Baza științifică pentru noua aplicație a Cistanche
Mar 09, 2022
Contact: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com
Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2
(1. Spitalul de Medicină Tradițională Chineză Yangzhou, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. Școala de Medicină, Universitatea Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)
REZUMAT: A fost stabilit modelul de șobolan al hiperplaziei de prostată (HBP) și au fost administrate pe cale orală trei grupuri de doze de acteozidă timp de 4 săptămâni, pentru a studia efectul actozidei distilate dinCistanche tubulosaasupra apoptozei și a glandei prostatice cu ultra microstructură la șobolani cu HBP. Modificarea ultrastructurală a glandei prostatei a fost observată prin microscopia electronică cu transmisie. Rezultatele au arătat că apoptoza prostatei normale de șobolan nu a fost evidentă, a existat un nivel scăzut
rata apoptozei prostatei în grupul model, în actozidă în doză mare dinCistanche tubulosatratament, apoptoza prostatei la șobolan a fost semnificativ mai mare decât cea a modelului.
CUVINTE CHEIE:Cistanche, Cistanche tubulosa, acteozid; şobolan; începe hiperplazia de prostată; apoptoza; ultrastructurale
În procesul de hiperplazie benignă de prostată (HBP), apoptoza celulară este unul dintre mecanismele care atrag atenția în prezent. Codificarea genelor o determină și permite celulelor să controleze moartea celulară programată, răspunzând la semnale specifice.
După ce prostata se dezvoltă la dimensiunea adultă, rata de proliferare a celulelor de prostată este menținută la 1% până la 2% prin echilibrul ratei medii de apoptoză. Odată ce echilibrul este rupt, se consideră că este cauza BPH. În condiții normale, nivelurile de estrogen și androgeni și circulația normală în prostată sunt un fel de stare de autoechilibrare care există în procesul de proliferare și apoptoză. Atunci când echilibrul dintre proliferare și apoptoză este dezechilibrat, va duce la creșterea și expansiunea în continuare a glandei, ceea ce provoacă în principal extinderea compartimentului celulelor epiteliale [1].
În acest experiment, am stabilit un model de hiperplazie a prostatei de șobolan pentru a observa și analiza efectul actozidei (glicozide asemănătoare coacțiunii), una dintre componentele chimice aleCistancheasupra apoptozei și modificărilor ultrastructurale ale celulelor de prostată de șobolan, pentru a evalua efectul actozidei. Efectul de inhibare a hiperplaziei de prostată oferă o bază științifică pentru dezvoltarea și utilizarea noilor utilizări ale medicinei chineze Cistanche.
Cistancheextrage
1 Material și metode
1. 1 Animal experimental
Cincizeci de șobolani masculi SD în vârstă de 6-7 săptămâni, de calitate curată, cântărind 80-100 g, sunt furnizați de Centrul de Medicină Comparată al Universității Yangzhou.
1. 2 Reactivi și medicamente
Injecția cu propionat de testosteron este de la Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., specificația este de 25 mg·mL-1, iar numărul de lot este 060708. Soluția de colorant PI este de la Centrul de testare al Universității Yangzhou. Conținutul de Aktiside este de 945 g·kg-1, pregătit de Departamentul de Analiză a Medicinei Chineze, China Pharmaceutical University.
1. 3 Echipamente experimentale
Microscopul electronic cu transmisie Philips Tecnai 12 este de la Philips din Olanda; Citometrul de flux FACSAria este de la BD din Statele Unite.
1. 4 Grupări și modelare
După castrare conform metodei din literatura de specialitate [3], șobolanii au fost injectați cu 5 mg·(kg·d)-1de propionat de testosteron pe spatele șobolanilor timp de 4 săptămâni pentru a stabili un model de hiperplazie de prostată. Șobolanii model au fost împărțiți aleatoriu în grupuri model: grup model plus actozidă cu doză mare, grup model plus acteozidă cu doză medie, grup model plus acteozidă cu doză mică, zece șobolani în fiecare grup; alți zece șobolani normali au fost ca grup de control.
1. 5 Mod de administrare
La o săptămână după modelare, grupurilor cu doză mare, medie și mică de actozidă li sa administrat 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 prin gavaj, respectiv. Grupului model și grupului de control li s-a pus un volum egal de soluție salină normală o dată pe zi timp de patru săptămâni, s-au cântărit o dată pe săptămână și au ajustat doza în funcție de greutatea corporală.
1. 6 Colectarea și prelucrarea probelor
1) Pregătirea materialului și a probei: la 24 de ore de la ultima administrare, se cântăresc șobolanii aflați în jeun și se sacrifică șobolanii prin luxație cervicală. Deschideți imediat abdomenul inferior, îndepărtați țesuturile din jurul prostatei, eliberați prostata și luați o parte din prostată pentru a fi folosită într-o baie de gheață. Omogenizator de țesut omogenizat, suspensie unicelulară de prostată preparată și colorată cu iodură de propidiu metoda într-o singură etapă [4]; o altă parte a țesutului de prostată a fost fixată în 25 g·L-1 glutaraldehidă pentru a pregăti secțiuni ultra-subțiri.
2) Pregătiți o suspensie de celule unice: în condiții aseptice, îndepărtați complet prostata de șobolan și mutați-o într-o cutie Petri, spălați sângele și cheagurile de sânge de pe suprafața țesutului de prostată cu PBS și îndepărtați grăsimea din jur, excesul de fibre, și membranele celulare. Din aceeași prostată de șobolan, țesut prostat de prostată cu dimensiunea de aproximativ 0,5 cm3a fost luată și tăiată în bucăți pentru a prepara o suspensie de celule de prostată [5]. Puneți blocul de țesut de prostată într-o cutie Petri și adăugați o cantitate mică de PBS; folosiți foarfece oftalmologice pentru a tăia țesutul într-o baie de gheață, măcinați omogenizatorul până la o suspensie, adăugați 10 mL PBS, pipetați omogenatul de țesut și utilizați o plasă de nailon cu dimensiunea porilor de 0,074 mm a fost filtrată în eprubetă, centrifugata. la 1 500 r min-1timp de 3 minute, iar precipitatul a fost spălat de trei ori cu PBS, de fiecare dată la 500 r min.-1centrifugare pe termen scurt, cu viteză mică, pentru a îndepărta resturile celulare, până la un filtru cu plasă de nailon cu dimensiunea porilor de 0,037 mm pentru a îndepărta aglomerările de celule. Numărați celulele și ajustați concentrația celulară la 2×109 celule·L-1. Colorați cu 1 ml soluție de colorare PI, protejați de lumină la 4 grade timp de 10 minute.
3) Pregătirea secțiunii ultrasubțiri: Pentru pregătirea secțiunii ultrasubțiri de țesut, vezi literatura [6].
2 Rezultate și analiză
Fig. 1 Apoptoza modelului de șobolan BPH și acțiunea indusă a actozidei
A. grup normal; b. Grup model; c. Grupul de acteozide cu doză mare; d. Grupul de acteozide cu doză mică
2. 1 Efectul actozidei asupra apoptozei prostatei de șobolan
Figura 1 prezintă vârful apoptozei detectat prin citometrie în flux, care arată că actozidul are un efect pro-apoptotic. Analiza statistică a rezultatelor apoptozei celulare a arătat că rata de apoptoză a celulei de șobolan a crescut semnificativ (24,7±1,85) procente și (16,1±1,04) procente după tratamentul cu doze mari, medii și mici de acteozid. , (14,5±0,68) procente și grupul normal (1,1±{{20}},06) procente, grup model (9,5±0,5) procente, grup pozitiv (9,83±). 0,76) Diferența de comparație procentuală este semnificativă (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">
Fig. 2 Radioul apoptozei în modelul de șobolan BPH și efectul actozidei
2.2 Efectul actozidei asupra ultrastructurii celulelor hiperplaziei de prostată.
Observațiile la microscopie electronică arată că prostata normală de șobolan are nuclei completi, evident nucleoli, și distribuție uniformă a cromatinei nucleare; reticulul endoplasmatic aspru are aceeași dimensiune, este ordonat și nu are vacuolare. Nu există microvilozități asemănătoare degetelor pe suprafața epiteliului, nicio umflare a mitocondriilor și puține secreții în cavitate. Nucleii celulelor de prostată din grupul model au fost deformați și micșorat, iar citoplasma a fost abundentă. Reticulul endoplasmatic aspru a fost extins într-o formă asemănătoare unui chist, iar chistul a fost umplut cu particule de proteine de înaltă densitate. Mitocondriile au fost ușor umflate (au fost și vacuole), în cavitate sunt secreții de densitate medie, iar în unele celule s-au găsit granule de secreție rotundă. La șobolanii tratați cu acteozidă, nucleul a fost intact în comparație cu grupul model. Nucleul a fost concentrat, densitatea nucleară a fost crescută, heterocromatina acumulată, citoplasma avea vacuole, iar vacuolele reticulului endoplasmatic aspru au fost reduse. Grupul de actozide cu doză mică a avut nuclei ușor încrețiți. Contracție, citoplasmă neregulată, mai bogată și reticul endoplasmatic rugos redus (Figura 3).
Beneficiul cistanchei: anti-Apoptoza
3 Discuție
Apoptoza este un proces de moarte celulară programată în organismele multicelulare care reglează dezvoltarea organismului și menține stabilitatea mediului intern, iar codurile genetice o determină.
Celulele apoptotice au caracteristicile lor morfologice și biologice unice: contracția cromatinei nucleare, degradarea și fragmentarea extensivă a ADN-ului, contracția la scară completă a celulelor, contracția membranelor celulare și a proeminențelor exterioare care acoperă organele (cum ar fi mitocondriile și ribozomii) și formarea unor caracteristici nucleare. fragmente Corpurile apoptotice, celulele apoptotice nu numai că păstrează o structură și o funcție completă a membranei celulare, dar au și o structură completă de organite, care este diferită de necroza celulară.
Mecanismul molecular al apoptozei celulare nu a fost pe deplin elucidat până acum. Studiile [7] au arătat că există multe gene implicate în reglarea genică a apoptozei celulare.
Apoptoza este procesul de HBP care atrage în prezent mai multă atenție. Este determinată de codificarea genelor și permite celulelor să controleze moartea celulelor prin răspuns la semnale specifice [1]. După ce prostata ajunge la dimensiunea adultă, rata de proliferare a celulelor de prostată este menținută la 1% până la 2% prin echilibrul ratei de apoptoză. Distrugerea acestui echilibru a fost întotdeauna considerată cauza BPH [8]. În condiții normale, nivelul de estrogen și androgeni și circulația regulată în prostată sunt un fel de stare de autoechilibrare care există în procesul de proliferare și apoptoză. Atunci când proliferarea și apoptoza sunt dezechilibrate, va face glandele să crească și să se extindă în continuare, în principal din cauza extinderii compartimentului celulelor epiteliale [9]. Întreruperea acestui echilibru se poate datora modificărilor nivelurilor sau funcțiilor androgenilor; se poate datora, de asemenea, oricărui răspuns produs de stimularea AR a DHT sau modificări ale nivelurilor factorului de creștere mediat de DHT [2]. În acest studiu, FCM a detectat apoptoza celulară și a constatat că rata de apoptoză a celulelor de prostată la șobolanii cărora li s-a administrat doze mari de acteozidă a crescut semnificativ. Rezultatele microscopiei electronice au arătat că nucleii celulelor de prostată din grupul model au fost deformați, reticulul endoplasmatic aspru a fost foarte extins într-o formă asemănătoare chistului, iar chistul a fost umplut cu particule de proteine de înaltă densitate și s-a găsit vacuolare. Mitocondriile erau ușor umflate, iar studiile conexe[ 10-11 ] Raportul este consecvent.
După intervenția cu actozidă, gradul de hiperplazie a prostatei la șobolani a fost mai scăzut. Grupul cu doze mari a prezentat, de asemenea, semne timpurii de apoptoză: nucleul celulelor de prostată a rămas intact, iar vacuolele reticulului endoplasmatic au fost semnificativ mai mici. Condensarea nucleelor, densitatea nucleară crescută, acumularea de heterocromatine, similar cu caracterizarea celulelor țesutului prostatic la șobolani după castrare [12-13]. Arată că acteozidul dincistanchepoate induce apoptoza celulară la șobolanii cu hiperplazie de prostată, poate regla și restabili echilibrul apoptozei și proliferării celulelor prostatei și joacă un rol în inhibarea proliferării celulelor prostatei. Rezultatele acestui studiu și ale studiilor anterioare [14] indică faptul că efectul inhibitor al actozidei, o componentă chimică aCistanche tubulosa, pe hiperplazia de prostată poate fi legată de promovarea apoptozei celulare, reducerea supraexpresiei AR și a TGF-UR1. Mecanismul detaliat de acțiune trebuie încă studiat în continuare.
Beneficiu Cistanche: imbunatateste imunitatea
Referinte:
[1] Giacomo N, Antonio G, Ra fa el BB, et al. Inflamație, apoptoză și HBP, care este Dovada [J]. Suplimentele europene de urologie, 2006(5): 401-408.
[2] Car son IC, Rittmaster R. Rolul dihidrotestosteronului în hiperplazia benignă de prostată [J]. Urologie, 2003, 61: 2-7.
[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Metodologia experimentului farmacologic[M]. a 3-a editie. Beijing: Editura Medicală Populară, 2002: 1552-1553.
[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda și colab. Utilizarea unui sistem de expresie inductibil de tet-off pentru a studia funcția Akt[J]. Chinese Science Bulletin, 2000, 45(16): 1738-1741.
[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen și colab. Studiu comparativ asupra metodelor de preparare a suspensiei unicelulare de țesut renal [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24(1):50-53.
[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei și colab. Modificările ultrastructurii pulmonare la șoarecii în vârstă experimentală și efectul polizaharidei Cistanche deserticola [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2002, 18(1): 84-87.
[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Progresul cercetării în patogeneza proliferării celulelor hiperplaziei benigne de prostată și a apoptozei [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23(2): 141-143.
[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG, et al. Exprimarea supraviețuinței și a biomarkerilor apoptotici în hiperplasma benignă de prostată [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.
[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Benign prostatic hyperplasia: age-related tissue-remodeling [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.
[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Efectul inhibitor al clorhidratului asupra hiperplaziei de prostată la șobolani [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.
[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. Modificările morfologice ale hiperplaziei benigne de prostată și diferența de expresie ARmRN A [J]. Journal of Xi'an Medical University, 1999,20(2): 145-149.
[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen și colab. Modificări patologice dinamice ale prostatei canine după castrare[ J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19(7): 429-433.
[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng și colab. Modificări dinamice în microstructura prostatei ventrale a șobolanului după castrare[ J]. Chinese Journal of Urology, 2001,22(8): 468-472.
[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun yun. Efectul inhibitor al Aktiside asupra modelului experimental de hiperplazie benignă de prostată [J]. Jurnalul Universității Yangzhou: Agricultură și Științe ale Vieții
Ediția, 2008, 29(3): 55-58.