Trombomodulina este suprareglată în rinichii femeilor cu preeclampsie

edmund.chen@wecistanche.com

Glicoproteina endotelială trombomodulină reglează coagularea, inflamația vasculară și apoptoza. Înrinichi, trombomodulina protejează bariera de filtrare glomerulară prin declanșarea diafoniei între endoteliul glomerular și podocite. Mai multe patologii glomerulare se caracterizează printr-o pierdere a trombomodulinei glomerulare. La femeile cu preeclampsie, nivelurile serice de trombomodulină solubilă sunt crescute, reflectând posibil o pierdere din endoteliul glomerular. Ne-am propus să investigăm dacă expresia trombomodulinei este scăzută în rinichii femeilor cu pre-eclampsie și a șobolanilor expuși la un inhibitor de angiogeneză. Expresia trombomodulinei a fost examinată utilizând imunohistochimie și qPCR înrenalțesuturi de autopsie colectate de la 11 femei preeclamptice, 22 de martor gravide și 11 femei hipertensive, care nu sunt însărcinate. Mai departe,rinichide la șobolani tratați cu doze crescânde de sunitinib sau sunitinib în combinație cu antagonişti ai receptorilor de endotelină. Nivelurile proteinei trombomodulină glomerulară au crescut înrinichia femeilor cu preeclampsie. În paralel, la șobolanii expuși la sunitinib, trombomodulina glomerulară a fost suprareglată într-o manieră dependentă de doză, iar reglarea în sus a trombomodulinei glomerulare a precedat apariția modificărilor histopatologice. Blocarea ETAR selectivă, dar nu blocarea duală ETA/BR, a normalizat creșterea indusă de sunitinib a exprimării trombomodulinei și albuminurie. Propunem ca expresia trombomodulinei glomerulare să crească într-un stadiu incipient alafectare renalăinduse de stări antiangiogene. Reglarea în sus a acestei proteine ​​nefroprotectoare în celulele endoteliale glomerulare ar putea servi ca mecanism de protejare a barierei de filtrare glomerulară în pre-eclampsie.

Cuvinte cheie;insuficiență renală; rinichi; afectarea rinichilor; Disfuncție renală; țesuturi renale; renal

CISTANCHE VA AMUNĂȚI INSUFICIENȚA RENALĂ/RENALĂ

Preeclampsia afectează 3-5% dintre femeile însărcinate și este o cauză importantă a morbidității și mortalității materne și neonatale1. Preeclampsia este caracterizată prin disfuncția placentară și producția placentară a mai multor factori antiangiogenici și proinfamatori (de exemplu Flt-1 solubil, endoglină solubilă și TNF-alfa), care contribuie la disfuncția endotelială sistemică, la creșterea rezistenței vasculare. , și complicații în mai multe organe2. Therinichieste frecvent afectată la femeile cu preeclampsie, cu simptome variind de la proteinurie ușoară până la proteinurie cu amplitudine nefrotică șiinsuficiență renalăîn stadiile ulterioare ale bolii3. Modificările patologice înrinichidintre femeile cu pre-eclampsie se caracterizează prin endoteline, ștergerea procesului podocitelor piciorului și pierderea podocitelor4,5. Ceea ce determină aceste modificări patologice nu este pe deplin înțeles.Disfuncție renalăîn pre-eclampsie este probabil cauzată de o întrerupere a căilor de semnalizare implicate în menținerea barierei de filtrare glomerulară6. De exemplu, nivelurile crescute ale factorului antiangiogenic Flt-1 solubil duc la afectarea semnalizării VEGF în glomerul, ducând la o întrerupere a barierei de filtrare glomerulară, proteinurie și endotelioză glomerulară7,8. În conformitate, medicamentele care inhibă semnalizarea angiogenă, cum ar fi sunitinib, sunt asociate cu efecte adverse care imită pre-eclampsia.rinichifenotip9. Un alt mediator important al hipertensiunii arteriale şileziuni renaleîn preeclampsie şi inhibarea VEGF este sistemul endotelinei10. Endotelina este un vasoconstrictor puternic produs de celulele endoteliale care semnalizează prin tipul de endotelină.

Un receptor (ETAR) pe celulele musculare netede vasculare, rezultând vasoconstricție11. În schimb, semnalizarea endotelinei prin receptorul de endotelină de tip B (ETBR) are ca rezultat producerea de oxid nitric și prostaciclină care promovează vasodilatația11,12. Blocarea ETR, și antagonismul ETAR selectiv în special, reduce în mod eficient tensiunea arterială și proteinuria la modelele de rozătoare de pre-eclampsie și inhibarea VEGF13. În mod similar, recent am demonstrat că blocarea ETAR selectivă salveazărenalfenotipul șobolanilor expuși la inhibarea VEGF14. Trombomodulina este o glicoproteină transmembranară exprimată în principal de celulele endoteliale și este o componentă a glicocalixului15 de suprafață endotelială. Trombomodulina menține homeostazia vasculară prin reglarea coagulării, inflamației și apoptozei15,16. La femeile cu pre-eclampsie, au fost raportate niveluri serice crescute de trombomodulină solubilă17, care probabil reflectă clivarea crescută a ectodomeniului trombomodulină din endoteliu18. Trombomodulina joacă un rol esențial în menținerea barierei de filtrare glomerulară la șoarecii diabetici: semnalizarea perturbată a trombomodulinei duce la creșterea apoptozei celulelor endoteliale glomerulare și a podocitelor și la creșterea activării complementului glomerular, ducând la proteinurie și glomeruloscleroză agravate. Astfel, trombomodulina are efecte citoprotectoare importante asupra barierei de filtrare glomerulară, iar perturbarea semnalizării trombomodulinei poate fi implicată înboală de rinichiîn preeclampsie. În acest studiu, am investigat dacă expresia trombomodulinei este scăzută înrinichia femeilor cu pre-eclampsie și într-un model de șobolan de inhibare a VEGF. În plus, am investigat rolul sistemului endotelinei asupra expresiei trombomodulinei renale în acest model de șobolan, utilizând un antagonist ETAR selectiv și un antagonist dublu ETA/BR.

Metode

Materialul pacientului. Cohorta de autopsie renală utilizată în acest studiu a fost descrisă mai înainte (vezi: 21). Pe scurt, a fost efectuată o căutare la nivel național a Registrului olandez de patologie (PALGA) pentru a colectatesuturi renalede la paciente care au fost însărcinate și au fost cazuri confirmate de preeclampsie. În plus, au fost incluse două grupuri de control: (1) femei însărcinate fără o tulburare de hipertensiune arterială înainte sau în timpul sarcinii și (2) femei tinere neînsarcinate cu antecedente medicale de hipertensiune cronică. Datele de patologie au fost legate de înregistrările Comitetului Național de Mortalitate Maternă al Societății Olandeze de Obstetrică. Preeclampsia a fost definită pe baza criteriilor de diagnostic ale Societății Internaționale pentru Studiul Hipertensiunii în Sarcină (ISSHP)22. Încorporat în parafinărinichiAu fost disponibile pentru acest studiu eșantioane de la 11 femei cu pre-eclampsie, 22 de martori gravide normotensive și 11 martori de hipertensiune neînsarcinată. Toate probele de autopsie au fost codificate și apoi manipulate și analizate în mod anonim, în conformitate cu ghidurile naționale de etică olandeze (Codul pentru Utilizarea Secundară a Țesuturilor Umane, Federația Olandeză a Societăților Medicale Științifice). Acest studiu a fost aprobat de Comitetul de etică medicală a Centrului Medical al Universității din Leiden (numărul de licență P12.107).

CISTANCHE VA ÎMBUNĂTĂȚI FUNCȚIA RINICHII/RENALE

Șobolani. Experimentele au fost efectuate în conformitate cu liniile directoare din Directiva 2010/63/UE a Parlamentului European și Țările de Jos Experiments on Animals Act, după obținerea aprobării din partea Comitetului de etică a animalelor Eras mus Medical Center (numărul de licență 118-16-01). Șobolani masculi Wistar Kyoto (WKY, 280–300 g) au fost obținuți la vârsta de 10 săptămâni. Animalele au fost găzduite într-o cameră experimentală cu temperatura menținută la 21-22 de grade și un ciclu de 12- h lumină/întuneric. Animalele au avut acces la mâncare standard de laborator pentru șobolani și apă ad libitum. În acest studiu au fost utilizate două experimente diferite, cu metode detaliate și fenotipul acestor animale publicate anterior14,23. Pe scurt, șobolanii au fost tratați cu diferite doze de sunitinib cu sau fără antagonişti ETR timp de 8 zile. Tensiunea arterială aortică a fost măsurată folosind radiotelemetrie. Înainte și după administrarea tratamentului(lor), șobolanii au fost găzduiți în cuști metabolice timp de 48 de ore. Prima zi a fost folosită pentru aclimatizare, iar a doua zi pentru recoltarea de probe de urină de 24-h. În primul studiu, șobolanii au fost repartizați aleatoriu pentru a primi o doză mică, intermediară sau mare de sunitinib (7, 14 sau 26,7 mg/kg/zi po sunitinib-L-malat (Sutent, Pfizer), respectiv) sau vehicul timp de 8 zile . La sfârșitul experimentului, șobolanii au fost eutanasiați cu 60 mg/kg pentobarbital intraperitoneal și exsanguinare prin puncție venoasă abdominală23. În al doilea studiu, șobolanilor li s-a administrat vehicul sau doza intermediară de sunitinib (14 mg/kg/zi po) singur sau în combinație cu macitentan (antagonist dublu ETA/BR, 100 mg/kg/zi po) sau sitaxentan (ETAR selectiv antagonist, 30 sau 100 mg/kg/zi po). La sfârșitul experimentului, șobolanii au fost eutanasiați prin supradozaj cu anestezie Forane (izofluran) și exsanguinare prin puncție venoasă abdominală14. În ambele studii, în urma eutanasiei,rinichiau fost eliminate rapid pentru analizele ulterioare.

Histologie renală.Secțiunile de rinichi au fost evaluate orbește de către un patolog pentru prezența sau absența tumefierii celulelor endoteliale, tumefacției celulelor epiteliale, ischemiei și proteinei intraepiteliale. Pentru microscopia electronică s-au examinat doi glomeruli, s-a studiat prezența endotelinelor glomerulare și morfologia podocitelor. Descoperirile histopatologice la subiecții umani și animalele expuse la diferite concentrații de sunitinib au fost publicate înainte21,23.

Imunohistochimie.Secțiunile de rinichi au fost deparafinate. Recuperarea antigenului indus de căldură a fost efectuată utilizând tampon citrat (anticorp anti-trombomodulină umană) sau Tris/EDTA (trombomodulină anti-șobolan și anticorpi anti-ETAR). Peroxidaza a fost blocată într-o soluție de peroxid de hidrogen timp de 20 de minute.Rinichiprobele au fost incubate cu o trombomodulină monoclonală anti-umană de șoarece (1:200, Leica Biosystems, Danvers), o trombomodulină monoclonală anti-șoarece/șobolan de iepure (1:2000, Abcam) sau un anti-ETAR policlonal de iepure (1:700, Invitrogen, Carlsbad) timp de o oră la temperatura camerei. Legarea anticorpului primar a fost vizualizată cu polimer anti-șoarece sau anti-iepure marcat cu peroxidază (Dako, Danemarca) și diaminobenzidină ca cromogen.

Analiza colorării.Colorația cu trombomodulină și ETAR a fost evaluată de doi observatori independenți orbiți în ceea ce privește diagnosticul clinic și tratamentul (CCLA și MB). Douăzeci și cinci de glomeruli selectați aleatoriu per probă au fost punctați folosind o scală semi-cantitativă, după cum urmează: 0, absent; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 procente din colorarea glomerulară. Exemple reprezentative ale diferitelor scoruri sunt prezentate în figurile suplimentare S1, S2, S3. Acordul dintre observatori a fost minim suficient în toate experimentele de punctare (κ Mai mare sau egal cu 0,5). Când observatorii au punctat glomeruli diferit, s-a obținut consensul.

qPCR.PCR cantitativă a fost efectuată pentru a cuantifica expresia ARNm a trombomodulinei și a ET AR. ARN a fost izolat cu reactiv TRIzol (Life Technologies, San Francisco, CA, SUA). Sinteza ADNc a fost efectuată cu revers transcriptază AMV (Roche, Basel, Elveția), iar PCR cantitativă SYBR Green a fost efectuată conform protocolului producătorului (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, SUA). Secvențele de primer sunt descrise în tabelul suplimentar S1. Expresia a fost măsurată prin metoda ciclului de prag comparativ și normalizată la expresia hipoxantin fosforiboziltransferazei. A fost efectuată o analiză a curbei de topire pentru a verifica specificitatea aplicației.

CISTANCHE VA ÎMBUNĂTĂȚI RINCHII/DIALIZA RENALĂ

Analize statistice.Variația interobservator a fost determinată folosind statistica kappa. Datele continue distribuite în mod normal au fost analizate utilizând ANOVA unidirecțional urmată de testul post-hoc al diferenței cele mai puțin semnificative pentru comparațiile de grup planificate în perechi. Pentru a analiza diferențele în scorurile de exprimare a trombomodulinei glomerulare între grupurile din cohorta de autopsie, a fost utilizată regresia logistică ordinală pentru date grupate cu ecuații de estimare generalizate (GEE). Pentru a analiza corelațiile presupuse dintre expresia trombomodulinei și constatările histopatologice sau clinice, a fost utilizată corelația lui Pearson. Formele curbelor de răspuns la trombomodulină și ET AR în intervalul de doze de sunitinib au fost examinate prin intermediul liniilor de regresie. p<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">

Rezultate Trombomodulina glomerulară este crescută în rinichii femeilor cu preeclampsie. Colorația cu trombomodulină a fost analizată în probe de rinichi de la 11 femei cu preeclampsie,22 de martori gravide normotensive și 11 controale hipertensive non gravide. Martorii hipertensivi au fost mai în vârstă decât femeile din celelalte 2 grupuri de studiu; comparativ cu martorii gravide, femeile pre-eclamptice au avut o sarcină mai lungă și o tensiune arterială mai mare (Tabelul suplimentar S2). Indiferent de prezența trombomodulinei în glomerul, trombomodulina a fost prezentă în capilarele peritubulare în toate probele studiate (Figura suplimentară S1). În glomeruli, expresia trombomodulinei părea să provină din polul vascular (Fig. 1A). În medie, expresia trombomodulinei glomerulare a fost mai mare la pacientele pre-eclamptice comparativ cu martorii gravide și hipertensive (Fig. 1); comparativ cu pre-eclampsie, controalele au avut scoruri mai mici ale expresiei trombomodulinei glomerulare (martori gravide, OR: 3.0; 95% -CI: (1,1, 7,8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>

Exprimarea trombomodulinei glomerulare la șobolani expuși la sunitinib.Pentru a înțelege mai bine constatările noastre în pre-eclampticărinichi,Colorația cu trombomodulină glomerulară a fost studiată la șobolani expuși la doze crescânde de inhibitor al receptorului VEGF sunitinib. Administrarea de sunitinib a dus la o creștere a tensiunii arteriale și proteinurie într-o manieră dependentă de doză23. Șobolanii expuși la doza mică de sunitinib nu au prezentat anomalii histopatologice; endotelinele au fost observate înrinichide șobolani expuși la dozele intermediare și mari de sunitinib; depozitele de fibrină au fost observate doar în capilarele glomerulare ale animalelor expuse la o doză mare de sunitinib23. Niciunul dintre glomerulii marcați la șobolani nu a fost negativ pentru trombomodulină. Proteina trombomodulină glomerulară a fost crescută în rinichii șobolanilor expuși la doze mici și intermediare de sunitinib (p <{1}}.05, fig.="" 2a),="" dar="" nu="" și="" la="" șobolanii="" expuși="" la="" cea="" mai="" mare="" doză="" de="" sunitinib.="" în="" sprijinul="" acestor="" constatări,="" un="" model="" de="" regresie="" a="" arătat="" că="" nivelurile="" de="" proteină="" trombomodulină="" glomerulară="" au="" fost="" asociate="" neliniar="" cu="" doza="" de="" sunitinib="" ca="" relație="" pătratică="" semnificativă="" statistic="" (fig.="" 2b,="" y="2.829" plus="" 0).="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the=""  etar,="" which="" mediates="">afectarea rinichilorinduse de inhibarea VEGF. La șobolanii tratați cu doze mici și intermediare de sunitinib, dar nu și la șobolanii tratați cu o doză mare de sunitinib, colorația ETAR glomerulară a fost crescută în comparație cu șobolanii martor (p < {{0}}.0.="" 1,="" fig.="" 2c).="" în="" paralel="" cu="" nivelurile="" de="" trombomodulină,="" nivelurile="" etar="" glomerulare="" au="" fost="" asociate="" pătratic="" cu="" doza="" de="" sunitinib="" (y="0.642" plus="" 0.087x−0.003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>

Tratamentul cu blocant ETAR sitaxentan normalizează expresia trombomodulinei.Pentru a studia dacă expresia trombomodulinei este reglată de semnalizarea endotelinei, șobolanii expuși la doza intermediară de sunitinib au fost tratați cu agenți de blocare a ETR. Tratamentul cu un antagonist ETAR selectiv (sitaxentan) a normalizat tensiunea arterială și albuminuria la șobolanii tratați cu sunitinib14 (Figura suplimentară S4). În schimb, tratamentul cu un antagonist dublu ETA/BR (macitentan) a dus la normalizarea tensiunii arteriale, dar nu la normalizarea albuminuriei induse de sunitinib14 (Figura suplimentară S4).

Expresia ARNm de trombomodulină a fost crescută în rinichii șobolanilor expuși la sunitinib în comparație cu martorii (Fig. 3A, p<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,=""  thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">

Discuţie

Aici, arătăm că proteina nefroprotectoare trombomodulină este crescută înrinichiglomerulii femeilor cu preeclampsie. Mai mult, arătăm că la șobolanii expuși la inhibitorul angiogenezei sunitinib, trombomodulina glomerulară este suprareglată într-o manieră dependentă de doză, iar creșterea trombomodulinei glomerulare precede apariția manifestărilor histopatologice. În cele din urmă, arătăm că blocarea ETAR normalizează suprareglarea indusă de sunitinib a trombomodulinei glomerulare. Descoperirile noastre sugerează că reglarea în sus a trombomodulinei endoteliale glomerulare are loc într-un stadiu incipient al pre-eclampticului.afectare renalăsi serveste ca mecanism de protejare a barierei de filtrare glomerulara. Studiul nostru este primul care a raportat creșterea exprimării trombomodulinei glomerulare în pre-eclampsie. Deoarece am constatat anterior că în placenta femeilor cu pre-eclampsie, trombomodulina este reglată în jos24,

nivelurile serice crescute ale ectodomeniului de trombomodulină solubilă la pacienții cu pre-eclampsie17 pot fi derivate din endoteliul glomerular. În plus, am găsit o asociere inversă între expresia trombomodulinei glomerulare și prezența endotelinelor glomerulare, sugerând că reglarea în sus a trombomodulinei servește ca mecanism de protecție glomerulară. Această noțiune este susținută de dovezi preclinice la șoarecii diabetici, în care trombomodulina păstrează în mod critic supraviețuirea celulelor glomerulare și suprimă activarea complementului glomerular19,20. Spre deosebire de descoperirea noastră conform căreia o stare antiangiogenă crește nivelurile de trombomodulină glomerulară, un studiu anterior a constatat că tratamentul cu sFlt-1 a redus expresia trombomodulinei glomerulare la șobolanii cu glomerulonefrită semilună25. Hara et al.25 nu au studiat efectul sFlt-1 asupra trombomodulinei glomerulare la șobolani sănătoși. Prin urmare, deși niveluri crescute de factori infamatori se găsesc și în pre-eclampsie, reglarea în jos a trombomodulinei glomerulare în acest studiu poate fi explicată prin inflamația glomerulară de grad înalt prezentă în glomerulonefrită (citokine proinflamatorii, activarea complementului), care suprimă puternic expresia trombomodulinei26. .

Pentru a elucida dacă în pre-eclampsie, trombomodulina glomerulară este suprareglată ca urmare a inhibării sistemice a receptorului VEGF, am studiat expresia trombomodulinei la șobolani expuși la sunitinib. Sunitinib a crescut în funcție de doză trombomodulină glomerulară la doze mici și intermediare, dar nu la doza cea mai mare. Deoarece modificări histologice nu au fost observate la rinichii șobolanilor expuși la doze mici de sunitinib23, creșterea exprimării trombomodulinei glomerulare a precedat apariția leziunii histopatologice glomerulare induse de sunitinib. La șobolanii expuși la o doză intermediară de sunitinib, s-a observat cel mai înalt nivel de expresie a trombomodulinei glomerulare, care a fost direct asociat cu cantitatea de albuminurie. Fenotipul histopatologic renal al cazurilor noastre de preeclampsie umană a fost comparabil cu afectarea renală a șobolanilor tratați cu o doză intermediară de sunitinib: endotelinele au fost observate în 6 din 11 preeclampsie.

cazuri și microtrombi au fost observate în 1 din 11 cazuri de pre-eclampsie21, în timp ce în modelul de șobolan, șobolanii tratați cu doză intermediară au prezentat endoteline, iar șobolanii tratați cu cea mai mare doză au prezentat endoteline combinate cu depozite de fibrină23. Propunem ca expresia trombomodulinei glomerulare să crească într-un stadiu incipient al pre-eclampsiei și al inhibiției angiogenice, ca mecanism de protecție pentru a compensa stresul antiangiogenic asupra barierei de filtrare glomerulară. În schimb, la șobolanii tratați cu cea mai mare doză, expresia trombomodulinei a fost redusă la niveluri de control. Un studiu recent a constatat că dimensiunile stratului de glicocalix endotelial sunt reduse la femeile cu preeclampsie severă cu debut precoce27. Prin urmare, propunem, de asemenea, ca la șobolanii tratați cu doze mari de sunitinib, glicocalixul endotelial este afectat, ceea ce provoacă interacțiunea dintre trombomodulină și enzime, contribuind astfel la clivajul proteolitic și pierderea proteinei trombomodulinice glomerulare. În cazurile noastre de pre-eclampsie, nivelurile crescute de trombomodulină glomerulară au fost asociate cu mai puține endoteline glomerulare, o leziune cauzată direct de perturbarea semnalizării VEGF glomerulare. Studiile in vitro au identificat VEGF ca un factor inductor puternic al expresiei trombomodulinei în celulele endoteliale28. Prin urmare, reglarea în sus a trombomodulinei renale în condiții antiangiogenice, cum ar fi pre-eclampsia și inhibarea angiogenă, poate părea contraintuitivă. Interesant, un studiu a arătat că VEGF este crescut în glomerulii femeilor cu pre-eclampsie29, reflectând probabil un mecanism compensator glomerular în încercarea de a compensa biodisponibilitatea redusă a VEGF. Astfel, reglarea în sus a trombomodulinei poate fi cauzată de o creștere compensatorie a VEGF glomerular în condiții antiangiogenice sistemice. În plus, semnalizarea endotelinei poate fi implicată în reglarea trombomodulinei glomerulare. Nivelurile plasmatice ale endotelinei sunt crescute la femeile cu preeclampsie30 și sunt asociate cu niveluri sistemice de sFlt-131,32. În modelul nostru de șobolan, ambele tratamente cu sitaxentan (antagonist ETAR) și macitentan (antagonist dublu ETA/BR) au dus la normalizarea hipertensiunii induse de sunitinib la șobolanii noștri14. Cu toate acestea, numai tratamentul cu sitaxentan (antagonist ETAR) a normalizat suprareglarea indusă de sunitinib a trombomodulinei renale și a scăzut albuminuria. Acest lucru sugerează că reglarea exprimării trombomodulinei renale este independentă de afectarea endotelială mediată de hipertensiune arterială, care a fost susținută și de lipsa exprimării crescute a trombomodulinei la pacienții noștri de control hipertensivi. Rămâne de investigat dacă ETAR induce expresia trombomodulinei prin efecte sistemice sau prin semnalizare în celulele endoteliale glomerulare în mod specific. Interesant, expresia trombomodulinei a fost normalizată numai la nivelul ARNm după blocarea ETAR la șobolanii tratați cu sunitinib, dar nu și la nivel de proteine. Această discrepanță poate fi explicată prin efectele post-translaționale, timpul de înjumătățire al proteinei și factorii care influențează scindarea trombomodulinei din endoteliu.

Trombomodulina are proprietăți antiinflamatorii importante, care includ inhibarea infiltrației leucocitelor prin sechestrarea moleculelor proinflamatorii, cum ar fi antigenul Lewis y și HMGB-133,34, scăzând activitatea NF-kB35 și inhibând activarea complementului20. Anterior, am raportat că în cazurile noastre de pre-eclampsie, activarea complementului glomerular a fost crescută în comparație cu martorii însărcinați și hipertensivi36. Aceasta sugerează că reglarea în sus a trombomodulinei endoteliale glomerulare în pre-eclampsie funcționează ca un mecanism anti-infamator și anti-complement. Pe lângă binecunoscutele sale efecte antiinflamatorii, un studiu recent a constatat că trombomodulina are proprietăți proinflamatorii; trombomodulina leagă integrinele leucocitare LFA-1 și Mac1, promovând astfel aderența leucocitelor la endoteliu in vitro37. Prin urmare, creșterea trombomodulinei glomerulare poate contribui direct la inflamația și deteriorarea glomerulare. Trebuie să recunoaștem limitările studiului nostru. În primul rând, femeile cu pre-eclampsie la care am investigat expresia trombomodulinei glomerulare au murit toate din cauza consecințelor pre-eclampsiei. Acest lucru face ca aceste femei să fie un subgrup specific de pacienți cu preeclampsie și, prin urmare, rezultatele acestui studiu pot să nu fie aplicabile tuturor femeilor care dezvoltă preeclampsie. În al doilea rând, șobolanii masculi tratați cu sunitinib au fost utilizați ca model pentru a studia reglarea trombomodulinei în condiții antiangiogenice. Mai mult, sunitinib duce la inhibarea diverselor receptori tirozin kinaze și nu este un inhibitor specific al VEGF. În mod clar, acest model nu imită pe deplin pre-eclampsia, cu toate acestea, tratamentul cu sunitinib duce la hipertensiune arterială și proteinurie23. Prin urmare, am putut folosi acest model pentru a studia reglarea trombomodulinei în condiții antiangiogenice. În ciuda limitărilor studiului nostru, acesta oferă perspective interesante asupra mecanismelor de afectare renală în pre-eclampsie. În concluzie, expresia trombomodulinei renale este crescută în preeclampsie și într-un model de inhibare angiogenă indus de sunitinib. Noi speculăm că creșterea nivelurilor de trombomodulină glomerulară reflectă un mecanism reno-protector ca răspuns la stresul antiangiogenic la bariera de filtrare glomerulară. Mai mult, tratamentul cu un antagonist ETAR a normalizat expresia ARNm a trombomodulinei renale concomitent cu reducerea proteinuriei la șobolanii tratați cu sunitinib. Mai multe cercetări sunt justificate cu privire la rolul trombomodulinei în bariera de filtrare glomerulară.