Strategie anti-iritantă împotriva retinolului bazată pe analiza genetică a populației coreene: o abordare de sus în jos ghidată genetic

Cuvinte cheie: retinol; retinoid;produse cosmetice; anti-iritare; personalizat genetic; polimorfisme cu un singur nucleotide

Faceți clic aici pentru a obține mai multe informații despre tratamentul anti-îmbătrânire Cistanche

1. Introducere

Retinoizii, o familie de compuși derivați din vitamina A care include atât compuși sintetici, cât și naturali, au fost studiati intens și utilizați în diverse aplicații biomedicale, cum ar fitratament pentru cancer(leucemie mieloidă acută), neoplazie cervicală, șitulburări ale pieliiîn ultimele decenii. Aplicarea largă a retinoizilor, în special a acidului retinoic, se bazează pe premisa științifică căacid retinoiceste implicat în numeroase căi biologice din natură prin declanșarea interacțiunilor între receptorii nucleari care controlează expresia genelor [1–5]. Una dintre cele mai izbitoare aplicații ale retinoizilor este abordarea dermatologică, împreună cu medicamentele farmaceutice și produsele cosmetice. Deoarece retinoizii au fost utilizați pentru prima dată pentru tratamentul acneei în anii 1940, este raportată eficiența terapeutică a acestuia împotriva afecțiunilor pielii, cum ar fi keratoza actinică, psoriazisul și ihtioza [6]. Deoarece multe studii științifice și studii clinice au demonstrat eficacitatea terapeutică a tretinoinei (acidul all-trans retinoic) asupra fotoîmbătrânirii, a fost declanșată dezvoltarea derivaților retinoizi pentru utilizare ca ingrediente cosmetice. Retinoizii cosmetici, care includ palmitatul de retinil, acetatul de retinil, retinolul și retina, au fost investigați intens pe piața comercială, deoarece acidul retinoic a fost interzis în produsele cosmetice prin reglementări globale, cum ar fi Anexa II 375 (EC 1223/2009). Unele studii au arătat că acești retinoizi cosmetici sunt eficienți și pentru tratamentul fotoîmbătrânirii, ale căror caracteristici patologice implică ridurile fine și grosiere, rugozitatea pielii și pigmentarea anormală și chiar au susținut că sunt puternici ca tretinoina [7].

Cu toate acestea, retinoizii provoacă iritații și unele efecte secundare caracterizate prin eritem, descuamare, arsură și mâncărime, care sunt denumite și dermatită retinoidă [8]. Unele studii au investigat mecanismul iritației și se sugerează că diverse mecanisme sunt implicate în iritația indusă de retinoizi, care includ inflamația extinsă și pervazivă caracterizată prin eliberarea de citokine și infifiltrarea celulelor imune [9], precum și întreruperea barierei cutanate caracterizată prin dezechilibrul genetic al factorilor legați de plicul cornifificat (CE) [10,11]. În plus, s-a sugerat pe scară largă că fototoxicitatea retinoidului și a subprodușilor săi degradați din cauza instabilității sale sub UV și căldură contribuie la iritația indusă de retinoid [12]. Cu toate acestea, aceste observații sunt insuficiente pentru a explica în detaliu iritația indusă de retinoizi și nu s-a ajuns la o concluzie clară până în prezent. Din acest motiv, produsele actuale pe bază de retinol au de obicei o formulă antiinflamatoare „obositoare”, care este utilizată în general și universal în produsele comerciale generale. Prin urmare, o strategie anti-iritare împotriva retinolului, bazată pe un fundal științific puternic, nu a fost încă stabilită.

O abordare genetică poate fi o altă soluție pentru stabilirea unei strategii anti-iritare împotriva retinolului. Variațiile genetice au fost studiate pe larg pentru a descoperi gene asociate cu eficacitatea medicamentului și efectele secundare [13]. Nelson şi colab. au arătat că medicamentele prezise de asociații genetice cunoscute reprezintă doar 2,0 la sută din medicamente în stadiul preclinic, deși proporția crește la 8,2 la sută în medicamentele aprobate [14]. Acest lucru implică faptul că concentrarea asupra țintelor descoperite de studiile genetice ar crește dramatic șansa dezvoltării de succes a medicamentelor, așa cum s-a demonstrat cu medicamentele pentru colesterol sau artrita reumatoidă [15-18].

Tratamentul cu retinol induce modificări în expresia factorilor de transcripție legate de creșterea celulară [19] și proteinele structurale [11]. Mai precis, o varietate de proteine ​​au fost implicate în iritația indusă de retinol, care includ citokine legate de inflamație (MCP-1, TNF-a, interferoni și interleukine) [9], receptorul acidului retinoic (RARG) [9]. 20], vaniloid 1 al receptorului tranzitoriu al canalului de detectare a durerii (TRPV1) [21] și GPCR activator de mastocite (MRGPRX2) [22]. Cu toate acestea, majoritatea studiilor genetice au fost limitate la o singură genă sau cale, iar mecanismul cuprinzător al dermatitei retinoide rămâne de elucidat. Prin urmare, a fost efectuată o analiză „genă candidată” a iritației induse de retinoizi pentru a detecta anti-iritanți împotriva dermatitei retinoide, iar rezultatele acesteia se vor adăuga la actualul grup de gene țintă pentru studiul dermatitei retinoide.

2. Materiale și metode

2.1. Design de studiu

Acest studiu a fost conceput așa cum se arată în Figura 1. Pe scurt, a fost efectuată fenotiparea iritației induse de retinol din prima evaluare clinică a 173 de coreeni. Prin analiza genetică, markerii genetici au fost verificați și au fost investigate antiiritanții și formulele. În continuare, au fost efectuate un studiu pilot la scară mică (n=7) și o evaluare clinică la scară largă (a doua, n=91) ​​pentru a verifica eficacitatea anti-iritant a formulei nou dezvoltate.

Figura 1. Proiectarea studiului. Diagrama superioară (diagramă) ilustrează procedura generală a studiului. Tabelul de jos indică principalele trei teste pe bază de om. Retinolul 1IU se referă la 3×10−5 la sută cu formularea. g;5000IU=0.15 procente g/g).

2.2. Fenotiparea iritației induse de retinol

au fost informați despre ingredientele cremei înainte de experiment, iar participanții care au experimentat iritații ale pielii la oricare dintre ingredientele din cremă, cu excepția retinolului, au fost excluși din experiment. Procedura detaliată este descrisă în Informațiile de sprijin.

2.3. Microarray cu polimorfism cu un singur nucleotidă (SNP).

ADN-ul genomic a fost extras din probe de salivă folosind QIAmp Mini Prep Kit (QIAGEN, Germantown, MD, SUA). Genotiparea a fost efectuată utilizând cip versiunea 2 a testului Global Screening conform protocolului de testare Illumina Infifinium High-Throughput Screening (HTS) (Illumina, San Diego, CA, SUA). Intensitatea mărgelelor a fost obținută folosind instrumentul iScan® și ulterior utilizată pentru a produce date genotipului folosind software-ul GenomeStudio® (Illumina, San Diego, CA, SUA).

Controlul calității datelor genotipului a fost efectuat de preferință în următoarele condiții: Dintre probele genotipizate, au fost excluși indivizii cu o rată de apelare a genotipului mai mică de 98%. Pentru variantele genotipizate, SNP-urile cu rate de apel mai mici de 98%, frecvențele alelelor minore mai mici de 1%, abaterea de la echilibrul Hardy-Weinberg (valoarea p HWE <1 × 10-6) și cele care au mai mult de două alele au fost excluse. Dintre cei 173 de indivizi genotipați, 159 au trecut criteriile QC și au fost selectați pentru analiză ulterioară.

2.4. Evaluarea iritației

Cele două tipuri de creme, și anume crema de control cu ​​5000 UI retinol și crema pe bază de formulă antiiritant (AF) cu 5000 UI retinol, au fost administrate la șapte persoane (trei bărbați și patru femei) în cadrul studiului pilot. Indivizii și-au aplicat cremele pe față înainte de culcare în felul următor: o cremă pe o jumătate a feței și alta pe cealaltă jumătate a feței. Subiecții testului au fost orbiți față de crema care conținea formula antiiritantă (single-blind). După trei zile de aplicare, subiecților li s-a cerut să înceteze aplicarea timp de 4 zile. Roșeața pielii și pierderea de apă transepidermică (TEWL) au fost măsurate folosind un cromametru (CR-400, Konica Minolta, Osaka, Japonia) și respectiv Tewameter® (TM 300 E, Courage plus Khazaka electronic GmbH, Köln, Germania). Pentru a măsura pragul de presiune al durerii (PPT), a fost fabricat și utilizat un algometru cu un diametru al sondei de 1 mm combinat cu un cilindru. Înainte de măsurare, fețele subiecților au fost curățate și aclimatizate timp de 20 de minute într-o cameră cu aer condiționat (temperatura, 23 ± 2◦C; umiditate relativă, 50 ± 10 la sută).

Având în vedere că iritația indusă de retinoizi declanșează o gamă extrem de largă de tipuri și severitate de iritație, se pare că liniile directoare tradiționale de măsurare a iritației care se concentrează în principal pe eritemul propuse de ghidurile Frosh și CTFA [23] nu califică sau cuantifică în mod eficient aceste iritații. Prin urmare, am reproiectat ghidul de autoevaluare pentru iritația pielii, așa cum se arată în tabelul S1 (a se vedea Materialele suplimentare). Această autoevaluare a fost efectuată într-un mic studiu pilot și o a doua evaluare clinică la scară largă.

2.5. Pregătirea celulelor și experimentul in vitro

Informații detaliate privind prepararea celulelor și procedurile experimentale in vitro sunt furnizate în Informațiile suplimentare. Pe scurt, keratinocitele, fifibroblastele, mastocitele și HEK-urile care supraexprimă TRPV{{{0}}au fost cultivate folosind propriile protocoale și experimente de cultură. Au fost analizate RT-PCR, eliberarea de hexozaminidază și afluxul de calciu. 2.6. Analiza statistică Analiza statistică a fost efectuată folosind SNP și Variation Suit (SVS) v8.9.0 (Golden Helix, Bozeman, MT, SUA) și PLINK 1.90 (Cambridge, MA, SUA) [24]. Pentru analiza genelor candidate, SNP-urile din genele candidate (inclusiv regiunea promotor -2 kb și regiunea din aval 500 bp) au fost extrase. Semnificația statistică a asociațiilor și a cotelor au fost determinate printr-un test de asociere a genotipului cu un model aditiv. Înainte de calcularea scorului de risc poligenic, a fost examinat dezechilibrul de legătură (LD) și SNP-urile au fost selectate folosind Haploview 4.2 (Cambridge, MA, SUA). [25]. Pentru analiză au fost utilizate alele care au prezentat o tendință crescută de iritație indusă de retinol. Scorul de risc poligenic a fost calculat ca suma ponderată a cotelor de șanse ale fiecărei alele [26]. Preprocesarea datelor de intrare, generarea unui subset aleatoriu de participanți pentru validare repetată și calculul scorului de risc poligenic au fost efectuate folosind un cod scris personalizat în R v.4.0.3. GraphPad Prism v7.04 (GraphPad Software, San Diego, CA, SUA) a fost folosit pentru vizualizarea datelor. Barele de eroare ale căror valori au fost obținute prin împărțirea fiecărei abateri standard la rădăcina pătrată a numărului de probe sunt prezentate în figuri.

În analiza ratei de apariție a iritației pe baza întrebării dihotomice (dacă crema cu retinol este iritantă: D/N), a fost efectuat testul chi-pătrat pentru a investiga semnificația statistică.

3. Rezultate si discutii

3.1. Propunerea de gene țintă pentru screening-ul antiiritanților la iritația indusă de retinol

3.1.1. Prima evaluare clinică - Aplicarea topică a retinolului și analiza proprietăților sale iritante

Am investigat proprietățile iritante ale retinolului și relația acestuia cu sensibilitatea pielii la 173 de indivizi coreeni. Au aplicat retinol timp de 3 zile, care a fost urmat de o pauză de 4 zile pe săptămână timp de 3 săptămâni, fiecare concentrație de retinol crescând treptat în fiecare săptămână (2500 UI în prima săptămână, 3300 UI în a 2-a săptămână și 5000 UI în a 3-a săptămână). Apoi, am analizat chestionarul primit în urma experimentului pentru a investiga factorii legați de iritația indusă de retinol.

O proporție mai mare de participanți din grupul de piele sensibilă au raportat că au experimentat iritații în comparație cu grupul de piele nesensibilă (Figura 2a). S-a demonstrat, de asemenea, că persoanele care aparțin grupului de piele sensibilă au de aproximativ trei ori mai multe șanse de a avea experiență anterioară de a opri utilizarea produselor cosmetice din cauza iritației pielii (Figura 2b). Printre cei cu experiențe anterioare de iritare, majoritatea persoanelor au răspuns că produsele cosmetice de bază au declanșat iritații, care a fost urmată de produse de protecție solară, de curățare și cosmetice (Figura 2c). O proporție mai mare de indivizi care au avut iritații ale pielii cu produse cu retinol în trecut au răspuns că au avut iritații în acest experiment, comparativ cu cei care nu au experimentat iritații când au folosit produse cu retinol în trecut (Figura 2d). Acest rezultat a arătat că iritația indusă de retinol tinde să apară în mod repetat, în funcție de indivizi, ceea ce susține ipoteza că factorii genetici ar putea afecta sensibilitatea la retinol. Studiile anterioare au arătat că variațiile genetice afectează în mod semnificativ biodisponibilitatea retinolului și a retinoidului, ceea ce susține că factorii genetici ar putea guverna și iritația indusă de retinol [27,28].

Tipul de iritație indusă de utilizarea retinolului variază foarte mult în funcție de indivizi. Cu toate acestea, înțepătura a fost cea mai frecventă, care a cuprins aproximativ trei sferturi din iritații și a fost urmată de arsură, mâncărime și eritem (Figura 2e).

(c) Proporția persoanelor care suferă de iritații atunci când folosesc produse cosmetice de bază. (d) Proporția persoanelor cu experiență anterioară de iritare la produsele care conțin retinol. (e) Tipurile de iritații pe care le-au experimentat persoanele în timpul utilizării produselor topice care conțin retinol; * valoarea p < 0.05; *** valoarea p < 0,001; ns, nu este semnificativ.

3.1.2. Analiza genetică candidată pentru iritația indusă de retinol

Pentru a descoperi variante genetice asociate cu sensibilitatea pielii la retinol, am ales 14 gene candidate care sunt binecunoscute pentru funcțiile lor în metabolismul retinoidului și sensibilitatea pielii (Tabelul S2). Ne-am referit la analiza transcriptomică anterioară a pielii reconstituite 3D sub tratament cu sensibilizatori [29].

Un total de 319 SNP-uri situate în genele candidate au fost selectate și utilizate pentru analiza de asociere folosind modelul aditiv. Treizeci de SNP au fost asociate în mod semnificativ cu iritația indusă de retinol, niciunul dintre acestea nu a fost raportat anterior (p < 0.05; Tabelul 1). În detaliu, un total de 12 SNP au fost găsite în RARB, trei în EGFR, trei în CD44, două în IL18, două în IL4R și patru în BCL2. Celelalte patru gene, CD86, RXRB, MMP10 și COL6A2, au inclus SNP-uri unice. SNP-urile descoperite aparțineau a 10 gene, dintre care două erau gene legate de retinol, iar restul de opt erau legate de sensibilitatea generală a pielii, conform studiilor anterioare. Dintre cele 10 gene, am selectat cele mai importante trei gene în ceea ce privește iritația pielii: COL6A2, EGFR și IL-4R.

S-a demonstrat că COL6A2, care codifică unul dintre cele trei lanțuri alfa de colagen de tip VI găsite în majoritatea țesuturilor conjunctive, reglează asamblarea matricei dermice și motilitatea fibroblastelor [30] și contribuie la remodelarea țesuturilor și la vindecarea rănilor [31,32]. Acest defect duce la formarea de cheloizi [33] și la fenotipuri anormale ale pielii [34]. Receptorul factorului de creștere epidermic (EGFR) este un regulator important al funcției de barieră epidermică. S-a demonstrat că semnalizarea EGFR inhibă competența învelișului cornificat și perturbă funcția de barieră a joncțiunii strânse în keratinocitele epidermice [35,36]. Pe lângă semnalizarea EGFR, se crede că o altă gamă largă de factori precum ADAM17 (o dezintegrină și metaloproteinază 17) [37] și canalul TRP [38] afectează funcția de barieră epidermică asociată sistematic cu EGFR.

În ultimele decenii, funcțiile și rolurile interleukinei 4 (IL-4) și ale receptorului său, IL-4R, au fost investigate pe larg. Ca un regulator cheie în sistemul imunitar umoral și adaptativ, IL-4, care este secretat în principal de mastocite și celulele Th2, induce diferențierea celulelor Th2 și stimulează celulele B. Deși rolul său nu este clar înțeles, multe studii au subliniat că IL-4 poate conduce la procese extinse pro- și inflamatorii, în timp ce defectul său s-a dovedit că conduce la boli alergice, boala Alzheimer și tumori [39]. De-a lungul aceleiași axe pentru răspunsul imun legat de IL-4-, IL-4R este exprimat omniprezent pe diferite celule imunitare, atât în ​​sistemul imunitar înnăscut, cât și în cel adaptiv. IL-4R este un receptor comun atât pentru IL-4, cât și pentru IL{-13 [40]. Spre deosebire de IL-4, care afectează direct diferențierea Th2, IL-13 este, de asemenea, responsabilă pentru activarea mastocitelor, care controlează funcția eozinofilelor și are efecte imunosupresoare și antiinflamatorii asupra macrofagelor prin suprimarea citokinelor proinflamatorii. și chemokine [41].

3.2. Abordare de sus în jos: screeningul anti-iritanți in vitro

3.2.1. Gene legate de repararea țesuturilor, COL6A2 și EGFR

Pe baza genelor selectate, am testat anti-iritanți care ar putea modula patogenia moleculară, cum ar fi controlul expresiei genelor țintă.

Rapoartele anterioare au arătat că retinoizii induc modificări fiziologice și morfologice în bariera cutanată [8,42,43]. S-a observat că tratamentul țesutului cutanat cu acid retinoic ex vivo și in vivo crește pierderea de apă transepidermală (TEWL), iar mai multe studii au arătat că această perturbare a funcției de barieră a pielii este mediată de un model de expresie dezechilibrat al învelișului cornificat și strâns. gene legate de joncțiune. Reglarea descendentă a filagrinei (FLG), loricrinei și CLDN1 și reglarea în sus a CLDN2, CLDN4 și o expresie semnificativ diferită a genelor membrilor familiei serpinelor au fost observate într-un studiu anterior, despre care se crede că este principala cauză a iritației induse de retinoizi. [10,11]. Am emis ipoteza că indivizii cu variații genetice în COL6A2 și EGFR tind să fie susceptibili la slăbirea funcției de barieră a pielii de către retinol, ceea ce duce la iritația indusă de retinol (Figura 3a). De asemenea, am considerat că, în afară de colagenul VI, colagenul IV este, de asemenea, un factor important în membrana bazală epidermică și procesul de vindecare a rănilor, deși rolul său exact în țesutul pielii rămâne neclar [44]. Am emis ipoteza că o deficiență sau o anomalie a colagenului VI și IV duce la susceptibilitatea la iritația indusă de retinol, iar supraexprimarea ambelor tipuri de colagen ar putea atenua slăbirea barierei cutanate indusă de retinol. Dintre diferitele substanțe, am observat că glucozamina a crescut expresia COL6A2 și COL4A2 de 1,5-ori, respectiv de 1,7-ori (Figura 3a, panoul din mijloc). Rolul modulator al glucozaminei asupra COL6A2 și COL4A2 nu a fost raportat înainte, ceea ce implică faptul că aceste observații sunt importante din punct de vedere științific.

În cazul EGFR, am luat în considerare cu atenție cercetările anterioare care indică faptul că acidul retinoic induce supraexprimarea acvaporinei 3 (AQP3) prin calea EGFR/ERK în keratinocitele umane [45]. În primul raport, am observat că nu numai acidul retinoic, ci și retinolul au indus expresia AQP3 de aproximativ două ori în fibroblaste (Figura 3a panoul din dreapta). Efectul de atenuare al supraexprimării AQP3 de către niacinamidă (nicotinamidă) este similar cu cel găsit într-un studiu anterior. Printre diferitele substanțe, trehaloza și eupatilina au atenuat supraexpresia AQP3 indusă de retinol. S-a raportat că eupatilina (5,7-dihidroxi{-3',4',6-trimetoxiflavonă), un tip de flavonoid găsit în Artemisa asiatica, îmbunătățește funcția de barieră a pielii în condiții patologice in vivo [46].

În plus, am investigat expresia FLG, care este un indicator principal al funcției de barieră a pielii. Similar cu studiile in vivo anterioare [47], am observat că retinolul a scăzut semnificativ expresia FLG cu aproximativ 45%, iar această scădere a fost inversată de niacinamidă, glucozamină și sucralfat (Figura S1a, vezi Materiale suplimentare).

În mod colectiv, glucozamina, trehaloza și sucralfatul ar putea atenua întreruperea barierei cutanate induse de retinol prin modularea expresiei COL6A2, AQP3 și FLG.

3.2.2. Gena inflamatorie: IL-4R

Apoi, am încercat să identificăm anti-iritanți legați de genele inflamatorii. Pe baza rezultatelor noastre ale analizei genetice, s-a demonstrat că persoanele care sunt predispuse la iritații induse de retinol tind să aibă markeri SNP pentru IL-4R, dar nu pentru IL-4. În primul rând, am investigat dacă tratamentul cu retinol modulează expresia IL-4 sau IL{-4R în mastocite, care este, de asemenea, un factor principal al inflamației asociate IL{-4-. Retinolul a indus supraexprimarea IL-4R 1.74-fold. Deși retinolul nu a indus supraexprimarea IL-4 (Figura S1b, vezi Materiale suplimentare), s-a observat că ectoina scade în mod eficient expresia IL{-4 a mastocitelor, ceea ce coincide cu studiile anterioare. care a argumentat efectele antiinflamatorii ale ectoinei în unele modele de boală, cum ar fi IBD (boala inflamatorie intestinală) și boala alergică a căilor respiratorii [48,49]. Mai precis, studiile anterioare au arătat că ectoina ar putea normaliza expresia IL-4 în inflamația pulmonară indusă de CNP (nanoparticule de carbon) într-un model in vivo, susținând rezultatele noastre experimentale [50].

Crocina, glucozamina și ectoina au atenuat supraexprimarea IL-4R provocată de retinol în mastocite, cu o scădere de 37,03%, 41,97% și, respectiv, 82,59%. Ectoina (acidul 1,4,5,6-tetrahidro-2-metil{-4-pirimidincarboxilic), un compus natural găsit în mai multe bacterii halofile, s-a dovedit că modulează multe citokine și chemokine în condiții inflamatorii, deși rolul ectoinei în ameliorarea expresiei IL-4R nu a fost încă elucidat. Observațiile noastre oferă perspective noi asupra funcției ectoinei. Studiul anterior efectuat de grupul nostru a arătat că ectoina la o concentrație optimă de 100 ppm a arătat cel mai mare efect antiinflamator împotriva efectelor retinoizilor și citotoxicitate neglijabilă în experimentul in vitro pe celule (datele nu sunt prezentate). De asemenea, am măsurat rata de eliberare a hexosaminidazei a mastocitelor, care este un indicator al degranulării mastocitelor (Figura 3b, panoul din dreapta). Ectoina nu a redus eliberarea de hexozaminidază indusă de retinol în retinol de 400 ppm, deși a redus eliberarea de hexozaminidază indusă de retinol în retinol de 200 ppm. În mod colectiv, se poate concluziona că ectoina poate ameliora inflamația legată de IL-4 și IL{-4R indusă de retinol. Având în vedere cercetările anterioare conform cărora ectoina intervine în activarea EGFR în inflamația pulmonară indusă de CNP [50], ectoina pare să fie, de asemenea, benefică pentru perturbarea barierei cutanate induse de retinol.

3.2.3. Inflamație neurogenă, adiponectină și TRPV1

O trăsătură distinctivă a iritației induse de retinol la pacienții extrem de sensibili la retinoizi este reacțiile asemănătoare alergiei, cum ar fi senzația de arsură rapidă și usturime, mâncărime, edem rapid difuziv și erupție cutanată. Un studiu a arătat că retinoizii, inclusiv retinolul și acidul retinoic, activează TRPV1 [21]. Prin urmare, emitem ipoteza că iritația indusă de retinol, în special care apare rapid în câteva minute, este mediată de activarea TRPV1 de către retinol.

Figura 3. Analiza pentru expresia ARNm pentru screeningul anti-iritanți care ar putea modula patogenia moleculară asociată iritației. (a) Investigarea patogenezei moleculare asociate cu perturbarea barierei cutanate Diagrama schematică pentru abordarea modulării genetice a retinolului (disruperea barierei cutanate indusă de ROL. (stânga) Expresia relativă a ARNm a COL4A2 și COL6A2 atunci când fifibroblastele au fost tratate cu glucozamină (în mijloc) și expresia relativă a ARNm a AQP3 (keratinocite, dreapta). (b) Investigarea patogenezei moleculare asociate cu inflamația (controlată de mastocit) Expresia relativă a ARNm a IL-4R atunci când RBL-2H3 a fost tratat cu 1 0 µM retinol și diferiți candidați. (c) Inflamație neurogenă mediată de TRPV1 indusă de retinol și efect antagonist de 4-t-butilciclohexanol și omega-9; Trei condiții pentru combinare: (1) 4-t-butilciclohexanol 25 µM și omega-9 5 µM, (2) 4-t-butilciclohexanol 50 µM și omega{-9 10 µM și (3) 4- t-butilciclohexanol 100 uM și omega-9 20 uM, BC, 4-t-butilciclohexanol; OA, acid oleic omega{-9 A fost prezentată o bară de scară de 50 um (albă); * p < 0,05; ns, nesemnificativ; a fost afișată bara de eroare; ppm, părți pe milion.

TRPV1, un cation neselectiv activat de diverși stimuli fizico-chimici, a fost studiat pe scară largă, în special rolul său în piele. [51–54] Deși TRPV1 nu a apărut în analiza genetică anterioară, trebuie remarcat faptul că adiponectina (ADIPQ) a apărut în unele modele de analiză cu semnificație statistică scăzută până la moderată. Un studiu anterior al populației coreene a arătat că fenotipul pielii „sensibile” pare să fie legat de deficitul de adiponectină, care, în consecință, contribuie la reglarea TRPV1 [55]. Celulele care supraexprima TRPV1-HEK293 au fost tratate cu retinol, iar activarea TRPV1 a fost confirmată prin imagistica afluxului de calciu. Am observat că retinolul ar putea activa TRPV1 într-o manieră dependentă de doză (Figura S1c, vezi Materiale suplimentare). La concentrații de peste 50 pM, efectul agonist asupra TRPV1 părea să atingă un platou. Pe baza unui studiu anterior, am investigat dacă 4-t-butilciclohexanolul și acidul oleic omega{-9 pot antagoniza activarea TRPV1 indusă de retinol. După cum era de așteptat, ambele substanțe pot antagoniza TRPV1, în timp ce la doze mici, acidul omega-9 oleic a fost mai puternic decât 4-t-butilciclohexanol (Figura S1d, vezi Materiale suplimentare). Combinația acestor două materiale a arătat un ușor efect sinergic asupra inhibării TRPV1 de către retinol. Trei concentrații diferite ale combinației de 4-t-butilciclohexanol și omega-9 au arătat o activare redusă a TRPV1 indusă de retinol, 28,25 la sută, 43,73 la sută și, respectiv, 68,50 la sută. Influxul de calciu în celule mediat de activarea TRPV1 a fost observat la microscopie fluorescentă (Figura 3c). În concluzie, am verificat că iritația indusă de retinol ar putea fi, de asemenea, legată de inflamația neurogenă mediată de activarea TRPV1 într-un model in vitro, iar 4-tbutilciclohexanolul și acidul oleic omega-9 ar putea fi utilizate pentru atenuarea neurogenului. inflamație prin antagonizarea TRPV1.

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950