Comparație între dozarea unică și repetată a celulelor stromale mezenchimale ale cordonului ombilical uman antiinflamator într-un model de șoarece de sepsis polimicrobian
Jul 07, 2023
rezumat
Celulele stromale mezenchimale (MSC) ameliorează sepsisul preclinic și leziunea renală acută asociată cu sepsis (SAAKI), dar studiile clinice cu MSC cu doză unică nu au indicat o eficacitate robustă. Acest studiu a investigat efectele imunomodulatoare ale unui nou produs MSC (MSC-uri derivate din cordonul ombilical uman selectat cu CD362-[hUC-MSC]) în modelele de endotoxemie și sepsis polimicrobian la șoarece. Inițial, șoarecii au primit lipopolizaharidă (LPS) intraperitoneală (ip), urmată de doze ip unice de hUC-MSC-uri sau vehicul. Apoi, șoarecii au suferit ligatură și puncție cecală (CLP) urmate de doze intravenoase (iv) de hUC-MSC la 4 ore sau 4 și 28 de ore. Analizele au inclus teste ser/plasmă ale indicilor biochimici, mediatorilor inflamatori și biomarkerului AKI NGAL; citometria în flux multicoloră a macrofagelor peritoneale (LPS) și subpopulațiilor de celule imune intra-renale (CLP) și histologie/imunohistochimie a rinichilor (CLP). La 72 de ore după injecțiile cu LPS, hUC-MSC-urile au redus mediatorii inflamatorii serici și raportul M1/M2 al macrofagelor peritoneale. Dozele repetate, dar nu unice, de hUC-MSC administrate la 48 de ore după CLP au dus la concentrații serice mai scăzute ale mediatorilor inflamatori, NGAL plasmatic mai scăzut și inversarea epuizării asociate cu sepsis a celulelor T intra-renale și a subpopulațiilor de celule mieloide. Analiza de grupare ierarhică a tuturor analiților de ser/plasmă 48-h a demonstrat gruparea parțială a animalelor hUC-MSC CLP cu doze repetate cu un grup Sham, dar nu a evidențiat o semnătură distinctă a răspunsului la terapie. S-a ajuns la concluzia că dozele repetate de hUC-MSC selectate CD362- sunt necesare pentru a modula evenimentele imune/inflamatorii sistemice și locale în sepsisul polimicrobian și SA-AKI. Variabilitatea inter-individuală și lipsa efectului administrării de MSC în doză unică în modelul CLP sunt în concordanță cu observațiile până în prezent din studiile clinice de fază incipientă.
Cuvinte cheie
Leziune renală acută · Celulă stromală mezenchimală · Medicina regenerativă · Sepsis · Inflamație · Terapie celulară
Click aici pentru a cumpara suplimentul Cistanche
Introducere
Sepsisul se caracterizează prin disfuncția organului care pune viața în pericol datorită unui răspuns dereglat al gazdei la infecția cauzată de agenți patogeni bacterieni, fungici, virali și paraziți [1]. În fiecare an, sepsisul afectează aproape 50 de milioane de oameni din întreaga lume, ducând frecvent la consecințe sistemice severe și leziuni ale organelor, inclusiv leziuni renale acute (AKI), ducând la aproximativ 11 milioane de decese [2, 3]. Celulele stromale mezenchimale (MSC) sunt celule multipotente cu proprietăți imunomodulatoare extinse care pot fi izolate din diferite țesuturi [4]. Acum este bine recunoscut faptul că MSC oferă o terapie potențială de modulare a bolii pentru sepsis și AKI asociată cu sepsis (SA-AKI) [5, 6]. Mai multe studii recente care utilizează modele de ligatură și puncție cecală la șoarece și șobolan (CLP), lipopolizaharide (LPS) sau peritonită fecală au arătat că administrarea sistemică de MSC are potențialul de a reduce inflamația, de a contracara infecțiile bacteriene și de a îmbunătăți repararea țesutului lezat în sepsis [7–11], inclusiv SA-AKI, [10, 12–15] prin modularea echilibrului dintre stările proinflamatorii și antiinflamatorii.
Un studiu recent pe adulți sănătoși a confirmat că tratamentul preventiv intravenos (iv) cu 4 × 106 MSC/kg produce efecte imunomodulatoare timpurii asupra răspunsului gazdei la LPS [16]. Mai mult, administrarea de MSC alogene la pacienții cu șoc septic (NCT01849237, NCT02421484 și NCT02328612) și sindromul de detresă respiratorie acută legat de sepsis (NCT01775774) a demonstrat o bună siguranță și tolerabilitate în studiile clinice de fază [16-19]. În ciuda acestor rezultate încurajatoare, Galstyan et al. de asemenea, a raportat că o singură doză de MSC iv nu a prevenit decesul din cauza disfuncției de organ legate de sepsis, ridicând posibilitatea ca doze suplimentare să fie necesare pentru a obține un beneficiu clinic semnificativ [17]. Un studiu recent de fază 2 fără sepsis (NCT01602328) în care doze unice de MSC alogene au fost administrate intra-vortic la pacienții cu AKI sterile după o intervenție chirurgicală de by-pass cardiopulmonar, de asemenea, nu a reușit să demonstreze un efect benefic asupra disfuncției de organ și a supraviețuirii pacientului, în ciuda faptului că este promițător. rezultatele preclinice și ale studiilor de fază 1 [20]. Dacă dozele repetate în cursul timpuriu al sepsisului și ale altor sindroame inflamatorii acute ar putea crește sau extinde efectele de modulare a bolii ale MSC, rămâne relativ subinvestigat la niveluri preclinice și translaționale. În plus, cunoașterea incompletă a mecanismului de acțiune, a răspunsului la doză și a indicilor clinici optimi pentru administrarea MSC în sepsis limitează potențialul de proiectare a studiilor de succes [5, 21, 22].
În studiul actual, am efectuat o investigație preclinică a efectelor antiinflamatorii ale MSC derivate din cordonul ombilical uman selectat CD362- (hUC-MSC) în modele de șoarece de sepsis. Acest hUC-MSC selectat cu marker de suprafață este un nou produs terapeutic care a demonstrat eficacitate în modelele de șobolan de pneumonie bacteriană și sepsis atunci când este administrat devreme după debutul bolii [23, 24]. În calitate de produs medicinal experimental de grad clinic (IMP), hUC-MSC este în prezent în curs de studiu de fază I/II la pacienții cu sindrom de detresă respiratorie acută moderată până la severă (ARDS) din cauza COVID-19 (NCT03042143) și în multiple boli inflamatorii autoimune (POLARISE). Ne-am propus să demonstrăm potențialul antiinflamator al dozelor unice de hUC-MSC în modelele de șoarece de endotoxemie/sepsis polimicrobian indus de LPS și CLP [25, 26] și, în cel din urmă, să determinăm dacă o a doua administrare de hUC-MSC în timpul cursul precoce al bolii a dus la efecte benefice mai mari sau mai frecvente asupra inflamației sistemice și a leziunilor specifice de organ, exemplificate prin SA-AKI.
Cistanche tubulosa
Materiale și metode
1. Celulele
Anti-CD362 plus hUC-MSC selectat au fost cultivate din țesut de cordon ombilical uman obținut din surse etice, obținut de la Tissue Solutions Ltd. (Glasgow, Marea Britanie). Izolarea primară și culturile de expansiune ale CD362 plus hUC-MSC au fost efectuate așa cum s-a descris anterior [19, 23, 27]. Fiolele crioconservate (1 x 107 în 1 mL) de anti-CD362 plus hUC-MSC selectat au fost dezghețate și transferate în 9 mL de soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). După analiza vii/moarte, fie prin colorant albastru tripan, fie prin contor de celule automat (NucleoCounter® NC-200™, Chemometec A/S, Danemarca), numărul necesar de celule au fost granulate prin centrifugare la 400×g timp de 5 minute și celulele au fost resuspendate în 100 ul de soluţie salină sterilă pentru injectare intraperitoneală (ip) sau iv.
2. Proceduri animale
Toate procedurile pe animale au fost efectuate sub o licență (nr. 255/17) de la Comitetul de etică pentru experimente pe animale, Universitatea din Barcelona și sub autorizație (AE19125/P082 și AE19125/P066) de la Autoritatea de Reglementare a Produselor de Sănătate, Irlanda și aprobate. de NUI Galway Animal Care Research Ethics Committee. Toate procedurile au fost efectuate în unități de animale licențiate la NUI Galway și la Universitatea din Barcelona.
Pentru modelul LPS de endotoxemie, au fost utilizați 10-12 șoareci masculi C57BL/6 în vârstă de 10-12 de la Charles River Ltd., Kent, Marea Britanie. Şoarecii au fost injectaţi ip cu 5 ug/g LPS (LPS 0111:B4, catalog nr. L2630, Sigma Aldrich, UK) în 100 ul de soluţie salină sterilă. Șoarecii au fost găzduiți în grupuri de 3-5 șoareci/cușcă în timpul studiului în cuști ventilate individual. Injecții ip unice de 2,5 x 105 hUC-MSC sau volume egale de vehicul (soluție salină sterilă) au fost administrate la 4 ore după injecțiile cu LPS. Animalele au fost monitorizate la fiecare 4 ore până la sfârșitul studiului folosind o foaie de scor de suferință și măsuri de sprijin conform unui protocol predeterminat. Eutanasia umană a fost efectuată la punctul final experimental definit sau mai devreme dacă animalele au depășit pragul de severitate predefinit. În momentul eutanasiei, exsudatele peritoneale au fost colectate pentru analiza citometriei în flux prin pescuitul cu atenție a 5 ml de PBS steril în și din cavitatea peritoneală.
Ligarea și puncția cecală (CLP) au fost efectuate pe șoareci masculi C57BL/6 în vârstă de {{0}} (Charles River Ltd., Marea Britanie). Șoarecii au primit buprenorfină {{1{{20}}}},1 mg/kg (Richter Pharma AG, Austria) subcutanat cu 25-30 minute înainte de procedură și au fost anesteziați cu 1.{{8} }} procente de izofluran (cu debit de O2 de 0,5 L/min) la NUI Galway sau cu Anesketin (100 mg/mL; Dechra Veterinary Products SLU, Spania) și Rampun (20 mg/mL; Bayer, Germania) la Universitatea din Barcelona. Jumătatea inferioară a abdomenului a fost rasă și curățată cu 4% clorhexidină sau povidonă-iodă și incizată 1 cm vertical de-a lungul liniei mediane. Cecumul a fost exteriorizat și 50% distal a fost ligat folosind suturi de 4,0- 6,0 M. Materialul cecal a fost eliberat prin puncție „prin și prin” cu un ac 21-gauge și o picătură de materie fecală a fost exudată înainte de a reintroduce cecumul în cavitatea peritoneală și de a sutura mușchiul și pielea închisă. Șoarecii operați de simulare au suferit o procedură identică, inclusiv deschiderea peritoneului și expunerea intestinului, dar fără ligatura și perforarea cecumului. Șoarecii au primit 0,5 ml de Gelofusine (Braun Melsungen AG, Germania) prin instilare ip înainte de închiderea plăgii. Suportul postoperator a constat în buprenorfină diluată administrată subcutanat (sc) la fiecare 8-12 h până la punctele finale predeterminate (48 sau 72 de ore pentru experimentele individuale). Administrarea a 1 x 106 hUC-MSC sau a volumelor echivalente de vehicul (soluție salină sterilă) a fost efectuată iv prin vena cozii la 4 ore sau 4 și 28 ore după CLP. Monitorizarea și sprijinul frecvent au fost efectuate conform unui protocol aprobat din punct de vedere etic. Eutanasia umană a fost efectuată la punctul final experimental definit sau mai devreme dacă animalele au depășit un prag de severitate predefinit.
Dozele de celule pentru cele două modele de animale folosite pentru studiu au fost selectate pe baza rapoartelor anterioare ale efectelor antiinflamatorii MSC umane în modele similare [9, 13, 14, 28, 29]. Mărimile grupurilor pentru studiul LPS au fost selectate empiric pe baza rapoartelor anterioare relevante pentru acest model [30, 31]. Mărimile grupurilor pentru studiul CLP au fost determinate pentru un rezultat primar al NGAL plasmatic la 24 de ore după operație. Folosind date dintr-un experiment pilot, a fost calculată o dimensiune a eșantionului de 9 animale per grup pentru a oferi o putere de 90% presupunând un nivel de semnificație de 5% și un test cu două fețe (http://www.3rs-reduction.co.uk/html /6__putere_și_eșantion_size.html). A fost aplicată o rată de uzură estimată de 10% pentru a selecta dimensiunea finală a grupului de n=10.
Extract de Cistanche
3. Prelevarea de sânge și obținerea de țesuturi
Probele de sânge venos până la un volum maxim de 20 μL au fost extrase intermitent din venele cozii și faciale printr-o tehnică aseptică folosind ace de măsurare 25-21 și au fost colectate în tuburi care conțineau heparină (VWR International, Dublin, Irlanda). O probă de sânge terminală a fost extrasă prin puncție cardiacă în momentul eutanasiei. Serul a fost colectat în micro-tuburi cu gel de ser și activator de coagulare (Sarstedt, Wexford, Irlanda). Probele de plasmă și ser au fost preparate prin centrifugare la 10,000xg timp de 10 min. Probele de ser au fost stocate la -80 de grade și ulterior analizate pentru parametrii biochimici de către NationWide Laboratories (Lancashire, Marea Britanie). Splina, plămânii, rinichii și ficatul au fost disecate imediat după eutanasie.
4. Teste imunologice
Concentrația de lipocalină asociată gelatinazei neutrofile din plasmă (NGAL) a fost cuantificată cu kitul de dezvoltare ELISA Lipocalin-2/NGAL Duo-Set de șoarece (R&D Systems, Minneapolis, MI, SUA) conform protocolului sugerat de producător (detalii în Metode suplimentare ). Pentru cuantificarea multiplex a citokinelor și chemokinelor din ser, a fost utilizat testul 23-plex standard al citokinelor de șoarece Bio-Plex Pro (Bio-Rad, Accuscience) conform instrucțiunilor producătorului. Probele au fost analizate pe un sistem ELISA multiplex Bioplex 200 (BioRad, Accuscience).
5. Notarea semi-cantitativă a secțiunilor de țesut renal
Secțiunile colorate ale rinichiului au fost analizate într-un mod orb prin microscopie luminoasă la o mărire de 40X utilizând un microscop cu câmp luminos Olympus BX43 (Olympus, Center Valley, PA) și cu software-ul IS TCapture (Tucsen Photonics Co., Fujian, China). Pentru fiecare rinichi, au fost capturate douăzeci de câmpuri care nu se suprapun dintr-o secțiune colorată, iar zona colorată pozitiv a fost marcată de un observator orb pentru (A) dilatație tubulară, gips și necroză (PAS) și (B) expresia NGAL [32] Notarea a fost efectuată pe o scală de notare 0-4 semi-cantitativă (detalii în Metode suplimentare). Scorurile medii au fost calculate pentru fiecare rinichi, iar rezultatele finale au fost exprimate ca medii de grup ± SD.
Pudra de Cistanche
Discuţie
Sepsisul și complicația sa frecventă SA-AKI reprezintă provocări majore de sănătate publică din cauza lipsei continue de tratamente eficiente și a rezultatelor dezamăgitoare din studiile clinice în stadiu avansat [2, 3]. Mai multe studii preclinice recente au raportat rezultate care indică faptul că MSC din diverse surse și produsele lor au efecte pozitive asupra severității bolii și supraviețuirii în modelele de sepsis și AKI [7, 8, 11-15]. Cu toate acestea, beneficiile clinice ale MSC în sepsis și SA-AKI rămân nedovedite, cu date limitate disponibile de la pacienți umani [5]. Până în prezent, studiile clinice au documentat că perfuzia intravenoasă cu MSC în doză unică în cazul administrării de LPS, sepsis și ARDS este sigură și fezabilă, [16–19], dar nu reduce în mod deschis decesul cauzat de insuficiența de organ asociată cu sepsis [17] . În acest studiu, am comparat efectele administrării iv în doză unică și dublă a unui produs terapeutic MSC uman distinctiv (hUC-MSC selectat CD362-) în modelul CLP de șoarece al sepsisului polimicrobian. Inițial, în conformitate cu rezultatele raportate recent pentru același produs MSC în modelele de șobolan de pneumonie bacteriană și sepsis [23, 24], am confirmat potențialul administrării precoce a hUC-MSC pentru a modula inflamația sistemică indusă de LPS la șoareci. Cu toate acestea, într-un model CLP de șoarece de sepsis polimicrobian, rezultatele noastre au indicat că dozele unice de hUC-MSC administrate iv 4 ore după inducerea peritonitei fecale nu au exercitat un efect benefic clar asupra inflamației sistemice sau a leziunilor tisulare specifice organelor (renale). În schimb, administrarea unei a doua doze iv de hUC-MSC 24 de ore mai târziu a dus la semnale multiple de ameliorare a inflamației și leziuni renale cu 48 de ore după debutul sepsisului. În ciuda acestui fapt, un beneficiu de supraviețuire pentru regimul cu doză dublă nu a fost demonstrat. Rezultatele noastre evidențiază importanța efectuării de studii in vivo ale produselor terapeutice MSC în mai multe modele și raportarea rezultatelor preclinice atât pozitive, cât și negative pentru a informa mai bine traducerea clinică și proiectarea studiului. Luate împreună, rezultatele noastre oferă, de asemenea, dovezi că beneficiul limitat sau absent al regimurilor precoce, cu doză unică, de produse antiinflamatoare MSC în studiile cu sepsis poate fi depășit cel puțin parțial prin dozarea repetată.
În modelul LPS de șoarece, o singură doză precoce de hUCMSC a modulat nivelurile sistemice atât ale mediatorilor inflamatori înnăscuți, cât și cei adaptativi timp de cel puțin 72 de ore, deși fără un efect evident asupra scorurilor de severitate și supraviețuire. Analiza fenotipică a macrofagelor peritoneale a furnizat dovezi că administrarea hUC-MSC a fost asociată cu un efect de modulație imună locală prezisă - deformarea macrofagelor către polarizarea M2, care a fost legată de rezolvarea leziunilor inflamatorii și de promovarea reparării tisulare [29, 35] și este posibil să fie mediată de diafonia MSC cu celulele mieloide rezidente [36]. Într-adevăr, studii recente au raportat că imunomodularea terapeutică de către MSC în sepsis poate fi dependentă de fagocitoza acestora de către celulele mieloide (fagocite mononucleare) care apoi sunt supuse unei activări alternative, ducând la producerea IL-10 și a altor antiparacrine. mediatori inflamatori [7, 27, 37]. Deși ar fi fost de interes să se determine dacă beneficiile unei astfel de imunomodulări sunt îmbunătățite de doze repetate de hUC-MSC după administrarea LPS, am motivat că un model experimental care reflectă mai bine evoluția sepsisului ar avea o relevanță clinică mai mare. Astfel, având confirmată activitatea biologică a hUC-MSC la șoareci folosind administrarea LPS, modelul CLP de șoarece a fost utilizat pentru caracterizarea efectelor antiinflamatorii legate de dozarea repetată și cuantificarea efectelor specifice rinichilor ale hUC-MSC în sepsis polimicrobian. și SA-AKI. În mâinile noastre, acest model a fost asociat cu sepsis moderat sever (aproximativ 70%, 50% și 40% supraviețuire la 48, 96 și, respectiv, 168 de ore la animalele netratate) fără insuficiență hepatică și renală evidentă. Observațiile noastre pentru model, inclusiv ratele mortalității și tendințele parametrilor hepatici serici și albuminei, sunt în concordanță cu profilul foarte cuprinzător al CLP de șoarece raportat de Li și colab. [38], care documentează, de asemenea, scăderea temperaturii corpului, a tensiunii arteriale și a ritmului cardiac în primele 48 de ore post-CLP. Interesant, în timp ce Li et al. au documentat o creștere a creatininei serice și a azotului ureic din sânge la 8 și 16 ore după CLP, rezultatele lor indică faptul că acești biomarkeri funcționali renali au scăzut la niveluri normale (sau sub normal) în 48 de ore – reflectând probabil efectele evolutive ale metabolismului modificat/masei musculare asupra acești biomarkeri pe măsură ce modelul progresează [38]. În concordanță cu aceasta, analiza serului/plasmei și a țesutului renal la 48 de ore a indicat o inflamație sistemică semnificativă și un răspuns la leziuni renale fără dovezi clare de afectare ischemică/necroză. Aceste din urmă analize au furnizat cele mai clare dovezi pentru un efect modulator al regimului de hUCMSC cu doză dublă asupra severității sepsisului polimicrobian în comparație cu administrarea în doză unică care, spre deosebire de rezultatele raportate recent într-un model CLP de șobolan [24], nu se poate distinge. din grupul CLP tratat cu soluție salină pe toți indicii examinați. În special, biomarkerul AKI relevant din punct de vedere clinic, NGAL, sa dovedit a fi un discriminator valoros al severității sepsisului și al efectului tratamentului în acest model și poate fi un biomarker important pentru studiile clinice viitoare ale terapiilor celulare în sepsis și SA-AKI [33, 39] ].
Rezultatele noastre pentru efectul MSC iv asupra supraviețuirii la modelele animale mici de sepsis sunt în contrast cu alte rapoarte [28, 40] dar, în special, sunt în concordanță cu efectele observate ale MSC alogene în studiile clinice umane [5, 16- 18, 41]. În acest sens, am evidenția rolul potențial al prejudecăților de publicare – în special, publicarea selectivă a rezultatelor care reflectă efecte pozitive – ca un factor important al așteptărilor nerealiste pentru eficacitatea regimurilor MSC cu doză unică și a altor terapii avansate în primele etape ale clinicii. traducere [42]. Într-adevăr, Sun și colab., într-o meta-analiză recentă a 29 de studii pe animale privind eficacitatea terapiilor MSC în sepsis, au detectat prejudecăți semnificative de publicare și lipsă de claritate cu privire la doza optimă de celule printre aceste rapoarte preclinice [43]. Cu toate acestea, raportăm, de asemenea, constatări pozitive distinctive care pot ajuta la avansarea obiectivelor translaționale pentru UC-MSC în sepsis sau alte boli inflamatorii sistemice și specifice organelor, cum ar fi AKI, boli hepatice sau respiratorii. În ambele modele, aceste modificări moleculare indică interacțiuni complexe ale hUC-MSC cu răspunsul imun Th1 și Th2. Astfel de efecte asupra activării celulelor T-efectoare și echilibrului fenotipului T helper pot juca un rol cheie în modularea fazei acute a sepsisului, deoarece activarea nediscriminată, dereglată a efectorilor imunitari, care duce la niveluri ridicate de citokine circulante, contribuie la insuficiența multi-organă [44] și, în cazul celulelor T, poate fi urmată de apoptoză larg răspândită și deficiențe imune ulterioare [45]. De asemenea, s-a demonstrat că administrarea de MSC poate scădea inflamația localizată a țesuturilor prin reglarea homeostaziei citokinelor și scăderea traficului de celule imune în organe [44]. În conformitate cu aceasta, analiza noastră cantitativă a unei game de populații de celule imune intra-renale la 48 de ore după sepsisul indus de CLP a evidențiat deficiențe induse de sepsis care afectează atât efectorii înnăscuți, cât și cei adaptativi, inclusiv pierderea celulelor T dublu negative care au fost raportate recent. să fie răspunsuri precoce la AKI [46]. În special, pentru animalele tratate cu hUC-MSC cu doză dublă, dar nu cu doză unică, au existat dovezi ale reversirii epuizării celulelor imune intrarenale. Deoarece tendințe similare au fost observate și în plămâni și splină, rezultatele noastre indică potențialul dozării iv repetate de MSC pentru a ameliora în mare măsură epuizarea celulelor imune din organele non-limfoide și limfoide - o fațetă a sepsisului care a fost legată de mortalitatea ulterioară din cauza infecție secundară [47, 48]. Pe baza observației suplimentare a creșterii morții celulare în rândul celulelor intrarenale CD45 plus la animalele CLP netratate, este plauzibil ca acest lucru să reflecte efectele directe sau indirecte ale hUC-MSC pentru a reduce disfuncția mitocondrială și semnalizarea pro-apoptotică [49-51]. Cu toate acestea, vor fi necesare experimente mai concentrate pentru a elucida pe deplin mecanismele prin care administrarea sistemică de MSC păstrează numărul de celule mieloide și/sau limfoide în sepsis și pentru a determina dacă acestea pot fi exploatate terapeutic.
Cistanche capsule
Având în vedere variabilitatea inerentă, noi și alții observăm cu rezultate individuale pentru modelul CLP de șoarece, am emis ipoteza că analiza de grupare ierarhică a citirilor cantitative pentru o serie de mediatori circulanți legați de inflamație la 48 de ore ar ajuta la definirea mai bună a unei „semnături de răspuns” distinctive. printre animalele tratate cu MSC. Deși 60 la sută din grupul cu doză dublă s-au grupat într-un model care i-a separat de majoritatea grupurilor cu doză unică și netratate și a fost mai aproape de grupul de simulare, nu a putut fi identificat un profil multi-analitic foarte clar al modulării bolii. O abordare a analizei componentelor principale (PCA) a condus la o concluzie similară (datele nu sunt prezentate). Trebuie recunoscut faptul că datele de la animalele care nu au supraviețuit până la 48 de ore nu au putut fi obținute și este posibil ca analizele la unul sau mai multe momente anterioare să ofere o separare mai distinctă între respondenți/non-răspunzători. Cu toate acestea, această analiză evidențiază complexitatea variației inter-individuale care este inerentă modelelor animale de sepsis și terapii celulare, chiar și cu o atenție deosebită la principiile unui design experimental bun [52, 53] și care reflectă provocări similare cu care se confruntă în aplicarea clinică a terapii noi pentru sepsis [18, 20, 41, 54, 55].
Unele limitări ale studiului trebuie recunoscute. În primul rând, ne-am concentrat pe investigarea efectelor in vivo ale hUC-MSC selectate cu CD362-, deoarece acest produs celular este supus unor studii clinice pentru alte boli cauzate de inflamație, inclusiv SDRA asociată cu COVID-19-. Acest proiect de studiu a împiedicat obținerea unor informații suplimentare asupra efectelor comparative, în sepsis și SA-AKI, ale produsului celular testat cu cele ale hUC-MSC neselectate sau cu MSC derivate din măduva osoasă sau din alte țesuturi. În al doilea rând, deoarece dozele de celule utilizate au fost alese pe baza studiilor anterioare ale efectelor antiinflamatorii MSC umane la șoareci, nu este posibil să se determine dacă administrări multiple de un număr de celule mai mare sau mai mic oferă beneficii mai mari. În cele din urmă, deoarece dimensiunile grupurilor pentru experimentele cu modelul CLP au fost alimentate pentru a aborda efectele hUC-MSC asupra unui biomarker inflamator sistemic al severității sepsisului/SA-AKI, este posibil ca grupuri mai mari să fi definit mai clar efectele dozelor repetate asupra supravieţuire. În timp ce aceste probleme subliniază și mai mult necesitatea experimentelor preclinice secvențiale care să adere cât mai mult posibil la parametrii cheie necesari pentru proiectarea optimă a studiilor clinice, rezultatele pe care le prezentăm aici susțin o concentrare continuă asupra regimurilor multi-doze de MSC antiinflamatorii în sepsis și SA-AKI.
Referințe
1. Singer, M., Deutschman, CS, Seymour, CW, Shankar-Hari, M., Annane, D., Bauer, M., Bellomo, R., Bernard, GR, Chiche, JD, Coopersmith, CM, Hotchkiss , RS, Levy, MM, Marshall, JC, Martin, GS, Opal, SM, Rubenfeld, GD, van der Poll, T., Vincent, JL și Angus, DC (2016). A treia definiție internațională de consens pentru sepsis și șoc septic (sepsis-3). Jurnalul Asociației Medicale Americane, 315(8), 801–810. https://doi.org/10.1001/jama.2016.0287
2. Hoste, EA, Bagshaw, SM, Bellomo, R., Cely, CM, Colman, R., Cruz, DN, Edipidis, K., Forni, LG, Gomersall, CD, Govil, D., Honore, PM, Joannes-Boyau, O., Joannidis, M., Korhonen, AM, Lavrentieva, A., Mehta, RL, Palevsky, P., Roessler, E., Ronco, C. și colab. (2015). Epidemiologia leziunii renale acute la pacienții în stare critică: studiul multinațional AKI-EPI. Intensive Care Medicine, 41(8), 1411–1423. https://doi.org/ 10.1007/s00134-015-3934-7
3. Rudd, KE, Johnson, SC, Agesa, KM, Shackelford, KA, Tsoi, D., Kievlan, DR, Colombara, DV, Ikuta, KS, Kissoon, N., Finfer, S., Fleischmann-Struzek, C ., Machado, FR, Reinhart, KK, Rowan, K., Seymour, CW, Watson, RS, West, TE, Marinho, F., Hay, SI și colab. (2020). Incidența și mortalitatea sepsisului la nivel mondial, regional și național, 1990-2017: Analiză pentru studiul povara globală a bolii. Lancet, 395(10219), 200–211. https://doi. org/10.1016/S0140-6736(19)32989-7
4. Arutyunyan, I., Elchaninov, A., Makarov, A. și Fatkhudinov, T. (2016). Cordonul ombilical ca sursă prospectivă pentru terapia bazată pe celule stem mezenchimale. Stem Cells International, 2016, 6901286. https://doi.org/10.1155/2016/6901286
5. Fazekas, B. și Grifn, MD (2020). Terapii bazate pe celule stromale mezenchimale pentru leziunea renală acută: progrese în ultimul deceniu. Kidney International, 97(6), 1130–1140. https://doi.org/10. 1016/j.kint.2019.12.019
6. Hickson, LJ, Herrmann, SM, McNicholas, BA și Grifn, MD (2021). Progresul către aplicarea clinică a celulelor stromale mezenchimale și a altor terapii regenerative care modulează boala: exemple din domeniul nefrologiei. Kidney360, 2(3), 542–557. https://doi.org/10.34067/kid.0005692020
7. Weiss, ARR, Lee, O., Eggenhofer, E., Geissler, E., Korevaar, SS, Soeder, Y., Schlitt, HJ, Geissler, EK, Hoogduijn, MJ și Dahlke, MH (2020). Efecte diferențiate ale msc inactivată prin căldură, cu deficit de secretom și ale msc activ metabolic în sepsis și transplantul alogen de inimă. Stem Cells, 38(6), 797–807. https://doi.org/10.1002/stem.3165
8. Jerkic, M., Gagnon, S., Rabani, R., Ward-Able, T., Masterson, C., Otulakowski, G., Curley, GF, Marshall, J., Kavanagh, BP și Lafey, JG (2020). Celulele stromale mezenchimale ale cordonului ombilical uman atenuează sepsisul sistemic parțial prin îmbunătățirea uciderii bacteriilor macrofagelor peritoneale prin inducerea hemoxigenazei-1 la șobolani. Anesthesiology, 132(1), 140–154. https://doi.org/10.1097/ ALN.0000000000003018
9. Wu, KH, Wu, HP, Chao, WR, Lo, WY, Tseng, PC, Lee, CJ, Peng, CT, Lee, MS și Chao, YH (2016). Exprimarea în serie de timp a semnalizării receptorului 4 asemănător toll la șoarecii septici tratați cu celule stem mezenchimale. Shock, 45(6), 634–640. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000546
10. Chang, CL, Leu, S., Sung, HC, Zhen, YY, Cho, CL, Chen, A., Tsai, TH, Chung, SY, Chai, HT, Sun, CK, Yen, CH și Yip , HK (2012). Impactul celulelor stem mezenchimale apoptotice derivate din adiposul asupra atenuării leziunilor organelor și asupra reducerii mortalității în sindromul de sepsis la șobolan indus de puncția și ligatura cecală. Journal of Translational Medicine, 10, 244. https://doi. org/10.1186/1479-5876-10-244
11. Hall, SR, Tsoyi, K., Ith, B., Padera Jr., RF, Lederer, JA, Wang, Z., Liu, X. și Perrella, MA (2013). Celulele stromale mezenchimale îmbunătățesc supraviețuirea în timpul sepsisului în absența hemoxigenazei-1: importanța neutrofilelor. Celulele stem, 31(2), 397–407. https://doi.org/10.1002/stem.1270
12. Zhang, G., Zou, X., Huang, Y., Wang, F., Miao, S., Liu, G., Chen, M. și Zhu, Y. (2016). Veziculele extracelulare derivate din celulele stromale mezenchimale protejează împotriva leziunii renale acute prin antioxidare prin îmbunătățirea activării nrf2/are la șobolani. Cercetarea rinichilor și a tensiunii arteriale, 41(2), 119–128. https://doi.org/10. 1159/000443413
13. Luo, CJ, Zhang, FJ, Zhang, L., Geng, YQ, Li, QG, Hong, Q., Fu, B., Zhu, F., Cui, SY, Feng, Z., Sun, XF , și Chen, XM (2014). Celulele stem mezenchimale ameliorează leziunea renală acută asociată cu sepsis la șoareci. Şoc, 41(2), 123–129. https://doi. org/10.1097/SHK.0000000000000080
14. Condor, JM, Rodrigues, CE, Sousa Moreira, R., Canale, D., Volpini, RA, Shimizu, MH, Camara, NO, Noronha Ide, L., & Andrade, L. (2016). Tratamentul cu celule stem mezenchimale umane derivate din jeleu Wharton atenuează leziunile renale induse de sepsis, leziunile hepatice și disfuncția endotelială. Stem Cells Translational Medicine, 5(8), 1048–1057. https://doi.org/10.5966/sctm. 2015-0138
15. Zullo, JA, Nadel, EP, Rabadi, MM, Baskind, MJ, Rajdev, MA, Demaree, CM, Vasko, R., Chugh, SS, Lamba, R., Goligorsky, MS și Ratliff, BB (2015) ). Secretomul celulelor progenitoare endoteliale încorporate în hidrogel și al celulelor stem mezenchimale instruiește polarizarea macrofagelor în endotoxemie. Stem Cells Translational Medicine, 4(7), 852–861. https://doi.org/10. 5966/sctm.2014-0111
16. Perlee, D., van Vught, LA, Scicluna, BP, Maag, A., Lutter, R., Kemper, EM, van 't Veer, C., Punchard, MA, Gonzalez, J., Richard, MP , Dalemans, W., Lombardo, E., de Vos, AF și van der Poll, T. (2018). Infuzia intravenoasă de celule stem mezenchimale adipoase umane modifică răspunsul gazdei la lipopolizaharide la oameni: un studiu randomizat, unic-orb, cu grupuri paralele, controlat cu placebo. Stem Cells, 36(11), 1778–1788. https:// doi.org/10.1002/stem.2891
17. Gennadiy Galstyan, PM, Parovichnikova, E., Kuzmina, L., Troitskaya, V., Gemdzhian, E. și Savchenko, V. (2018). Rezultatele studiului clinic rusesc randomizat cu un singur centru pilot de celule stromale mezenchimale la pacienții cu neutropenie severă cu șoc septic (RUMCESS). International Journal Blood Research and Disorders, 5(1), 33. https://doi.org/10.23937/2469-5696/1410033
18. McIntyre, LA, Stewart, DJ, Mei, SHJ, Courtman, D., Watpool, I., Granton, J., Marshall, J., Dos Santos, C., Walley, KR, Winston, BW, Schlosser, K., Fergusson, DA și grupul canadian de studii de îngrijire critică și grupul canadian de biologie translațională de îngrijire critică. (2018). Imunoterapie celulară pentru șoc septic. Un studiu clinic de fază I. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 337–347. https://doi.org/10. 1164/rccm.201705-1006OC
19. Matthay, MA, Calfee, CS, Zhuo, H., Thompson, BT, Wilson, JG, Levitt, JE, Rogers, AJ, Gotts, JE, Wiener-Kronish, JP, Bajwa, EK, Donahoe, MP, McVerry , BJ, Ortiz, LA, Exline, M., Christman, JW, Abbott, J., Delucchi, KL, Caballero, L., McMillan, M. și colab. (2019). Tratamentul cu celule stromale mezenchimale alogene pentru sindromul de detresă respiratorie acută moderată până la severă (studiu START): un studiu de siguranță randomizat de fază 2a. The Lancet Respiratory Medicine, 7(2), 154–162. https://doi.org/10. 1016/S2213-2600(18)30418-1
20. Swaminathan, M., Staford-Smith, M., Chertow, GM, Warnock, DG, Paragamian, V., Brenner, RM, Lellouche, F., FoxRobichaud, A., Atta, MG, Melby, S., Mehta, RL, Wald, R., Verma, S., Mazer, CD și anchetatori, A.-A. (2018). Celule stem mezenchimale alogene pentru tratamentul AKI după intervenția chirurgicală cardiacă. Jurnalul Societății Americane de Nefrologie, 29(1), 260–267. https://doi.org/10.1681/ASN.2016101150
21. Gotts, JE și Matthay, MA (2018). Terapia celulară în sepsis. Un pas mai aproape. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 197(3), 280–281. https://doi.org/10.1164/rccm. 201710-2068ED
22. Griffin, MD și Swaminathan, S. (2020). Editorial: Produse biologice și medicamente inovatoare pentru a viza inflamația renală. Frontiers in Pharmacology, 11, 38. https://doi.org/10.3389/fphar.2020.00038
23. Horie, S., Masterson, C., Brady, J., Loftus, P., Horan, E., O'Flynn, L., Elliman, S., Barry, F., O'Brien, T. , Lafey, JG și O'Toole, D. (2020). Celule stromale mezenchimale CD362( plus ) derivate din cordonul ombilical pentru e. coli pneumonie: impactul regimului de dozare, trecere, crioconservare și terapie cu antibiotice. Cercetare și terapie cu celule stem, 11(1), 116. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01624-8
24. Gonzalez, H., Keane, C., Masterson, CH, Horie, S., Elliman, SJ, Higgins, BD, Scully, M., Lafey, JG și O'Toole, D. (2020). Celulele stromale mezenchimale CD362(plus) derivate din cordonul ombilical atenuează sepsisul polimicrobian indus de ligatura și puncția cecală. Jurnalul Internațional de Științe Moleculare, 21(21). https://doi.org/10.3390/ijms21218270
25. Lewis, AJ, Seymour, CW și Rosengart, MR (2016). Modele murine actuale de sepsis. Infecții chirurgicale, 17(4), 385–393. https://doi.org/10.1089/sur.2016.021
26. Remick, DG și Ward, PA (2005). Evaluarea modelelor de endotoxine pentru studiul sepsisului. Șoc, 24 (Suppl 1), 7–11. https:// doi.org/10.1097/01.shk.0000191384.34066.85
27. de Witte, SFH, Luk, F., Sierra Parraga, JM, Gargesha, M., Merino, A., Korevaar, SS, Shankar, AS, O'Flynn, L., Elliman, SJ, Roy, D. , Betjes, MGH, Newsome, PN, Baan, CC și Hoogduijn, MJ (2018). Imunomodularea de către celulele stromale mezenchimale terapeutice (MSC) este declanșată prin fagocitoza MSC de către celulele monocitare. Celulele stem, 36(4), 602–615. https:// doi.org/10.1002/stem.2779
28. Zhao, X., Liu, D., Gong, W., Zhao, G., Liu, L., Yang, L. și Hou, Y. (2014). Liganzii receptorului 3 de tip toll, poli(I:C), îmbunătățește funcția imunosupresoare și efectul terapeutic al celulelor stem mezenchimale asupra sepsisului prin inhibarea mir-143. Stem Cells, 32(2), 521–533. https://doi.org/10.1002/stem.1543
29. Nemeth, K., Leelahavanichkul, A., Yuen, PS, Mayer, B., Parmelee, A., Doi, K., Robey, PG, Leelahavanichkul, K., Koller, BH, Brown, JM, Hu, X., Jelinek, I., Star, RA și Mezey, E. (2009). Celulele stromale ale măduvei osoase atenuează sepsisul prin reprogramarea dependentă de prostaglandina E(2) a macrofagelor gazdă pentru a le crește producția de interleukine-10. Nature Medicine, 15(1), 42–49. https://doi.org/10.1038/nm.1905
30. Fletcher, AL, Elman, JS, Astarita, J., Murray, R., Saeidi, N., D'Rozario, J., Knoblich, K., Brown, FD, Schildberg, FA, Nieves, JM, Heng , TS, Boyd, RL, Turley, SJ și Parekkadan, B. (2014). Transplanturile de celule reticulare fibroblastice de ganglioni limfatici arată o eficacitate terapeutică robustă în sepsisul murin cu mortalitate ridicată. Science Translational Medicine, 6(249), 249ra109. https:// doi.org/10.1126/scitranslmed.3009377
31. Gonzalez-Rey, E., Anderson, P., Gonzalez, MA, Rico, L., Buscher, D., & Delgado, M. (2009). Celulele stem adulte umane derivate din țesutul adipos protejează împotriva colitei și sepsisului experimental. Gut, 58(7), 929–939. https://doi.org/10.1136/gut.2008. 168534
32. Kaucsar, T., Godo, M., Revesz, C., Kovacs, M., Mocsai, A., Kiss, N., Albert, M., Krenacs, T., Szenasi, G. și Hamar, P. (2016). Raportul lipocalin asociat cu gelatinaza neutrofilă urina/plasmă este un marker sensibil și specific al leziunii renale acute subclinice la șoareci. PLoS One, 11(1), e0148043. https://doi.org/10.1371/journ al.pone.0148043
33. Park, HK, Kim, S., Lee, S.-S., Kim, H.-J., Ahn, H.-S., Song, JY, Um, T.-H., Cho, C .-R., Jung, H., Koo, H.-K., Sim, YS, Song, J.-U. și Park, J.-H. (2015). Ajută NGAL plasmatic la predicția leziunii renale acute la pacienții cu sepsis?: O revizuire sistematică și meta-analiză. European Respiratory Journal, 46(suppl 59), PA2148. https://doi.org/10.1183/13993003.cong ess-2015.PA2148
34. Koeze, J., van der Horst, ICC, Keus, F., Wiersema, R., Dieperink, W., Kootstra-Ros, JE, Zijlstra, JG și van Meurs, M. (2020). Lipocalină asociată gelatinazei neutrofilelor plasmatice la internarea în unitatea de terapie intensivă ca predictor al progresiei leziunii renale acute. Clinical Kidney Journal, 13(6), 994–1002. https://doi. org/10.1093/ckj/sfaa002
35. Lee, KY (2019). Polarizarea M1 și M2 a macrofagelor: o mini-revizuire. Medical Biological Science and Engineering, 2(1), 1–5. https://doi.org/10.30579/mbse.2019.2.1.1
36. Eggenhofer, E., Luk, F., Dahlke, MH și Hoogduijn, MJ (2014). Viața și soarta celulelor stem mezenchimale. Frontiers in Immunology, 5, 148. https://doi.org/10.3389/fmmu.2014.00148
37. Luk, F., de Witte, SF, Korevaar, SS, Roemeling-van Rhijn, M., Franquesa, M., Strini, T., van den Engel, S., Gargesha, M., Roy, D. , Dor, FJ, Horwitz, EM, de Bruin, RW, Betjes, MG, Baan, CC și Hoogduijn, MJ (2016). Celulele stem mezenchimale inactivate mențin capacitatea imunomodulatoare. Celulele stem și dezvoltare, 25(18), 1342–1354. https://doi.org/10.1089/scd. 2016.0068
38. Li, JL, Li, G., Jing, XZ, Li, YF, Ye, QY, Jia, HH, Liu, SH, Li, XJ, Li, H., Huang, R., Zhang, Y., & Wang, H. (2018). Evaluarea biomarkerilor clinici asociați cu sepsisul într-un model de șoarece septic. Journal of International Medical Research, 46(6), 2410–2422. https://doi.org/10.1177/0300060518764717
39. Cai, L., Rubin, J., Han, W., Venge, P. și Xu, S. (2010). Originea formelor moleculare multiple în urina HNL/NGAL. Jurnalul clinic al Societății Americane de Nefrologie, 5(12), 2229–2235. https://doi.org/10.2215/CJN.00980110
40. Capcha, JMC, Rodrigues, CE, Moreira, RS, Silveira, MD, Dourado, P., Dos Santos, F., Irigoyen, MC, Jensen, L., Garnica, MR, Noronha, IL, Andrade, L. , & Gomes, SA (2020).
41. Schlosser, K., Wang, JP, Dos Santos, C., Walley, KR, Marshall, J., Fergusson, DA, Winston, BW, Granton, J., Watpool, I., Stewart, DJ, McIntyre, LA, Mei, SHJ, & Canadian Critical Care Trials, G., & Canadian Critical Care Translational Biology, G. (2019). Efectele tratamentului cu celule stem mezenchimale asupra nivelurilor sistemice de citokine într-un studiu de siguranță de fază 1 cu creșterea dozei la pacienții cu șoc septic. Critical Care Medicine, 47(7), 918– 925. https://doi.org/10.1097/CCM.0000000000003657
42. van Rhijn-Brouwer, FCC, Gremmels, H., Fledderus, JO și Verhaar, MC (2018). Caracteristicile celulelor stromale mezenchimale și potențialul regenerativ în bolile cardiovasculare: Implicații pentru terapia celulară. Cell Transplantation, 27(5), 765–785. https:// doi.org/10.1177/0963689717738257
43. Sun, XY, Ding, XF, Liang, HY, Zhang, XJ, Liu, SH, Bing, H., Duan, XG și Sun, TW (2020). Eficacitatea terapiei cu celule stem mezenchimale pentru sepsis: o meta-analiză a studiilor preclinice. Cercetare și terapie cu celule stem, 11(1), 214. https://doi.org/ 10.1186/s13287-020-01730-7
44. Laroye, C., Gibot, S., Reppel, L. și Bensoussan, D. (2017). Revizuire concisă: Celulele stromale/stem mezenchimale: un nou tratament pentru sepsis și șoc septic? Stem Cells, 35(12), 2331–2339. https:// doi.org/10.1002/stem.2695
45. Brady, J., Horie, S. și Lafey, JG (2020). Rolul răspunsului imun adaptativ în sepsis. Terapie intensivă Medicină Experimental, 8 (Suppl 1), 20. https://doi.org/10.1186/s40635-020-00309-z
46. Martina, MN, Noel, S., Saxena, A., Bandapalle, S., Majithia, R., Jie, C., Arend, LJ, Allaf, ME, Rabb, H. și Hamad, AR (2016) ). Celulele T alfa-beta dublu negative au răspuns timpuriu la Aki și se găsesc în rinichii umani. Jurnalul Societății Americane de Nefrologie, 27(4), 1113–1123. https://doi.org/10.1681/ ASN.2014121214
47. Hotchkiss, RS, Tinsley, KW, Swanson, PE, Schmieg Jr., RE, Hui, JJ, Chang, KC, Osborne, DF, Freeman, BD, Cobb, JP, Buchman, TG și Karl, IE (2001) ). Apoptoza indusă de sepsis provoacă epuizarea profundă progresivă a limfocitelor B și CD4 plus T la om. Jurnalul de Imunologie, 166(11), 6952–6963. https://doi.org/10.4049/jimmunol.166.11.6952
48. Condotta, SA, Cabrera-Perez, J., Badovinac, VP, & Grifth, TS (2013). Imunitatea mediată de celule T și rolul TRAIL în imunosupresia indusă de sepsis. Critical Reviews in Immunology, 33(1), 23–40. https://doi.org/10.1615/critrevimmunol.20130 06721
49. Khosrojerdi, A., Soudi, S., Hosseini, AZ, Eshghi, F., Shafee, A. și Hashemi, SM (2021). Efectele imunomodulatoare și terapeutice ale celulelor stem mezenchimale asupra disfuncției de organ în sepsis. Shock, 55(4), 423–440. https://doi.org/10.1097/SHK.0000000000 001644
50. Nie, P., Bai, X., Lou, Y., Zhu, Y., Jiang, S., Zhang, L., Tian, N., Luo, P. și Li, B. (2021) . Celulele stem mezenchimale ale cordonului ombilical uman reduc deteriorarea oxidativă și apoptoza în nefropatia diabetică prin activarea Nrf2. Cercetare și terapie cu celule stem, 12(1), 450. https://doi.org/10.1186/s13287-021-02447-x
51. dos Santos, CC, Murthy, S., Hu, P., Shan, Y., Haitsma, JJ, Mei, SH, Stewart, DJ și Liles, WC (2012). Analiza de rețea a răspunsurilor transcripționale induse de tratamentul cu celule stem mezenchimale al sepsisului experimental. Jurnalul American de Patologie, 181(5), 1681–1692. https://doi.org/10.1016/j.ajpath.2012.08.009
52. von Kortzfeisch, VT, Karp, NA, Palme, R., Kaiser, S., Sachser, N. și Richter, SH (2020). Îmbunătățirea reproductibilității în cercetarea pe animale prin împărțirea populației de studiu în mai multe „mini-experimente”. Scientifc Reports, 10(1), 16579. https://doi.org/10. 1038/s41598-020-73503-4
53. Tanavde, V., Vaz, C., Rao, MS, Vemuri, MC și Pochampally, RR (2015). Cercetare folosind celule stem/stromale mezenchimale: metrica de calitate pentru dezvoltarea unui material de referință. Citoterapie, 17(9), 1169–1177. https://doi.org/10.1016/j.jcyt.2015. 07.008
54. Pickkers, P., Heemskerk, S., Schouten, J., Laterre, PF, Vincent, JL, Beishuizen, A., Jorens, PG, Spapen, H., Bulitta, M., Peters, WH și van der Hoeven, JG (2012). Fosfataza alcalină pentru tratamentul leziunilor renale acute induse de sepsis: un studiu prospectiv randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo. Îngrijire critică, 16(1), R14. https://doi.org/10.1186/cc11159
55. Pickkers, P., Mehta, RL, Murray, PT, Joannidis, M., Molitoris, BA, Kellum, JA, Bachler, M., Hoste, EAJ, Hoiting, O., Krell, K., Ostermann, M. ., Rozendaal, W., Valkonen, M., Brealey, D., Beishuizen, A., Meziani, F., Murugan, R., de Geus, H., Payen, D., et al. (2018). Efectul fosfatazei alcaline recombinate umane asupra clearance-ului creatininei 7-zi la pacienții cu insuficiență renală acută asociată cu sepsis: un studiu clinic randomizat. Jurnalul Asociației Medicale Americane, 320(19), 1998–2009. https://doi.org/10.1001/jama.2018.14283
Barbara Fazekas1 · Senthilkumar Alagesan2 · Luke Watson2 · Olivia Ng1,2 · Callum M. Conroy1,2 · Cristina Català3 · Maria Velascode Andres3 · Neema Negi1 · Jared Q. Gerlach4 · Sean O. Hynes5,6 · Francisco Lozano3,7,8 · Stephen J. Elliman2 · Matthew D. Grifn1,9,10
1 Institutul de Medicină Regenerativă de la Centrul CÚRAM pentru Cercetare în Dispozitive Medicale, Școala de Medicină, Universitatea Națională a Irlandei Galway, Galway, Irlanda
2 Orbsen Therapeutics Ltd., Galway, Irlanda
3 Institut d'Investigacions Biomèdiques August Pi i Sunyer, Barcelona, Spania
4 Glycoscience Group, National Center for Biomedical Engineering Science, National University of Ireland Galway, Galway, Irlanda
5 Disciplina de patologie, Școala de Medicină, Universitatea Națională a Irlandei Galway, Galway, Irlanda
6 Departamentul de Histopatologie, Spitalele Universitare Galway, Galway, Irlanda
7 Servei d'Immunologia, Hospital Clínic de Barcelona, Barcelona, Spania
8 Department de Biomedicina, Universitat de Barcelona, Barcelona, Spania
9 Departamentul de Nefrologie, Saolta University Health Care Group, Galway University Hospitals, Galway, Irlanda
10 Universitatea Națională a Irlandei Galway, REMEDI, Științe Biomedicale, Corrib Village, Dangan, Galway H91 TK33, Irlanda
