Sunt saunele benefice sau dăunătoare pentru boala polichistică de rinichi autosomal dominant? Examinare cu mouse-ul model

Fundal abstract: 

Proteinele de șoc termic (Hsps), a căror expresie este indusă prin tratament termic, funcționează în protecția rinichilor prinsuprimarea apoptozeișimenținerea viabilității tubulare renale. Mai mult, recent, s-a indicat că expresia Hsps poate fi o țintă terapeutică pentru autosomaldominantăboala de rinichi cu chisturi multiple(ADPKD). Am investigat efectul terapiei cu saună uscată asupraADPKDșoareci model.

CLICK AICI PENTRU A OBȚINE EXTRACT DE CISTANCHE ORGANIC NATURAL CU 25% ECHINACOSIDE ȘI 9% ACTEOSIDE PENTRU FUNCȚIA RENICALE

E-mail:Wallence.Suen@Wecistanche.Com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Cumpărați pentru mai multe detalii despre specificații:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Metode și rezultate:

Șoarecii (șoareci masculi DBA/2FG-pay) au fost clasificați în trei grupuri: martori, TS: șoareci pcy supuși la saună prelungită cu apă administrată care conține 4% zaharoză, SW: șoareci pcy cărora li s-a administrat apă care conține 4% zaharoză. Grupul TS a fost supus la sesiuni de saună de două ori pe săptămână timp de patru săptămâni. Grupul TS a atins și a fost menținut la temperaturi rectale de aproximativ 39.0 grade, până când au fost îndepărtați cu grijă din dispozitivul cu raze infraroșii îndepărtate. După 4 săptămâni de tratament la saună, nivelurile de creatinine și uree-azot din sânge (BUN) au fost determinate printr-o metodă enzimatică. Proteina de șoc termic (HSP) sau proteinele legate de creșterea și dimensiunea celulelor au fost analizate prin western blot. Grupul TS a prezentat niveluri de creatinine și BUN marginal mai mari decât grupurile de control și SW, cu toate acestea, diferențele nu au fost semnificative. Cu toate acestea, mărirea chistului în grupul TS s-a redus semnificativ în comparație cu cea a grupului de control. Expresia HSP90 a fost ușor scăzută în grupurile TS și SW față de grupul de control (p < 0.01 sau p < 0,001, față de control), la fel ca și expresia Erk , care este legat de dezvoltarea și proliferarea chistului (p < 0,05, TS vs. control). Expresia Hsp27 și nivelul de fosforilare în grupul SW au fost comparabile cu cele ale grupului de control. Cu toate acestea, grupul TS a avut niveluri crescute de Hsp27 și fosforilare (NS). Expresia pro-caspazei-3 în grupul TS a fost marginal mai mică decât cea în grupul de control. Cu toate acestea, activitatea caspazei-3 în toate grupurile nu a arătat diferențe.

Concluzie: Constatările acestui studiu au indicat că 4 săptămâni de tratament cu saună ar putea cauza deshidratare tranzitorie și disfuncție renală asociată și a condus la riscul de stimulare a creșterii chistului prin creșterea expresiei Hsp27. Mai mult, am ajuns la concluzia că prevenirea deshidratării și a creșterii chistului ar putea fi suprimată prin administrarea unei cantități adecvate de apă direct după tratamentul la saună.

Cuvinte cheie:polichistic autosomal dominantboală de rinichi, sauna, admisie apa, Hsp90, Hsp27

I. Introducere

Autozomal dominantboala de rinichi cu chisturi multiple(ADPKD) este o tulburare genetică caracterizată prin creșterea a numeroase chisturi în ambii rinichi. ADPKD este cauzată în principal de mutații înboala de rinichi cu chisturi multiple1 (PKD1) și genele PKD2, care codifică policistina 1 (PC1) și, respectiv, PC2. Pe parcursul de zeci de ani a bolii, pacienții dezvoltă chisturi renale mari, pline de lichid, care afectează funcția rinichilor. În prezent, numărul de pacienți cu ADPKD în Japonia este estimat la 31,000, reprezentând aproximativ 3-5% din toți pacienții dializați). Aproximativ 50% dintre pacienții cu ADPKD dezvoltă boală renală în stadiu terminal până la vârsta de 602 ani). Tolvaptan, un antagonist al receptorului de vasopresină 2 (V2), a fost aprobat ca primul agent terapeutic pentru ADPKD, iar utilizarea sa clinică a început în mai 2014 în Japonia). Deși este un medicament eficient care reduce rata de creștere a chisturilor, în prezent nu există un remediu pentru ADPKD și nu este posibilă oprirea formării chisturilor la rinichi.

Termoterapie, inclusivbalneoterapie(BT) șiterapie balneară(ST), a fost folosit frecvent la nivel global ca fizioterapie sau terapie alternativă. În mediile clinice, obiectivul major al terapiei termice este de a obține rezultate eficiente ale tratamentului fără a deteriora țesuturile normale. O revizuire sistematică recentă a arătat că BT și ST oferă o ameliorare semnificativă a durerii și o îmbunătățire a calității vieții în bolile cronice ale sistemului musculo-scheletic sau ale țesutului conjunctiv). Stimularea termică induce proteinele de șoc termic (Hsps) care sunt esențiale pentru supraviețuirea celulelor prin funcția lor ca chaperone proteice. Rolul Hsps în sănătatea și boala rinichilor este variabil. Inducerea Hsps poate fi fie benefică, fie dăunătoare pentru rinichi, în funcție de Hsps specific, tipul de celulă și context). În țesutul renal, Hsps reprezintă o parte importantă a sistemului de apărare intracelular, care este activat de diferite tipuri de stres celular. Diferitele Hsps din interiorul celulei stabilizează structurile celulare și sporesc rezistența celulelor la apoptoză și necroză6), 7). În ultimii ani, s-a raportat că Hsps joacă un rol dăunător în ADPKD și, prin urmare, sunt ținte terapeutice8), 9). Prin urmare, ne-am propus să investigăm efectul saunelor asupra animalelor model ADPKD, atunci când sarcina termică care crește temperatura rectală cu aproximativ 2 grade și o menține timp de aproximativ 30 de minute se repetă.

II Materiale şi Metode

1. Boală polichistică renală autozomal dominantă (ADPKD) model de șoarece Toate procedurile pe animale au fost efectuate în conformitate cu liniile directoare pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator aprobate de Universitatea de Științe a Sănătății Kumamoto (nr. 18-07). Soareci masculi DBA/2FG-pcy (pcy)10), 11) (8 săptămâni, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Japonia) cu greutăți corporale inițiale de 20,9±0,7 g au fost utilizați ca Șoareci model ADPKD în acest experiment. Șoarecii masculi DBA (8 săptămâni, n=3) au fost utilizați ca referință pentru modelul de șoarece ADPKD. Figura 1 prezintă aspectul și rinichiul excizat ca exemple tipice de șoareci pcy (Fig. 1A, B). Toate animalele au fost găzduite la umiditate și temperatură controlate, cu un ciclu de lumină/întuneric de 12:12-h și au primit acces gratuit la mâncare standard pentru șoarece și apă de la robinet.

Nouă șoareci pcy (8 săptămâni) au fost împărțiți aleatoriu în următoarele trei grupuri - grupul de control: șoareci pcy ca martor (n=3), grup TS: șoareci pcy expuși la stimulare termică sistemică repetată (n {{3} }); și grupul SW: șoareci pcy cărora li sa furnizat apă care conține 4% zaharoză (n=3). Șoarecilor din grupul TS li sa furnizat apă care conține 4% zaharoză peste noapte, după stimularea termică sistemică pentru a preveni deshidratarea. Într-un studiu anterior, am descoperit că pierderea în greutate corporală a fost de aproximativ 3-4% după stimularea termică sistemică12). Când 4% apă cu zaharoză a fost administrată șoarecilor pcy, cantitatea de apă consumată a crescut semnificativ de la 5,6 ± 0,6 ml la 7,4 ± 0,7 ml (p < 0,001 , Fig. 1C). Aportul de apă cu zaharoză de 4% peste noapte a fost într-adevăr un aport ridicat de lichide, echivalent cu 14 ± 7% din greutatea corporală. Grupul SW a consumat apă peste noapte la aceeași frecvență ca și grupul TS.

2. Stimulare termică sistemică (sauna)

Intensitatea căldurii saunei a fost stabilită într-un studiu anterior13). Cu toate acestea, temperatura rectală a unora dintre șoarecii pcy a depășit 42 de grade din cauza volumului lor mic al corpului în comparație cu cele ale șoarecilor DBA normali și șoarecilor 129X1/SvJ. Prin urmare, s-a încercat creșterea temperaturii rectale cu 1 grad, dar din cauza limitării controlului sistemului de saună uscată cu raze infraroșii îndepărtate (furnizat de Universitatea Kagoshima), temperatura rectală a fost setată să crească la aproximativ 39 de grade. Nu au fost găsite rapoarte privind frecvența saunelor pentru ADPKD; prin urmare, a fost adoptată frecvența minimă efectivă a saunei (de două ori/săptămână) stabilită într-un studiu privind relația dintre scăldarea în saună și bolile cardiovasculare și alte cauze de mortalitate de către Laukkanen și colab.14). Mai exact, șoarecii au primit tratament la saună la 43 de grade timp de zece minute și apoi la 37 de grade timp de 35 de minute pentru a crește temperatura rectală de la 37,1 ± 0,1 grade la 39,3 ± 0,3 grade folosind sistem de saună uscată cu raze infraroșii îndepărtate. Temperaturile rectale ale șoarecilor au fost menținute la aproximativ 39,0 grade până când au fost scoși din dispozitivul de saună. Grupul TS a fost expus la saună timp de patru săptămâni, de două ori pe săptămână.

3. Procedura analitică

Datele fiziologice au fost obținute de la toți șoarecii la sfârșitul perioadei de studiu de patru săptămâni. Au fost colectate probe de urină de douăzeci și patru de ore în cuști metabolice și a fost determinat aportul de lichide. Au fost colectate probe de sânge din vena cavă inferioară, iar nivelurile de creatinine plasmatice și de azot ureic din sânge (BUN) au fost măsurate folosind un analizor automat de biochimie Hitachi 7180 (Hitachi High-Technologies Corporation, Tokyo, Japonia), cu Aqua-auto Kainos CRE -Kitul de testare II sau kitul de testare UN-II (Kainos, Tokyo, Japonia) folosind metoda enzimatică.

4. Studii histologice

Rinichii au fost fixați cu soluție tampon de paraformaldehidă fosfat 4% și încorporați în parafină. Probele de rinichi au fost secționate la intervale de 2-µm și colorate cu hematoxilină și eozină (H&E), iar chisturile tubulilor au fost cuantificate pe 2 secțiuni/șoarece (rinichiul drept) folosind ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, STATELE UNITE ALE AMERICII). Zonele cu rupturi de țesut și bule care au fost identificate la o mărire mai mare (× 40) au fost excluse din analiză, așa cum s-a raportat anterior15).

5. Western blot

Electroforeza pe gel de dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă (SDS-PAGE) și blotarea au fost efectuate folosind proceduri standard. Alicote care conţin 15 pg proteină au fost supuse la SDS-PAGE. Au fost utilizați anticorpi generați împotriva următoarelor proteine: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), phosphoHsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Tehnologie), total-Akt (1:1,000, #9272, Tehnologie de semnalizare celulară), phospho-Akt (1:1,000, #9275, Tehnologie de semnalizare celulară), Erk1/2 (1:1,000, #9102, Tehnologie de semnalizare celulară), phospho-Erk1/2 (1:1,000, #9101, Tehnologie de semnalizare celulară), mTOR (1:1,{ {39}}, #2972, Tehnologia de semnalizare celulară), fosfo-mTOR (1:1,000, #2971, Tehnologia de semnalizare celulară), caspaza 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, Marea Britanie) , caspază scindată-3 (1:1,000, #9661, Tehnologia de semnalizare celulară) și -actină (1:1,{000, sc{-130656, Santa Cruz Biotehnologie). Petele au fost detectate folosind sistemul de detectare ECL Prime western blot (GE Healthcare, Marea Britanie), conform instrucțiunilor producătorului. Datele au arătat cuantificare relativă împotriva -actinei, care a fost folosită ca control intern.

6. Analiză statistică

Pentru analiza statistică, datele dintre grupurile TS și SW au fost comparate folosind testul Mann-Whitney U. Grupurile au fost comparate folosind o analiză unidirecțională a varianței (ANOVA), urmată de testul Tukey pentru a identifica diferențele. Diferențele au fost considerate semnificative statistic la p < 0.05. Datele sunt exprimate ca medie ± abatere standard (SD) sau medie ± eroare standard a mediei (SEM). Pentru analiza statistică a fost utilizat GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, SUA).