastazele pulmonare în modelul nostru, dar este eliminată atunci când se utilizează celule T CD{4+ izolate din II22/animale (Figura 2G). Important, diferențele de metastază au fost afectate de grefarea celulelor T la transfer (Figura S2K). În concluzie, am identificat celulele Th ca o sursă suficientă de IL-22 care determină metastaze în plămânul șoarecilor purtători de tumori și apoi am căutat să identificăm celula țintă relevantă.

Figura 1. Knockout-ul IL-22-reduce numărul de metastaze pulmonare, dar nu afectează creșterea tumorii în modelele de șoareci singenici de carcinom pulmonar și mamar

Figura 2. Celulele T sunt sursa primară de IL-22 în plămânul șoarecilor purtători de tumori

Expresia IL-22RA1 pe celulele tumorale este indispensabilă pentru formarea metastazelor

Expresia IL-22RA1 este limitată la celulele non-hematopoietice și servește ca factor limitator pentru semnalizarea IL-22. Pentru a interoga influența acesteia asupra fenotipului metastatic, am generat o ștergere stabilă a Il22ra1 în celulele 4T1 și Line-1 (Figura 3A). În conformitate cu descoperirile noastre anterioare, creșterea tumorii celulelor 4T1 Il22ra1 a fost în mare parte neafectată în comparație cu celulele de control 4T1 (Figura 3B). Cu toate acestea, șoarecii care au fost injectați cu celule 4T1 Il22ra1 sc sau iv au avut mai puține metastaze macroscopice și clonogene în plămân, comparativ cu celulele 4T1 de control (Figurile 3B și 3C). Pentru a confirma că acest efect nu este dependent de clonă, am generat și analizat trei clone Line-1 Il22ra1 și le-am testat împotriva a trei clone de control, care au dat rezultate similare (Figurile 3D și 3E). Acest lucru confirmă faptul că celulele canceroase care exprimă IL-22RA1- sunt ținta relevantă a IL-22 în declanșarea metastazelor pulmonare. Pentru a exclude efectele în afara țintă ale metodologiei, am folosit IL-22BP pentru a inhiba semnalizarea IL-22. Am stabilit linii celulare 4T1 și Line-1 care au secretat constitutiv IL-22BP (Il22ra{2+) (Figura S3A). Când au fost injectate sc, celulele Line-1 Il22ra{2+ au crescut în mod comparabil cu controlul la locul de implantare, așa cum sa văzut anterior în modelele Il22ra1 și Il22 / șoareci, deși celulele 4T1 Il22ra2+ au crescut mai lent (Figura S3B). Aici, celulele 4T1 Il22ra2+ au avut un număr mult redus de metastaze atunci când au fost injectate sc (Figura S3B și S3C). În ciuda variabilității mai mari, celulele Line-1 Il22ra{2+ au format, de asemenea, mai puține metastaze atunci când au fost injectate sc sau iv (Figura S3D și S3E). Astfel, neutralizarea IL{-22 prin IL{-22BP a imitat în mare măsură fenotipul observat cu celulele Il22ra1 și Il22 / șoareci, coroborând relevanța citokinei pentru procesul metastatic.

beneficii supliment cistanche-crește imunitatea

IL-22 controlează creșterea celulelor tumorale în stadiul incipient al grefei metastatice

To determine the role of IL-22 signaling during the dissemination process, we analyzed the kinetics of metastatic seeding in our models. For this, we injected 4T1-GFP cells i.v. and analyzed lungs at 12 and 48 h after injection (Figure S4A). We used confocal microscopy to quantify the numbers of GFP+ colonies (defined as cell clusters of >100 mm) și celule individuale per mm2 de țesut pulmonar (Figura S4B). Nu am putut detecta diferențe la 12 ore după injectare, ceea ce indică faptul că însămânțarea ar putea să nu fie afectată major de IL-22 (Figurile S4C și S4D). Cu toate acestea, la momentul 48-h, numărul de celule și colonii GFP+ a scăzut în plămânul Il22 / șoareci (Figurile S4C și S4D). Acest lucru a sugerat un rol pentru IL-22 în declanșarea metastazelor precoce în plămâni. Pentru a evalua rata de proliferare, am co-injectat șoareci cu 5-etinil-20 -deoxiuridină (EdU) cu 4 ore înainte de investigare la 12, 24, 48 ore și 7 zile după injectarea tumorii (Figura S4E) . Similar numărării microscopice, nu am detectat diferențe în numărul de celule GFP+ mai devreme de 48 de ore după injectare (Figurile S4F-S4G). În schimb, am putea detecta diferențe în încorporarea EdU, ceea ce indică o fracțiune mai mare a celulelor în diviziune numai până în ziua 7 după injectare (Figura S4G). Astfel, argumentăm că diferențele în sarcina tumorii pulmonare afectate de IL-22 observate încă de la 48 de ore sunt mediate de un mecanism independent de proliferare.

Figura 3. Expresia IL-22RA1 pe celulele tumorale este indispensabilă pentru formarea metastazelor

IL-22 reglează expresia CD155 pe celulele tumorale și, prin urmare, promovează metastaza

Pe baza constatărilor noastre că IL-22 acționează asupra celulelor canceroase IL{{-22ra{1+ pentru a promova metastazele, am efectuat secvențierea ARN în vrac a celulelor 4T1 tratate cu IL-22 pentru a delimita în continuare mecanismul de bază (GEO: GSE202314) (Figura 4A). Am descoperit 147 de gene care au fost reglementate diferențiat. Dintre acestea, expresia a 133 de gene a fost crescută, iar 14 a scăzut la tratamentul cu IL-22 (Figurile 4B și S5A). Am validat Pvr (receptor de poliovirus, Pvr) ca una dintre țintele cele mai semnificativ crescute folosind qPCR (Figura S5B). Acest lucru este notabil deoarece CD155, produsul Pvr, este supraexprimat în diferite tipuri de cancer și posedă proprietăți de promovare a tumorilor, inclusiv metastaze.54–56 Pentru a confirma descoperirile noastre, am evaluat expresia CD155 în 4T1 stimulat de IL{20}} Linia -1 și celulele E0771 prin citometrie în flux (Figura 4C). Am detectat o creștere a expresiei CD155 în toate liniile celulare peste 72 de ore (Figurile 4D și 4E), dar acest efect a fost absent în celulele lipsite de IL-22RA1 (Figura S5C). Apoi, am evaluat impactul IL-22 asupra expresiei CD155 în celulele E0771-GFP din plămânii șoarecilor purtători de tumoră (Figura 4F). Aici, am putea confirma că celulele implantate în Il22 / șoareci au avut o expresie mai mică a CD155, care s-a corelat cu o fracțiune mai mică de celule E0771-GFP detectate prin citometrie în flux (Figurile 4G și 4H). Pentru a verifica rolul CD155 în metastază, am stabilit liniile celulare Pvr Line-1 și 4T1 (Figurile 4I, S5D și S5G). Deși acest lucru a avut un efect redus asupra capacității lor de a crește subcutanat (Figurile S5E și S5F), a abolit capacitatea de a forma metastaze în plămân (Figurile 4J și S5H). Am putea inversa acest proces prin exprimarea constitutivă a CD155 în celulele Pvr, independent de reglarea indusă de IL-22-(Pvr+).

Figura 4. Semnalizarea IL-22 crește expresia CD155 pe suprafața celulelor tumorale și conferă rezistență la controlul metastazelor

În acest cadru, am putea induce metastaze în plămânii Il22 / șoareci, evidențiind legătura dintre aceste două molecule și rolul lor ca mediatori ai procesului metastatic (Figurile 4K și S5I).

CD155 pe celulele tumorale este asociat cu scăderea expresiei CD226 pe celulele NK și cu producția redusă de IFNg

CD155 joacă un rol intrinsec în proliferarea și aderența celulelor canceroase,54–57 printre altele. Nu am detectat deficiențe în proliferarea celulelor Line-1 Pvr in vitro (datele nu sunt afișate). Este important că CD155 are un rol pro-metastatic extrinsec al celulelor prin legarea la receptorii imunomodulatori CD96, CD226 sau TIGIT de pe suprafața celulelor NK și T.54–56,58,59 Pentru a identifica partenerii de legare ai CD155, am analizat răspunsuri antitumorale în plămânii șoarecilor care conțin celule 4T1-luciferaze+ (4T1-Luc) (Figura 5A). Am confirmat utilizând un sistem de imagistică in vivo (IVIS) că șoarecii de tip sălbatic și Il22 / au avut însămânțare similară de celule tumorale până în ziua 5 după injectare, iar diferențele în sarcina tumorii au crescut pe parcursul a două săptămâni (Figurile 5B și 5C) . Într-adevăr, defectul producției de IFNg de către celulele NK, dar nu și alte tipuri de celule, a evidențiat pierderea mecanismelor efectoare umorale (Figurile 5D, 5E și S6A) și s-a corelat cu o sarcină tumorală mai mare (Figura S6B). Acest efect a fost găsit în mod constant în modelul Line-1 sc (Figurile S6C–S6E). Analizate prin citometrie cu cip, 60 de probe de la șoareci purtători de metastaze pulmonare 4T1-au demonstrat o expresie crescută a CD155 în focarele metastatice în WT, dar nu și la Il22 / animale (Figurile 5F și S6F). Am găsit o infiltrare mai mare a celulelor NK în focarele metastatice ale animalelor Il22 / dar nu WT, sugerând o activare mai mare și confirmând dependența de celulele NK ca celule efectoare anti-tumorale (Figura 5F). CD226, dar nu TIGIT sau CD96, a fost exprimat diferențial de celulele NK și, într-o măsură mai mică, de celulele T CD8+ din plămânii animalelor de tip sălbatic și Il22 / (Figurile 5G și S6G–S6H). CD226 este un co-receptor esențial pentru activarea funcțiilor efectoare ale celulelor T NK și CD8. Prin urmare, ne-am propus să explorăm relevanța sa fiziopatologică în modelul nostru.61–64

cistanche tubulosa-imbunatateste sistemul imunitar

Blocarea CD226 abrogă fenotipul anti-metastatic al animalelor cu deficit de IL-22-

Semnalizarea excesivă mediată de CD155- prezentă în micromediul tumoral poate induce internalizarea și degradarea CD226 în celulele efectoare.61,63 Pentru a delimita rolul exprimării excesive a CD155 asupra CD226 și răspunsul anti-tumoral ulterior, am injectat controlul 4T1 și Celulele Pvr+ iv la șoareci Il22/ și două grupuri au primit, de asemenea, anticorp de blocare anti-CD226 (480.1) (Figura 6A). Atât celulele Pvr +, cât și blocarea CD226 ar putea promova în mod similar metastaza pulmonară la Il22 / șoareci, iar aceste efecte nu s-au sinergizat (Figura 6B). Similar cu observațiile noastre anterioare la animalele de tip sălbatic, acest lucru a fost suficient pentru a inhiba producția de IFNg de către celulele NK (Figura 6C). În cele din urmă, am detectat o scădere a expresiei CD226 pe celulele NK la șoarecii injectați cu Pvr+-în comparație cu celulele de control. Acest lucru s-a corelat cu capacitatea scăzută a acestor celule NK de a produce IFNg (Figura 6D). În plus, am interogat potențialul anticorpului TIGIT agonist (IG9) de a inhiba activarea celulelor NK la Il22 / animale și al blocării CD96 (3.3) pentru a preveni inhibarea funcției celulelor NK (Figura 6E). Nici agonistul TIGIT, nici antagonistul CD96 nu au modificat numărul de metastaze în comparație cu Il22 / animalele care au primit celule de control sau, respectiv, Pvr+ 4T1 (Figura 6F). Când este activat, TIGIT ar putea inhiba producția de IFNg din celulele CD8+ T, dar nu și din celulele NK (Figura 6G). Astfel, o axă IL-22- CD155 declanșează scăderea expresiei CD226 în celulele NK și le face inerte în micromediul tumoral.

Expresia CD155 completează semnătura genei IL-22 la pacienții cu cancer mamar și pulmonar

În cele din urmă, am evaluat relevanța clinică a CD155 în contextul axei IL-22-IL{-22RA1. Numai expresia CD155 este asociată cu un prognostic nefavorabil într-o varietate de entități canceroase.54 Am analizat datele de secvențiere a ARN din atlasul genomului cancerului (TCGA) adenocarcinomul pulmonar (TCGA: LUAD, n=504) și HER2- mostre de pacient pozitive din seturile de date pentru carcinomul mamar invaziv (TCGA: BRCA, n=110). Ne-am concentrat pe genele cheie legate de IL-22-: IL22RA1, IL22RA2, IL1{0RB și PVR. Pentru a stratifica cohortele de pacienți, am utilizat gruparea aglomerativă, o metodă de grupare nesupravegheată, rezultând trei grupuri majore (Figurile 7A și 7B). Aceasta a dezvăluit modele distinctive de expresie a genelor: cluster 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, IL10RBmed, PVRhi), cluster 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, IL1{0RBhi, PVRlo) și cluster 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, IL10RBlo, PVRmed) (Figura 7C). Aceste grupuri au fost distribuite uniform în aceste două cohorte (Figura 7D). Pacienții din grupul 0 și grupul de date LUAD 2 au avut o supraviețuire mai proastă decât pacienții din grupul 1 (Figura 7E). Supraviețuirea clusterelor 1 și 2 nu a fost diferită în ambele cohorte (Figura 7E). În plus, am calculat timpii medii de supraviețuire restricționați (RMST) pentru grupurile 0 și 1 pentru a cuantifica diferența dintre timpul de supraviețuire așteptat până la cinci ani de urmărire, rezultând 361,18 zile pentru LUAD și 93,23 zile pentru BRCA (Figura 7F). Clusterele 0 și 1 au avut diferențe în frecvența stadiilor patologice ale bolii în cadrul lor în LUAD, dar nu și în cohorta BRCA (Figura 7G). Este important, astfel de diferențe de supraviețuire între grupuri (IL22RA1hiPVRhi) și 1 (IL22RA1loPVRlo) provin în principal de la pacienții diagnosticați în stadiile incipiente (I și II), dar nu în stadiile avansate ale bolii (III și IV) (Figura S7A). Pentru a evalua impactul fiecărei gene asupra supraviețuirii, am folosit modelul de riscuri proporționale al lui Cox. Atât IL22RA1 (raportul de pericol [HR]=1.23) cât și PVR (HR=1.28) au impact asupra supraviețuirii, în timp ce IL22RA2 și IL10RB nu au modificat pericolul în cohorta LUAD (Figura S7B). Mai mult, doar CD226 (p=0.06), dar nu și TIGIT sau CD96, au avut tendința de a influența supraviețuirea, în conformitate cu constatările noastre în modelele preclinice (Figura S7B). Am folosit algoritmul de deconvoluție CIBERSORTx pe cohorta LUAD pentru a evalua dacă modelele de expresie genică ale clusterelor noastre au un impact asupra infiltrației celulelor imune la pacienți.65 Interesant, există o creștere a unităților CIBERSORTx pentru celulele NK activate din clusterul 1 în comparație cu clusterele. 0 și 2 la pacienții cu LUAD, în timp ce nu au existat diferențe între celulele NK în repaus sau celulele T cu memorie CD4+ activate (Figura S7C) cu o tendință similară în cohorta BRCA (Figura S7D). Împreună, aceste rezultate din cohortele clinice demonstrează relevanța unei legături de reglementare între IL-22 derivată din celulele T și CD155.

Figura 5. Expresia CD226 este mai mare pe celulele NK la șoarecii Il22–/–

DISCUŢIE

În acest studiu, am descoperit un mecanism prin care celulele T produc IL-22 pentru a promova metastaza pulmonară în modelele de șoarece de cancer pulmonar și de sân. Din punct de vedere mecanic, celulele T de la focarele metastatice din plămân, predominant CD4+, produc IL-22 care semnalează direct prin receptorul său exprimat în celulele canceroase, promovând expresia moleculei pro-metastatice CD155.{{ 5}},58,59 În ciuda expresiei pan-cancerului bine studiate a CD155 și a rolurilor sale intrinseci și extrinseci în progresia cancerului,54 calea responsabilă pentru reglarea CD155 în celulele maligne rămâne evazivă.66–68 Am demonstrat că IL{{ 15}} a crescut expresia CD155 în liniile celulare de cancer pulmonar și de sân in vitro și in vivo, în timp ce expresia sa constitutivă a permis metastazele la Il22 / șoareci, în comparație cu celulele de control și deficitare. Expresia crescută a CD155 în micromediul pulmonar al tumorii a condus la o reducere a moleculei co-stimulatoare CD226 pe celulele NK, diminuând localizarea acestora la metastaze și producția de IFNg, care s-au corelat cu o sarcină tumorală mai mare. În studiile noastre anterioare, am detectat o acumulare de celule T producătoare de IL-22-în mostrele tumorale ale pacienților cu carcinom pulmonar fără celule mici (NSCLC).12,48 Am demonstrat că celulele canceroase declanșează NLRP3- secreția dependentă de IL-1b care induce astfel de producție de IL-22 în principal din celulele Th.18 Demn de remarcat este faptul că, la om, datorită diferențelor dintre profilurile citokinelor celulelor Th, IL{{ 31}} este de asemenea indusă în celulele Th1. Este de imaginat că acest lucru ar putea afecta răspunsul imun antitumoral. Este important că astfel de variante Th1 ar putea explica parțial hiperprogresia cancerului la activarea celulelor T după blocarea punctului de control.69 În conformitate cu observațiile noastre anterioare, am confirmat acumularea de IL-22-producător de CD{4+ și CD{{38} } Celulele T, dar și celulele NK1.1+, în nișa metastatică din plămânul animalelor injectate cu tumori. Este important de reținut că am observat diferențe specifice tulpinii în acumularea unor astfel de celule T CD8+ producătoare de IL-22-în modelele noastre. Cu toate acestea, eliminarea producției de IL-22 în totalul celulelor T mature a fost suficientă pentru a recapitula efectul observat la animalele cu deficit de IL{-22-70. De asemenea, transferul adoptiv al celulelor T CD{4+ în Soarecii Rag / II22 / a fost suficient pentru a induce metastaze pulmonare, evidențiind rolul primordial al celulelor Th ca sursă de IL-22. În schimb, descoperirile noastre anterioare sugerează că, în ciuda acumulării de celule T CD8+ în probele tumorale, contribuția acestora la pool-ul IL{-22 este minoră.48 În orice caz, caracterizarea unui astfel de CD{{53} }} Celulele T producătoare de IL-22-este esențială pentru a evalua cu atenție proprietățile lor pro- sau anti-tumorale, pe măsură ce apar noi date despre această subpopulație.71,72 De asemenea, rolul principal al celulelor NK și NKT în controlul tumorii le depășește. contribuția potențială la formarea metastazelor prin IL-22, care este descoperită într-un experiment de transfer Rag / II22 / adoptiv folosind animale lipsite de celule T mature, dar având celule NK funcționale.37 Această ipoteză este susținută în continuare de descoperirile noastre în metastaza. focare în care celulele NK au fost găsite mai abundent decât celulele T citotoxice, evidențiind celulele NK ca jucători esențiali în controlul tumorii în absența IL-22. Este important de reținut că ne-am concentrat pe producătorii de IL-22 din focarele metastatice din plămân, dar nu am luat în considerare originea, clonalitatea sau distribuția lor în sânge sau organe limfoide. Mai mult, diverse surse de IL-22 promovează progresia tumorii într-o manieră dependentă de context mediată de acțiunea pleiotropă a acestei citokine. În acest sens, celule similare producătoare de IL-22-în diferite compartimente (plămân vs. splină vs. ganglion limfatic) ar putea afecta în mod diferențial fenotipurile pro-tumorale sau nu au nicio funcție în funcție de context, care va trebui investigat în continuare. Studiile asupra cancerului raportează în mod repetat că IL-22 afectează dezvoltarea și creșterea tumorilor primare și, în cele din urmă, progresia neoplazice.26,73–76 Această noțiune este justificată în principal de capacitatea de a promova migrarea, invazia și ameliorarea celulelor canceroase. in vitro și astfel promovează formarea metastazelor.76,77 Important, ablația IL-22 poate atenua micromediul imunosupresor într-un model Kras-mutant de carcinom pulmonar.14 În studiul actual, am demonstrat că sarcina crescută de metastaze a fost un efect direct al IL-22 asupra celulelor tumorale IL{-22RA1+ diseminate, care a dus la creșterea creșterii coloniilor. Important este că datele noastre nu exclud în mod oficial un impact asupra celulelor non-tumorale. Ca atare, influența IL-22 asupra diseminării celulelor tumorale prin acțiunea intrinsecă a IL-22R exprimată endogen este subliniată pe larg de Giannou și colab.78.

Figura 6. Semnalizarea CD226 este indispensabilă pentru producerea de IFNg din celulele NK

Am demonstrat că Pvr este una dintre genele cu expresie crescută pe celulele canceroase după tratamentul cu IL-22. În acest context, celulele CD155-deficiente au format puține metastaze, atât la tipul sălbatic, cât și la șoareci Il22/și, important, reintroducerea CD155 ne-a permis să reconstituim fenotipul metastatic. Rolul intrinsec al CD155 în celulele canceroase a fost bine studiat și se știe că afectează însămânțarea, proliferarea celulelor tumorale și migrarea.56,57 Cu toate acestea, celulele Pvr nu au prezentat proliferare sau migrare inhibată în mâinile noastre și însămânțarea celulelor tumorale. a fost neafectat la Il22 / soareci. Identificat inițial pe celulele prezentatoare de antigen, CD155 servește ca un promotor extrinsec al progresiei tumorii care suprimă funcția celulelor NK și T prin legarea de CD96 și TIGIT pe suprafața lor și induce internalizarea și reglarea în jos a CD226.56,61-64,79-85Due la funcția sa imunosupresoare, CD155 în cancer și celulele gazdă exercită proprietăți pro-metastatice și este propus ca o țintă pentru blocarea inhibării punctului de control.61,86 Celulele NK primesc un semnal co-stimulator de la celulele prezentatoare de antigen prin CD226. 87 Cu toate acestea, stimularea excesivă a CD226 în micromediul tumoral duce la internalizare și degradare.63 Acest lucru este de obicei contracarat de CD96 și TIGIT, care leagă CD155 cu o afinitate mai mare.58 Interesant este că celulele 4T1 sunt cunoscute că induc reglarea CD226 în infiltrarea tumorii. limfocitelor și suprimă producția de IFNg.88 Aici, am demonstrat că deficiența IL-22 a păstrat expresia CD226 pe celulele NK și CD8+ T. Cu toate acestea, numai celulele NK au avut capacități de producție de IFNg dramatic mai mari și s-au corelat invers cu sarcina metastatică. În mod interesant, activarea semnalizării TIGIT în studiul nostru a inhibat producția de IFNg din celulele CD8+ T, dar nu și NK, și nu a fost suficientă pentru a crește sarcina metastatică. În mod similar, un alt receptor pentru CD155, CD96, nu a fost nici reglat diferențial la Il22 / șoareci și nici inhibarea acestuia nu a prevenit metastaza, ceea ce indică faptul că CD155 nu suprimă celulele NK prin CD96 în modelul nostru. Acest lucru evidențiază reglarea specifică tipului de celule a răspunsurilor anti-tumorale de către CD155 și diferiții săi parteneri de legare.

Beneficiile suplimentului cistanche-cum să întărești sistemul imunitar

Faceți clic aici pentru a vedea produsele Cistanche Enhance Immunity

【Cereți mai multe】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Impactul CD155 asupra prognosticului și rolul său în patogeneza plămânilor, sânului, colonului și a altor tipuri de cancer este stabilit.79–85 Există dovezi vaste cu privire la relevanța prognostică a IL-22 și a genelor sale înrudite. în diferite entități canceroase.10,21,27,75,89–91 Cu toate acestea, unele studii raportează nicio influență a exprimării IL-22 asupra supraviețuirii.12 Deși aceste discrepanțe s-ar putea datora eterogenității în populațiile de pacienți, eșantionarea și problemele de raportare, multe dintre aceste studii se concentrează pe o singură genă legată de semnalizarea IL-22. Aici, am folosit gruparea aglomerativă pentru a discerne modelele de expresie ale IL22RA1, IL22RA2, IL10RB și PVR în cohortele LUAD și BRCA din TCGA și le-am afiliat cu datele clinice. Aici, am identificat trei modele de exprimare a acestor gene: modelul 0 (IL22RA1hi, IL22RA2lo, PVRhi), modelul 1 (IL22RA1lo, IL22RA2hi, PVRlo) și modelul 2 (IL22RA1lo, IL22RA2lo, PVRmed). Am identificat că expresia ridicată a IL22RA1 a coincis cu o exprimare ridicată a PVR, care s-a tradus și în rezultate slabe de supraviețuire globală, în special la pacienții diagnosticați cu stadii patologice precoce (I și II), dar nu avansate (III și IV), evidențiind rolul specific etapei al acestui mecanism. În schimb, expresia ridicată a IL22RA2, cunoscută și sub numele de IL-22BP, a fost corelată cu o expresie mai scăzută a PVR și o supraviețuire mai bună. , deconvoluția CIBERSORTx a indicat că clusterul 1 caracterizat prin expresie ridicată a IL22RA2 prezintă o semnătură genică pentru celulele NK activate, dar nu în repaus, în comparație cu alte clustere. Expresia CD226 este demonstrată că stratifică pacienții pentru rezultat în mai multe studii clinice NSCLC.93 Cu toate acestea, datorită modului dublu de reglare pre- și post-translațională a CD226, expresia nu este întotdeauna reflectată în datele de secvențiere a ARNm.94 Prin urmare, studiile care se concentrează cu privire la reglarea post-translațională a CD226, să evalueze expresia sa în probe clinice folosind colorarea cu anticorpi. }}.24, p=0.06), în timp ce TIGIT și CD96 nu au demonstrat nicio corelație cu supraviețuirea. Este important că celulele tumorale concepute pentru a secreta IL-22BP au format mai puține metastaze, evidențiind potențialul căii IL{-22 pentru intervenția terapeutică țintită. Acest lucru ar putea contracara supraexpresia tumorii CD155, a cărei țintire directă rămâne o provocare din cauza unei rețele complexe de co-receptori. De notat în plus, efectele pe termen lung ale neutralizării IL-22 asupra metastazelor sunt necunoscute, dar ar putea avea un impact direct asupra considerației terapeutice a celulelor T sau ar putea oferi rațiunea neutralizării IL{-22 folosind anticorpi cu un profil de siguranță benefic, cum ar fi Fezakinumab (procesul NCT01941537) sau IL-22 proiectat cu design bazat pe structură.39,95 În rezumat, am identificat supraexpresia CD155 indusă de IL-22- asupra celulelor tumorale ca un mecanism care beneficiază de creșterea metastatică. Acest rol esențial în prognostic a subliniat potențialul IL-22 ca țintă terapeutică în cancer. Până acum, neutralizarea IL-22 este propusă în principal ca strategie de tratare a bolilor autoimune.31,49 Datele noastre despre IL{-22BP ca neutralizator al IL{-22, care a fenocopiat deficiența globală de IL-22, a susținut potențialul terapeutic de a viza axa IL{{-22-IL{-22R1 și ar trebui explorată în continuare în studiile preclinice și clinice.

REFERINȚE

1. Hanahan, D. și Weinberg, RA (2011). Semnele distinctive ale cancerului: generația următoare. Celula 144, 646–674. https://doi.org/10.1016/j.cell.2011. 02.013.

2. Massague, J. și Obenauf, AC (2016). Colonizarea metastatică prin celule tumorale circulante. Natura 529, 298–306. https://doi.org/10.1038/ nature17038.

3. Renner, P., Rovira, J., Klein, C., Schlitt, HJ, Geissler, EK și Kroemer, A. (2014). Celulele natural killer KLRG1(+) protejează împotriva bolilor metastatice pulmonare prin imunosupraveghere. OncoImmunology 3, e28328. https://doi.org/10.4161/onci.28328.

4. Mohme, M., Riethdorf, S. și Pantel, K. (2017). Celulele tumorale circulante și diseminate - mecanisme de supraveghere și evadare imună. Nat. Rev. Clin. Oncol. 14, 155–167. https://doi.org/10.1038/nrclinonc. 2016.144.

5. Briukhovetska, D., Do¨ rr, J., Endres, S., Libby, P., Dinarello, CA și Kobold, S. (2021). Interleukine în cancer: de la biologie la terapie. Nat. Rev. Cancer 21, 481–499. https://doi.org/10.1038/s41568-021-00363-z.

6. Kitamura, T., Qian, BZ și Pollard, JW (2015). Promovarea celulelor imune a metastazelor. Nat. Rev. Immunol. 15, 73–86. https://doi.org/10.1038/ nri3789.

7. Galon, J. și Bruni, D. (2020). Imunologia tumorii și evoluția tumorii: istorii împletite. Imunitatea 52, 55–81. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.12.018.

8. Page` s, F., Mlecnik, B., Marliot, F., Bindea, G., Ou, FS, Bifulco, C., Lugli, A., Zlobec, I., Rau, TT, Berger, MD , şi colab. (2018). Validarea internațională a Immunoscore-ului de consens pentru clasificarea cancerului de colon: un studiu de prognostic și acuratețe. Lancet 391, 2128–2139. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(18)30789-X.

9. Rui, J., Chunming, Z., Binbin, G., Na, S., Shengxi, W. și Wei, S. (2017). IL-22 promovează progresia cancerului de sân prin reglarea HOXB-AS5. Oncotarget 8, 103601–103612. https://doi.org/10.18632/ oncotarget.22063.

10. Kryczek, I., Lin, Y., Nagarsheth, N., Peng, D., Zhao, L., Zhao, E., Vatan, L., Szeliga, W., Dou, Y., Owens, S. ., şi colab. (2014). Celulele T IL-22(+)CD4(+) promovează apariția cancerului colorectal prin activarea factorului de transcripție STAT3 și inducerea metiltransferazei DOT1L. Imunitatea 40, 772–784. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2014.03.010.

11. Jiang, R., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., Wang, X. și Sun, B. (2011). Interleukina-22 promovează carcinomul hepatocelular uman prin activarea STAT3. Hepatologie 54, 900–909. https://doi.org/10.1002/ hep.24486.

12. Kobold, S., Vo¨ lk, S., Clauditz, T., K€ superior, NJ, Minner, S., Tufman, A., D€ uwell, P., Lindner, M., Koch, I ., Heidegger, S., et al. (2013). Interleukina-22 este exprimată frecvent în cancerul pulmonar cu celule mici și mari și promovează creșterea celulelor canceroase rezistente la chimioterapie. J. Thorac. Oncol. 8, 1032–1042. https://doi.org/10.1097/JTO.0b013e31829923c8.

13. Hernandez, P., Gronke, K. și Diefenbach, A. (2018). O captură-22: interleukina-22 și cancer. EURO. J. Immunol. 48, 15–31. https://doi.org/10. 1002/eji.201747183.

14. Khosravi, N., Caetano, MS, Cumpian, AM, Unver, N., De la Garza Ramos, C., Noble, O., Daliri, S., Hernandez, BJ, Gutierrez, BA, Evans, SE, et al. (2018). IL22 promovează cancerul pulmonar mutant Kras prin inducerea unui răspuns imun protumoral și protecția proprietăților stemness. Cancer Immunol. Res. 6, 788–797. https://doi.org/10.1158/ 2326-6066.CIR-17-0655. 15. Li, H., Mou, Q., Li, P., Yang, Z., Wang, Z., Niu, J., Liu, Y., Sun, Z., Lv, S., Zhang, B. . și Yin, C. (2019). MiR-486-5p inhibă tranziția epitelial-mezenchimală indusă de IL-22- a celulelor canceroase de sân prin reprimarea Dock1. J. Cancer 10, 4695–4706. https://doi.org/10.7150/jca.30596.

16. Kim, K., Kim, G., Kim, JY, Yun, HJ, Lim, SC și Choi, HS (2014). Interleukina-22 promovează transformarea celulelor epiteliale și tumorigena sânilor prin activarea MAP3K8. Carcinogeneza 35, 1352–1361. https:// doi.org/10.1093/carcin/bgu044.

17. Katara, GK, Kulshrestha, A., Schneiderman, S., Riehl, V., Ibrahim, S. și Beaman, KD (2020). Interleukina-22 promovează dezvoltarea leziunilor maligne într-un model de șoarece de cancer de sân spontan. Mol. Oncol. 14, 211–224. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12598.

18. Huber, S., Gagliani, N., Zenewicz, LA, Huber, FJ, Bosurgi, L., Hu, B., Hedl, M., Zhang, W., O'Connor, W., Jr., Murphy, AJ, și colab. (2012). IL-22BP este reglată de inflamazom și modulează tumorigeneza în intestin. Natura 491, 259–263. https://doi.org/10.1038/ nature11535.

19. Perez, LG, Kempski, J., McGee, HM, Pelzcar, P., Agalioti, T., Giannou, A., Konczalla, L., Brockmann, L., Wahib, R., Xu, H., et al. (2020). Semnalizarea TGFbeta în celulele Th17 promovează producția de IL-22 și cancerul de colon asociat colită. Nat. comun. 11, 2608. https://doi.org/10.1038/ s41467-020-16363-w.

20. Meyer, A., Stark, M., Karstens, JH, Christiansen, H. și Bruns, F. (2012). Histiocitoza cu celule Langerhans a bazei craniene: este eficientă radioterapia cu doze mici? Caz Rep. Oncol. Med. 2012, 789640. https:// doi.org/10.1155/2012/789640.

21. Zhuang, Y., Peng, LS, Zhao, YL, Shi, Y., Mao, XH, Guo, G., Chen, W., Liu, XF, Zhang, JY, Liu, T. și colab. (2012). Creșterea intratumorală producătoare de IL-22-celule T CD4(+) și celule Th22 se corelează cu progresia cancerului gastric și prezice o supraviețuire slabă a pacientului. Cancer Immunol. Imunalt. 61, 1965–1975. https://doi.org/10.1007/s00262-012- 1241-5.

22. Chen, X., Wang, Y., Wang, J., Wen, J., Jia, X., Wang, X. și Zhang, H. (2018). Acumularea celulelor T-helper 22, a interleukinei-22 și a celulelor supresoare derivate din mieloid promovează progresia cancerului gastric la pacienții vârstnici. Oncol. Lett. 16, 253–261. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8612.

23. Doulabi, H., Rastin, M., Shabahangh, H., Maddah, G., Abdollahi, A., Nosratabadi, R., Esmaeili, SA și Mahmoudi, M. (2018). Analiza celulelor Th22, Th17 și CD4(+) care coproduc IL-17/IL{-22 în diferite stadii ale cancerului de colon uman. Biomed. Pharmacother. 103, 1101–1106. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.04.147.

24. Zeng, H., Liu, Z., Wang, Z., Zhou, Q., Qi, Y., Chen, Y., Chen, L., Zhang, P., Wang, J., Chang, Y. ., şi colab. (2020). Celulele producătoare de IL22-intratumorale definesc subtipul imunoevaziv cancerul vezicii urinare invaziv muscular (2017). O funcție de protecție a IL-22BP în ischemie-reperfuzie și leziuni hepatice induse de acetaminofen. J. Immunol. 199, 4078–4090. https://doi. org/10.4049/jimmunol.1700587.

25. Jiang, R., Wang, H., Deng, L., Hou, J., Shi, R., Yao, M., Gao, Y., Yao, A., Wang, X., Yu, L. . și Sun, B. (2013). IL-22 este legat de dezvoltarea cancerului de colon uman prin activarea STAT3. BMC Cancer 13, 59. https://doi.org/10.1186/1471-2407-13-59.

26. Fukui, H., Zhang, X., Sun, C., Hara, K., Kikuchi, S., Yamasaki, T., Kondo, T., Tomita, T., Oshima, T., Watari, J. ., şi colab. (2014). IL-22 produs de fibroblastele asociate cancerului promovează invazia celulelor canceroase gastrice prin semnalizarea STAT3 și ERK. Br. J. Cancer 111, 763–771. https://doi.org/ 10.1038/bjc.2014.336.

27. Liu, T., Peng, L., Yu, P., Zhao, Y., Shi, Y., Mao, X., Chen, W., Cheng, P., Wang, T., Chen, N. ., şi colab. (2012). Creșterea celulelor Th22 și Th17 circulante este asociată cu progresia tumorii și cu supraviețuirea pacientului în cancerul gastric uman. J. Clin. Imunol. 32, 1332–1339. https://doi.org/10.1007/ s10875-012-9718-8.

28. Niccolai, E., Taddei, A., Ricci, F., Rolla, S., D'Elios, MM, Benagiano, M., Bechi, P., Bencini, L., Ringressi, MN, Pini, A. ., şi colab. (2016). Celulele Th22 producătoare de IFN-gamma intra-tumorale se corelează cu stadializarea TNM și cu cele mai grave rezultate în cancerul pancreatic. Clin. Sci. 130, 247–258. https:// doi.org/10.1042/CS20150437.

29. Xu, X., Tang, Y., Guo, S., Zhang, Y., Tian, ​​Y., Ni, B. și Wang, H. (2014). Nivelurile crescute de interleukină 22 intratumorală și frecvența celulelor T CD22-producătoare de interleukină4+ se corelează cu progresia cancerului pancreatic. Pancreasul 43, 470–477. https://doi.org/10.1097/MPA.000000000000 0055.

30. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP și Pestka, S. (2001). Identificarea complexului receptor al interleukinei-22 (IL-22) funcțional: lanțul IL-10R2 (IL{-10Rbeta ) este un lanț comun al ambelor IL{{7 }} și complexe de receptori IL-22 (factor inductibil derivat din celulele T înrudit cu IL{- 10-, IL-TIF). J. Biol. Chim. 276, 2725–2732. https://doi.org/10.1074/jbc.M0078 37200.

31. Ouyang, W. și O'Garra, A. (2019). IL-10 Citokinele de familie IL-10 și IL{- 22: de la știința de bază la traducerea clinică. Imunitatea 50, 871–891. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2019.03.020.

32. Kempski, J., Giannou, AD, Riecken, K., Zhao, L., Steglich, B., L€ ucke, J., Garcia-Perez, L., Karstens, KF, Wo¨ stemeier, A. , Nawrocki, M., şi colab. (2020). IL22BP mediază efectele antitumorale ale limfotoxinei împotriva tumorilor colorectale la șoareci și oameni. Gastroenterologie 159, 1417– 1430.e3. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.06.033.

33. Kotenko, SV, Izotova, LS, Mirochnitchenko, OV, Esterova, E., Dickensheets, H., Donnelly, RP și Pestka, S. (2001). Identificarea, clonarea și caracterizarea unui nou receptor solubil care leagă IL-22 și îi neutralizează activitatea. J. Immunol. 166, 7096–7103. https://doi. org/10.4049/jimmunol.166.12.7096.

34. Dudakov, JA, Hanash, AM și van den Brink, MRM (2015). Interleukina-22: imunobiologie și patologie. Annu. Rev. Immunol. 33, 747–785. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-032414-112123.

35. Wolk, K., Kunz, S., Witte, E., Friedrich, M., Asadullah, K. și Sabat, R. (2004). IL-22 crește imunitatea înnăscută a țesuturilor. Imunitatea 21, 241–254. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2004.07.007.

36. Sabat, R., Ouyang, W. și Wolk, K. (2014). Oportunități terapeutice ale sistemului IL-22-IL-22R1. Nat. Rev. Drug Discov. 13, 21–38. https://doi. org/10.1038/nrd4176.

37. Zenewicz, LA, Yancopoulos, GD, Valenzuela, DM, Murphy, AJ, Stevens, S. și Flavell, RA (2008). Interleukina înnăscută și adaptivă-22 protejează șoarecii de bolile inflamatorii intestinale. Imunitatea 29, 947–957. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2008.11.003.

38. Gronke, K., Hernández, PP, Zimmermann, J., Klose, CSN, Kofoed Branzk, M., Guendel, F., Witkowski, M., Tizian, C., Amann, L., Schumacher, F., şi colab. (2019). Interleukina-22 protejează celulele stem intestinale împotriva stresului genotoxic. Natura 566, 249–253. https://doi.org/10.1038/ s41586-019-0899-7.

39. Saxton, RA, Henneberg, LT, Calafiore, M., Su, L., Jude, KM, Hanash, AM și Garcia, KC (2021). Funcțiile de protecție tisulară ale interleukinei-22 pot fi decuplate de acțiunile proinflamatorii prin proiectarea bazată pe structură. Imunitatea 54, 660–672.e9. https://doi.org/10. 1016/j.immuni.2021.03.008.

40. Dumoutier, L., Louahed, J. și Renauld, JC (2000). Clonarea și caracterizarea factorului inductibil derivat din celulele T (IL-TIF) legat de IL-10-, o nouă citokină legată structural de IL-10 și inductabilă de IL-9. J. Immunol. 164, 1814–1819. https://doi.org/10.4049/jimmunol.164. 4.1814.

41. Lejeune, D., Dumoutier, L., Constantinescu, S., Kruijer, W., Schuringa, JJ, and Renauld, JC (2002). Interleukina-22 (IL{-22) activează căile JAK/ STAT, ERK, JNK și p38 MAP kinazei într-o linie celulară de hepatom de șobolan. Căi care sunt partajate și distincte de IL-10. J. Biol. Chim. 277, 33676–33682. https://doi.org/10.1074/jbc.M204204200.

42. Nagalakshmi, ML, Rascle, A., Zurawski, S., Menon, S. și de Waal Malefyt, R. (2004). Interleukina-22 activează STAT3 și induce IL-10 de către celulele epiteliale ale colonului. Int. Imunofarmacol. 4, 679–691. https://doi. org/10.1016/j.intimp.2004.01.008.

43. Mitra, A., Raychaudhuri, SK și Raychaudhuri, SP (2012). Proliferarea celulară indusă de IL-22-este reglată de cascada de semnalizare PI3K/Akt/mTOR. Citokină 60, 38–42. https://doi.org/10.1016/j.cyto.2012.06.316.

44. Bachmann, M., Ulziibat, S., H€ ardle, L., Pfeilschifter, J., and M€ uhl, H. (2013). IFNalpha convertește IL-22 într-o citokină care activează eficient STAT1 și țintele sale din aval. Biochim. Pharmacol. 85, 396–403. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2012.11.004.

45. Zheng, Y., Valdez, PA, Danilenko, DM, Hu, Y., Sa, SM, Gong, Q., Abbas, AR, Modrusan, Z., Ghilardi, N., de Sauvage, FJ și Ouyang , W. (2008). Interleukina-22 mediază apărarea timpurie a gazdei împotriva atașării și eliminării agenților patogeni bacterieni. Nat. Med. 14, 282–289. https://doi. org/10.1038/nm1720.

46. ​​Andoh, A., Zhang, Z., Inatomi, O., Fujino, S., Deguchi, Y., Araki, Y., Tsujikawa, T., Kitoh, K., Kim-Mitsuyama, S., Takayanagi , A., şi colab. (2005). Interleukina-22, un membru al subfamiliei IL-10, induce răspunsuri inflamatorii în miofibroblastele subepiteliale colonice. Gastroenterologie 129, 969–984. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2005.06.071.

47. Tufman, A., Huber, RM, Vo¨ lk, S., Aigner, F., Edelmann, M., Gamarra, F., Kiefl, R., Kahnert, K., Tian, ​​F., Boulesteix, AL și colab. (2016). Interleukina-22 este crescută la spălarea pacienților cu cancer pulmonar și alte boli pulmonare. BMC Cancer 16, 409. https://doi.org/10.1186/s12885-016- 2471-2.

48. Voigt, C., May, P., Gottschlich, A., Markota, A., Wenk, D., Gerlach, I., Voigt, S., Stathopoulos, GT, Arendt, KAM, Heise, C., et al. (2017). Celulele canceroase induc producția de interleukină-22 din celulele T CD4(+) de memorie prin interleukină-1 pentru a promova creșterea tumorii. Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 114, 12994–12999. https://doi.org/10.1073/pnas.17051 65114.

49. Markota, A., Endres, S. și Kobold, S. (2018). Direcționarea interleukinei-22 pentru terapia cancerului. Zumzet. Vaccin. Imunalt. 14, 2012–2015. https:// doi.org/10.1080/21645515.2018.1461300.

50. Ewens, A., Mihich, E. și Ehrke, MJ (2005). Metastaze la distanță de la adenocarcinom medular de sân E0771 crescut subcutanat. Anticancer Res. 25, 3905–3915.

51. Sugiura, K. și Stock, CC (1952). Studii într-un spectru tumoral. I. Comparația acțiunii metil bis(2-cloretil)aminei și 3-bis({2-cloretil)aminometil{-4-metoximetil -5-hidroxi{{7} }metilpiridină asupra creșterii unei varietăți de tumori de șoarece și șobolan. Cancer 5, 382–402. https://doi.org/10.1002/1097-0142(195203)5:2<382::aidcncr2820050229>3.0.co;2-3.

52. Renier, N., Wu, Z., Simon, DJ, Yang, J., Ariel, P. și Tessier-Lavigne, M. (2014). iDISCO: o metodă simplă și rapidă de imunomarcare a probelor de țesut mari pentru imagistica de volum. Celula 159, 896–910. https://doi.org/10. 1016/j.cell.2014.10.010.

53. Kleinschmidt, D., Giannou, AD, McGee, HM, Kempski, J., Steglich, B., Huber, FJ, Ernst, TM, Shiri, AM, Wegscheid, C., Tasika, E., și colab.

54. O'Donnell, JS, Madore, J., Li, XY și Smyth, MJ (2020). Funcțiile imune intrinseci și extrinseci ale tumorii CD1

55. Semin. Cancer Biol. 65, 189–196. https://doi.org/10.1016/j.semcancer.2019.11.013. 55. Molfetta, R., Zitti, B., Lecce, M., Milito, ND, Stabile, H., Fionda, C., Cippitelli, M., Gismondi, A., Santoni, A. și Paolini, R. (2020). CD155: o moleculă multifuncțională în progresia tumorii. Int. J. Mol. Sci. 21, 922. https://doi.org/10.3390/ijms21030922.

56. Gao, J., Zheng, Q., Xin, N., Wang, W. și Zhao, C. (2017). CD155, o moleculă onco-imunologică în tumorile umane. Cancer Sci. 108, 1934– 1938. https://doi.org/10.1111/cas.13324.

57. Morimoto, K., Satoh-Yamaguchi, K., Hamaguchi, A., Inoue, Y., Takeuchi, M., Okada, M., Ikeda, W., Takai, Y. și Imai, T. ( 2008). Interacțiunea celulelor canceroase cu trombocitele mediată de receptorul Necl-5/poliovirus îmbunătățește metastaza celulelor canceroase la plămâni. Oncogene 27, 264–273. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1210645.

58. Chan, CJ, Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, MT, Town, L., Ritchie, DS, Colonna, M., Andrews, DM și Smyth, MJ (2014). Receptorii CD96 și CD226 se opun unul altuia în reglarea funcțiilor celulelor ucigașe naturale. Nat. Imunol. 15, 431–438. https://doi.org/10.1038/ni.2850.

59. Fuchs, A., Cella, M., Giurisato, E., Shaw, AS și Colonna, M. (2004). De vârf: CD96 (tactil) promovează aderența celulelor NK-celula țintă prin interacțiunea cu receptorul poliovirusului (CD155). J. Immunol. 172, 3994– 3998. https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.7.3994.

60. Jarosch, S., Kohlen, J., Wagner, S., D'Ippolito, E. și Busch, DH (2022). ChipCytometry pentru detectarea multiplexată a markerilor de proteine ​​și ARNm pe probele de țesut uman FFPE. STAR Protoc. 3, 101374. https://doi.org/10.1016/j.xpro.2022.101374.

61. Chauvin, JM, Ka, M., Pagliano, O., Menna, C., Ding, Q., DeBlasio, R., Sanders, C., Hou, J., Li, XY, Ferrone, S., et al. (2020). Stimularea IL15 cu blocarea TIGIT inversează disfuncția celulelor NK mediată de CD155-în melanom. Clin. Cancer Res. 26, 5520–5533. https://doi.org/10.1158/ 1078-0432.CCR-20-0575.

62. Weulersse, M., Asrir, A., Pichler, AC, Lemaitre, L., Braun, M., Carrie´ , N., Joubert, MV, Le Moine, M., Do Souto, L., Gaud, G. şi colab. (2020). Pierderea dependentă de eom a receptorului co-activator CD226 restrânge funcțiile antitumorale ale celulelor T CD8(+) și limitează eficacitatea imunoterapiei pentru cancer. Imunitatea 53, 824–839.e10. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.006.

63. Braun, M., Aguilera, AR, Sundarrajan, A., Corvino, D., Stannard, K., Krumeich, S., Das, I., Lima, LG, Meza Guzman, LG, Li, K., et al. (2020). CD155 pe celulele tumorale conduce rezistența la imunoterapie prin inducerea degradării receptorului de activare CD226 în celulele T CD8(+). Imunitatea 53, 805–823.e15. https://doi.org/10.1016/j.immuni. 2020.09.010.

64. Lepletier, A., Madore, J., O'Donnell, JS, Johnston, RL, Li, XY, McDonald, E., Ahern, E., Kuchel, A., Eastgate, M., Pearson, SA, et al. (2020). Expresia tumorii CD155 este asociată cu rezistența la imunoterapie antiPD1 în melanomul metastatic. Clin. Cancer Res. 26, 3671–3681. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-19-3925.

65. Newman, AM, Steen, CB, Liu, CL, Gentles, AJ, Chaudhuri, AA, Scherer, F., Khodadoust, MS, Esfahani, MS, Luca, BA, Steiner, D. și colab. (2019). Determinarea abundenței și expresiei tipului de celule din țesuturi în vrac cu citometrie digitală. Nat. Biotehnologia. 37, 773–782. https://doi.org/10.1038/s41587-019-0114-2.

66. Soriani, A., Zingoni, A., Cerboni, C., Iannitto, ML, Ricciardi, MR, Di Gialleonardo, V., Cippitelli, M., Fionda, C., Petrucci, MT, Guarini, A., et al. (2009). Reglarea dependentă de ATM-ATR a liganzilor DNAM-1 și NKG2D pe celulele de mielom multiplu de către agenți terapeutici are ca rezultat o susceptibilitate crescută a celulelor NK și este asociată cu un fenotip senescent. Sânge 113, 3503–3511. https://doi.org/10.1182/blood- 2008-08-173914.