Modificări ale activității antioxidante în timpul fermentației enzimelor

Capitolul 4 Modificări ale activității antioxidante în timpul fermentației enzimelor

Fructele sunt bogate în nutrienți și vin în multe soiuri. Producția de substanțe în timpul fermentației este complexă și variată și există multe studii asupra lorActivitate antioxidantă. Oamenii explorează și descoperă mereu, caută alimente benefice pentruSănătate umană, astfel, enzimele au devenit un subiect fierbinte în ultimii ani. Procesul tradițional de producție a enzimelor este de a obține enzime prin fermentarea naturală a fructelor și legumelor. Pe baza cercetărilor anterioare, acest articol adaugă 4 bacterii de fermentare benefică. Această bacterie în sine există și în enzimă. După adăugarea suplimentară de bacterii, numărul și tipul de microorganisme în procesul de fermentare sunt modificate. Ce efect va avea această schimbare asupra activității sale antioxidante? În capitolul precedent, am luat mere ca exemplu pentru o explicație detaliată. Comparația activității antioxidante a grupului experimental și a grupului de control la diferite concentrații enzimatice a arătat că activitatea antioxidantă a enzimei în grupul experimental a fost mai mare decât cea a grupului de control. Intensitatea activității antioxidante reflectă, de asemenea, fiabilitatea enzimei într -un anumit mod.

Noile ierburi Cistanche cu putere antioxidantă puternică

 

Serviciul de susținere al WeCistanche-cel mai mare exportator de Cistanche din China:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

Acest capitol adaugă perele de fructe comune și citrice la experimentul inițial și urmărește și detectează schimbările lorActivitate antioxidantăîn timpul fermentației. Pe baza reducerii costurilor, prin experimente, sperăm să reflectăm mai cuprinzător activitatea biologică a enzimelor după adăugarea de bacterii și să oferim o anumită bază teoretică și suport de date pentru producerea de enzime microbiene By Inocularea artificială a tulpinilor.

 

 

 

4.1 Materiale și metode

4.1.1 Materiale

(1) Materiale experimentale

Spălați mere proaspete, pere și fructe de citrice cu apă sterilă în condiții sterile, uscați -le în mod natural pe o masă de funcționare sterilă, decojiți -le și feliați -le pentru utilizare ulterioară. Adăugați zahăr alb și fructe într -un borcan de sticlă sterilizat la un raport în masă de 1: 1. Activați bacteriile necesare pentru experiment și inoculați -le în enzimă în funcție de schema optimă (această etapă de operare este omisă pentru grupul de control), sigilați -o și așezați -o într -un loc rece și uscat. Faceți probe la diferite perioade de timp de fermentare la temperatura camerei pentru a obține tot lichidul enzimatic care conține pulpă de fructe și filtrați -l. Luați supernatantul ca eșantion experimental și folosiți-l pentru a măsura datele relevante după centrifugarea la 10, 000 rpm într-o centrifugă de mare viteză timp de 15 minute. Este demn de remarcat faptul că, în procesul de a face enzime, pentru a evita contaminarea inutilă, toate operațiunile noastre sunt efectuate în condiții sterile.

(2) Instrumente principale

Instrumentele necesare pentru experiment sunt aceleași cu 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metode

(1) Modificări ale conținutului total de fenol în timpul fermentației

S-au adăugat 450 µl de soluție de probă cu apă distilată pentru a face volumul 46 ml, iar apoi s-a adăugat 1 ml de reactiv Folin-phenol. Se amestecă bine și reacționează pentru 3min. Apoi s -au adăugat 3 ml de 20% NaCO3. Amestecul a fost zguduit într -o baie de apă la temperatură constantă la 25 de grade pentru 2 ore. Apa distilată a fost folosită ca control gol. Absorbanța A a fost măsurată la 760 nm de spectrofotometru. Au fost efectuate trei replici pentru fiecare tratament. Conținutul total de fenol a fost calculat în funcție de ecuația curbei standard.

(2) Modificări ale reducerii puterii în timpul fermentației

Add 450μL of sample to 2.5mL of phosphate buffer with a concentration of 0.2mol/L and a pH value of 6.6, then add 2.5mL of potassium ferricyanide (w/v) with a mass concentration of 1%, react at 50 degree for 30 minutes, add 2.5mL of trichloroacetic acid (greutate/v) Cu o concentrație de masă de 10%, centrifugă la 3000 rpm timp de 10 minute, scoateți și trageți imediat 2,5 ml de supernatant într -un balon volumetric, adăugați 2,5 ml de apă distilată și 0,5 ml de clorură ferică (greutate/v) cu o concentrație de masă de 0,1%. Folosiți apă distilată ca un control gol și măsurați absorbția A la o lungime de undă de 700 nm cu un spectrofotometru. Efectuați 3 replici pentru fiecare tratament. Puterea reducerii puterii este determinată pe baza valorii de absorbție.

 

(3) Modificări ale capacității de epurare radicală a anionului superoxid în timpul fermentației
Plasați 4.5 ml de 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8,2 tampon Tris-HCl într-o baie de apă de temperatură constantă și reglați temperatura la 25 grade. După 20 min, adăugați 1 ml soluție de probă de enzime și 0,4 ml soluție de pirogallol cu ​​o concentrație molară de 25 mmol/L. Se amestecă bine și se așează într -o baie de apă de 25 de grade timp de 5 minute. Adăugați 1,0 ml de 8 mol/L HCl pentru a încheia reacția. Utilizați tamponul Tris-HCl ca referință și utilizați un spectrofotometru pentru a măsura absorbția A la 299 nm pentru a calcula rata de epurare. Grupul de control gol folosește 1 ml de solvent în loc de eșantion. Rata de epurare a radicalului anionului superoxid este calculată conform Formulei 4.1: Rata de scădere a radicalilor de anion superoxid (%)=(a 1- a2)/a1 × 100 (4.1) unde: A1 este absorbția grupului de control gol; A2 este absorbția soluției de probă enzimatică a grupului experimental.

 

(4) Modificări ale capacității de epurare radicală hidroxilică în timpul fermentației

 

Adăugați apă la 45 0 µl Soluție de probă la 2 ml, apoi adăugați -o la 1,4 ml de peroxid de hidrogen cu o concentrație de masă molară de 6mmol/L, apoi adăugați 0,6 ml de salicilat de sodiu cu o concentrație de masă molară de 20mmol/L și 2ml de sulfat feros cu o concentrație de molar de masă de 17 grad pentru 1,5 mmol/L, și încălziți într -o temperatură constantă cu o baie de masă 37 pentru 3,5 mmol/L, și încălziți într -o temperatură constantă cu o concentrație de apă 37 pentru 37 de grad pentru 3,5 mmol/L, și încălziți într -o temperatură constantă cu o baie de masă 37 pentru 3,5 mmol/L, și încălziți într -o temperatură constanta 1H. Zero cu apă distilată și măsurați absorbția A la o lungime de undă de 562Nm cu un spectrofotometru. Au fost efectuate trei replici pentru fiecare tratament. Rata de epurare a radicalilor hidroxil a fost calculată conform formulei 4.2: rata de scădere a radicalilor hidroxil (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.2) unde: A1 este absorbția medie a golului; A2 este absorbția medie a soluției de probă.

 

(5) Modificări ale abilității de epurare a radicalilor liberi DPPH în timpul fermentației
Transferul cu exactitate 2 ml de soluție de probă enzimatică la un balon volumetric de 1 0 ml, apoi adăugați 2 ml de 80% soluție apoasă de etanol DPPH la balonul volumetric, cu o concentrație de masă molară de 2 × 10-4 mol/L. Se amestecă bine și se lasă să stea la temperatura camerei timp de 30 min. Luați 80% soluție de etanol ca referință și măsurați absorbția eșantionului la o lungime de undă de 517 nm, care este înregistrată ca A1. Se amestecă 2 ml soluție DPPH și 2 ml de soluție de etanol 80% și măsoară absorbția acestora la aceeași lungime de undă, care este înregistrată ca A0. Se amestecă 2 ml soluție de enzimă și 2 ml soluție de etanol 80% și măsoară absorbția lor la aceeași lungime de undă, care este înregistrată ca A2. Au fost efectuate trei replici pentru fiecare tratament. Calculați rata de epurare a radicalilor liberi DPPH în conformitate cu Formula 4.3:
Rata de scădere radicală liberă DPPH (%) {{0}} [1-} (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) unde: A1 este absorbția medie a soluției de 2 ml dpph 80% Ethanol Solution Aqueus Solution și 2 ml Soluție de probă; A2 este absorbția soluției de 2 ml enzime și 2 ml 80% soluție mixtă de etanol; A0 este absorbția soluției de 2 ml DPPH și soluție mixtă de 2 ml 80% etanol.

(6) Modificări ale abilității de epurare a radicalilor liberi ABTS în timpul fermentației
8 µl Soluție de probă a fost completată la 10 µl cu tampon fosfat (5 mmol/L pH 7,4) și apoi amestecat uniform cu 10 ml de sulfat de potasiu și soluție amestecată ABTS pentru a reacționa la o temperatură de reacție de 30 de grade și un timp de reacție de 5 min. Zero soluția cu apă distilată și măsurați absorbția A la o lungime de undă de 734 nm folosind un spectrofotometru. Au fost efectuate trei replici pentru fiecare tratament. Rata de epurare a radicalilor liberi ABTS a fost calculată conform Formulei 4.4:
ABTS Free radical radical rata (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.4) unde: a1 este absorbanța grupului de control gol; A2 este absorbția grupului experimental de probă.