Efectele anti-îmbătrânire ale Ludwigia Octovalvis asupra șoarecilor Drosophila Melanogaster și SAMP8 Partea 1

AbstractAm investigat efectele anti-îmbătrânire ale Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae), este un extract care este consumat pe scară largă ca băutură sănătoasă în mai multe țări. Folosind musca de fructe, Drosophila melanogaster, ca organism model, am demonstrat că extractul de L. octovalvis (LOE) a prelungit semnificativ durata de viață a muștei cu o dietă bogată, dar nu săracă în calorii, indicând că LOE poate regla durata de viață printr-o restricție alimentară ( calea legată de DR). LOE a atenuat, de asemenea, declinul cognitiv legat de vârstă atât la muște, cât și la șoarecele 8 predispus la senescență (SAMP8), fără a provoca compromisuri negative vizibile, inclusiv aportul de apă, aportul de alimente, fecunditatea sau activitatea motorie spontană. LOE conținea niveluri ridicate de polifenoli și flavonoide, care posedă activitate puternică de captare a radicalilor DPPH și s-a demonstrat că atenuează daunele oxidative induse de paraquat și letalitatea la muște. Analizele cromatografiei gazoase-spectrometrie de masă (GC-MS) au identificat 17 molecule cunoscute, dintre care -sitosterolul și scualena au fost cele mai abundente două. Am demonstrat în continuare că -sitosterolul ar putea prelungi durata de viață, probabil prin activarea proteinei kinazei activate de AMP (AMPK) în corpul de grăsime al muștelor adulte. Datele noastre sugerează că LOE este o intervenție puternică anti-îmbătrânire cu potențial pentru tratarea tulburărilor legate de vârstă.

Glicozidul cistanchei poate crește, de asemenea, activitatea SOD în țesuturile inimii și hepatice și poate reduce semnificativ conținutul de lipofuscină și MDA din fiecare țesut, eliminând eficient diferiți radicali reactivi de oxigen (OH-, H₂O₂ etc.) și protejând împotriva daunelor cauzate de ADN. prin radicalii OH. Glicozidele feniletanoide Cistanche au o capacitate puternică de captare a radicalilor liberi, o capacitate de reducere mai mare decât vitamina C, îmbunătățește activitatea SOD în suspensia de spermă, reduc conținutul de MDA și au un anumit efect protector asupra funcției membranei spermatozoizilor. Polizaharidele Cistanche pot spori activitatea SOD și GSH-Px în eritrocite și țesuturi pulmonare ale șoarecilor senescenți experimental cauzate de D-galactoză, precum și pot reduce conținutul de MDA și colagen în plămâni și plasmă și pot crește conținutul de elastină, au un bun efect de curățare asupra DPPH, prelungește timpul de hipoxie la șoarecii senescenți, îmbunătățește activitatea SOD în ser și întârzie degenerarea fiziologică a plămânilor la șoarecii senescenți experimental. Cu degenerarea morfologică celulară, experimentele au arătat că Cistanche are o bună capacitate antioxidantă. și are potențialul de a fi un medicament pentru prevenirea și tratarea bolilor de îmbătrânire a pielii. În același timp, echinacozidul din Cistanche are o capacitate semnificativă de a elimina radicalii liberi DPPH și poate elimina speciile reactive de oxigen, poate preveni degradarea colagenului indusă de radicalii liberi și, de asemenea, are un efect bun de reparare asupra daunelor anionice a radicalilor liberi de timină.

Faceți clic pe cistanches herba

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Cuvinte cheieLudwigia octovalvis. Restricții de dietă. Durată de viaţă. AMPK

Introducere

Înțelegerea îmbătrânirii este o provocare majoră a timpului nostru, având în vedere tendințele demografice și poverile prezise ale unei societăți în vârstă. Studiile care investighează bolile legate de vârstă, cum ar fi bolile neurodegenerative, cancerele și bolile cardiovasculare, au oferit deja perspective semnificative asupra senescenței umane. Restricția alimentară (DR), prin reducerea aportului de calorii fără malnutriție sau modificarea echilibrului componentelor dietei, este cunoscută a fi cea mai eficientă intervenție pentru prelungirea duratei de viață sănătoase între specii, de la drojdie la muște la mamifere (Lin et al. 2000; Wood și colab. 2004; Bonkowski și colab. 2006; Wu și colab. 2013). La rozătoare, DR poate crește în mod semnificativ durata de viață la șoarecii normali și la șoarecii cu durată scurtă de viață predispusi la senescență accelerată-accelerată 8 (SAMP8) (Weindruch și Walford 1982; Choi și Kim 2000; Simons și colab. 2013). La muște, se poate observa și o prelungire uimitoare a duratei de viață (Zheng et al. 2005; Soh et al. 2013). Deși studiile la primate (maimuța rhesus) nu au generat încă rezultate definitive cu privire la efectul DR asupra mortalității, este clar că DR la maimuțe produce efecte fiziologice benefice similare cu cele observate la rozătoare și muște (Colman et al. 2009; Mattison et al. al. 2012). S-a demonstrat că extinderea duratei de viață prin DR este probabil mediată prin mai multe căi genetice care implică detectarea nutrienților și metabolismul, cum ar fi insulina/IGF, sirtuinele (Sir), SKN-1, ținta rapamicinei și protein kinaza activată de AMP. (AMPK) (Lin și colab. 2000; Kaeberlein și colab. 2005; Bishop și Guarente 2007; Alcedo și Kenyon 2004; Stenesen și colab. 2013). Se pare că Sir2/Sirt1 (Lin et al. 2004) și AMPK (Xiao și colab. 2011) pot fi activate prin raporturi crescute AMP/ATP, ADP/ATP sau NAD/NADH, reflectând o stare de energie celulară mai scăzută. Acestea, la rândul lor, induc o serie de evenimente de semnalizare în aval care transformă starea metabolică a celulelor de la consumul de energie la stocarea și generarea energiei.

Având în vedere limitele practice pentru oameni în practicarea DR în viața de zi cu zi, dezvoltarea mimeticii DR a apărut ca un domeniu interesant pentru cercetarea anti-îmbătrânire. Suplimentele alimentare care conțin compuși nutraceutici sau extracte din plante pot fi capabile să ofere intervenții sigure și eficiente pentru prelungirea vieții sănătoase. S-a demonstrat deja că extractele de fructe din nectarine și mere, precum și extractele din plante din Rhodiola rosea și Curcuma longa, prelungesc durata de viață la muștele fructelor, prin reducerea daunelor oxidative (Boyd et al. 2011; Peng et al. 2011; Schriner și colab. 2009; Lee și colab. 2010; Schriner și colab. 2013). Componentele majore identificate în aceste plante care promovează sănătatea ca candidați probabili pentru efectele de extindere a duratei de viață sunt polifenolii, care au potențialul de a acționa ca captatori de radicali liberi sau chelatori de metale redox-activi (Galleano et al. 2010). Resveratrolul, un compus polifenolic găsit în mare parte în pielea strugurilor roșii, este cel mai cunoscut exemplu al acestei clase de molecule și s-a dovedit că prelungește durata de viață a unor specii la fel de îndepărtate evolutiv precum Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster și Nothobranchius. furzeri (Howitz et al. 2003; Wood et al. 2004; Valenzano et al. 2006). Deși proprietățile antioxidante ale resveratrolului au fost demonstrate, acumularea de dovezi sugerează că acest compus poate acționa și ca un activator puternic pentru mai multe gene asociate longevității, inclusiv Sir2/Sirt1 menționate mai sus (Hubbard et al. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Corbul (Onagraceae) are o răspândire largă în zonele tropicale ale multor țări din întreaga lume. Deși compoziția chimică completă a L. octovalvis nu a fost complet descrisă, această plantă are o istorie lungă de utilizare ca medicament pe bază de plante pentru tratarea diferitelor afecțiuni, inclusiv edem, nefrită și hipotensiune arterială. Populațiile mari din Asia consumă zilnic extract de L. octovalvis (LOE) ca băutură sănătoasă. Evaluarea toxicologică la șoareci a sugerat că tratamentul cronic LOE poate oferi proprietăți imunoreglatoare, hepatoprotectoare și de protecție cardiovasculară, fără efecte secundare observabile (Kadum Yakob și colab. 2012). În plus, s-a raportat că LOE are activități anti-bacteriene și anti-cancer (Chen și colab. 1989; Chang și colab. 2004). În acest studiu, am investigat efectele antiîmbătrânire ale LOE, folosind atât muștele de fructe, cât și șoarecii SAMP8 ca organisme model. Descoperirile noastre sugerează că LOE se poate dezvolta ca o intervenție anti-îmbătrânire.

Metode

Pregătirea LOE

Plantele întregi de L. octovalvis au fost de obicei colectate în timpul sezonului de vară, iar plantele uscate au fost obținute de la Stația locală de îmbunătățire a agriculturii și Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. din Taiwan. Controlul calității pentru L. octovalvis a fost monitorizat de Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. și un exemplar de voucher (Nr. 034) a fost depus la herbarul Hsiehyu Biotech Company Ltd. Pentru prepararea LOE, 100 g de pulbere de L. octovalvis au fost înmuiate în 400 ml de etanol 95 la sută peste noapte la 4 grade și apoi extras de două ori la 55 de grade timp de 30 de minute. Supernatantul a fost centrifugat (la 8,000xg timp de 5 min) și filtrat (TOYO nr. 1) pentru a îndepărta resturile. LOE a fost obținut în urma unui proces de decompresie.

Cromatografie gazoasă-spectrometrie de masă (GC-MS)

Analiza GC-MS a LOE a fost efectuată utilizând un cromatograf de gaze HP- 6890 și un detector selectiv de masă HP{-5973 (MSD, Agilent Technologies), echipat cu o coloană de cromatografie gazoasă capilară HP-5MS (12,5 m×0,2 mm ID, 0,33 μm grosimea filmului) (J&W Scientific). Volumul de injectare a fost de 2 ul în modul splitless, iar temperatura de intrare a fost de 290 grade . Heliul a fost folosit ca gaz purtător (debit de 0,6 ml/min), iar temperatura cuptorului a fost programată după cum urmează: temperatura inițială: 35 grade, crescută cu 5 grade/min la 90 grade, apoi cu 10 grade/min la 200 grade , și în final cu 20 de grade / min până la 290 de grade , unde a fost ținut timp de 8 min. Analiza a fost efectuată în modul EI, cu tensiunea de ionizare fixată la 70 eV. Achiziția prin scanare (m/z 45-550) a MSD a fost efectuată cu software-ul HP Chemistation.

2,2-Difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) activitate de captare a radicalilor și conținutul total de polifenoli și flavonoide

Activitatea de captare a radicalilor DPPH a fost măsurată folosind o metodă modificată descrisă anterior (Brand-Williams et al. 1995). Pe scurt, 100 ul din diferite concentrații de LOE, acid ascorbic, resveratrol, squalen sau - sitosterol (Sigma) s-au adăugat la 200 ul de 100 μM DPPH în 96-plăci cu microgodeuri pentru a ajunge la concentrațiile finale de 0, 1, 5, 10 şi 50 ug/ml. Amestecul de reacţie a fost incubat la întuneric la temperatura camerei timp de 30 de minute. O scădere a absorbanței a fost măsurată la 520 nm într-un cititor de microplăci (AccuReader 965). Constituenții fenolici totali ai LOE au fost determinați cu reactivul Folin-Ciocalteu, folosind acid galic ca standard (Slinkard și Singleton 1977). Conținutul întreg de flavonoide a fost măsurat cu un test colorimetric cu clorură de aluminiu, cu rutina utilizată ca standard (Shih et al. 2010).

Cultură celulară și analize Western blot

Celulele Drosophila Schneider (S2) au fost crescute la 25 de grade în mediu Schneider Drosophila (Invitrogen), suplimentat cu 10 procente ser fetal bovin inactivat la căldură (Gibco). Celulele au fost tratate cu diferite concentrații de LOE și -sitosterol (Sigma) în condiții normale de creștere (1 × mediu, ca mai sus) sau în condiții DR (0,5 × mediu, diluție 1: 1 a mediului 1 × în soluție salină tamponată cu fosfat ( PBS)) timp de 12 ore. Nivelurile de proteine ​​​​de fosfor-AMPK și -tubulină (anticorpi de la Cell Signaling Technology) au fost analizate prin Western blot așa cum s-a descris anterior (Wang și colab. 2005).

Muștele și testele duratei de viață

Stocurile Canton-S (CS), w1118, driver GeneSwitch S106 (Bloomington Stock Center #8151) și UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) au fost strânse pe hrană standard de zaharoză/drojdie/făină de porumb . Fecioarele S106 au fost încrucișate cu bărbați UASAMPK.RNAi în experimentele de distrugere AMPK. Pentru testele duratei de viață, muștele care s-au închis în 48 de ore (aproximativ 100 de masculi și 100 de femele) au fost transferate într-o cușcă pentru populație de 1-l și menținute într-un incubator umidificat, cu temperatură controlată, cu 12-h pornit/ ciclu de lumină oprită la 25 de grade (Wang et al. 2009). Mâncarea proaspătă a fost furnizată în fiecare două zile, iar numărul și genul muștelor moarte au fost notate. Alimentele bogate în calorii și cu conținut scăzut de calorii au conținut 15 sau 5% atât dextroză, cât și, respectiv, drojdie. La toate alimentele s-au adăugat 2% agar și 0,23% Tegosept (Apex). La alimentele descrise în fiecare experiment s-au adăugat diferite concentrații de LOE, squalen, -sitosterol, RU486 (Mifepristone, Sigma) sau martor vehicul.

Hrănirea, fecunditatea și activitatea motrică spontană a muștelor

Muștele de zece zile menținute pe alimente bogate în calorii care conțineau diferite concentrații de LOE au fost transferate în flacoane proaspete ale aceluiași aliment, cu adăugarea de 0,5 la sută FD&C nr. 1 colorant alimentar albastru. După 24 de ore, 10 muște au fost omogenizate într-un singur tub care conține PBS, iar cantitatea de colorant ingerată a fost determinată de spectrofotometru pentru absorbanța colorantului la 625 nm. Fecunditatea femelelor a fost determinată prin numărarea zilnică a ouălor produse de trei perechi de împerechere. Muștele au fost trecute zilnic în fiole noi care conțineau hrană adecvată, iar numărul de ouă depuse a fost numărat și înregistrat pentru primele 20 de zile de viață adultă. Pentru monitorizarea nivelurilor de activitate, fiole de sticlă care conțin o singură muscă masculă pe sursa de hrană adecvată au fost plasate în camere de înregistrare a locomotorii care au inele circulare de surse de lumină infraroșie; rupturile fasciculului sunt înregistrate ca activitate (TriKinetics). Datele au fost înregistrate la fiecare 20 de secunde pe o perioadă de 72-h. Monitoarele de activitate au fost găzduite în incubatorul descris mai sus.

Memoria de scurtă durată asociativă olfactivă pavloviană a muștelor

Muștele la vârste diferite au fost antrenate prin expunerea la electroșocuri (70 V) care a fost asociată cu un miros timp de 60 de secunde. Ulterior, muștele au fost expuse la un al doilea miros fără electroșoc timp de 60 de secunde. Muștele au fost lăsate să se odihnească timp de 45 de secunde și apoi au fost supuse unui test T-maze timp de 2 minute, în care li s-a cerut să aleagă între cele două mirosuri. Mirosurile utilizate au fost metil ciclohexanol (1:1, diluție000 în ulei mineral) și sau octanol (1,5:1,000 diluție în ulei mineral). Pentru toate experimentele, au fost efectuate cel puțin cinci sesiuni pentru fiecare împerechere miros-electroșoc. Toate datele au fost mediate și sunt afișate ca procent din indicele de memorie pentru fiecare grup. Indicele de performanță a fost calculat scăzând numărul de muște care au intrat în brațul în care mirosul a fost asociat cu electroșocul din numărul care a intrat în brațul opus, unde mirosul nu a fost asociat cu electroșocul, și împărțind la numărul total de muște.

Stresul oxidativ indus de paraquat și determinarea 4-hidroxi-2-nominală (HNE)

Muștele de zece zile menținute pe alimente bogate în calorii care conțineau diferite concentrații de LOE au fost transferate în flacoane cu hârtie de filtru înmuiată într-o soluție de paraquat 0 sau 20 mM și dextroză 6%. Numărul de muște moarte a fost numărat la fiecare 3 până la 4 ore. La 12 ore, unele dintre muștele tratate cu paraquat au fost colectate și HNE a fost măsurat cu Kit-ul OxiSelect™ HNE Adduct ELISA (Cell Biolabs), urmând protocolul furnizat de producător.

Animale

Toate protocoalele experimentale au respectat reglementările locale de etică a animalelor. Șoarecii SAMP8 au fost crescuți și menținuți în Modular Animal Caging System® (Design alternativ), iar hrana lor a fost sterilizată prin iradiere gamma. Camera a avut un ciclu de lumină pornit/oprit de 12-h, cu faza întunecată începând la ora 20:00. Pentru șoareci, LOE a fost adăugat în apa de băut la concentrații finale de 0, 50 și 100 ug/ ml. Aportul de alimente, consumul de apă și modificarea greutății corporale au fost monitorizate în mod regulat.

Prepararea ARN, sinteza cADN și reacția cantitativă în lanț a polimerazei (qPCR)

ARN total a fost preparat din cel puțin 30 de muște folosind kit-ul RNeasy Mini (Qiagen). ARN-ul a fost tratat cu ADNază și convertit în ADNc folosind oligo-d(T)15 (Invitrogen) și transcriptază inversă SuperScript III (Invitrogen) așa cum s-a descris anterior (Chou et al. 2013). Reacțiile qPCR au fost efectuate utilizând un StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems), iar primerii specifici genei au fost CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA și CACATTTCGA AAAACTCCATGGT pentru AMPK- și GACGAAAT CAAGGCTAGGGAGTCGTC și AAGGCTAGGGAGTCGTC pentru AGCTAGGGAGTCG. O reacție PCR în două etape a fost efectuată cu denaturare la 95 de grade timp de 15 s, recoacere și extensie combinate la 60 de grade timp de 1 minut într-un total de 40 de cicluri. Nivelul de expresie ARNm al fiecărei gene țintă în comparație cu GAPDH a fost cuantificat prin scădere: Cttarget - CtGAPDH=ΔCt. O diferență de un ciclu PCR echivalează cu o schimbare de două ori a nivelului de expresie a ARNm. Unicitatea ampliconilor a fost confirmată folosind curbele de disociere.

Recunoaștere nouă a obiectelor, labirint cu T ridicat și teste în câmp deschis

Pentru noul test de recunoaștere a obiectelor, șoarecii au fost mai întâi obișnuiți cu o cutie deschisă (50 cm × 25 cm × 50 cm) timp de 10 minute pe zi timp de două zile consecutive, fără obiecte prezente. În a treia zi, șoarecii au fost plasați în cutie timp de 2 minute și apoi i-au fost prezentate două obiecte similare fiecărui șoarece. Timpul petrecut explorând fiecare obiect a fost înregistrat în perioada de 5-min ulterioară (definită ca sesiune de antrenament). Șoarecii au fost apoi înapoiați în cușca lor de acasă. Una, două sau trei ore mai târziu, aceleași animale au fost re-testate timp de 5 minute în cutie cu un obiect familiar și un nou (definit ca sesiune de testare a memoriei). Indicele de discriminare a obiectelor a fost calculat scăzând timpul petrecut explorând un obiect familiar din timpul petrecut explorând un obiect nou și împărțind-l la timpul total petrecut explorând ambele obiecte.

Labirintul cu T ridicat a fost modificat din studiile anterioare (Cruz-Morales et al. 2008; De-Mello și Carobrez 2002; Maia și colab. 2010; Santos și colab. 2006; Takahashi și colab. 2005). Era format dintr-un braț închis de pereți de 15 cm înălțime, perpendicular pe două brațe opuse deschise. Cele trei brațe aveau dimensiuni egale (30 cm×5 cm), iar întregul aparat era ridicat la 50 cm deasupra podelei. În ziua de antrenament, fiecare șoarece a fost plasat la capătul distal al brațului închis, cu fața la intersecția brațelor, și a fost lăsat să exploreze brațul închis. Proba sa încheiat când șoarecele fie a intrat în brațele deschise (toate cele patru labe erau în zona brațului deschis) fie a rămas în brațul închis timp de 300 de secunde. Numărul de încercări necesare pentru atingerea criteriului de evitare a fost utilizat pentru a evalua capacitatea de învățare a șoarecilor în timpul sesiunilor de antrenament. Douăzeci și patru de ore după sesiunile de antrenament, șoarecii au fost reexpuși la brațul închis, iar timpul în care au rămas în brațul închis a fost înregistrat ca o evaluare a reținerii memoriei.

Testul în câmp deschis a fost efectuat într-o cutie deschisă (50 cm×25 cm×50 cm). Fiecare șoarece a fost plasat în centrul câmpului deschis și a fost lăsat să exploreze liber aparatul timp de 1 oră. Direcția și viteza de deplasare a fiecărui șoarece au fost înregistrate prin observare automată (Instrumente de diagnostic și cercetare).

Rezultate

Extinderea duratei de viață indusă de LOE este asociată cu DR

Pentru a testa dacă LOE are un efect anti-îmbătrânire in vivo, am examinat mai întâi durata de viață a muștelor CS crescute pe alimente care conțin diferite concentrații de LOE. Muștele masculi CS pe alimente bogate în calorii au avut o durată medie de viață de 41,5 zile, iar adăugarea a 50, 100 și 1,000 ug/ml de LOE la alimentele pentru muște a prelungit durata de viață a muștelor masculi cu 8,9, 16,1 și, respectiv, 9,6 la sută (Fig. 1a și Tabelul 1). Femelele muște CS pe hrana bogată în calorii au avut o durată medie de viață de doar 32,2 zile, scurtă în comparație cu omologii lor de sex masculin. Cu toate acestea, LOE a indus o extindere și mai mare a duratei de viață la muștele femele CS, unde 100 ug/ml de LOE a avut cel mai mare efect (extensie de 24,2%; Fig. 1b și Tabelul 1), iar 100 ug/ml LOE a prelungit, de asemenea, durata de viață atât la masculi, cât și la masculi. femela w1118 zboară, sugerând că durata de viață prelungită cu LOE nu se limitează la fondul genetic CS (Fig. 1c, d și Tabelul 1).

Deoarece DR este o intervenție bine documentată pentru prelungirea duratei de viață, am vrut să testăm dacă efectele longevității ale LOE ar fi modificate de DR. Muștele CS masculi și femele crescute cu alimente cu conținut scăzut de calorii au prezentat creșteri cu 17,8 și, respectiv, 49,4% în durata medie de viață, în comparație cu muștele CS crescute pe alimente bogate în calorii (Fig. 1e, f și Tabelul 1). LOE, totuși, nu a indus prelungirea duratei de viață peste cea observată deja pentru muștele de control pe alimente cu conținut scăzut de calorii (Fig. 1e, f și Tabelul 1), ceea ce sugerează o relație între LOE și extinderea duratei de viață indusă de DR, ceea ce implică faptul că aceste intervenții pot acționează, cel puțin parțial, pe aceleași căi.

Tratamentul LOE cronic nu induce compromisuri negative

Deoarece extinderea duratei de viață indusă de LOE este potențial cuplată cu calea DR, am examinat dacă LOE ar putea reduce aportul de hrană al muștelor și ar putea duce la o stare asemănătoare DR. Am monitorizat aportul de hrană al muștelor folosind un sistem standard de adăugare de colorant în hrana lor (Wang et al. 2009). În medie, muștele femelele CS au ingerat mult mai multă mâncare în comparație cu masculii de vârstă, dar nu s-a observat nicio diferență în ceea ce privește aportul de alimente între muștele martor și cele tratate cu LOE pentru oricare dintre sexe (Fig. 2a).

Pe lângă reducerea consumului de alimente, intervențiile care prelungesc durata de viață pot implica compromisuri negative, cum ar fi scăderea fecundității și a activității fizice (Flatt et al. 2008; Wang et al. 2009; Sohal și Buchan 1981). Am descoperit că muștele CS tratate cu LOE nu au prezentat nicio diferență în producția de ouă în primele 20 de zile de viață adultă (Fig. 2b). Atât muștele CS tratate cu LOE, cât și cele de control au prezentat, de asemenea, ritm circadian normal și activitate motorie spontană (Fig. 2c), așa cum s-a menționat anterior (Wang et al. 2009).

LOE atenuează deficitele de memorie legate de vârstă la muștele de fructe și la șoarecii SAMP8

Declinul funcțional al neuronilor este un semn distinctiv comun al procesului de îmbătrânire. Am examinat memoria funcțională a muștelor, utilizând un test de memorie asociativă pe termen scurt olfactiv Pavlovian. Muștele CS pe alimente bogate în calorii au prezentat un declin cognitiv treptat în primele 20 de zile de viață adultă (Fig. 3a). Acest declin de memorie a fost atenuat de DR, cu o diferență semnificativă statistic observată până în ziua 20 (Fig. 3a, b). LOE a redus, de asemenea, scăderea memoriei legată de vârstă într-o manieră dependentă de doză, muștele cu 100 ug/ml LOE atingând un nivel de platou similar cu cel observat pentru muștele DR (Fig. 3b).

Am investigat în continuare efectul pro-cognitiv al LOE la șoarecii SAMP8, despre care se știe că dezvoltă debutul precoce al deficitelor de învățare și memorie și s-a dovedit a fi un model potrivit pentru studierea mecanismelor fundamentale ale bolii Alzheimer (Flood și Morley 1992, 1993). Chan și colab. 2006; Takeda 2009). În testele de recunoaștere a obiectelor noi, șoarecii SAMP8 3-vechi de o lună au arătat memorie de recunoaștere susținută până la 3 ore după sesiunea de antrenament, petrecând mai mult timp pe obiectul nou în comparație cu obiectul familiar (Fig. 3c, d). Această reținere a memoriei, totuși, nu a fost observată la șoarecii SAMP8 în vârstă de 8-luni (Fig. 3c, d). Adăugarea de LOE (100 ug/ml) în apa de băut timp de 5 luni (începând de la vârsta de 3 luni) a îmbunătățit semnificativ reținerea memoriei de recunoaștere a șoarecilor SAMP8, chiar și la 3 ore după sesiunea de antrenament (Fig. 3d). Suplimentarea cu apă de 50 ug/ml de LOE a avut mai puține efecte benefice, dar a reușit să îmbunătățească reținerea memoriei timp de până la 2 ore (Fig. 3d).

În testele labirintului cu T ridicat, toate grupurile de șoareci au necesitat un număr similar de teste de antrenament pentru a atinge criteriul de evitare, ceea ce sugerează că toți șoarecii aveau abilități de învățare similare (Fig. 3e). În testele de recuperare a memoriei de 24-h, șoarecii SAMP8 de numai 8-luni, dar nu de 3-luni, au prezentat un deficit semnificativ în retenția memoriei (Fig. 3f). Acest deficit legat de vârstă al memoriei fricii la șoarecii SAMP8 ar putea fi, de asemenea, salvat printr-o suplimentare LOE de 5-lună în apă de băut (Fig. 3f). Efectele pro-cognitive ale LOE observate mai sus nu pot fi atribuite vreunei modificări în activitatea motorie generală a șoarecilor, deoarece nu s-a observat nicio diferență în viteza de deplasare sau distanță în testele în câmp deschis (Fig. 3g și datele nu sunt prezentate). Șoarecii SAMP8 care au primit un tratament LOE de 5-lună nu au arătat niciun efect asupra aportului de alimente sau consumului de apă și nicio modificare a greutății corporale (Fig. 3h-j).

【Pentru mai multe informații:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】