Evaluarea toxicologică și efectele protectoare ale extractului etanolic de frunze de Cassia Spectabilis DC asupra funcției hepatice și renale a șoarecilor infectați cu Plasmodium Berghei
Oct 30, 2023
1. Introducere
Până astăzi, problema dePlasmodiumrezistența parazitării față de medicamentele antimalarice existente este încă o problemă majoră pentru eradicarea malariei [1–3]. de aceea, continuă să se facă cercetări privind descoperirea de noi surse de medicamente antimalarice, dintre care unul din plante medicinale [4].In vivoșiin vitromodelele au fost folosite de mult timp în testarea antimalarică. În a doua jumătate a secolului al XX-lea,Plasmodium bergheisauPlasmodium yoeliia fost folosit pentru a infecta rozătoare. Între timp,P. bergheia devenit cea mai frecvent utilizată specie pentru studiu în stadiul hepatic, în special formarea de hipnozoit pentru a investiga recurența malariei [5–7].
CLICK AICI PENTRU A OBȚINE FORMULAȚIA DE CISTANCHE PENTRU RINCHI
Una dintre plantele tradiționale din Indonezia, Cassia spectabilis DC din familia Caesalpiniaceae, a fost dovedită experimental in vitro împotriva P. falciparum și în tratarea malariei in vivo împotriva P. berghei [8, 9], indicând faptul că planta C. spectabilis DC este foarte potențial de a fi dezvoltat în continuare ca candidat pentru medicamente antimalarice. Lucrări anterioare au raportat că un test in vivo pe extractul etanolic 90% din frunza de C. spectabilis DC împotriva P. berghei ANKA la șoareci BALB/c a arătat că o valoare ED50 a fost de 131,5 mg/kg BW [9] și este clasificată ca fiind foarte activitate antimalarică bună [10].
În plus, extractul, fracțiile, subfracțiile și compușii izolați de C. spectabilis DC au fost testați in vitro pentru activitățile lor antimalarice. *Compusul activ al acestei plante a fost identificat cu succes ca un compus care este identic cu (–){{0}}hidroxicasina, iar testul său de activitate antimalarică in vitro a arătat un IC50 foarte scăzut de 0,016 ug/mL [ 11], care este clasificată ca o activitate antimalarică foarte puternică [12].
Cercetările asupra acestei plante privind depășirea rezistenței la medicamente pentru malarie au fost continuate prin examinarea siguranței și efectelor îmbunătățirii extractului de frunze de C. spectabilis DC asupra funcțiilor hepatice și renale la șoarecii infectați cu P. berghei ANKA. Studiile de cercetare privind efectul plantelor medicinale care au activitate antimalarică asupra funcțiilor hepatice și renale ale șoarecilor infectați cu paraziți au fost efectuate pe scară largă [13–16], precum și teste de toxicitate acută și subacută [17–20]. Ficatul are un rol important în reglarea proceselor fiziologice. este un organ implicat în mai multe funcții vitale, cum ar fi metabolismul, secreția și stocarea. În plus, ficatul are un rol important în detoxifierea și excreția compușilor endogeni și exogeni [21–24].
Infecția cu malarie începe atunci când sporozoiții sunt infectați de mușcătura de țânțar femele Anopheles infectată cu parazitul malaric. În timpul hrănirii cu sânge, femela infectată Anopheles injectează stadiul de sporozoit al parazitului [25, 26]. După aproximativ o oră de călătorie în corpul uman, sporozoiții intră apoi în ficat, atacă hepatocitele și încep ciclul asexuat al schizogoniei exoeritrocitare. În interiorul celulelor hepatice, paraziții se înmulțesc asexuat, până ajung la schizontul matur și, în cele din urmă, un număr mare de merozoiți produc și intră în fluxul sanguin după infectarea exploziei hepatocitelor. *hepatocitele infectate care provoacă leziuni hepatice din cauza rupturii hepatocitelor infectate și merozoiților intră în fluxul sanguin și încep ciclul eritrocitar în celulele roșii din sânge [27, 28]. Daunele care apar în celulele hepatice pot crește enzimele care lucrează asupra funcției hepatice, în special enzimele transaminaze, și modificări morfologice în aspectul ficatului [29, 30], cum ar fi hepatomegalia. Hepatosplenomegalia este o caracteristică comună a infecției cu malarie la oameni [31] și șoareci [32] cauzată de expunerea cronică la paraziții malariei. Cu toate acestea, nici o mărire a rinichilor în infecția cu malarie.
Disfuncția ficatului poate fi detectată prin transaminarea hepatocelulară a transaminazei oxaloacetice glutamice plasmatice (SGOT) și transaminazei piruvice glutamice plasmatice (SGPT) eliberate în plasmă sau prin examinarea histologică a țesutului [33]. Cea mai frecventă afectare este activarea morții celulelor apoptotice sau a necrozei hepatocitelor [34–36]. Implicarea renală semnificativă clinic este asociată cu infecția cu P. falciparum și P. malariae. *Infecția cu P. falciparum produce manifestări acute, variind de la asimptomatice, până la tulburări urinare și tulburări electrolitice ușoare pentru insuficiența renală acută (IRA) sau leziunea renală acută (IRA) care necesită suport de dializă [27, 37]. *Se știe că cazurile de AKI în complicația malariei contribuie la o rată ridicată a mortalității, care este de aproximativ 75% din cazuri. *Studiul histologic sugerează prezența glomerulonefritei, a necrozei tubulare acute și a nefritei interstițiale ca factor hemodinamic cheie în AKI asociată malariei [38]. În general, gradul de disfuncție renală poate fi detectat prin prezența unor cantități adecvate de proteine în urină și o creștere a ureei plasmatice, a creatininei și a nivelurilor de electroliți în plasmă [39].
*Toxicitatea extractului etanolic 90% din frunzele de C. spectabilis DC (EECS) la șoarecii BALB/c, urmată de examinările enzimatice, poate afecta histopatologia și funcțiile hepatice și renale post-administrarea EECS.
2. Materiale și metode
2.1. Material vegetal și pregătirea EECS. *e C. spectabilis
Frunzele DC au fost achiziționate și determinate în LIPI (Centrul de Cercetare Indonezia), Grădina Botanică, Purwodadi, Java de Est, Indonezia (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). * specimenul a fost depus ca herbar în Departamentul de Farmacognozie și Fitochimie, Facultatea de Farmacie, Universitas Airlangga. * Frunzele au fost clătite bine cu apă de la robinet pentru a îndepărta contaminanții străini, uscate la 45 de grade și măcinate în pulbere cu o râșniță. *Extractia a fost efectuata prin macerarea materialelor vegetale pulverulente (500 g) intr-un balon care contine 2.500 ml etanol 90% (la 25-30 grade) timp de 3 × 24 ore. * Solventul de extracție a fost separat, filtrat prin hârtie de filtru și evaporat sub presiune redusă prin evaporare rotativă. * Randamentul extractului etanolic de 1000 g greutate uscată de pulbere de frunze de C. spectabilis DC a fost de 10,20% (g/g) și a fost utilizat în acest experiment.
2.2. Animale.
În studiu au fost utilizați șoareci masculi BALB/c în vârstă de 6-8 săptămâni, greutate de 25-30 g. Toți șoarecii au fost obținuți de la Centrul Veterinar Farma, Direcția Generală de Creștere și Sănătate Animală Ministerul Agriculturii, Surabaya, Java de Est, Indonezia. * Animalele au fost adăpostite în condiții standard și hrănite cu o dietă de stoc și apă ad libitum. *Aprobarea protocolului de studiu a fost obținută de la Comitetul de etică pentru cercetarea animalelor, Universitas Air langga, Indonezia, numărul 2.KE.181.10.2018.
2.3. Test de toxicitate acută.
EECS a fost ponderat și resuspendat cu 0,5% carboximetil celuloză de sodiu (Na CMC) pentru a obține dozele dorite. Șoarecii BALB/c au fost ținuți timp de 24 de ore înainte de a fi hrăniți cu extract. * Animalele au fost împărțite în trei grupuri, fiecare grup conținând cinci șoareci. *e doze pentru fiecare grup au fost 1.250; 2.500; și, respectiv, 5,000 mg/kg BW. Comportamentul general al fiecărui șoarece a fost observat continuu timp de o oră după fiecare doză, intermitent la fiecare patru ore și ulterior pe o perioadă de 24 de ore [40-42].
2.4. Test de toxicitate subacută.
În testul de toxicitate subacută, șoarecii au fost grupați în trei grupuri și fiecare grup a fost tratat cu EECS o dată, de cinci ori și de zece ori a unei doze orale zilnice de 150 mg/kg BW timp de 28 de zile; grupului de control normal i sa administrat doar mâncare și băutură ad libitum [43]. * Animalele au fost observate timp de 28 de zile pentru orice semn de toxicitate. La sfârșitul perioadei de observație, toate animalele au fost sacrificate sub anestezie cu eter și organele vitale, cum ar fi ficatul și rinichii, au fost îndepărtate de la toate animalele pentru examene brute și histopatologice.
2.5. Parazitul rozătoarelor.
Sensibilitatea la clorochină a Plasmodium berghei ANKA a fost obținută de la Institutul Biomolecular Eijkman, Jakarta, Indonezia și menținută prin trecerea în serie care a fost utilizată în acest studiu.
2.6. Efectul EECS asupra nivelului plasmatic al SGOT și SGPT.
*experimentul a fost un test de suprimare bazat pe Peters [44]. *testul supresor a fost făcut înainte de evaluarea EECS asupra nivelului plasmatic de SGOT și SGPT. * animalele au fost infectate cu P. berghei ANKA și împărțite în cinci grupuri de A, B, C, D și E. * animalele au fost tratate la scurt timp după infectare în ziua 0 (D0) și a continuat zilnic timp de trei zile (D1-D3). Grupul A ca martor negativ a primit 0,5% Na CMC pe cale orală. Grupurilor B și C ca grupuri tratate li sa administrat EECS la o singură doză orală de 150 și, respectiv, 200 mg/kg BW. Grupul D a fost un martor pozitiv dat cu clorochină la o singură doză orală de 100 mg/kg BW. Mai mult, grupul E ca martor sănătos nu a fost infectat cu paraziți și i s-a administrat doar mâncare și băutură ad libitum. În a patra zi (Z4), frotiurile de sânge ale fiecărui șoarece au fost pregătite și examinate microscopic. Mai mult, plasma a fost colectată înainte de măsurarea nivelurilor SGOT și SGPT.
2.7. Efectul EECS asupra histopatologiei ficatului și rinichilor.
La sfârșitul perioadei de observație, toate animalele au fost sacrificate sub anestezie cu eter înainte de îndepărtarea ficatului și a rinichilor. După cântărirea organelor, țesuturile au fost apoi fixate în soluție de formaldehidă 10% și prelucrate în continuare pentru colorarea cu hematoxilină-eozină (H&E). *a fost efectuată observația histopatologică pentru a afla efectul toxicologic al EECS asupra celulelor degenerative și necrotice ale țesuturilor. *Daunele au fost clasificate pe baza Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Analize statistice.
*datele au fost reprezentate ca medie ± abatere standard (SD). Analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) a fost utilizată pentru a compara datele distribuite în mod normal între tratamente, urmată de un test de comparație multiplă post-hoc când a fost obținută o semnificație diferită. Atunci când datele nu au fost distribuite în mod normal, au fost utilizate testele U Kruskal-Wallis și Mann-Whitney pentru a evalua diferențele dintre tratamente.
Serviciul de asistență al Wecistanche-Cel mai mare exportator de cistanche din China:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Cumpărați pentru mai multe detalii despre specificații:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
