Glicozidul total cistanche are efecte asupra olfactivului?

A lua legatura:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Efectul glicozidelor totale de cistanche asupra celulelor de înveliș olfactiv de șobolan și secreția lor de factori neurotrofici

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Leziunea măduvei spinării (SCI) este o leziune gravă a centraleisistem nervos, reprezentând {{0}},2% —0,5% din totalul traumei. În fracturile coloanei vertebrale, 16 la sută — 40 la sută sunt complicate de leziuni ale măduvei spinării, lăsând adesea dizabilitate severă, ducând la Dificultăți în viața de zi cu zi care afectează calitatea vieții pacienților și provoacă o povară mare familiei și societății.Olfactivcelulele învelitoare (OEC) sunt un tip special de adeziv nervos. Celulele plasmatice pot migra în creier cuolfactivaxonii nervoși și pot secreta mulți factori de creștere, cum ar fi NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptida-Y și S-100. Datorită acestor caracteristici aleolfactivcare învelesc celulele, OEC-urile sunt considerate a fi una dintre celulele semințe promițătoare pentru transplantul de celule pentru repararea SCI. În prezent, tratamentul SCI în domeniul medicinei de reabilitare se bazează în principal pe reabilitare cuprinzătoare. Pentru a găsi o metodă mai eficientă, au fost efectuate următoarele cercetări asupra efectuluicistanchetotalglicozidedespre OEC:

Glicozidă totală Cistanche pentru celulele care învelesc olfactiv

1 Material și metode

1.1 Materiale experimentale

Șobolan Wistar (furnizat de Centrul pentru animale al Universității din Mongolia Interioară);cistanchetotalglicozide, mediu DMEM/F12, ser fetal de vițel (FCS), poli-D-lizină, arabinozidă (Ara-C), tripsină, soluție D-Hanks, iepure anti-p75NGFR (Santa Cruz), kit ELISA (Promega), incubator celular (Thermo-HEPA Clasa 100), microscop cu contrast de fază inversată (Olympus CKX41, Japonia), banc de lucru ultra-curat (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Compania, SW-CJ-2FD), enzimă analizor de etichete (Wellscan MKH), citometru de flux etc.

1.2 Metode de cercetare

1.2.1 Cultura, purificarea și identificarea OEC: șobolanii Wistar au fost sacrificați prin decapitare și înmuiați în vin timp de 5 minute. Craniul anterior a fost deschis pentru a expuneolfactivbec. Cei doiolfactivbulbii au fost îndepărtați complet sub un microscop de disecție. Se spală în soluție D-Hanks; tăiațiolfactivbulb cu foarfece microchirurgicale, adăugați 2 ml de 0.25 la sută pancreatină și incubați la 37 de grade timp de 20 de minute; se adaugă mediu de cultură D MEM/F12 conţinând 10% ser de viţel într-un tub de centrifugă de 2 ml. Digestia a fost încheiată la mijloc; pipeta a aspirat țesutul incomplet digerat la 800 rpm și a centrifugat timp de 5 minute, a eliminat supernatantul; în cele din urmă a folosit mediul condiționat (20% FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM/F12) Se transformă în suspensie unicelulară de lx 107ml, se inoculează într-un balon de cultură celulară acoperit cu polilizină, se pune într-un incubator la 37 de grade, 5% CO2, apoi se adaugă Arac. Purificarea a fost efectuată la 36 de ore. Utilizați anticorpi secundar IgG de iepure anti-p75E de iepure și marcați cu FITC pentru identificarea celulelor imunohistochimice și observarea la microscop cu fluorescență.

1.2.2 Utilizați MTT și citometria în flux pentru a determina efectulglicozide totale cistanchepeolfactivcelulele învelitoare: se inoculează cele cultivate și purificateolfactivînvelirea celulelor într-o placă de 96-godeuri la 1X106 și adăugațiglicozide totale cistanche(concentrațiile de acțiune sunt Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), se măsoară valoarea OD și se măsoară citometria în flux celular după 24 de ore de acțiune. Configurați grupul de control șiCistanche glicozide totalediferite grupe de concentrație: Grupa A (Grupul de control): Mediul de cultură care conține ser este utilizat ca martor negativ; Grupa B (glicozide totale cistanchegrup de concentrație scăzută: llig/ml); Grupa C (concentrația medie de glicozide totale cistanche Grupa: L10jxg/MK); Grupa D (glicozide totale cistanchegrup de concentrație mare: 100|xg/mlo): 15 șobolani în fiecare grup.

1.2.3 Determinarea conținutului de factor neurotrofic în supernatant prin ELISA: se inoculează cultivarea și purificareaolfactivînvelirea celulelor într-o placă de 6-godeuri la 1x106, adăugațiglicozide totale cistanche(aceeași concentrație ca mai sus) după 24 de ore și acționează timp de 24 de ore și colectează supernatantul separat, Salvat la -80 Long. Conținutul de factori de creștere a nervilor din fluid a fost determinat prin metoda ELISA.

1.3 Analiză statistică

Datele din acest studiu sunt tratate ca date de măsurare, iar datele obținute sunt exprimate ca medie ± abatere standard, iar software-ul statistic SPSS 11.0 este utilizat pentru analiza statistică. Datele obținute sunt analizate prin analiza varianței, iar P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Rezultate

2.1 Efectulcistancheglicozide totale peolfactivînvelitoare de celule

2.1.1 Rezultatele determinării metodei metil oxazolil tetrazolului (MT): Grupa A: 0.617±{0.149; Grupa B: 0,589±0,147; Grupa C: 0.761±0.138; Grupa D: 0.732±0.234. Comparație întreCistanche glicozide totale group (B) and Control group (A), P>0.05, diferența nu a fost semnificativă;Cistanche glicozide totale10mg/ml, grupul de concentrație 100mg/ml (C, D) comparativ cu grupul de control (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Rezultatul determinării prin citometrie în flux este prezentat în Figura 1. În comparație cu grupul de control,glicozide totale cistanchegrupul a fost mai mare decât grupul de control, iar procentul de celule apoptotice a fost mai mic decât grupul de control.

2.2 Rezultatele testului imunosorbent legat de enzime (ELISA).

Rezultatele testului au arătat că conținutul de factor neurotrofic derivat din linia celulară glială (GDNF): înainte de dozare: 302,1±16,6 pg/ml, grupa A: 340,5±13,2pg/ml; grupa B: 333,2±23,6pg/ml; Grupa C: 355,2±17,6pg/ml; grupa D; 379,2±15,3pg/ml. În comparație cu pre-administrare, conținutul GDNF a fost semnificativ crescut; în comparație cu grupul de control (A), conținutul GDNF alCistanche glicozide totaleGrupa de concentrație de 100 mg/ml (D) a fost semnificativ crescută.

3 Discuție

Dificultatea în regenerarea axonilor este unul dintre principalele motive pentru care este dificil să se recupereze după leziunea măduvei spinării. OEC-urile au un rol în regenerarea axonilor neuronilor centrali pe care alte tipuri de celule sunt greu de înlocuit. În ultimii ani, cercetarea deolfactivcelulele care învelesc a devenit un punct fierbinte.Olfactivcelulele învelitoare sunt un tip special de celule gliale care au caracteristicile celulelor Schwann și ale astrocitelor. Ele provin dinolfactivmembrana bazală și sunt larg distribuite pe suprafațaolfactivmucoasa,olfactivnerv, șiolfactivbec. Are capacitatea de a se diviza și de a se regenera pentru viață și poate însoțiolfactivaxonii nervilor să migreze în creier. Axonii luiolfactivnervul poate trece prin joncțiunea dintre sistemul nervos periferic și sistemul nervos central la fiecare 30-60 zile, recrește înolfactivteaca si stabilesc legaturi sinaptice4.Olfactivcelulele învelitoare pot secreta mulți factori de creștere, cum ar fi NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptida-Y și S-100. Studiile au arătat că factorul de creștere a nervilor (NGF) poate preveni atrofia neuronilor nucleului roșu spinal și poate întări tractul corticospinal Sprout și poate promova regenerarea căii nervoase a măduvei spinării nucleului roșu; atât factorul neurotrofic derivat din creier (BDNF) cât și neurotrofina-3 (NT{-3) pot preveni apoptoza celulelor nucleului roșu al măduvei spinării la șobolanii adulți cu leziuni axotomizate și pot salva neuronii muribundi și pot promova regenerarea axonală P. În plus,olfactivcelulele care învelesc, de asemenea, exprimă alți factori pe membranele lor celulare, cum ar fi factorul de adeziune a celulelor nervoase (N-CAM), care sunt implicați în adeziunea celulară și creșterea axonilor. Datorită acestor caracteristici aleolfactivcare învelesc celulele, OEC-urile sunt considerate a fi una dintre celulele semințe promițătoare pentru transplantul de celule pentru repararea SCI.

Componentele chimice aleCistancheinclud în principal glicozide feniletanoide, iridoide, componente volatile, lignani, polizaharide și alcaloizi. Studiul a constatat căCistancheiar componentele sale chimice au efecte neuroprotectoare. Deng şi colab. a studiat efectul tubulozei B asupra apoptozei neuronilor SH-SY5Y indusă de factorul de necroză tumorală (TNF). Rezultatele au arătat că, după 100 ug/, neuronii SH-SY5Y după 36 de ore de tratament cu TNF cu L au prezentat caracteristici tipice de apoptoză, în timp ce tratamentul tubulinei B timp de 2 ore ar putea reduce semnificativ apoptoza indusă de TNF. În plus, studiile au arătat, de asemenea, că glicozidele feniletanoide pot inhiba apoptoza celulelor granulare cerebeloase de șobolan prin inhibarea caspazei-3 și caspazei{-8 și împotriva negrului de șoarece C57 cauzat de metil fenil tetrahidropiridină (MPTP). Deteriorarea neuronilor dopaminergici de calitate are un efect protector. Nu numai atât, darCistanchepoate, de asemenea, atenua diverse leziuni precum ischemia-reperfuzia sistemului nervos. Experimentul de leziune a ischemiei cerebrale la șoarece arată că intervalul de infarct de 24 de ore și 48 de ore după ischemie în grupul de ischemie cerebrală-reperfuzie este de 72,98 la sută și 60,45 la sută în medie. În contrast, celcistancheGrupele totale de glicozide cu doze mari, medii și mici (250.{0mg·kg/zi; 125,0mg·kg/zi; respectiv 62,5mg·kg/zi) pot face creierul șoarecilor după ischemie-reperfuzie cerebrală 24h Dimensiunea infarctului a fost redusă la 25,94%, 25,81% și 31,13%, iar dimensiunea infarctului cerebral a fost redusă la 22,14%, 20,06% și 22,27% după 48 de ore. A existat o diferență semnificativă între cele două, arătând un efect inhibitor semnificativ asupra apoptozei neuronale.

În acest studiu, diferite concentrații deglicozide totale cistancheau fost aplicate OEC-urilor. Metoda MTT și măsurarea citometriei în flux au confirmat că 10mg/ml100mg/mlglicozide totale cistanchepoate promova proliferareaolfactivînvelitoare de celule. Rezultatele citometriei în flux au arătat căglicozide totale cistanchepoate promova proliferareaolfactivînvelitoare de celule Promovează în principal proliferarea ciclului G1 alolfactivspermatozoizi și reduce semnificativ celulele apoptotice. Prin urmare,Cistanche glicozide totalepoate nu numai să promoveze proliferareaolfactivcare învelesc celulele, dar cresc și activitatea celulară și le inhibă apoptoza. Testul imunosorbent legat de enzime demonstrează acest lucruCistanche glicozide totalepoate promova semnificativ secretia de GDNF prinolfactivînvelitoare de celule. Rezultatele de mai sus oferă o bază experimentală pentru aplicarea clinică aCistanche glicozide totale.

Referințe

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang și colab. Factorii care afectează calitatea vieții pacienților cu leziuni ale măduvei spinării în timpul reabilitării [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria şiolfactivcelulele care învelesc taurul prezintă integrare și migrare diferențială și promovează încolțirea axonilor deferenti în măduva spinării lezionată [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. celulele de înveliș olfactiv: rolul lor în repararea sistemului nervos central[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotența purificată. celule bazale de glucoză transplantate înolfactivepiteliu[J]. J Comp Neurol, 2004, 46914): 457-474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. Celulă marostromală care exprimă BDNF; sprijină creșterea axonală extinsă la locurile d leziune a măduvei spinării [J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD și colab. Efectul protector al tubulozei B asupra apoptozei induse de TNF în celulele neuronale [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.Feniletanoidglicozidedincistancisalsa inhibă apoptoza indusă de ionul 1-metil-4-fenilpiridiniu în neuroni[J]. J Ethnopharmacol,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Efect neuroprotector