Determinarea conținutului a cinci compuși din materialul seminal Rehmanniae și stabilirea amprentei HPLC

Tabelul 3 Rezultatele testului de recuperare (n=6)

2.4 Determinarea probei

Cele șase loturi de Rehmannia colectate au fost preparate conform metodei de la „2.2.2” și prelevate și determinate conform condițiilor cromatografice de la „2.1”. Rezultatele determinării conținutului sunt prezentate în tabelul 4. Rezultatele arată că dintre cele cinci componente, conținutul de rehmannia glicozidă D este cel mai mare, variind de la 0,460% la {{1 0}},730%; conținutul de glicozidă leonuri este al doilea, variind de la 0,100% la 0,270%, iar conținutul celor două componente în probe din diferite zone de producție nu este semnificativ diferit. În proba SX1, cu excepția echinacozidei, conținutul celorlalte patru componente este semnificativ mai mare decât cel al altor loturi de probe; conținutul de echinacozid, cistancheside A și verbascozid din Rehmannia glutinosa din diferite zone de producție este destul de diferit și neregulat.

CISTANCHE HERB CUCONSISTENȚĂ DE BUNE CALITATE

2.5 Stabilirea și evaluarea asemănării amprentei HPLC a Rehmannia glutinosa

Cromatogramele și datele determinării conținutului cu mai multe componente în Rehmannia glutinosa au fost importate în software-ul „Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)” și a fost selectată cromatograma probei de testare SX1 ca spectru de referinţă. Lățimea ferestrei de timp a fost setată la 0,10 min, iar metoda mediei a fost utilizată pentru a genera spectre suprapuse și spectre de referință. Au fost identificate un total de 23 de vârfuri comune (vezi Figura 3). Asemănarea dintre amprentele probei Rehmannia glutinosa și referința a fost de 0,904 ~ 0,950, ceea ce indică faptul că mostrele de Rehmannia glutinosa din diferite zone de producție și dintre Rehmannia glutinosa crudă și Rehmannia glutinosa gătită au fost similare și au o consistență de bună calitate.

Tabelul 4 Rezultatele determinării conținutului a 5 componente în Semen Rehmanniae/%

13. rehmanniozid D; 17. leonuridă; 19. echinacozid; 20. castanozidă A; 21. acteozid

Figura 3 Cromatograme HPLC suprapuse a 6 loturi de material seminal Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) și referință (R)

3 Discuție

3.1 Selectarea condițiilor cromatografice

În acest studiu au fost investigate patru sisteme de fază mobilă, acetonitril-apă, acetonitril-0,1% soluție de acid formic, metanol-apă și metanol-0,1% soluție de acid formic. Rezultatele au arătat că cele cinci componente au avut efecte bune de separare în sistemul acetonitril; în comparație cu sistemul de fază mobilă acetonitril-apă, vârfurile de rehmannia glutinosa și glicozidele de mușcă din faza mobilă de soluție de acid formic de acetonitril-0.1% au fost mai înguste și au avut o bună simetrie a vârfului. În același timp, datorită absorbției diferite de ultraviolete a celor cinci componente, conținutul componentelor variază foarte mult. Pentru a determina mai exact conținutul fiecărei componente și pentru a ne asigura că intensitatea de absorbție a celor cinci componente este distribuită uniform în aceeași cromatogramă, absorbția ultravioletă aglicozida rehmannia D, s-au analizat glicozidul de mușcă, echinacozidul, cistancheside A și verbascozidul și s-a selectat determinarea lungimii de undă variabilă, adică 0-24 min, prima glicozidă rehmannia separată a fost determinată la 203 nm și 24-40 min, echinacozidul separat, cistancheside A și verbascozid au fost determinate la 330 nm. În plus, acest studiu a investigat și efectele extracției metanolului, soluției de metanol 70%, soluției de metanol 50% și soluției de acetonitril 50% ca solvenți de extracție. Rezultatele au arătat că soluția de metanol 70% ca solvent de extracție poate dizolva mai bine componentele de testat, iar proba extrasă are mai puține impurități. Prin urmare, acest studiu a selectat 70% metanol ca solvent de extracție, acetonitril-0,1% soluție de acid formic ca sistem de fază mobilă și a folosit lungimea de undă variabilă pentru a determina conținutul celor cinci componente din Rehmannia.

3.2 Analiza rezultatelor determinării probei

Din rezultatele determinării, se poate observa că după aburire, cu excepția unei ușoare creșteri a conținutului de echinacozidă, conținutul celorlalte patru componente s-a redus semnificativ, în special conținutul de leonurizidă și cistancheside A; conținutul de rehmannia glicozidă D și cistancheside A în Rehmannia glutinosa din aceeași zonă de producție a fost ușor diferit, iar conținutul de leonurizidă, echinacozidă și verbascozidă a fost semnificativ diferit; conținutul de echinacozid din Rehmannia glutinosa din zona de producție Henan a fost semnificativ mai mare decât cel al probelor din zona de producție Shanxi, iar conținutul celorlalte patru componente a fost ușor diferit. În același timp, conform amprentei HPLC stabilită în acest studiu, asemănarea dintre cele 6 loturi de probe Rehmannia și amprenta de control a fost de 0,904~0,950, indicând faptul că principala substanță chimică componentele celor 6 loturi de probe Rehmannia înainte și după procesare au fost foarte consistente.

În rezumat, metoda de determinare a conținutului și amprenta digitală HPLC stabilite în acest studiu sunt precise, de încredere și au o specificitate bună. Acestea pot fi utilizate pentru a caracteriza modificările componentelor și gradul de prelucrare a Rehmannia glutinosa înainte și după procesare și pentru a oferi suport tehnic pentru controlul calității Rehmannia glutinosa. Cu toate acestea, acest studiu are dezavantajele unor loturi mici de mostre și acoperirea incompletă a zonelor de producție, ceea ce necesită analize și verificări suplimentare.

Referințe

[1] Comitetul pentru Farmacopeea Chineză. Farmacopeea Republicii Populare Chineze: Volumul 1 [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Cercetări privind evoluția istorică a denumirilor de Rehmannia glutinosa procesate și studiul eficacității acesteia [J]. Chinese Patent Medicine, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe și colab. Progresul cercetării asupra Rehmannia glutinosa și analiza de predicție a markerilor săi de calitate [J]. Chinese Patent Medicine, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi și colab. Progresul cercetării privind compoziția chimică și efectele farmacologice ale Rehmannia glutinosa [J]. Chinese Herbal Medicine, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Progresul cercetării privind componentele chimice și efectele farmacologice ale Rehmannia glutinosa［J］.

Drug Evaluation Research, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei și colab. Analiza componentelor chimice ale Rehmannia glutinosa proaspătă, Rehmannia glutinosa crudă și Rehmannia glutinosa gătită prin UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Chinese Patent Medicine, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei și colab. Recunoașterea modelului de amprentă și determinarea conținutului cu mai multe componente ale diferitelor produse procesate Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi și colab. Progresul cercetării privind componentele chimice și efectele farmacologice ale Rehmannia glutinosa［J］. Chinese Herbal Medicine, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian și colab. Studiu comparativ al componentelor chimice ale Rehmannia glutinosa înainte și după prelucrare prin UHPLC-Q-TOF/MS［J］. New Chinese Medicines and Clinical Pharmacology, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan și colab. Acumularea dinamică a componentelor nucleozidice și aminoacizilor în Rehmannia glutinosa pe baza UPLC-TQ-MS［J］. Chinese Herbal Medicine, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Studiu asupra tehnologiei și mecanismului de procesare a „nouă aburire și nouă expunere” a Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Universitatea Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan și colab. HPLC Determinarea simultană a conținutului a opt componente în Rehmannia glutinosa și diferitele sale produse procesate prin analiza UPLC a amprentei și determinarea conținutului de componente multi-index [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Evaluarea calității Rehmannia glutinosa bazată pe amprenta UPLC și pe determinarea conținutului de componente multi-index [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (4): 917-923.