Care sunt beneficiile polizaharidei Cistanche asupra funcției imune

Contact: emily.li@wecistanche.com

Activitatea imunologică și mecanismul polizaharidei Cistanche

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Abstract]Obiectiv: Studiereaimunactivitatea deCistanchePolizaharidă(CDPS) și mecanismul acestuiaimunreglare in vitro. Metode: Metoda colorimetrică cu albastru tiazol (MTT) a fost utilizată pentru a observa efectul de reglare al CDPS (Polizaharidă Cistanche) pe IQS DEX TNF care inhibă proliferarea limfocitelor timice de șoarece in vitro; CDPS (Polizaharidă Cistanche) a fost utilizat pentru a efectua analiza ciclului celular și ciclului celular folosind citometria în flux. Determinarea Ca2 intracelular. Rezultate: CDPS (Polizaharidă Cistanche) la o concentrație mai mare poate rezista efectului inhibitor al ISQDEX asupra proliferării limfocitelor și efectului inhibitor al TNF cu concentrație mare asupra proliferării limfocitelor și să sinergizeze efectul de promovare a proliferării al concentrației scăzute de TN F asupra limfocitelor; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Polizaharidă Cistanche) poate crește semnificativ celulele în faza de diviziune; concentrație mai mare (100 ug/ml) CDPS (Polizaharidă Cistanche) poate promova semnificativ concentrația ionului de Ca în timocitele de șoarece. Concluzie: CDPS (Polizaharidă Cistanche) poate promova celulele să intre în faza de diviziune și se deduce că efectul său de promovare asupra proliferării limfocitelor timice de șoarece este legat de promovarea eliberării de calciu în limfocitele timice de șoarece.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) este un material medicinal chinezesc rar și prețios în țara mea. Este listat ca clasa superioară în „Shen Nong’s Materia Medica”.Cistancheare funcțiile de a hrăni sângele, de a hrăni rinichii și de a ajuta yang, de a hidrata intestinele și de a întârzia îmbătrânirea. Cercetările farmacologice moderne arată căCistanchePolizaharidăpoate îmbunătăți pe cel al organismuluiimunfuncţie, promovează sinteza ADN-ului, întărește forța fizică, îmbunătățește inteligența și are efecte evidente anti-îmbătrânire [1]. Autorul a studiat reglementarea CDPS(Cistanche Polizaharidă), o componentă polizaharidă aCistanche, peimunfuncţiea limfocitelor de șoarece.

Polizaharidă Cistanchepromovareaproliferare alimfocite

1 Material și metode

1.1 Reactivi și medicamente.

RPM, I 1640 mediu: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamină: Shanghai Dongfeng Reagent Factory; Penicilină și streptomicina: Fabrica farmaceutică din China de Nord; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Fitohemaglutinină (PHA): Laboratorul Medical din Shanghai; Izoproterenol (ISO): Fabrica farmaceutică Shanghai Tianfeng; Mercaptoetanol: Compania Fluka; Ser de vițel nou-născut: Sijiqing Bioengineering Company; Dexametazona (DEX) a fost prezentat de Dr. Ma Liang, primul spital afiliat al Școlii de Medicină a Universității din Zhejiang; Tumor Suppressor Factor (TNF) a fost furnizat de Yu Yuehan, profesor, Departamentul de celule, Școala de Științe ale Vieții, Universitatea Zhejiang; Restul reactivilor sunt toți clase analitice produse pe plan intern.

1.2 Animale experimentale.

Șoarecii ICR, masculi, în vârstă de 68 de săptămâni, cântărind 18-20g, 22, au fost achiziționați de la Centrul pentru animale experimentale din Zhejiang.

1.3 Extracția polizaharidei Cistanche [2]:

CistanchePolizaharidăeste extras de laboratorul nostru! După zdrobirea drogului brutCistanche, este scufundat în etanol fierbinte, extras în apă clocotită și precipitat în etanol. Enzimă neutră combinată cu metoda Sewag pentru deproteinizare, cromatografia de schimb anionic DEAE-Sephadex A- 50 și cromatografia de filtrare cu gel Sephacry S{-200 pentru a obține o singură componentă a CDPS (Polizaharidă Cistanche)). Păstrați uscat, utilizați RPMI1640 incomplet pentru a face o anumită concentrație înainte de utilizare și sterilizați prin ultrafiltrare

1.4 Prepararea limfocitelor splinei și timusului [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, ajustați concentrația celulelor splinei la X 10 /ml și concentrația de timocite la × 10 grade /ml

1.5 Reacția de proliferare a limfocitelor:Conform metodei Mosmanmn [4] Îmbunătățire: 96-placă de cultură celulară de godeu, adăugați 10/ml suspensie de celule splinei sau apă 10/ml suspensie de timocite 100M1 și diferite concentrații de medicamente 10041 în fiecare godeu. Cultivați într-un incubator cu CO2.37C timp de 72 de ore. Cu 4 ore înainte de sfârșitul culturii, adăugați 8μ1 de MTT (5 mg/ml) în fiecare godeu. La sfârșitul culturii, se aspiră 150"1 din supernatant din fiecare godeu și se adaugă clorhidrat de izopropanol 0,5N 150M1. Agitați ușor micro-agitatorul pentru a dizolva complet cristalele albastre. Măsurați OD570 pe cititorul de microplăci. Setați fiecare experiment experimental. punct ca trei godeuri replicate.

1.6 Determinarea influenței asupra ciclului celular [5]:

{{0}}placă de cultură celulară de godeu, adăugați 4 10 grad /ml suspensie de timocite 1 ml în fiecare godeu, adăugați diverși reactivi și soluție de polizaharidă la 2 ml în CO puternic, 37 de incubatoare După cultivare timp de 72 de ore, centrifugați la 1500r/min timp de 15 minute, aruncați supernatantul, adăugați 7 etanol pentru a fixa celulele precipitate, depozitați la 4°C pentru testarea în așteptare, spălați celulele de două ori cu PBS, centrifugeți la 1500r/min timp de 15 minute, aruncați supernatant și se adaugă După ce 0,5 ml0,1 RNaseA au fost digerate la 4°C timp de 30 min, 50 ug/ml bromoacetat au fost colorate timp de 30 min la 4°C și intensitatea fluorescenței probelor de celule a fost măsurată pe citometrul de flux FACScan. 10,000 puncte de testare celulară au fost colectate pentru fiecare probă, iar datele au folosit analiza software-ului Mul tricycle.

1.7 Determinarea concentrației intracelulare a ionilor de calciu [6]

Luați timocitele de șoarece în același mod ca mai sus. Se suspendă în mediu de cultură incomplet RPMIl640 și se ajustează concentrația celulară la × 10'/ml. Adăugați 1 ml de suspensie de timocite și 1 μM în fiecare tub experimental Soluție de colorare Fluo-3AM 5μ1, 2% F-275μ1, după incubare la 37°C timp de 30 de minute, spălați de două ori cu RPM1640 incomplet, 1500r/ min, se centrifug timp de 10 min, se aruncă supernatantul și se adaugă diferite concentrații de polizaharide și polizaharide la celulele precipitate După ConA, intensitatea fluorescenței a fost măsurată pe citometrul de flux FACScan. Datele a 10,000 puncte de testare celulară au fost colectate pentru fiecare probă și analizate cu software-ul CELLQUEST. 1.8 Pentru analiza varianței s-au folosit metode statistice, iar ciclul celular și măsurarea ionilor de calciu au fost analizate cu ajutorul software-ului citometrului de flux.

Cistanche Polizaharidă din Cistanche deserticola

2 Rezultate

2.1 Polizaharidul Cistanche in vitro inhibă proliferarea limfocitelor timice de șoarece prin ISO DEX TNF

Agonistul receptorilor adrenergici izoproterenol (ISO) și o clasă de hormon de cortex suprarenal dexametazonă (DEX) inhibă proliferarea limfocitelor CDPS (Polizaharidă Cistanche) la o concentrație mai mare (75 125ug/ml) poate rezista efectului inhibitor al ISO DEX asupra proliferării limfocitelor (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polizaharidă) (125 ug/ml) la o concentrație mai mare poate rezista efectului inhibitor al TNF și poate promova sinergic proliferarea limfocitelor cu concentrație scăzută de TNF (Figura 2)

2.2 Reglarea polizaharidei Cistanche a ciclului limfocitelor timusului

CDPS (CistanchePolizaharidă) 25 ug/ml 100ug/ml 200#g/ml trei concentrații au fost acționate asupra limfocitelor timice de șoarece timp de 72 de ore, conținutul de ADN din celule a fost măsurat prin FACS și indicele de proliferare (PI) a fost calculat conform formulei. Rezultatele arată că atât 100 ug/ml, cât și 200 ug/ml pot crește semnificativ celulele în faza de divizare, iar indicele de proliferare (68,0 la sută, 56,6) al ambelor sunt semnificativ mai mari decât grupul de control (44,6) și 200 ug/ml. grupul este puțin mai mic decât grupul 100ug/ml deoarece, la concentrația de 200ug/ml, efectul său asupra proliferării celulare a devenit o tendință descendentă [7]. Valoarea PI (47,5 la sută) a grupului de 25 ug/ml nu a fost semnificativ mai mare decât cea a grupului de control.

2.3 Efectul polizaharidei Cistanche asupra concentrației ionilor de calciu în timocitele de șoarece

Rezultatele experimentale arată că o concentrație mai mare (100 ug/ml) de CDPS (Cistanche Polizaharide) poate favoriza semnificativ creșterea concentrației ionilor de calciu în timocitele de șoarece În comparație cu lotul martor, există o diferență semnificativă (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Discuție

Cistanche, cunoscut în mod obișnuit ca„Ginsengul din deșert„, este o tulpină cărnoasă uscată, solzoasă aCistanche.Cistancheare funcțiile de hrănire a rinichilor yang, a esenței hrănitoare, a sângelui și a intestinelor. Aparține unui fel de excitare a cortexului hipofizo-suprarenal sau are un efect asemănător hormonal similar cortexului suprarenal. Un medicament chinezesc valoros care poate reglaimunfuncţiea corpului. Rezultatele cercetării noastre anterioare arată că CDPS (Polizaharidă Cistanche) in vitro poate promova proliferarea limfocitelor T timice care nu au fost activate sau activate de ConA PHA. În combinație cu ConA PHA, există două tipuri de stimulatoare de celule T, credem că CDPS (Polizaharidă Cistanche) este un badjuvant pentru celulele T și am constatat, de asemenea, că CDPS (Polizaharidă Cistanche) poate crește semnificativ secreția de limfocite splenice de șoarece la concentrații mai mari [8]

Unele studii au descoperit că TNF recombinant poate provoca apoptoza grupurilor normale de limfocite T umane și de șoarece in vitro și acest efect poate fi potențial inhibat de IIL-2 IL-1 IFN și IIL-4 cu dexametazonă (DEX) Poate inhiba proliferarea limfocitelor prin inhibarea expresiei și secreției limfocitelor de IL-2 și scăderea producției de IL-2R cu afinitate ridicată. Acest experiment a constatat că o concentrație mai mare de CDPS (CistanchePolizaharidă) poate contracara efectele concentrației mari de TN F asupra proliferării limfocitelor. Inhibarea, sinergică cu concentrația scăzută de TNF pentru a promova proliferarea limfocitelor și poate contracara efectul inhibitor al ISQ DEX asupra proliferării limfocitelor. Aceste efecte sunt tocmai prin CDPS (CistanchePolizaharidă) pentru a promova proliferarea limfocitelor T și sunt autocrine de către celulele T IL-2 și alte citokine pentru a se completa.

În ultimii ani, au existat multe studii privind efectele imunofarmacologice ale polizaharidelor din plante, dar puține studii asupraimunmecanismul de reglare a polizaharidelor, în special calea de transducție a semnalului a polizaharidelor care acționează asupra limfocitelor cu Ca2 ca mesager secund. Nu există niciun raport. Acest experiment a efectuat cercetări preliminare în acest domeniu. Moleculele de semnalizare intracelulară includ cAM R Ca", IP3 DG cGMP etc., printre care Ca" are un efect fiziologic extrem de important asupra celulelor. Creșterea concentrației intracelulare de Ca² este un fenomen important în stadiul incipient al activării și proliferării limfocitelor. Acest proces are loc în principal în primele zeci de secunde până la minute când celulele sunt activate de stimulatori. Modul clasic de activare a celulelor T este fosfatidilinozitol (PIB) pentru a metaboliza mușchiul fosfatidil. Metabolitul alcoolului 1,4.5-inozitol trifosfat (IP3) poate promova eliberarea de Ca” stocat în rețeaua interioară prin legarea de receptorii rețelei interioare, crescând nivelul de Ca2 intracelular și concentrația de Ca intracelular. * creste.Ridicat poate favoriza producerea de NF-AT (factor nudeic al celulei T activate), acesta din urma are ca efect promovarea expresiei genei IIL-2.Rezultatele experimentale arata ca o concentratie mai mare (100ug/ml ) din CDPS (CistanchePolizaharidă) este eficient timp de 5 10 min. Timpul are un efect semnificativ asupra creșterii concentrației de Ca* în timocitele de șoarece și are un efect sinergic cu ConA. Prin urmare, speculăm că CDPS (Polizaharidă Cistanche) promovează eliberarea de calciu în limfocitele timice de șoarece pentru a crește concentrația intracelulară a ionilor de calciu. Creșterea promovează expresia genei IL-2 și duce la proliferarea celulelor T, care este unul dintre fundamentele teoretice aleCistanchePolizaharideleefect de reglementare asupra organismului

Polizaharidă Cistanche

Referințe

1. IN XiuHin, SU Yuke (Situația generală a cercetării farmacologice peCistancheSka 【J】. Medicamente chinezești tradiționale și pe bază de plante ((medicina chinezească pe bază de plante). 1993.24(10. 550-552(în chineză))

2. ZHANG Weijiee (Tehnologia biochimică a polizaharidei compuse [M]. Hangzhou Zhejiang University Pres (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (în chineză)

3. MA Bo- (Ma Baoli).Tehnica imunologie【M1. Shanghai Medical University Press (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n chinezi))

4. Testul Mosmann T. Rapiloloimeric pentru o aplicare mai ușoară a creșterii și supraviețuirii la eliminarea proliferării și a citotoxicității [JJ Immun Meth.1983,6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n, et al (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian, etc.), Efectul zincului asupra proliferării celulelor ciclice înimunanaliza organelor folosind citometria în flux [J]. Chinese immunology (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10X5: 278-281. (în chineză)

6. TAO axină. JIYong-yong, GAO Qi-rong și colab. (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong etc.). Analiza FACS a modificărilor C2 intracelular în timpul elactivării[J] Chinese journal of immunology (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (in chineza)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU suchiang; Purificare d polisacdarid deCistancheDeserticolaYC Mfa și efectele sale imunomodulatoare asupra Tellfunction[J].burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (în chineză)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH Cytotoxic Efed of TNF and Lymphotoxin on T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.