ARN circular CircDVL1 inhibă progresia carcinomului cu celule renale cu celule clare prin axa MiR-412-3p/PCDH7

Abstract

Carcinomul cu celule renale cu celule clare (ccRCC) este un cancer de rinichi primar cu fenotip agresiv ridicat și prognostic extrem de prost. Dovezile acumulate sugerează că ARN-urile circulare (circRNAs) joacă un rol esențial în apariția și dezvoltarea diferitelor tipuri de cancer la om. Cu toate acestea, expresia, semnificația clinică și rolul de reglementare al circRNA în ccRCC rămân în mare parte neclare. Aici raportăm că circDVL1 este redus în serurile și țesuturile pacienților cu ccRCC și se corelează negativ cu caracteristicile maligne ale ccRCC. Supraexprimarea circDVL1 inhibă proliferarea, induce stoparea G1/S, declanșează apoptoza și reduce migrarea și invazia în diferite celule ccRCC in vitro. În mod corespunzător, supraexpresia circDVL1 suprimă tumorigenitatea ccRCC într-un model de xenogrefă de șoarece. Din punct de vedere mecanic, circDVL1 servește ca un burete pentru miR-412-3p oncogen, prevenind astfel reprimarea mediată de miR{-412-3p a protocadherinei sale țintă 7 (PCDH7) în celulele ccRCC. În mod colectiv, rezultatele noastre demonstrează că circDVL1 exercită funcție de supresie tumorală în timpul progresiei ccRCC prin axa circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 și sugerează că circDVL1 ar putea fi un nou marker de diagnostic și prognostic și țintă terapeutică pentru ccRCC.

Cuvinte cheie

circDVL1; carcinom cu celule renale; miR-412-3p; PCDH7; biomarker

Click aici pentru a afla care sunt beneficiile Cistanche

Introducere

Carcinomul cu celule renale (RCC) este un carcinom malign extrem de letal al sistemului urologic și are un impact grav asupra sănătății umane [1]. Incidența RCC a crescut în ultimele decenii, cu 73.750 de cazuri noi diagnosticate în Statele Unite în 2020 [2, 3]. RCC cu celule clare (ccRCC), cel mai frecvent și mai agresiv subtip de RCC, reprezintă 70-75% din cazurile de RCC [4]. Important este că mai mult de 30 la sută dintre pacienții cu ccRCC sunt asociați cu metastaze la diagnosticul inițial. În plus, deși chirurgia radicală este principala opțiune de tratament pentru ccRCC primar, totuși aproximativ 40% dintre pacienți au prezentat recidive și metastaze, cu o supraviețuire globală 5-an de mai puțin de 10% [5, 6]. Aceste dileme subliniază necesitatea urgentă de a explora mecanismele moleculare care stau la baza dezvoltării ccRCC, atât ca biomarkeri de diagnostic și prognostic, cât și ca potențiale ținte terapeutice.

ARN-urile circulare (circRNAs) sunt ARN-uri necodificatoare cu structuri în buclă închisă cu un singur lanț care îi fac foarte stabili [7, 8]. Studii recente au demonstrat că circRNA-urile sunt abundente în sânge [9, 10], saliva [11] și exozomi [12], indicând faptul că ar putea servi ca noi biomarkeri de diagnostic [13]. Având în vedere că biopsia lichidă este mai puțin invazivă decât biopsia tradițională de țesut [14], circRNA-urile au fost considerate instrumente predictive valoroase pentru medicina de precizie [15-17]. În mod specific, mai multe circRNA, cum ar fi cricNOX4, circEGLN3 și circPRRC2A, pot acționa ca potențiali biomarkeri pentru diagnosticul și/sau prognosticul RCC, care au fost rezumați în recenzia noastră recentă [18]. În plus, cercetările actuale se concentrează în principal pe alternanța expresiei circARN în țesuturile ccRCC [19, 20], cu toate acestea, nivelurile lor în biopsia lichidă rămân în mare parte necunoscute, ceea ce împiedică explorarea potențialilor biomarkeri. În plus, deși s-a demonstrat că mai multe circRNA, inclusiv circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] și cRAPGEF5 [23], joacă un rol important în inițierea și progresia ccRCC [18], investigarea sistematică a circRNA-urilor implicate în ccRCC dezvoltarea, precum și mecanismele lor moleculare subiacente, încă lipsesc.

Aici, am determinat mai întâi expresia circRNA-urilor în probele de ser de la pacienții cu ccRCC și controale sănătoase folosind o microarray circRNA. În mod semnificativ, am identificat un nou circRNA circDVL1 asociat cu ccRCC (ID carcasă: hsa_circ_ 0009267), care este codificat în gena DVL1. CircDVL1 este redus semnificativ în serul pacienților cu ccRCC, iar expresia sa este invers corelată cu gradul ccRCC Fuhrman, sugerând potențialul ca biomarker. Mai mult, CircDVL1 este scăzut în țesuturile tumorale ccRCC. În mod corespunzător, circDVL1 poate inhiba proliferarea, poate induce oprirea ciclului celular, poate declanșa apoptoza și poate reduce migrarea și invazia celulelor ccRCC. Din punct de vedere mecanic, circDVL1 funcționează ca un burete miR-412-3p pentru a regla expresia PCDH7. În mod colectiv, aceste descoperiri identifică circDVL1 ca supresor tumoral pentru ccRCC și sugerează potențialul său atât ca biomarker de diagnostic, cât și ca țintă terapeutică.

Supliment Cistanche

Materiale și metode

1. Probe clinice

Acest studiu a fost aprobat de Comitetul de etică al primului spital afiliat al Universității Zhejiang (2021-104). Optsprezece probe potrivite de ccRCC și țesuturi non-tumorale adiacente au fost colectate de la pacienții cu ccRCC. Probele au fost conservate rapid în azot lichid după intervenție chirurgicală și apoi păstrate la grade -80 până la utilizare ulterioară. Au fost colectate probe de ser de la 60 de pacienți cu ccRCC și 66 de martori sănătoși. Apoi, probele au fost procesate folosind metode adecvate, iar serul obținut a fost păstrat la grade -80 până la utilizare ulterioară.

2. Liniile celulare și cultura celulară

Toate liniile celulare au fost achiziționate de la Colecția Națională de Culturi de Celule Autentificate (China). Celulele 786-O și Caki-1 au fost cultivate în RPMI 1640 (HyClone), celulele ACHN au fost cultivate în MEM (HyClone) și celulele 293T au fost cultivate în mediu DMEM (Gibco). Toate mediile de cultură celulară au fost suplimentate cu 10% ser fetal bovin (Gibco) și 1% amestec de penicilină și streptomicina (Gibco). Culturile de celule au fost menținute într-un incubator umidificat la 37 de grade și 5% CO₂.

3. Analiza microarray CircRNA

Profilarea microarray CircRNA în probele de ser a fost efectuată utilizând un Arraystar uman CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, China). Software-ul GeneSpring V13.0 (Agilent Technologies) a fost utilizat pentru rezumarea datelor, normalizare și controlul calității microarray. CircARN-urile cu un prag de modificare a ori mai mare sau egal cu 2 și Mai mic sau egal cu -2 și valoarea P < 0.05 au fost considerate semnificative statistic. Analiza cluster ierarhică a fost efectuată utilizând distanța euclidiană standardizată cu o legătură completă.

4. Secvențierea ARN (ARN-seq) și analiza datelor

Următoarea generație ARN-seq a fost efectuată așa cum a fost detaliat anterior [24, 25]. Celulele miR-412-3p și control mimic-transfectate 786-0 au fost utilizate pentru secvențierea ARN. Construcția bibliotecii și analizele bioinformatice ale datelor brute au fost efectuate de Novogene Co., Ltd. (Beijing, China). Datele ARN-seq au fost depuse în Gene Expression Omnibus (GEO) sub numărul de acces GSE175492.

5. Extracția ARN și RT-PCR cantitativă în timp real (RT-qPCR)

RT-qPCR a fost efectuat așa cum s-a descris anterior [26, 27]. ARN-ul total a fost izolat din ser, celule și țesuturi tumorale folosind AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, China). Pentru detectarea circARN, 1 ug de ARN total a fost digerat cu RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, SUA, Cat#RNR07250) la 37 de grade timp de 10 minute, iar ADN-ul complementar (cDNA) a fost generat folosind HiScript II 1st Kit de sinteză a ADNc-ului (Vazyme). Nivelurile de expresie de ARNm și ARNm au fost normalizate la actină. Pentru a determina expresia miARN, transcripția inversă a fost efectuată cu un kit miR-XTM miRNA First-Strand Synthesis (Takara Bio USA, CA, SUA, Cat. #638313) cu expresia U6 (Rnu6-1) ca control endogen. Nivelul relativ de expresie a ARN a fost determinat cu metoda 2-ΔΔCt. Toate secvențele de primeri de analiză qRT-PCR sunt prezentate în Tabelul S2.

6. Construcția plasmidei și transfecția stabilă

Pentru a construi vectorul de supraexpresie circDVL1 și circDVL1-MUT, circDVL1 și secvența circDVL1 mutantă au fost donate în vectorul pcDNA 3.1( plus ) Laccase 2 MCS Exon, care a fost comandat de la Addgene (#69893) [28]. Celulele ACHN și 786-O au fost transfectate cu circARN și vectori de control negativ utilizând Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). După 48 de ore, celulele transfectate stabil care exprimă circDVL1 au fost selectate prin adăugarea a 800 ug/mL G418 la mediul de cultură.

7. Viabilitatea celulară

Analiza viabilității celulare a fost determinată cu kitul CCK8 (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japonia, Cat # CK04), așa cum a fost descris anterior [29]. 786-O și ACHN circDVL1 supraexprimarea și celulele de control au fost însămânțate în 96-plăci de godeuri. Soluția CCK8 (10 μL) a fost adăugată la momentul indicat și incubată la 37 de grade timp de 2 ore, iar absorbanța a fost măsurată folosind un spectrofotometru.

Herba Cistanche

8. Formarea coloniilor

Testele de formare a coloniilor au fost efectuate așa cum s-a descris anterior [24]. ACHN (800 celule/godeu) și 786-O celule (400 celule/godeu) au fost cultivate timp de 10 zile și ulterior fixate cu 4% paraformaldehidă timp de aproximativ 30 de minute, urmate de colorare cu 0,1% soluție de cristal violet timp de aproximativ 15 min. Clonele care conţin mai mult de 50 de celule au fost numărate ca o singură colonie.

9. Analiza ciclului celular

Celulele au fost sincronizate în mediu RPMI 1640 fără FBS peste noapte și au fost trecute la mediu cu 10% FBS pentru următoarele 48 de ore. Celulele au fost spălate, resuspendate în etanol 70% în PBS și depozitate la -20 grade peste noapte. Apoi, celulele au fost colorate cu soluție de iodură de propidiu (PI) care conține RNază A pentru analiza ciclului celular.

10. Analiza apoptozei

Analiza apoptozei celulelor ACHN și 786-O a fost efectuată cu un kit de detectare a apoptozei Annexin V-FITC/PI (Beijing Biosea Biotechnology, China) urmând instrucțiunile producătorului.

11. Migrarea celulelor și testele de invazie

In vitro, capacitatea de migrare a celulelor a fost evaluată folosind camere transwell cu membrane de policarbonat cu pori de 8 μm (Millipore, MA, SUA). Testele de invazie celulară au fost efectuate cu camerele transwell acoperite cu 100 μL de Matrigel (BD Biosciences, SUA). 786-Celulele O (2×104) sau celulele ACHN (4×104) au fost suspendate în 200 μL de RPMI 1640 fără ser și însămânțate în camerele superioare transwell, apoi s-au adăugat 600 μL de mediu care conține 20% FBS în camerele inferioare. Apoi, celulele au fost cultivate timp de 24 de ore pentru a măsura migrarea și timp de 48 de ore pentru a evalua invazia. Celulele din camera superioară au fost răzuite cu grijă, iar celulele din compartimentul inferior au fost fixate cu 4% paraformaldehidă și colorate cu cristal violet. S-au obținut imagini și au fost numărate celulele cu un microscop.

12. Western blot

Proteina totală a fost extrasă, cuantificată și separată pe geluri SDS-PAGE de 10% și apoi transferată pe membrane de difluorură de poliviniliden (Millipore, MA, SUA), care au fost incubate cu anti-gliceraldehidă 3-fosfat dehidrogenază primară (GAPDH) (Proteinch, 60004-1-Ig), anticorpi primari anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) la 4 grade peste noapte.

13. Colorarea prin imunofluorescență

Celulele au fost însămânțate pe lame de acoperire timp de 24 de ore și fixate cu 4% paraformaldehidă, permeabilizate cu 0,2% Triton X{-100 timp de 20 de minute și incubate cu 5% albumină serică bovină. Apoi, celulele au fost incubate cu un anticorp primar specific pentru Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) la 4 grade peste noapte și, ulterior, au fost incubate cu un 488-IgG conjugat de capră anti-iepure (1:150, D110088, Sangon). ) la 37 de grade timp de 1 oră. Celulele au fost colorate cu 4′,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), iar imaginile au fost obținute cu un microscop cu fluorescență Leica (DM4000).

14. Formarea tumorii in vivo și colorarea Ki67

Șoarecii masculi nuzi BALB/c în vârstă de șase săptămâni (achiziționați de la Shanghai SLAC) au fost împărțiți în 2 grupuri (n=5 pentru fiecare grup). Șoarecii au fost inoculați cu aproximativ 3 x 106 celule de control sau celule ACHN care supraexprimă circDVL1 prin injecție subcutanată. Dimensiunea tumorii a fost măsurată cu un șubler glisant la fiecare 3 zile, începând cu ziua 6 după injectare. Volumul tumorii a fost calculat ca lungime × lățime × înălțime/2. Toate experimentele au fost efectuate conform Ghidurilor pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator (publicația NIH 80-23, revizuită în 1996) și au fost aprobate de Comitetul pentru îngrijirea animalelor de la Universitatea Zhejiang, Hangzhou, China.

Cistanche capsule

15. Hibridarea fluorescentă in situ (FISH)

A fost sintetizată o sondă circDVL1 dublă digoxigenină (DIG)-peroxidază de hrean (HRP) (Exon Biotechnology, Guangzhou, China). Celulele ACHN de control și supraexprimarea circDVL1 au fost cultivate pe lame de acoperire și incubate cu sonda marcată la 37 de grade timp de 24 de ore. După spălare, lamele au fost incubate într-un anticorp secundar anti-DIG la 37 de grade timp de 1 oră. O metodă de amplificare a semnalului de tiramină a fost utilizată pentru a detecta semnalele circDVL1, iar celulele au fost contracolorate cu DAPI. Pentru co-FISH, lamele de acoperire au fost incubate cu circDVL1 marcat DIG și miR-412-3p. marcat cu biotină.

16. Testul de imunoprecipitare a ARN (RIP).

Testele RIP au fost efectuate cu trusa de imunoprecipitare a proteinei de legare a ARN Magna RIP™ (Millipore, MA, SUA). 786-Celulele O au fost lizate în tampon de liză RIP complet și apoi incubate cu tampon de imunoprecipitare care conține granule magnetice care au fost conjugate cu AGO2 (Abcam, MA, SUA) sau complex de anticorpi IgG la 4 grade peste noapte. Apoi, ARN-urile imunoprecipitate au fost testate prin RT-qPCR.

17. Testul dual-luciferaze reporter

Secvențele CircDVL1, PPM1H-3'UTR și PCDH7-3'UTR, care conțineau site-uri de legare miR-412-3p mutante și secvențele mutante corespunzătoare ale acestora, au fost sintetizate și apoi subclonate în raportorul de luciferază vector psiCHECK-2 (Promega) pentru a produce circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 și PCDH7-3'UTR-Mut2. Diferitele secvențe 3'UTR ale PPM1H și PCDH7 conțin fragmentul de 500 bp care conține site-uri potențiale de legare a miR-412-3p (flancat de 250 bp). Activitatea relativă a luciferazei a fost evaluată cu un test dual-luciferaze reporter (Promega, SUA). Toate testele au fost efectuate în trei replici independente.

18. Analiză statistică

Analizele statistice au fost efectuate cu GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Diferențele dintre grupuri au fost evaluate cu testele t Student sau cu analiză unidirecțională a varianței (ANOVA). Diferențele dintre grupuri au fost considerate a fi semnificative statistic atunci când valorile P au fost < 0.05.

Discuţie

Diferite tipuri de biomarkeri ccRCC au fost propuse și evaluate experimental, inclusiv ARNm [32], miARN [33], lncARN [34] și circRNA [35]. Cu toate acestea, niciunul dintre ei nu a fost confirmat ca biomarkeri de diagnostic precis pentru utilizare clinică de rutină la pacienții cu ccRCC. Aici, studiul nostru a ilustrat că circDVL1 joacă un rol important în progresia ccRCC. În primul rând, am analizat serul de la pacienții cu ccRCC și de la controale sănătoase pentru a identifica circRNA-urile exprimate diferențial folosind o microarray circRNA. Datele RT-qPCR au dezvăluit că circDVL1 a fost redus dramatic în probele ccRCC. Studiile anterioare au arătat că circRNA-urile ar putea servi ca biomarkeri serici latenți în diferite tipuri de cancer [36, 37]. De exemplu, Bei et al. a demonstrat că exosomal has-circ-0004771 a fost crescut în serul colectat de la pacienții cu cancer colorectal [38]. Cu toate acestea, cercetările privind rolul specific al circRNA ca biomarker neinvaziv în ccRCC sunt încă limitate. Studiul nostru a dezvăluit că circDVL1 a fost redus în mod semnificativ în serul pacienților cu ccRCC și că expresia scăzută a circDVL1 seric poate fi derivată din tumori. În plus, nivelul seric circDVL1 a avut o valoare diagnostică semnificativă în discriminarea între pacienții cu tumori Fuhrman de gradul I-II și Fuhrman de gradul III-IV. Prin urmare, circDVL1 seric ar putea fi un marker de diagnostic promițător pentru ccRCC. Cu toate acestea, mai mulți pacienți sănătoși au prezentat niveluri scăzute de circDVL1 în serul lor, ceea ce indică faptul că monitorizarea pacientului bazată exclusiv pe analiza acestui ARN circulant ar putea duce la rezultate fals pozitive. Prin urmare, valoarea circDVL1 ca marker de diagnostic unic este oarecum limitată și ar putea fi necesară analizarea unei combinații de diferite ARN-uri circulante pentru a obține o predicție fiabilă pentru dezvoltarea tumorii și metastaze.

Ca circARN nou identificat, rolul biologic și patologic al circDVL1 nu a fost investigat. În acest studiu, am evaluat rolul și mecanismul de reglementare al circDVL1 în ccRCC. Testele funcționale au arătat că circDVL1 supraexprimat ar putea scădea proliferarea celulelor ccRCC, capacitatea de formare a coloniilor și potențialul tumorigen, probabil datorită creșterii apoptozei celulare in vitro și suprimarii dezvoltării tumorii in vivo. Datele au implicat că circDVL1 ar putea avea o funcție de supresie tumorală în ccRCC.

CircARN-urile pot promova inițierea și progresia tumorii acționând ca bureți miARN. Prin urmare, am examinat dacă circDVL1 ar putea regla biogeneza miARN în timpul carcinogenezei ccRCC. Folosind software-ul miRanda și miRWalk, am descoperit că circDVL1 avea un site potențial de legare pentru miR-412-3p. Testele reporterului luciferazei au demonstrat o legătură directă între circDVL1 și miR-412-3p. Studiile anterioare au arătat că miR-412-3p a fost implicat în patogeneza diferitelor tipuri de cancer prin diferite mecanisme moleculare [31, 39, 40]. De exemplu, miR-412-3p a avut un rol oncogen în cancerul de colon, promovând migrarea, invazia și proliferarea celulară a celulelor stem canceroase [31]. Mai mult, expresia miR-412-3p a fost reglată în creștere în veziculele extracelulare de la pacienții cu carcinom bucal cu celule scuamoase (OSCC) [39]. În mod similar, rezultatele noastre au sugerat că miR-412-3p a fost un promotor tumoral important în ccRCC.

Pudra de Cistanche

În plus, a fost identificată și ținta circDVL1/miR-412-3p. Protocadherinele (PCDH) sunt proteine ​​transmembranare aparținând superfamiliei cadherinei, care joacă roluri semnificative în adeziunea celulară și căile de semnalizare. PCDH7 este un membru al familiei PCDH și are roluri bine stabilite în recunoașterea celulă-celulă și aderența celulară [41]. Se știe în general că pierderea aderenței este o etapă timpurie în invazia și metastazarea celulelor tumorale. Dovezile emergente sugerează că PCDH7 este exprimat în mod aberant într-o varietate de tipuri de tumori. De exemplu, în cancerul pulmonar uman fără celule mici, PCDH7 a fost frecvent supraexprimat și a funcționat ca o oncogenă pentru a induce transformarea celulară și a promova tumorigeneza pulmonară prin potențarea semnalizării MAPK [42]. În schimb, PCDH7 a inhibat migrarea și invazia celulelor canceroase gastrice prin intermediul E-cadherinei [43]. Mai mult, expresia redusă a PCDH7 a fost găsită în cancerele colorectale [44] și vezicii urinare [45]. Aceste date au indicat că PCDH7 a avut diferite funcții în tipuri distincte de tumori. În acest studiu, am demonstrat că nivelurile de PCDH7 au fost reduse în specimenele tumorale ccRCC. În mod interesant, experimentele de salvare funcțională au arătat că proprietățile supresoare tumorale ale circDVL1 se datorează parțial efectului său asupra PCDH7. Studiul nostru sugerează cu tărie importanța axei de reglementare circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 în progresia ccRCC.

Acest studiu are mai multe limitări. Am testat trei siRNA-uri specifice pentru circDVL1 endogen, dar, din păcate, toate aceste siRNA-uri nu au reușit să doboare circDVL1, probabil datorită structurii unice a acestui circRNA, precum și expresiei sale bazale scăzute în celulele ccRCC. În plus, rezultatele noastre au arătat că circDVL1 ar putea fi o țintă terapeutică la pacienții cu ccRCC, sunt necesare studii clinice cu cohorte mari de pacienți pentru a demonstra în continuare importanța sa clinică. În studiul nostru, nu am investigat cauza scăderii circDVL1 în leziunile ccRCC. S-a raportat că proteinele care leagă ARN (RBP), inclusiv cutremurul (QKI), proteina de reglare a epitelial-splicing 1 (ESRP1) și fuzionat în sarcom (FUS) sunt implicate în formarea posttranscripțională a circRNA [{{10] }}]. În plus, unii factori de transcripție (de exemplu, ZEB1, c-Myb și c-Jun) sunt, de asemenea, implicați în biogeneza ARN-urilor specifice [49-52]. De asemenea, studiile au arătat că modificarea m6A mediază degradarea circARN. Park și colab. a raportat că circARN-urile modificate cu m6A au fost, de asemenea, reglate în jos prin intermediul unei axe YTHDF2- HRSP12-RNază P/MRP [53]. Dacă aceste RBP, factori de transcripție și metilarea m6A sunt implicate în reglarea în jos a circDVL1 rămâne incert. În cercetările noastre viitoare, vom încerca să explorăm mecanismul de reglare din amonte al circDVL1 în dezvoltarea ccRCC și tumorigeneză.

În rezumat, am demonstrat că nivelul circDVL1 a fost redus în serul pacienților cu ccRCC. În special, am investigat în continuare mecanismele de reglementare ale circDVL1 și am demonstrat că circDVL1 a suprimat tumorigena ccRCC prin promovarea expresiei PCDH7 prin sponging miR-412-3p. Prin urmare, studiul nostru a arătat că circDVL1 ar putea fi o potențială țintă terapeutică pentru viitoarele tratamente ccRCC.

Referințe

1.Cheng SK, Chuah KL. Carcinomul cu celule renale metastatic la pancreas: o revizuire. Arhive de patologie și medicină de laborator. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Ontogenia carcinomului renal cu celule clare și mecanismele letalității. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A și colab. Înțelegerea variantelor patologice ale carcinomului cu celule renale: distilarea oportunităților terapeutice din complexitatea biologică. urologie europeană. 2015; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB și colab. Aspecte moleculare ale carcinomului cu celule renale: o revizuire. Am J Cancer Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Tratamentul sistemic al cancerului cu celule renale: O revizuire cuprinzătoare. Cancer Treat Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. Biogeneza, biologia și caracterizarea ARN-urilor circulare. Nature Reviews Genetica. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Trecut, prezent și viitor al circRNA. Jurnalul EMBO. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. Circular RNAs in Blood Malignities. Front Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH și colab. Identificarea și caracterizarea ARN-urilor circulare ca o nouă clasă de biomarkeri presupuși în retinopatia diabetică. oftalmologie investigativă și știință vizuală. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y și colab. Peisajul microARN, ARN-ului care interacționează cu Piwi și ARN circular în saliva umană. Chimie clinică. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J și colab. ARN-ul circular este îmbogățit și stabil în exozomi: un biomarker promițător pentru diagnosticul cancerului. Cercetarea celulelor. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. ARN-urile circulare ca biomarkeri promițători în cancer: detecție, funcție și nu numai. Medicina genomului. 2019; 11:15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Biopsie lichidă în carcinomul hepatocelular: celulele tumorale circulante și ADN-ul tumoral circulant. Mol Cancer. 2019; 18: 114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Potențialul utilizării ARN circular din sânge ca biomarker lichid de biopsie pentru bolile umane. Celula proteică. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. Circular ARNs: Promising Biomarkers for Human Diseases. EBioMedicine. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H și colab. ARN-urile circulare în fluidele corporale ca biomarkeri ai cancerului: noua frontieră a biopsiilor lichide. Mol Cancer. 2021; 20:13.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. ARN circulare în carcinomul cu celule renale: implicații pentru tumorigenesis, diagnostic și terapie. Mol Cancer. 2020; 19: 149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y și colab. Punct de control imunitar reglat în sus HHLA2 în carcinomul cu celule renale cu celule clare: un biomarker de prognostic nou și țintă terapeutică potențială. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y și colab. CircAGAP1 promovează progresia tumorii prin buretele miR-15-5p în carcinomul cu celule renale cu celule clare. J Exp Clin Cancer Res. 2021; 40:76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Receptorul androgenic (AR) promovează migrarea și invazia carcinomului cu celule renale cu celule clare (ccRCC) prin modificarea circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3p/CDC42 semnale. Scrisori de cancer. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M și colab. Circ-AKT3 inhibă metastaza carcinomului renal cu celule clare prin modificarea semnalelor miR-296-3p/E-caderinei. Cancerul molecular. 2019; 18: 151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H și colab. CircRNA cRAPGEF5 inhibă creșterea și metastaza carcinomului cu celule renale prin calea miR-27a-3p/TXNIP. Scrisori de cancer. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et al. Identificarea genelor noi de susceptibilitate pentru riscul de cancer colorectal dintr-un studiu de asociere la nivelul transcriptomului pe 125.478 de subiecți. Gastroenterologie. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L și colab. MicroARN-874-3p/ADAM (A dezintegrină și metaloprotează) 19 mediază activarea macrofagelor și fibroza renală după leziunea acută a rinichilor. Hipertensiune. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. Un roman circulant hsa_circ{_0081001 acţionează ca un potenţial biomarker pentru diagnosticul şi prognosticul osteosarcomului. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F și colab. Analiză multi-omică pentru a identifica genele de susceptibilitate pentru cancerul colorectal. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, March ZM, Cherry S și colab. Controlul combinatoriu al exprimării ARN circulare a Drosophila prin repetări intrronice, hnRNP și proteine ​​SR. Genes Dev. 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M și colab. O analiză cuprinzătoare cis-eQTL a dezvăluit gene țintă în locii de susceptibilitate la cancerul de sân identificați în studiile de asociere la nivel de genom. Am J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: un software pentru adnotarea circARN-urilor și determinarea specificității primerilor circARN. BMC Bioinformatica. 2018; 19: 292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Long non-coding ARN MBNL1-AS1 reglează proliferarea, migrarea și invazia celulelor stem canceroase în cancerul de colon prin interacțiunea cu MYL9 prin microARN sponging -412-3p. Clinici și cercetări în hepatologie și gastroenterologie. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D și colab. Identificarea transportorului de dopamină SLC6A3 ca biomarker pentru pacienții cu carcinom cu celule renale. Cancerul molecular. 2016; 15:10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNAs în predicția prognosticului în carcinomul cu celule renale cu celule clare. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B și colab. ARN-ul lung noncoding MRCCAT1 promovează metastaza carcinomului cu celule renale cu celule clare prin inhibarea NPR3 și activarea semnalizării p38-MAPK. Cancerul molecular. 2017; 16: 111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. ARN-uri circulare în cancerul sistemului digestiv: potențiali biomarkeri și ținte terapeutice. Am J Cancer Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. Circular RNAs in Blood. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y și colab. Peisajul ARN circular în cancer. Celulă. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y și colab. Identificarea serului exosomal has-circ-0004771 ca un biomarker de diagnostic nou al cancerului colorectal. Front Genet. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L, et al. MiRNA-urile asociate veziculelor extracelulare salivare ca potențiali biomarkeri în carcinomul bucal cu celule scuamoase. BMC Cancer. 2018; 18: 439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. Profilul de expresie MicroARN identifică tumori ale vezicii urinare de grad înalt, non-invazive musculare, cu risc crescut de a progresa la un fenotip invaziv. Genele (Basel). 2017; 8.

41. Yoshida K. Forma și aderența celulelor fibroblastice in vitro sunt modificate prin supraexprimarea izoformelor 7a și 7b ale protocadherinei 7, dar nu și izoformei 7c. Cell Mol Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE, et al. PROTOCADHERINA 7 Acționează prin SET și PP2A pentru a potența semnalizarea MAPK de către EGFR și KRAS în timpul tumorigezei pulmonare. Cancer Res. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY și colab. Protocadherin 7 inhibă migrarea celulelor și invazia prin E-cadherin în cancerul gastric. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Modificări ale expresiei genelor legate de adeziunea celulă-celulă în tumorile colorectale. Oncol Lett. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Expresia scăzută a protocadherinei7 (PCDH7) este un potențial biomarker de prognostic pentru cancerul vezicii urinare primar non-invaziv muscular. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Tremurul proteinei de legare a ARN reglează formarea circRNA. Celulă. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D, et al. FUS afectează expresia circulară a ARN-ului în neuronii motori derivați de celule stem embrionare murine. Nat Commun. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY și colab. ARN-ul circular circBIRC6 participă la circuitele moleculare care controlează pluripotența umană. Nat Commun. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG și colab. C-my reglează autofagia pentru vitalitatea pulpei în stresul oxidativ pe glucoză. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R și colab. CircACC1 reglează asamblarea și activarea complexului AMPK sub stres metabolic. Cell Metab. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Circular ARN hsa_circ_0001178 facilitează invazia și metastaza cancerului colorectal prin suprareglarea ZEB1 prin buretarea mai multor miARN. Biol Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T și colab. CircHIPK3 promovează creșterea cancerului colorectal și metastazele prin buretele miR-7. Moartea celulară Dis. 2018; 9: 417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK și colab. Scindarea endoribonucleolitică a ARN-urilor care conțin mA de către complexul RNază P/MRP. Celula Mol. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Fu5, Ping Wang1, Weiqiang

1. Al patrulea spital afiliat și institutele internaționale de medicină, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Jinhua 322000, Zhejiang, China.

2. Centrul de boli de rinichi, primul spital afiliat și Institutul de Medicină Translațională, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

3. Departamentul de Urologie, Primul Spital Afiliat, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.

4. Departamentul de Medicină Respiratorie, Spitalul Sir Run Run Shaw și Institutul de Medicină Translațională, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

5. Divizia de Endocrinologie și Metabolism, Laboratorul cheie de stat de Bioterapie și Centrul de Cancer, Spitalul West China, Universitatea Sichuan și Centrul de Inovare Colaborativă de Bioterapie, Chengdu 610041, Sichuan, China.

6. Departamentul de Oncologie Medicală, Spitalul Sir Run Run Shaw, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Hangzhou 310016, Zhejiang, China.

7. Divizia de Epidemiologie, Departamentul de Medicină, Centrul de Epidemiologie Vanderbilt și Centrul de Cancer Vanderbilt-Ingram, Școala de Medicină a Universității Vanderbilt, Nashville 37203, TN, SUA.

8. Departamentul de Nefrologie, Centrul Național de Cercetare Clinică pentru Sănătatea Copilului, Spitalul de Copii, Școala de Medicină a Universității Zhejiang, Hangzhou 310003, Zhejiang, China.