UPLC-Q-Orbitrap HRM-uri combinate cu andocarea moleculară pentru a investiga baza materială a gustului amar și a relației cu efect de aromă în Cistanchia Desertica

Abstract

 

Pe baza cromatografiei lichide ultra-performanțe-quadrupol-electrostatic orbitrap Spectrometrie de masă de înaltă rezoluție (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) și andocarea moleculară, gustul amar care prezintă substanțe ale Cistanstanisului deserticola au fost investigate pentru a pune bazele de cercetare pentru a debastrea și corectarea gustului și pentru a investiga relația lor cu efectele de depozitare și corectarea gustului și pentru a investiga relația lor de cercetare cu efectele gustului amar. În primul rând, au fost utilizate HRM-uri UPLC-Q-Orbitrap pentru a caracteriza componentele C. deserticola și au fost identificate 69 de componente chimice. Achiajul molecular al acestor componente chimice cu receptorul gustului amar a dus la screeningul a 20 de substanțe cu prezentare amară, incluzând 6 glicozide de feniletanol, 5 flavonoide, 3 acizi fenolici, 2 cicloalkenil eter terpene, 2 alcaloizi și alte 2 componente. Extractele de aceeași origine au fost colectate din același loc de origine, iar substanțele cu prezență amară au fost cercetate prin andocarea moleculară. Other components, nine batches of fresh C. deserticola samples were collected from different months of the same origin, divided into different months and different parts, and the quantitative value of bitterness of the samples was determined by the electronic tongue method, and the contents of six components in the samples (pineconotyloside, trichothecene glycoside, tubulin A, iso-trichothecene glycoside, Jinshihuaoside și jingnipinozid) au fost determinate de cromatografia lichidă de înaltă performanță (HPLC), iar glicozidele totale de feniletanol în probe au fost determinate prin metoda spectrofotometrică uvvisibilă. Metoda fotometrică pentru a determina conținutul glicozidelor totale de feniletanol, polizaharide totale, alcaloizi totali, flavonoide totale și acizi fenolici totali din eșantioane și va fi combinată cu analiza chimiometrică pe această bază, și verificată prin analiza corelației lui Pearson, analiza de corelație gri pentru a se analiza bitle-ul litif. Deserticola, care erau de acord cu rezultatele andocărilor moleculare; și în sfârșit, cu substanțele cu prezență amară ca obiect al studiului.

Extract de cistanți deserticola

 

În cele din urmă, predicția și analiza farmacologică a rețelei au fost efectuate cu substanța amară ca țintă, iar relațiile IP dintre ținta substanței amare și eficacitatea amară a fost investigată. Rezultatele au arătat că țintele cheie ale substanței b itter au fost EGFR, PIK3CB și PTK2 și că substanța amară ar putea exercita eficacitatea amară prin acțiunea pe țintele de boală relevante, ceea ce înseamnă că substanța amară a C. desertica este baza materială a eficacității amare. În concluzie, acest studiu a arătat că glicozidele de feniletanol, în principal pinealosid, glicozida Mauritiana și Gibbe Rellin, sunt baza materială a gustului amar al C. deșertica, iar tehnologia de andocare moleculară are un rol de ghidare în screeningul substanțelor amare în medicina tradițională chinezească și că substanțele amare ale lui C. Desertica are efectul efectei amarului, care este o bază bună pentru „Botter Substance of C. Desertica, care are efectul”, care este o bază bună pentru „Guster” de la C. Desertica, care este o bază bună pentru „Gustul de deșertic” de medicină tradițională chineză în viitor. Substanțele amare din C. deșertica au gust și efect amar, care vor oferi idei și referințe pentru cercetările viitoare asupra relațiilor dintre gusturile și efectul în medicina tradițională chineză

 

 

 

Cuvinte cheie Extract de cistanți deserticola; UPLC-Q-Orbitrap HRMS; Farmacologie de rețea; andocare moleculară; limbă electronică; substanțe amare;Relația gust-efect

 

Cistanche Deserticola YC MA.este un parazit de rădăcină perenă a familiei Orobanchaceae, genul Cistanche, cunoscut în mod obișnuit sub numele de Desert Cistanche [1]. Clasicul pe bază de plante al lui Shennong afirmă că Cistanche are un gust dulce și ușor cald. Cu toate acestea, de fapt, are un gust persistent și ușor amar după ce a fost luat. „Aroma” celor cinci arome ale medicamentului tradițional chinez a fost inițial determinată pe baza gustului real al medicamentului atunci când a fost gustat, dar pentru că gustul medicamentului este strâns legat de efectul său, a evoluat treptat în explicarea și rezumarea efectului medicamentului prin „aromă” [2]. Cistanche este înregistrată în multe cărți medicale clasice antice. Are efectele hrănirii rinichilor și reumplerii esenței, umeziind intestinele și ameliorarea constipației. Încă din cele mai vechi timpuri, a fost folosită pentru a trata bolile legate de deficiența de rinichi, inclusiv disfuncția sexuală, infertilitatea feminină, pierderea esenței și sângele, durerea taliei și genunchilor, intestinele uscate și constipația etc. [3]. Amărăciunea medicinei tradiționale chineze este una dintre cele cinci arome ale teoriei tradiționale a medicinei chineze și este o bază teoretică importantă pentru ghidarea utilizării clinice a medicinei tradiționale chineze. Amărăciunea este una dintre cele cinci arome ale medicinei tradiționale chineze. Caracteristicile sale sunt purgative, uscarea și crearea [4] și joacă un rol important în ghidarea utilizării clinice a medicinei tradiționale chineze. Majoritatea medicamentelor tradiționale chinezești și preparatele tradiționale de medicină chineză au un gust amar. Medicina tradițională chineză consideră că substanțele aromate amare (denumite în continuare substanțe amare) în medicamentele amare sunt substanțele eficiente [5]. Cu toate acestea, relația dintre substanțele amare din medicamentele tradiționale chineze și eficacitatea lor amară este încă neclară. Există încă o lipsă de cercetări științifice relevante cu privire la faptul dacă substanțele amare din medicamentele tradiționale chinezești amare au o eficacitate amară. Cistanche conține o varietate de componente chimice, în principal glicozide feniletanol, eter de ciclopentan, lignani și glicozide, zaharuri, etc. În plus, conține, de asemenea, flavonoide, acizi fenolici, alcaloizi, uleiuri volatile, aminoacizi, elemente de tracțiune inorganică și alți componenți [6]. Printre aceștia, compușii cu glicozid feniletanol sunt considerați a fi principalele componente eficiente din Cistanche [7]. Cistanche Deserticola are două sezoane de recoltare: primăvara și toamna. Studiile au arătat că conținutul de polizaharide al Spring Cistanche Deserticola este scăzut, conținutul de glicozid de feniletanol este ridicat, iar gustul este amar, dar capacitatea sa antioxidantă este puternică [8]. Se poate observa că componentele sale amare au o anumită corelație cu eficacitatea medicamentului, dar baza materială a gustului amar al Cistanche Deserticola este încă neclară, ceea ce poate limita dezvoltarea sa ulterioară.

Pentru a explora baza de substanță amară aCistanche DeserticolaȘi relația sa cu eficacitatea amară (relația de efect de gust), acest studiu a luat extractul de cistanche deserticola ca obiect de cercetare și a analizat substanțele amare din Cistanche Deserticola prin cromatografie lichidă de performanță ultra-înaltă-quadrupol-electrostatic orbitrap orbitrap de înaltă rezoluție de înaltă rezoluție, tehnologie de masă și moleculară; Conținutul principalelor componente medicinale amare a fost determinat deCromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC), iar conținutul fiecărei categorii majore de substanțe amare a fost determinat de spectrofotometrie vizibil UV. Gradul de amărăciune a fost evaluat prin limbă electronică, iar componentele amare au fost găsite în combinație cu chimometria; și tehnologia de farmacologie a rețelei a fost utilizată pentru a efectua calea KEGG și a analiza de îmbogățire a GO pe țintele substanțelor amare din medicina tradițională chineză, iar țintele substanțelor amare au fost corelate cu țintele eficacității lor amare, astfel încât să exploreze relația dintre substanțele amare și eficacitatea amară în medicina tradițională chineză. Ideile de cercetare sunt prezentate în figura 1. Acest studiu a utilizat pe deplin metodele de cercetare tehnologică modernă pentru a explora informațiile despre gust ale Cistanche Deserticola, dezvăluind baza sa materială amară și relația cu efect de gust. It is expected to provide a reference for the scientific analysis of the material basis of taste of traditional Chinese medicine, and provide a basis for the in-depth and precise development and utilization of Cistanche deserticola resources, making the five flavors theory clearer, more objective, and standardized, scientifically explaining the scientific connotation of the bitterness theory, and providing research ideas and references for exploring the true taste and efficacy relationship of the material basis of the nature and flavor of traditional Medicină chineză.

 

 

Fig. 1 Calea de studiu privind relația dintre substanțele cu prezență amară și eficacitatea amară a extractelor de cistanie deserticola

 

1 Materiale

1.1 Materiale medicinale

Probele proaspete de cistanie deserticola au fost colectate în Aksu, Xinjiang, din aprilie până în decembrie 2023. Probele au fost identificate de Li Mingjie, farmacist la Spitalul Poporului din județul Shaya, ca tulpini cărnoase uscate cu frunze de scară a Cistanchei Deserticola, o plantă a genului Cistanche în familia Orobanchaceae. Exemplarele de voucher au fost păstrate în laboratorul de cercetare a farmaciei de la Universitatea Medicală Xinjiang. Probele au fost curățate de impurități, felii proaspete și albite în apă timp de 5 minute în funcție de literatura de specialitate, apoi procesate, uscate la 60 de grade, zdrobite și cernute printr -o sită de plasă 40-, vezi Tabelul 1.

 

Eșantioane de masă Informații despre Cistanche Deserticola

 

Nu.	Cod	Timp de colectare	Pretratare înainte de uscare	Site de detectare
1	M1	2023-04-10	Întreg - felii de plante	Integral plantă
2	M2	2023-05-08	Întreg - felii de plante	Integral plantă
3	M3	2023-06-15	Întreg - felii de plante	Integral plantă
4	M4	2023-07-10	Întreg - felii de plante	Integral plantă
5	M5	2023-08-11	Întreg - felii de plante	Integral plantă
6	M6	2023-09-10	Întreg - felii de plante	Integral plantă
7	M7	2023-10-09	Întreg - felii de plante	Integral plantă
8	M8	2023-11-14	Întreg - felii de plante	Integral plantă
9	M9	2023-12-10	Întreg - felii de plante	Integral plantă
10	P1	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Epidermă superioară
11	P2	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Cortexul superior
12	P3	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Pith superior
13	P4	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Epidermă mijlocie
14	P5	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Cortexul mijlociu
15	P6	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Pith de mijloc
16	P7	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Epidermă inferioară
17	P8	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Cortex inferior
18	P9	2023-08-11	Secțiune - felii specifice	Pith inferior

 

1.2 Baze de date și software

Tcmsp (https://tcmspw.com/tcmsp.php), GeneCards (https://www.genecards.org), Omim (https://www.omim. (https://string-db.org), Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/), David (https://david.ncifcrf.gov/), Alphafold Protein Structure Database (https://alphafold.ebi.ac.ak (https://alphafold.ebi.ac.uk/) au fost utilizate pentru andocarea moleculară. IBM SPSS Statistis 25 a fost utilizat pentru analiza Pearson. Software: Analiza Asociației Gray a fost efectuată folosind site-ul online SPSSPRO (https://www.spsspro.com), a fost efectuată o analiză discriminantă cu cel puțin pătrate ortogonale (OPLS-DA), folosind software SIMCA14.1, iar analiza farmacologiei de rețea a fost efectuată folosind software-ul citoScape.

 

1.3 Instrumente și reactivi

Vanquish Cromatograf lichid cu performanță ultra-înaltă, Spectrometru de masă Orbitrap Exploris 120 de înaltă rezoluție (Thermofisher Scientific, SUA); Sa -402 b Limba electronică (insent, Japonia); Lc -20 un cromatograf lichid de înaltă performanță (shimadzu, Japonia); Spectrofotometru vizibil UV (Shanghai Youke Instrument Co., Ltd.); AUW2200 Electronic Balance (fabrica Shimadzu Philippines); SK250 Ultrasonic Cleaner (Shanghai Kedao Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); DHG -9246 Un cuptor electric de temperatură constantă de uscare (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.); Plusel+Instrument de apă Ultrapure Chorusl (Veolia, Franța).
Substanțele de referință echinacoside (puritate mai mare sau egală cu 98%, număr de lot PCL-#-A003), verbascosid (puritate mai mare sau egal cu 98%, număr de lot PCL-#-M235), tubulozid A (puritate mai mare sau egal cu 99%, număr de batch PCL-#-T003), număr de scutilarină (puritate, sau egală cu 99%, batch număr PCL-#-D005) și izovalascosid (puritate mai mare sau egală cu 98%, numărul de lot PCL-#-I236) au fost achiziționate de la Sichuan Puxi'ao Standard Material Technology Co., Ltd.; Geniposidul substanțelor de referință (puritate mai mare sau egală cu 98%, numărul de lot WP23120502), rutina (puritate mai mare sau egală cu 98%, numărul de lot WP32110405), acidul galic (puritate mai mare sau egal cu 98%, numărul de lot Wp32140706) și numărul de betaine (puritate mai mare decât egală WP33654874) au fost achiziționate de la Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.; Sarea Reinsteinului, glucoza anhidră (grad analitic), acetonitril, metanol (grad cromatografic) și acid fosforic au fost achiziționate de la Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.