Camellia Japonica ulei esential inhiba productia de melanina induse de α-MSH și activitatea tirozinazei în celulele de melanom B16F10

Persoană de contact: ali.ma@wecistanche.com

Si Young Ha , Ji Young Jung, și Jae-Kyung Yang

Uleiurile esențiale sunt uleiuri aromatice extrase din frunze, tulpini, coji, petale și rădăcini de plante aromatice cultivate în natură sau cultivate în metode organice și au diverse efecte medicale ca substanțe naturale. Uleiul esențial extras din Camellia semințele de japonica prezintă diferite proprietăți funcționale; cu toate acestea, satirozinazăactivitatea inhibitoare nu a fost investigată extensiv. -se efectueaza un studiu pentru a investiga compozitia chimica si activitatea inhibitoare a tirozinazeiCamellia japonica ulei esențial din semințe(CJS-EO). Hexametilciclotrisiloxanul (42,36%) și octametilciclonotetrasiloxanul (23,28%) sunt cele două primare componente ale CJS-EO, astfel cum au fost identificate prin cromatografie în fază gazoasă-spectrometrie de masă.The activități inhibitoare aleCJS-EOși pozitiv arbutina de control sunt evaluate în continuare împotriva ciuperci tirozinaza.ThRezultatele arată că CJS-EO și arbutina inhibătirozinazăactivitate. Mai mult decât atât, CJS-EO inhibă în mod semnificativ melanogeneza în grupul tratat cu hormoni de stimulare a α-melanocitelor și un grup tratat cu hormoni de stimulare a α și cantitatea semnificativă de melanină este suprimată. Pentru a stabili cauza CJS-OEtirozinazăefect inhibitor și melanină se efectuează efecte de reducere, analize genetice și proteice. Pe baza rezultatelor noastre, concluzionăm în mod provizoriu căCJS-EOpoate inhiba melanocite din factori nocivi, cum ar fi proteina legată de tirozinază. Aceste rezultate demonstrează că CJS-EO posedă puternic activitate antitirozinaza si poate fi o piele buna-Albireagent.

Click pentru aCistanche Marea Britanie pentru inhibitorii tirozinazei.

Introducere

Culoarea pielii este afectată de pigmenți, cum ar fi melanina din epidermă, hemoglobină în vasele de sânge ale dermei, și caroten în țesutul subcutanat. Printre acestea, culoarea exterioară a pielii este determinată de cantitatea și distribuția pigmentului melaninei [1]. Enzime implicate în sinteza melaninei este bine cunoscută sub numele detirozinază, proteina legată de tirozinază-1 (TRP-1) și tautomeraza dopachromă (DCT, TRP-2) [2]. Printre acestea, tirozinaza este o enzimă acționând în reacția inițială, care este determinarea ratei pas de sinteza melaninei, și oxidează tirozinaza la DOPAquinone [3]. Prin urmare, substanțe care inhibătirozinază, TRP-1 și TRP-2 pot inhiba sinteza melaninei și, astfel, au o piele-Albirefuncția [4]. Melanina joacă un rol important în protejarea pielii de razele UV și de factorii nocivi externi din pielea umană. Cu toate acestea, atunci când este produs în exces și acumulat pe piele, poate provoca melasma, pistrui, pete ale pielii etc., și poate duce la moartea celulelor datorită toxicității precursorilor melaninei și a bolilor astfel de ca cancer de piele [5–7].

Acidul L-ascorbic, arbutina și acidul lactic au fost dezvoltate ca inhibitori reprezentativi ai producției de melanină, dar utilizarea lor este strict reglementată din cauza iritației sau siguranței pielii Probleme. Prin urmare, cercetarea este în curs de desfășurare în mod activ pentru a găsi un agent natural de albire care este sigur și eficient [8].

Se știe că uleiurile esențiale din plante prezintă diverse proprietăți funcționale, cum ar fi o activitate antibacteriană puternică și efecte antiaging și regenerare a pielii [9, 10]. Ulei esențial Cinnamomum cassia [4], Polygonum odoratum esențial ulei [11], și Vitex negundo Linn frunze de ulei esențial [12] au a fost raportat să posedetirozinazăactivități inhibitoare.

Camellia japonica este un nume japonez de "tsubaki") este un copac popular ca atât o plantă de grădină și o sursă de ulei material și medicină populară în Japonia [13]. În Coreea, C. japonica este un arbore veșnic verde din familia Theaceae și din genul Camellia[14]. C. ulei din semințe de japonica are o lungă istorie de utilizare ca un protector cosmetice pentru a asigura sănătatea pielii și a părului și ca agent calmant [15]. C. japonica ulei de semințe a fost raportat pentru a expune diverse biologice activități, inclusiv activitatea antioxidantă [16], antibacteriană activitate [17], activitate antiinflamatorie [18] și piele funcția de barieră [19]. În ciuda utilizării sale pe scară largă, puține studii au examinat efectele uleiului din semințe de C. japonica asupra pielii-Albire-asociatetirozinazăactivitate.

Prin urmare, în acest studiu, compoziția chimică a C. ulei esențial din semințe de japonica (CJS-EO) a fost investigat utilizarea cromatografiei în fază gazoasă și a spectrometriei de masă (GC-MS), șitirozinazăactivitatea inhibitoare a acestui ulei esential a fost Examinate. Pentru a aborda această activitate inhibitoare, efecteleCJS-EOpe melanogeneza stimulată de α-MSH și inhibarea tirozinazei în celulele melanomului B16F10 au fost evaluate.

2. Materiale și metode

2.1. Materiale vegetale.

C. japonica semințe au fost achiziționate în Martie 2021 de la Seohyeon Herbal Medicine Farming Asociația, Nonsan, Coreea de Sud. Materialele vegetale au fost identificat de Hee-Gon Kang, un reprezentant al pădure experimentală a Universității Naționale Gyeongsang.

Cistanche este una dintre medicamentele tradiționale chineze

2.2. Reactivi.

Ciupercătirozinazăa fost achizitionat de la T-3824 (Sigma-Aldrich, SUA), și mouse-ul B16F10 melanom a fost achiziționat de la LCR-6475 (american Type Culture Collection, Manassas, VA, SUA). Mass-media și reactivii necesari pentru cultura celulară au fost achiziționați de la Invitrogen (SUA), Sigma (SUA) și Nunc (SUA). Pentru western blotting, un kit de western blot și un transfer semidry s-a folosit sistemul (Bio-Rad, SUA), iar rezultatele au fost confirmat cu ajutorul unui sistem de analiză a imaginii (Bio-Rad, SUA). Anticorpii au fost achiziționați de la Santa Cruz Biotech (SUA). Dimetil sulfoxid (DMSO) a fost achiziționat de la Sigma- -Aldrich (St Louis, MO, SUA).

2.3. Extracția și pregătirea probei.

Extracția a fost efectuate folosind o metodă publicată anterior cu o ușoară modificări [4]. Pe scurt, semințele de C. japonica (500 g) au fost plasate într-un vas și extrase prin distilare prin distilare 2000 ml de apa pentru 4 ore. -e vaporii generati au fost raciti folosind un sistem de răcire închis, iar lichidul rezultat a fost colectate într-un recipient. -e ulei plutit spre partea de sus a lichid distilat, în timp ce apa s-a așezat în partea inferioară faza lichidului; prin urmareCJS-EOa fost obținut prin îndepărtarea fazei superioare a lichidului, care conținea uleiul dorit și apoi depozitat la −20°C până la utilizare. A 500 ppm soluția stoc de CJS-EO în DMSO a fost utilizată pentru celulă Experimente.

2.4. Analiza GC-MS.

Componentele volatile aleCJS-EOau fost analizate folosind GC-MS (Clarus 600 GC-MS, Perkin Elmer, Shelton, CT, SUA). Coloana de analiză utilizată a fost PerkinElmer Elite-5 ms (30 mm × 0,3 mm × 0,25 μm). Gazul de heliu (1,0 ml/min) a fost folosit ca fază mobilă. Temperatura cuptorului a fost crescuta de la 40°C la 100°C la o viteza de 10°C/min și apoi menținute timp de 1,0 min. Apoi, temperatura a fost crescută la 230°C cu o viteză de 10°C/min și apoi menținut timp de 5 min. -e temperatura temperaturii injectorul a fost setat la 200 °C, iar temperatura detectorului a fost setata la 250°C. -e rezultatele analizate au fost identificate folosind Programul de căutare spectrală de masă NIST (versiunea 2.0 g, Institutul Național de Standarde și Tehnologie, Gaithersburg, MD, SUA).

2.5. Cultura celulară.

Celulele melanomului de șoarece B16F10 au fost cumpărate de la Korea Cell Line Bank. Cultura celulară a fost efectuate folosind DMEM (WELGENE, Daegu, Coreea) suplimentat cu 10% FBS (ser fetal bovin, WELGENE, Daegu, Coreea) și 1% penicilină-streptomicină (Gibco BRL) la 37 °C și 5% condiții de CO2. În pentru a rezolva fenomenul de suprasolicitare cauzat de proliferarea numerelor de celule, celulele cultivate B16F10 au fost menținute la un număr corespunzător folosind tripsină (Hyclone, SUA).

2.6. Testul de viabilitate celulară.

Celulele melanomului B16F10 au fost însămânțate la 3 ×104 /mL într-o placă de 6 puțuri pentru cultura celulară.CJS-EOa fost tratat la o concentrație adecvată (31,25 ppm până la 500 ppm) pe godeu. -e mediu a fost eliminat după 72 de ore, și 200 μL 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-soluție de bromură de difeniltetrazoliu (MTT) (Promega, Madison, WI, SUA) a fost tratat. Reactivul MTT a fost îndepărtat curat după ce incubarea într-un incubator de CO2 de 37 ° C timp de 2 ore. Pentru celule colorate, 2 ml de DMSO a fost tratat pentru a dizolva toate formazan generat în fântâni. Viabilitatea celulară a fost măsurată prin absorbanță la 540 nm cu un cititor ELISA (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, SUA).

2.7. Analiza activității tirozinazei.

Tirozinazaactivitatea a fost estimată prin măsurarea ratei de oxidare L-DOPA [20]. Celulele B16F10 (2 ×105 celule/fântână) au fost tratate cu hormon de stimulare a α-melanocitelor (α-MSH) șiCJS-EOși cultivate timp de 3 zile. Celulele au fost recoltate, tampon de liză (1% Triton X-100, 0.1 M PMSF) a fost adăugat, și apoi celulele au fost lizate reacționând la 4 °C timp de 1 oră. -e supernatant a fost colectate prin centrifugare la 12.000×g timp de 15 minute. După cuantificarea proteinelor din supernatantul colectat; 10 mmol/ml L-DOPA a fost adăugat. Apoi, celulele au fost incubate într-un incubator de CO2 la 37 °C timp de 30 de minute și absorbanța la 490 nm a fost înregistrat cu ajutorul unui cititor de microplate absorbanță (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, SUA). -e datele obtinute au fost calculate pe baza urmatoarelor formulă: activitatea tirozinazei (%) (DO 490 din probă/DO 490 de control) ×100.

2.8. Analiza conținutului melaninei.

Celulele B16F10 au fost însămânțate într-o placă cu șase godeuri (2 ×105 celule/godeu) timp de 12 ore după reînnoirea mediul de cultură al celulelor tratate cu concentrații diferite de CJS-EO și α-MSH timp de 48 de ore și spălarea cu PBS de două ori [21]. Celulele B16F10 au fost tratate cu α-MSH șiCJS-EOîmpreună, cultivate timp de 3 zile, iar celulele au fost recoltate și spălate de două ori cu soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). După aceea, a fost tratat cu 1N NaOH care conține 10% DMSO și a reacționat la 80° C timp de 1 oră. Pentru melanină analiza conținutului, absorbanța a fost măsurată la 475 nm folosind un cititor de microplate absorbanță (SpectraMax 190, Molecular Devices LLC, San Jose, CA, SUA). -e procent valoarea celulelor tratate cu CJS-EO a fost calculată în ceea ce privește la controlul negativ. În detaliu, BCA Protein Test Kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, SUA) a fost utilizat pentru a determina concentrația de proteine din fiecare probă. -e conținutul de melanină a fost normalizat la proteina celulară concentrație (melanină absorbantă/proteină μg).

2.9. Investigarea genelor.

Celulele melanomului B16F10 au fost inoculat într-un vas de 100 mm la o densitate de 1 × 106 celule în DMEM (GIBCO, SUA) a suplimentat cu 10% bovine ser și 1% antibiotice; ulterior, au fost incubate în 5% CO2 la 37°C. După trecerea la un dmem proaspăt de 10% MedieCJS-EOa fost adăugat la o placă de cultură și cultivat pentru 3 d, și 1% Amisoft ca agent tensioactiv a fost adăugat într-o suma corespunzătoare a 1/1.000 din volumul mediu. După 3 d, 1 ml de TRIzol (Invitrogen, SUA) a fost adăugat la celule pentru a investiga nivelul de expresie ARNm alAlbire-gene înrudite, iar ARN-ul a fost izolat folosind Invitrogen Metoda de izolare a ARN-ului. După cuantificarea cantității de ARN la 260 nm folosind un detector de ultraviolete, un revers reacția în lanț transcripție-polimerază (RT-PCR) a fost Efectuate. Pentru RT-PCR, un kit RT-PCR all-in-one (Super Bio, Coreea) a fost folosit, experimentul a fost efectuat pe baza instrucțiunilor producătorului și a grundurilor și condițiile de reacție au fost după cum urmează: secvența de actina a fost 5′-GAG ACC TTC AAC ACC CCA GCC-3'; antisense, 5′-GGC CAT CTC TTG CTC GAA GTC-3'; transcriere inversă la 50 °C timp de 30 min; revers transcriptaza inactivată la 96° C timp de 3 minute, 94°C pentru 30 s și 62°C pentru 1 min, urmat de 25 de cicluri la 72 °C timp de 1 min. Secvența detirozinazăa fost 5′-GGC CAG CTT TCA GGC AGA GGT3'; antisense, 5'-TGG TGC TTC ATG GGC AAA ATC-3'; denaturate la 90°C timp de 30 s; transcriere inversă la 60 °C pentru 30 min; revers transcriptaza inactivată la 94 °C timp de 1 min. Ulterior, a fost efectuat un PCR pentru 30 de cicluri la 94 °C pentru 30 s, 56° C pentru 30 s și 72 °C timp de 1 min. -e secvență de tirozinaza legate de proteine 1 (TRP-1) a fost 5′-GCT GCA GGA GCC TTC TTT CTC-3"; antisense, 5′-AAG ACG CTG TGC TGG TCT-3"; denaturate la 90°C timp de 30 s; inversa transcrierea la 60 °C timp de 30 min; revers transcriptaza inactivat la 94 °C timp de 1 min. Ulterior, a fost efectuat un PCR pentru 30 de cicluri la 94 °C pentru 30 s, 56 ° C pentru 30 s și 72 ° C timp de 1 min. -e secventa detirozinază-legate de proteine 2 a fost 5′-TGA CCG TGA GCA ATG GCC-3'; antisense, 5′-CGG TTG TGA CCA ATG GGT GCC-3"; transcriere inversă la 50° C timp de 30 de minute; inactivarea revers transcriptazei la 96°C timp de 3 minute, 94°C timp de 1 min și 60°C timp de 1 min. Ulterior 72 reacții PCR au fost efectuate în 25 de cicluri timp de 1 min.

2.10. Investigarea expresiei proteinelor.

Mouse-ul B16F10 celulele melanomului au fost inoculate într-un vas de 100 mm la un densitatea a 5 ×105 celule din DMEM suplimentată cu 10% FBS și 1% antibiotice și apoi cultivată în 5% CO2 la 37 °C pentru 1 d. Ulterior, au fost schimbate cu un nou mediu șiCJS-EOa fost tratat la concentrații diferite și cultivată timp de 3 d. O soluție apoasă de 1% a Amisoft ca agent tensioactiv a fost adăugat la un volum corespunzător 1/1000 de volumul mediu. -celulele de cultură au fost spălate cu PBS și transferat într-un microtub de 1,5 ml și apoi într-o celulă tampon de întrerupere (40 mM Tris-Cl [pH 7,4], 10 mM EDTA, 120 mM NaCl, 0,1% NP-40, 1 mM PMSF și protează cocktail inhibitor). După ce celulele au fost distruse prin adăugare, centrifugarea a fost efectuată la 15.000 rpm la 4 °C pentru 10 min, iar supernatantul a fost recuperat pentru a separa Proteine. -e proteine izolate au fost cuantificate folosind Sigma Metoda BCA și SDS-PAGE a fost efectuată. După transferarea gelului SDS-PAGE în membrana PVDF, proteina a fost etichetată cu ajutorul unui anticorp secundar conjugat cu un anticorp primar și peroxidază și apoi expus la un film cu raze X folosind un kit vestic de detectare a petelor (Intron, Coreea). Ulterior, au fost analizate nivelurile de expresie.

3. Rezultate

3.1. Compoziția chimică a CJS-EO.

A fost obținut CJS-EO la un randament de 18% g/g. -e compoziția chimică a CJS-EO a fost analizat folosind GC-MS (Tabelul 1). -e vârfuri au fost separate în GC, iar 17 compuși au fost identificați prin sm; care a reprezentat 90 % din suprafața totală a vârfului (tabelul 1). -e principalele componente chimice aleCJS-EOau fost hexametilciclotrisiloxan (42,36%), octametilciclotretrasiloxan (23,28%), decametilciclopopentasiloxan (5,81%), acid hexanedioic (5,56%), și vanilină (2,96%). În trecut cercetare, GC-MS analiza detectat hexamethylcyclotrisiloxane în frunze și stem extracte de Bauhinia acuminata Linn [22]. -e componente volatile în Moringa oleifera au fost compus în principal din esteri, acizi, aldehide și hidrocarburi, iar hidrocarburile sunt în principal hexametilciclotrisiloxan [23]. În mod similar, în studiul nostru, hexametilciclrisiloxanul a fost confirmat ca principal componenta chimică a CJS-EO. Una dintre principalele substanțe chimice componente ale CJS-EO, vanilină, a fost detectată în uleiul esențial de Eugenia caryophyllata și Ocimum basilicum [24], ulei esențial Hyssopus officinalis L. (Lamiaceae) [25], și uleiul esențial Calea clematidea [26]. În studiile anterioare, efectul inhibitor al vanilinei asupra activităților mono fenolazei și difenolazei conținute întirozinazăFost raportate anterior [27]. Interesant, greutate moleculară mică compuși volatili ciclici metilsiloxanului, inclusiv hexametilcyclotrisiloxane au fost utilizați într-o varietate de produse cosmetice și de îngrijire personală și multe altele produse de consum [28]. În viitor, compusul responsabil pentru inhibarea producției de melanină și activitatea tirozinazei este de a fi extrase și ar putea fi utilizate în naturale cosmetice sau medicamente.

3.2. Viabilitatea celulară a celulelor melanomului induse de CJS-EO.

Rezultatele noastre au arătat că celulele melanomului murin B16F10 tratat cu o concentrație de 31,25 până la 500 ppm deCJS-EOtimp de 24 de ore nu a determinat modificări ale viabilității celulare. La o concentrație de 31,25 până la 500 ppm, viabilitatea celulară a fost de 90% la 100%, ceea ce a indicat o citotoxicitate scăzută (Figura 1). -Prin urmare, toate concentrațiile (31,25 până la 500 ppm) au fost adecvate pentru evaluarea în continuare a efectelor CJS-OE asupratirozinazăactivitatea și sinteza melaninei în celulele B16F10.

3.3. Inhibarea activității tirozinazei intracelulare a CJS-EO.

EfectulCJS-EOprivind oxidarea L-DOPA catalizat de tirozinaza, precum și cea a arbutinei, o bine-cunoscutătirozinazăinhibitor, a fost investigat. După cum se arată în figura 2, CJS-EO și arbutin expuse puternic efecte inhibitoare asupra L-DOPA oxidaza activitate într-o manieră dependentă de doză. -e rezultatele arată că CJS-EO și arbutin expuse similare tirozinaza inhibitori Activităţi. Pe baza analizei statistice, arbutina a avut o activitate inhibitorie a tirozinazei semnificativ mai mare decât CJS-EO la 125 și 500 ppm. Cu toate acestea, la 31.25, 32.50, și 250 ppm, similar efecte inhibitoare (nu semnificative) au fost indicate pe tirozinaza în comparație cu activitatea inhibitorie a tirozinazei a CJS-EO pe bine-cunoscutul inhibitor al tirozinazei arbutină.

3.4. Efectul CJS-EO asupra conținutului de melanină în celulele B16F10.

Pentru a confirma dacă CJS-EO a contribuit la inhibarea producția de melanină, diferența de secreție de melanină după tratamentul cu fiecare concentrație de CJS-EO a fost analizate într-un mediu care promovează producția de melanină prin stimularea α-MSH.CJS-EOa fost tratat la concentrații de 31,25, 62,5, 125, 250 și 500 ppm în în același mod ca și pentrutirozinazăactivitate. CJS-EO în mod semnificativ melanogeneza inhibată în grupul tratat cu α-MSH și o o cantitate semnificativă de melanină a fost suprimată [figura 3 litera (b)]. -este similar cu observatia din martorul pozitiv, arbutină [figura 3 litera (a)]. În special, la cea mai mică concentrație de 32,25 ppm în grupul tratat, melanina conținutul s-a redus semnificativ în comparație cu grupul netratat (0 ppm). Prin urmare, s-a concluzionat că CJSEO a inhibat efectiv sinteza sau secreția de melanină în celulele B16F10. În 31.25, 62.5, 125, 250, și 500 ppm Grupurile tratate cu CJS-EO, conținutul de melanină a scăzut cu 1.1, 1.5, 2.6, 2.7 și, respectiv, de 4,3 ori, comparativ cu grupul netratat, indicând un efect inhibitor proeminent al secreției de melanină. -e test de citotoxicitate, tirozinază rezultatele testelor de inhibare și ale testelor privind conținutul de melanină indică faptul că CJS-EO este extrem de valoros ca material natural înAlbireCosmetice.

3.5. Investigația genetică.

Pentru a determina gena înCJS-EOcare inhibă biosinteza melaninei prin afectarea expresiei de gene implicate în calea biosintezei melaninei, o experimentul a fost efectuat folosind metoda RT-PCR și rezultatele sunt prezentate în figura 4. α-MSH a fost folosit ca un control negativ, și CJS-EO au arătat efecte inhibitoare asupra expresia tirozinazei, TRP-1 și TRP-2 la toate concentrațiile. În special, CJS-EO a inhibat exprimarea tirozinaza de mai mult de 50% la 125 ppm sau mai mare. Noi a descoperit că eficacitatea inhibitoare atirozinază, expresia TRP-1 și TRP-2 a scăzut pe măsură ce concentrația de CJSEO a crescut. -e rezultatele acestui experiment sugerează că melanogeneza efect inhibitor al CJS-EO a contribuit la inhibarea expresiei tirozinazei, TRP-1 și TRP-2.

3.6. Investigarea expresiei proteinelor.

Efectul CJS-EO privind exprimarea proteinelor implicate în biosinteza melaninei a fost confirmată cu ajutorul blotting-ului occidental, iar rezultatele sunt prezentate în figura 5. Când CJS-EO a fost comparat cu α-MSH-tratate de grup, care a fost un grup de control negativ, acesta s-a confirmat căCJS-EOa prezentat un efect inhibitor; în fapt, CJS-EO expuse cel mai proeminent efect inhibitor pe tirozinază și TRP-2. -e gradul de inhibiție a fost de 46,6% și 40,7% la 500 ppm de tirozinază și, respectiv, TRP-2, comparativ cu grupul tratat cu α-MSH. Deși TRP-1 a indicat cel mai puțin efect inhibitor, a arătat un semnificativ scădere în comparație cu grupul tratat cu α MSH. Deci analiza proteinelor a arătat aceeași tendință ca și gena analiza, și s-a confirmat că CJS-EO stimulattirozinază, TRP-1 și TRP-2 pentru a induce reducerea melaninei.

4. Discuții

Tirozinazaeste o enzimă implicată în producerea melaninei prin intermediul o cale oxidativă enzimatică, care determină culoarea a pielii, părului și ochilor, precum și căpruirea anumitor alimente [29]. Agenți chimici care demonstrează antitirozinaza activitatea a fost utilizata in medicina clinica pentru tratament de tulburări dermatologice asociate cu hiperpigmentarea melaninei [30]. Producția de melanină poate contribui la unele dintre caracteristicile histopatologice exclusive pentru maligne cancer [31]. Prin urmare, substanțele antitirozinază pot facilita tratamentul cancerului de piele. În ultimii ani, utilizarea de produse naturale în loc de compuși chimici sau sintetici a câștigat un interes tot mai mare, deoarece acestea sunt mai mult economic, ecologic și sigur [32]. În plus, cercetarea și dezvoltarea tehnologiilor ecologice și a materiilor prime cu costuri reduse sunt importante pentru industrie, precum și pentru îmbunătățirea utilizării resurselor vegetale. Recent, activitatea antitirozinază a anumitor plante a a fost raportat [33]. Cu toate acestea, datele referitoare la elementele esențiale uleiurile plantelor naturale sunt rare. Prin urmare, identificarea de uleiuri esențiale vegetale care au o activitate antitirozinază ridicată a atras un interes semnificativ. -etiologia pigmentarii nu este bine inteleasa. Biosinteza melaninei este catalizată de enzime specifice melanocitelor, cum ar fi TRP-1 și TRP-2 [34].Tirozinazaeste vital pentru melanocite melanina biosinteza și a fost cunoscut de mai multe decenii [34]. Prin urmare, tirozinaza este un indice important pentru tratament de pigmentare. În studiul nostru, CJS-EO a scăzut melanina sinteza și activitatea antitirozinază afectată; prin urmare, noi a concluzionat că antimelanogeneza de către CJS-EO poate fi asociate cu alte enzime (TRP-1 și TRP-2). Volatil substanțe au fost raportate pentru a expune antioxidant ridicat activități [35]. Ca volatile, CJS-EO se caracterizează printr-o miros înțepător. Este sintetizat de plante ca secundar metaboliți și a fost utilizat pe scară largă datorită sale bactericide, virucidale, fungicide, împotriva cancerului, antioxidant, și activități antidiabetice [36]. -e CJS-EO investigate în acest studiul a fost compus în principal din hexametilciclotrisiloxan, care a reprezentat 42,36% din conținutul chimic total. Toxicodendron vernicifluum care conțin hexamethylcyclotrisiloxane a fost demonstrat de a expune diverse biologice și activități farmacologice, inclusiv centrale, antimicrobiene; și activități antitumorale [37]. În studiul nostru, concentrațiile ridicate de CJS-EO au indicat doar ușoare efecte citotoxice asupra melanocite. Prin urmare, efectul inhibitor al CJS-EO asupra s-a observat propagarea celulelor B16F10 induse de α-MSH. -e rezultatele au arătat că pretratarea cu CJS-EO redusă propagarea celulelor induse de α-MSH într-o manieră dependentă de doză (Figura 3), iar aceste rezultate au fost similare cu cele pure arbutină utilizată ca martor pozitiv. În cele mai naturale esențiale ulei utilizat în medicina tradițională, extracte care conțin complex compușii sunt utilizați în loc de compuși puri. Acești uleiurile esențiale naturale, de obicei, nu conțin volatilitate compuși cu bioactivități foarte specifice, dar volatilitate compuși cu interacțiuni mai largi [38]. Prin urmare, este dificil pentru CJS-EO, care conține multe componente, pentru a au un efect antimelanogeneză mai mare decât arbutina pură. În în viitor, este necesar să se separe componentele volatile conținute înCJS-EOși să studieze efectul antimelanogenezei pe componenta unică separată. Pe baza rezultatelor noastre, noi concluzia tentativă că CJS-EO poate inhiba melanocite de la factori nocivi, cum ar fi TRP-1 (figurile 4 și 5).Thprin urmare, am presupus că hexametilcyclotrisiloxane a fost principalul compus biologic activ din CJS-EO. Existent studii privindAlbireproprietatea CJS-EO este insuficientă; prin urmare, acesta poate fi utilizat ca date de bază în viitor studii referitoare la principalele ingrediente care prezintă albire eficacitate.

5. Concluzii

Din câte știm, acesta este primul studiu care raportează eficacitatea CJS-EO în inhibarea producției de melanină în B16F10 celulele melanomului. Observațiile Curții au indicat că CJS-EO inhibat melanogeneza indusă de α-MSH printirozinazăinactivarea și suprimarea simultană a expresiei de proteine implicate în biosinteza melaninei în celulele melanomului B16F10.CJS-EOse știe că este în siguranță și am confirmat că este noncytotoxic în acest studiu.Thprin urmare, CJS-EO poate potențial să fie angajat ca o piele eficientă-Albireagent pentru viitor dezvoltarea de medicamente complementare și alternative aromoterapie.