Dezvoltarea gelului lipozomal anti-îmbătrânire cu extract de boabe de cafea verde

Vă rog contactațioscar.xiao@wecistanche.compentru mai multe informatii

ABSTRACT

Fundal:Fasolea verde de cafea arabica L. Familia: Rubiaceae sunt o sursă bogată de polifenoli care previne deteriorarea oxidativă a pielii. În acest studiu, lipozomii au fost formulați ca purtători de medicamente pentru a îmbunătăți permeabilitatea pielii a polifenolilor pentru administrare locală. Materiale și metode: Extractele de boabe de cafea verde au fost preparate prin variarea raporturilor de metanol și apă. Analizele fitochimice și evaluarea antioxidantă in vitro au fost efectuate pe toate extractele pentru a alege cel mai bun extract pentru studii ulterioare. Potențialul de citotoxicitate (testul MTT) și activitatea anti-elastazică a extractului ales au fost evaluate pe linii celulare L929 folosind un citometru de flux. Lipozomii extractului au fost preparați prin metoda de hidratare cu peliculă subțire și optimizați prin variarea raportului fosfatidilcolină la colesterol și creșterea treptată a cantității de extract. Formularea lipozomală a fost transformată în gel utilizând carbopol"974P ca agent de gelifiere. Suspensia lipozomală preparată și gelul lipozomal au fost evaluate pentru diverși parametri de formulare. Rezultate: Rezultatele analizei fitochimice, analizelor antioxidante in vitro și evaluării in vitro pe Liniile celulare L929 au concluzionat că extractul metanolic de 25% nu este toxic, cu cel mai mare conținut fenolic și prezintă o activitate antielastazică bună. Eficiența de încapsulare a acidului clorogenic în formularea lipozomală optimizată a fost de 75%. Gelul lipozomal a prezentat o eliberare susținută a medicamentului până la 12%. hr în comparație cu 6-7 hr din formula convențională Concluzie: Gelul formulat pe bază de lipozomi încărcat cu extract de boabe de cafea verde poate servi ca purtător potențial pentru efecte anti-îmbătrânire.

Cuvinte cheie:Boabe de cafea verde (GCB), acid clorogenic, extract, lipozomi, antioxidant, antiimbatranire.

INTRODUCERE

Pielea joacă un rol vital în modularea temperaturii corpului, perceperea durerii și presiunii și acționează ca o barieră crucială împotriva poluării mediului, făcând foarte evidentă îmbătrânirea pielii.1 Expunerea pe termen lung a pielii la radiațiile ultraviolete produce radicali liberi care induc stres oxidativ asupra pielea care duce la dezvoltarea fotoîmbătrânirii, arsurilor solare, melanogenezei, imunosupresiei și fotocarcinogenezei.² Radicalii liberi sunt molecule de oxigen extrem de reactive care sunt implicate în formarea de legături încrucișate cu moleculele de colagen, ducând la pierderea elasticității pielii.3 Îmbătrânirea se manifestă prin lasare, subțiere, uscăciune și pete pe piele. Astfel, cu dorinta de a arata tanara, produsele antiaging sunt la mare cautare. Antioxidanții de origine vegetală au câștigat importanță în industria cosmetică. Antioxidanții ajută la repararea și prevenirea daunelor oxidative cauzate de radicalii liberi. Activitatea antioxidantă a plantelor medicinale se datorează în principal proprietăților redox ale compușilor fenolici.4 Astfel, antioxidanții sunt promițători în întârzierea semnelor de îmbătrânire, cum ar fi ridurile, petele de vârstă și liniile fine.

Boabele de cafea verde (Coffea arabica L, Rubiaceae) sunt o sursă bogată de polifenoli, cum ar fi acidul clorogenic și compușii săi, cum ar fi acidul cafeic, acidul cumaric și acidul ferulic, care previn deteriorarea oxidativă a pielii. Studiile au arătat că extractele de C. arabica posedă antibacteriene,5 antivirale,6 antiinflamatoare,7 vindecarea rănilor pielii și reducerea daunelor oxidative la macromolecule? şi activitatea supresoare a expresiei metaloproteinazei.10

Acidul clorogenic, principalul compus polifenolic al boabelor de cafea verde, are proprietăți antioxidante și depigmentare și inhibă deteriorarea pielii induse de UV. I2 Conform studiilor științifice, boabele de cafea verde conțin o cantitate mai mare de acid clorogenic decât boabele de cafea prăjite și alte plante. „3

Vă rugăm să faceți clic aici pentru a afla mai multe

Livrarea polifenolilor prin piele este ineficientă din cauza pătrunderii sale limitate. Astfel, este nevoie de formularea de bază sau de amplificatori de penetrare care îi sporesc penetrarea." Deci lipozomii au fost selectați ca purtători de medicamente deoarece sunt de natură amfifilă și moleculele hidrofile pot fi ușor încorporate în straturile duble concentrice. Lipozomii fiind similari fiziologic cu membrana celulară nu sunt - de natură toxică.Prezența fosfolipidelor în lipozomi îmbunătățește absorbția topică a medicamentului din epidermă în straturile inferioare datorită aderenței crescute a complexului fosfolipide al medicamentului pe piele.'5 Scopul prezentului studiu este de a dezvolta un gel care contine lipozomi incarcati cu extract de boabe de cafea verde pentru a fi folosit ca formula cosmetica antioxidanta pentru efecte anti-imbatranire.

MATERIALE SI METODE Materiale

Boabele de cafea verde arabica L au fost obținute de pe piața locală din Mumbai în august 2019 și au fost autentificate de Dr. Harshad M. Pandit. Fost șef și profesor asociat de botanică, Guru Nanak Khalsa College, Mumbai, India. Fosfatidilcolina a fost achiziționată de la HiMedia Laboratories Pvt Ltd, colesterolul 99% a fost achiziționat de la Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-difenil-1-picrhidrazil (DPPH), iar acidul clorogenic a fost achiziționat de la Otto Chemie Pvt Ltd, Mumbai . Acidul galic și acidul ascorbic au fost procurate de la SD Fine Chemicals Ltd, Mumbai. Toate substanțele chimice utilizate în acest studiu au fost de calitate AR. Lipozomii au fost produși folosind un evaporator rotativ, Rotaeva, Equitron și spectrofotometru UV-Visible, Shimadzu 1800 a fost folosit pentru evaluarea lipozomilor.

Cistanche poate anti-imbatranire

Metode

Metodologia de extracție

Boabele de cafea verde sub formă de pulbere au fost degresate folosind eter de petrol 40-60 grad (1:6 procente g/v) timp de 3 ore într-un aparat Soxhlet. Pulberea de cafea verde degresată a fost extrasă cu diferiți solvenți, cum ar fi apă, 25% metanol, 50% metanol, 75% metanol și 100% metanol timp de 2 ore folosind un sistem Soxhlet. Extractele rezultate au fost concentrate într-un vas de porțelan pe o baie de apă electrică la 80 de grade pentru a îndepărta solventul. Extractele preparate au fost utilizate pentru analize calitative și cantitative.

Conținutul total de fenolici

Conținutul total de fenolici a fost determinat prin metoda reactivului Folin-Ciocalteu folosind procedura standard. Acidul galic a fost utilizat ca standard și conținutul total de polifenolici a fost exprimat ca mg/g echivalent acid galic (GAE) din curba de calibrare a acidului galic.16

Suprapunere spectrală

Metoda spectrometrică UV a fost utilizată pentru a determina prezența acidului clorogenic în extract. Pentru prepararea soluțiilor standard, s-a dizolvat Img/ml de acid clorogenic standard în tampon fosfat și s-a pregătit o diluție suplimentară pentru a obține 10 ug/ml de soluție standard. Pentru soluția de probă, 25% din extract metanolic de 1 mg/ml a fost dizolvat în tampon fosfat și a fost pregătită o diluție suplimentară pentru a obține 10 ug/ml de soluție standard. Un spectru de suprapunere a ambelor soluții a fost obținut utilizând spectrofotometrie UV-Vis.

Cuantificarea acidului clorogenic în fiecare extract Preparat soluție standard

Acidul clorogenic standard a fost dizolvat în solvenți cum ar fi apă, 25% metanol, 50% metanol, 75% metanol și 100% metanol. Pentru a reduce eroarea în procedura de preparare, soluția de acid clorogenic 10 ppm a fost preparată în fiecare solvent de mai sus și apoi a fost preparată diluția corespunzătoare variind de la concentrația 2 la 10 ppm. Graficul liniarității a fost realizat prin înregistrarea absorbanței la 324 nm folosind un spectrofotometru UV-Vis.

Prepararea soluției de probă

Pentru prepararea soluției de probă, extractele au fost dizolvate în solvenții respectivi și s-a făcut o soluție de 10 ppm. Absorbanța pentru soluția de probă a fost înregistrată la 324 nm folosind un spectrofotometru UV-Vis. Absorbanța obținută a fost extrapolată în graficul de liniaritate pentru a găsi concentrația de acid clorogenic din fiecare extract.

Determinarea activităților antioxidante

Testul antioxidant PDF (2,2-difenil -1-picrhidrazil) Activitatea de captare a radicalilor a extractelor de pe radicalii DPPH a fost investigată prin următoarea metodă standard." Acidul ascorbic a fost utilizat ca standard. Experimentul a fost efectuat în trei exemplare. Procentul activității de captare a radicalilor DPPH a fost reprezentat în funcție de concentrația fiecărei extracte și a fost determinată IC. Testul antioxidant de oxid nitric

Activitatea de captare a radicalilor de oxid nitric a fost investigată prin utilizarea reacției Griess Illosvoy.cistanche a imperiului pierdutAcidul ascorbic a fost folosit ca standard. Experimentul a fost realizat în trei exemplare. Procentul activității de captare a radicalilor de oxid nitric a fost reprezentat în funcție de concentrația fiecărei extracte, iar procentul de inhibare IC pentru ambele studii de antioxidanți a fost calculat folosind formula menționată mai jos. Activitatea de captare a fost exprimată ca procent de inhibare calculat folosind următoarea formulă:

Determinarea viabilității celulare prin testul MTT Extract de boabe de cafea verde, adică 25% extract metanolic, a fost testat pentru studiul citotoxicității împotriva liniilor celulare L929. densitatea celulară (20,000 celule per godeu), fără agentul de testare. Celulele au fost lăsate să crească timp de aproximativ 24 de ore. S-a adăugat o concentraţie adecvată a agentului de testare (25% extract metanolic), placa a fost incubată timp de 24 de ore la 37 de grade într-o atmosferă de 5% CO, şi mediul uzat a fost îndepărtat. Reactivul MTT a fost adăugat la o concentrație finală de (0,5 mg/mL) din volumul total și plăcile au fost incubate timp de 2-3 ore în condiții de întuneric. S-au adăugat 100 ul de DMSO după îndepărtarea reactivului MIT și s-au agitat ușor. Absorbanța a fost măsurată la 570 nm și 630 nm folosind un spectrofotometru pe un cititor ELISA. Valoarea IC.o a fost determinată utilizând o ecuație de regresie liniară. Formule utilizate pentru studiu:

Determinarea activității anti-elastazei

Celulele au fost cultivate la o densitate de 3x105 celule/2 ml și incubate într-un incubator cu CO timp de 24 de ore la 37 de grade. 1 Pentru studiul anti-elastaza, celulele tratate cu 250uM epigalocatechin galat (EGCG) au fost folosite ca martor pozitiv, celulele tratate cu 2{0{0ug/ml de 25 la sută din extract metanolic a fost utilizat ca probă de testare (Tabelul 6), iar celulele numai cu mediu de cultură au fost utilizate ca martor negativ și au fost incubate în 2 ml de mediu de cultură timp de 24 de ore. Tuburile au fost centrifugate timp de cinci minute la 300x g la 25 de grade și celulele au fost spălate cu PBS. S-au adăugat 0,5 ml de soluție BD Cytofix/Cytoperm după îndepărtarea PBS și tuburile au fost ținute nederanjate timp de 10 minute. SEd 20 μL de elastază neutrofilă anti-umană de șoarece/ELA2 Alexa Fluor® 647-anticorp monoclonal conjugat a fost adăugat, amestecat și incubat timp de 30 de minute la temperatura camerei în condiții de întuneric. Celulele au fost tratate cu 0,1% azidă de sodiu și 0,5 ml de PBS și analizate prin citometrie în flux cu excitarea și emisia de 650nm și respectiv 668nm. În acest studiu, compușii de testare și anume extractul de boabe de cafea verde (25% extract metanolic) și galatul de epigalocatechină standard (EGCG) au fost utilizați pentru a evalua efectul lor asupra expresiei ELA-2 (anticorp conjugat de șoarece anti-elastaza umană) în celula L929. linii.

Prepararea de boabe de cafea verde cu extract de lipozomi încărcate

Metoda de hidratare a filmului subțire, așa cum este descrisă de Bangham și colab., gradul 1 a fost utilizată pentru a formula lipozomi. Amestecul de lipide a fost preparat prin dizolvarea fosfatidilcolinei și colesterolului în cloroform și metanol (2:1) în balonul cu fund rotund (RBF) și s-au adăugat perle de sticlă pentru formarea filmului omogen. RBF a fost atașat la un evaporator rotativ rapid (Roteva, ecuație) și lăsat să se rotească la 80 rpm/min într-o baie de apă termostatată la 40 de grade. Solvenții organici au fost îndepărtați prin aplicarea lentă a vidului conducând la formarea unui film lipidic omogen 100% pe pereții balonului. Filmul a fost lăsat să se usuce pentru LH pentru îndepărtarea completă a solvenților organici. Filmul lipidic uscat a fost hidratat cu tampon fosfat (pH: 5,4) care conține extract dizolvat (25% extract metanolic) și apoi RBF a fost rotit la 150 rpm/min într-o baie de apă termostatată menținută la 46 de grade care este peste temperatura de tranziție. de lipide. Rotația a fost continuată timp de 60 de minute până la obținerea suspensiei omogene. Lipozomii produși folosind această metodă sunt mari și eterogene ca dimensiune, astfel încât metoda de sonicare în baie a fost utilizată timp de 30 de minute pentru a reduce dimensiunea lipozomilor. Suspensia lipozomală pe bază de extract de boabe de cafea verde a fost lăsată să stea timp de 2 ore la temperatura camerei pentru a asigura o hidratare completă. Suspensia lipozomală a fost păstrată într-o sticlă de sticlă de culoare chihlimbar în frigider până la utilizare ulterioară.

Caracterizarea lipozomilor

Următorii sunt parametrii pentru care au fost caracterizați lipozomii preparați

Determinarea eficienței de încapsulare Spectrofotometrul UV-Vis a fost utilizat pentru a estima eficiența de încapsulare a acidului clorogenic în lipozomii încărcați cu extract de boabe de cafea verde. Absorbanța acidului clorogenic rămas în supernatant după centrifugare a fost măsurată la 324 nm folosind un spectrofotometru UV-Vis.fracție de flavonoid purificată micronizat 1000 mg utilizăriApoi, concentrația a fost calculată din graficul de calibrare obținut pentru acidul clorogenic standard.

Cantitatea totală de medicament adăugată la microscopia optică

O picătură de suspensie lipozomală a fost plasată pe o lamă de sticlă curată și observată la puterea de 45X și 100X a microscopului optic (microscop Motic). Determinarea dimensiunii veziculelor, a indicelui de polidispersibilitate (PDI) și a potențialului zeta

Dimensiunea veziculelor și indicele de polidispersibilitate au fost analizate utilizând un instrument dinamic de împrăștiere a luminii cu un sistem de inspecție computerizat (analizor de dimensiunea particulelor Malvern). Loturile lipozomale proaspăt preparate au fost diluate în raport de 1:100 cu apă deionizată. Toate măsurătorile au fost făcute în triplicat la 25±0,5 grade. Suspensia lipozomală a fost diluată cu apă deionizată și potențialul zeta a fost determinat folosind Malvern Zetasizer.

Analiza TEM prin microscopie electronică cu transmisie (TEM) a fost efectuată pentru suspensie optimizată încărcată cu medicament prin microscopie electronică cu transmisie (Tecnai T20,200Kev, FEI). O picătură de suspensie a fost plasată cu ajutorul unei micropipete pe grilă. Grila a fost bine uscată. Grila uscată care conține proba a fost bombardată cu electroni accelerați la 200 VK. Apoi dimensiunea veziculelor și morfologia lipozomală au fost vizualizate prin TEM sub vid (Figura 1). Prepararea gelului lipozomal

Gelul lipozomal încărcat cu extract de boabe de cafea verde a fost preparat utilizând o bază de gel carbopol@974P. Cu precizie 0,5% din carbopol@974P a fost cântărit și păstrat pentru hidratare în apă dublu distilată care conține conservanți peste noapte. Peletele lipozomale obținute după centrifugare au fost dispersate în apă distilată prin sonicare și adăugate la soluție hidratată de carbopol cu ​​agitare. Gelificarea a fost indusă prin neutralizare folosind trietanolamină (TEA). Gelul a fost evaluat pentru culoare, textură (netezime și uns), pH, vâscozitate, conținut de medicament, gradul de întindere și în studiul de eliberare a medicamentului.

Studiu in vitro de eliberare a medicamentelor

Aparatul cu celule de difuzie Franz având o capacitate a compartimentului receptor de 22 ml și o suprafață de 3,91 cm2 a fost utilizat pentru a estima in vitro membrana de dializă cu eliberare a medicamentului (limită de greutate moleculară 12,000-14,000), care au fost prehidratate prin înmuiere în tampon peste noapte au fost montate pe celule. Tampon fosfat pH 5,4 (37 grade ±0,5 grade) a fost utilizat ca fluid receptor. Soluția rezervor a fost agitată la 100 rpm/min folosind o perlă magnetică. 0,5 g de gel au fost plasate în compartimentul donor de pe membrană. Alicote au fost colectate la intervale de 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12 și 24 de ore și analizate cu spectrofotometru UV-Vis la 324 nm.20

REZULTATE ȘI DISCUȚII Metodologia extracției

Randamentele procentuale ale extractelor de boabe de cafea verde arabica L. sunt prezentate în Tabelul 3. Aspectul fizic al tuturor extractelor a fost de culoare galben închis și maro închis. Cele 25% din extractul metanolic au prezentat cel mai mare randament procentual la 26,54±0,13 comparativ cu toate celelalte extracte.

Conținutul total de fenolici

Metoda Folin-Ciocalteu a fost utilizată pentru estimarea conținutului total de fenolici al tuturor extractelor. TPC-ul tuturor extractelor este exprimat în termeni de echivalent acid galic (ecuația curbei standard: y= 0.0031 plus 0,3477,r{2=0,9953) menționat în tabelul 1. Dintre toate extractele, conținutul fenolic major este estimat în 25% din extractul metanolic. Suprapunerea spectrală Cuantificarea acidului clorogenic din fiecare extract Cantitatea de acid clorogenic prezentă în fiecare extract este menționată în Tabelul 3 și Figura 2.oteflavonoidConform rezultatelor, s-a constatat că cea mai mare cantitate de acid clorogenic este prezentă în 25% din extractul metanolic.

Pe baza rezultatelor obținute din conținutul total de fenolici, cuantificarea acidului clorogenic și testul antioxidant, extractul metanolic de 25% conține cel mai mare conținut de fenolic, o cantitate mai mare de acid clorogenic și activitate maximă de captare a radicalilor în comparație cu alte extracte.

Determinarea viabilității celulare prin test MTT Testul de viabilitate este un test care determină capacitatea țesuturilor, celulelor sau organelor de a menține sau de a recupera starea de supraviețuire. Studiul de citotoxicitate al compusului de testat, extractul de boabe de cafea verde împotriva liniilor celulare L929 în datele statistice ale studiului de citotoxicitate celulară de către cititorul ELISA a sugerat că extractul de boabe de cafea verde a arătat proprietăți potențiale de citotoxicitate moderată cu o concentrație inhibitoare (IC) la 306,38 ug/ml comparativ cu standardul medicament Camptothecin cu 23 ug/ml Tabelul 5. Observația sugerează cu tărie că extractul de boabe de cafea verde nu are un potențial semnificativ de citotoxicitate cu o concentrație variind de la 12,5-200 ug/ml respectiv cu o perioadă de incubație de 24 de ore la 37 de grade. (Graficul 1).

Determinarea activității anti-elastazei

Enzima elastaza este capabilă să descompună elastina, o proteină fibroasă elastică insolubilă care împreună cu colagenul contribuie la rezistența mecanică a țesutului conjunctiv. Mai multe studii au sugerat că atât efectele îmbătrânirii pielii, cât și efectele antirid corespund în mod semnificativ unei activități reduse a elastazei. Astfel, au fost efectuate studii antielastaze pentru a confirma utilitatea extractului de boabe de cafea verde ca agent anti-îmbătrânire. În acest studiu, compusul de testat și anume extractul de boabe de cafea verde și Std, EGCG a fost utilizat pentru a evalua efectul lor asupra expresiei ELA-2 (anticorp conjugat de șoarece anti-elastaza umană) în linia celulară L929. Concentrațiile compușilor utilizați în experiment au fost următoarele:

Extractul de fasole GC compus de testat dat a suprimat expresia ELA-2 în linia celulară L929. Valorile medii relative ale intensității fluorescenței ale ELA-2 au fost aproape similare scăzute în std, galat de epigalocatechină și extract de boabe de cafea verde compus de testat. (Tabelul 7; Figura 3 și Histograma 1). Prin urmare, fasolea GC poate fi considerată un bun agent anti-elastaza. Prepararea de boabe de cafea verde cu extract de lipozomi încărcate

În acest studiu a fost utilizată metoda de hidratare a filmului subțire pentru a formula lipozomi.puritani vitamina cMotivul selectării acestui lucru

metoda este deoarece este cea mai simplă metodă de preparare a veziculelor multilamelare și este capabilă să încarce o masă mai mare de molecule hidrofile, cum ar fi acidul clorogenic, comparativ cu veziculele unilamelare. Metoda de hidratare a filmului subțire s-a dovedit că dă 75% din eficiența de încapsulare pentru acidul clorogenic prezent în extractul Tabelul 2. Astfel, această metodă a fost utilizată pentru prepararea lipozomilor.

Caracterizarea lipozomilor Microscopie optică

Vezicula multilamelară a fost observată în mod clar (Figura 4). Observațiile microscopice au fost utilizate pentru a evalua forma și dimensiunea veziculelor notate pentru toate loturile pregătite.

Determinarea indicelui de polidispersibilitate (PDI), potențialul zeta și dimensiunea veziculelor

PDI apare practic pentru distribuția mărimii veziculelor dintr-o probă dată.sistancheValoarea numerică a PDI începe de la {{0}}.0 (dimensiunea particulelor perfect uniformă) până la 1,1 (dimensiunea particulelor foarte polidispersă). În cazul sistemelor purtători pe bază de lipide, cum ar fi lipozomii și nanolipozomii cu o dimensiune de 0,3 sau mai mici sunt acceptabili, deoarece indică o populație omogenă de vezicule fosfolipide.21 Potențialul zeta este o tehnică semnificativă de caracterizare care este folosită pentru a înțelege stabilitatea fizică a particulelor. O valoare de la -30 mV la plus 30mV este, în general, considerată a avea suficientă forță de respingere pentru a obține o stabilitate coloidală fizică mai bună.

Metoda de hidratare a filmului subțire dă vezicule multilamelare mari și eterogene. Analiza mărimii lipozomilor produși a evidențiat o dimensiune medie z (d.nm) de 864,2 nm, PDI de 0,375 și potențial Zeta de -12,4 cu o valoare bună eficiența captării.

Microscopie electronică cu transmisie (TEM) Analiza morfologică a acestor lipozomi prin TEM a arătat lipozomi de formă sferică. Prepararea gelului lipozomal

Dispersia lipozomală a fost amestecată pur și simplu cu polimerul pentru a da gelurile corespunzătoare. Formularea gelului lipozomal este avantajoasă, deoarece fuziunea veziculelor poate fi evitată sau redusă la minimum, deoarece polimerul servește ca distanțier între lipozomi. Astfel, dimensiunea veziculelor nu este afectată deoarece este un proces controlat de interacțiune polimer/lipozom. Formularea cremei pe bază de lipozomi nu a fost aleasă, deoarece problemele de stabilitate sunt raportate în produsele pe bază de emulsie datorită metodei, deoarece este cea mai simplă metodă de preparare a veziculelor multilamelare și este capabilă să încarce o masă mai mare de molecule hidrofile, cum ar fi acidul clorogenic, comparativ cu vezicule unilamelare. Metoda de hidratare a filmului subțire s-a dovedit că dă 75% din eficiența de încapsulare pentru acidul clorogenic prezent în extractul Tabelul 2. Astfel, această metodă a fost utilizată pentru prepararea lipozomilor.

Caracterizarea lipozomilor Microscopie optică

Vezicula multilamelară a fost observată în mod clar (Figura 4). Observațiile microscopice au fost utilizate pentru a evalua forma și dimensiunea veziculelor notate pentru toate loturile pregătite.

Determinarea indicelui de polidispersibilitate (PDI), potențialul zeta și dimensiunea veziculelor

PDI apare practic pentru distribuția mărimii veziculelor dintr-o probă dată. Valoarea numerică a PDI începe de la {{0}}.0 (dimensiunea particulelor perfect uniformă) până la 1,1 (dimensiunea particulelor foarte polidispersă). În cazul sistemelor purtători pe bază de lipide, cum ar fi lipozomii și nanolipozomii cu o dimensiune de 0,3 și mai mici sunt acceptabili, deoarece indică o populație omogenă de vezicule fosfolipide.21 Potențialul zeta este o tehnică de caracterizare semnificativă care este folosită pentru a înțelege stabilitatea fizică a particulelor. O valoare de la -30 mV la plus 30mV este, în general, considerată a avea suficientă forță de respingere pentru a obține o stabilitate coloidală fizică mai bună. 2

Metoda de hidratare a filmului subțire dă vezicule multilamelare mari și eterogene. Analiza mărimii lipozomilor produși a evidențiat o dimensiune medie z (d.nm) de 864,2 nm, PDI de 0,375 și potențial Zeta de -12,4 cu o valoare bună eficiența captării.

Microscopie electronică cu transmisie (TEM) Analiza morfologică a acestor lipozomi prin TEM a arătat lipozomi de formă sferică.

Prepararea gelului lipozomal

Dispersia lipozomală a fost amestecată pur și simplu cu polimerul pentru a da gelurile corespunzătoare. Formularea gelului lipozomal este avantajoasă, deoarece fuziunea veziculelor poate fi evitată sau redusă la minimum, deoarece polimerul servește ca distanțier între lipozomi. Astfel, dimensiunea veziculelor nu este afectată deoarece este un proces controlat de interacțiune polimer/lipozom. Formularea cremei pe bază de lipozomi nu a fost aleasă deoarece problemele de stabilitate sunt raportate în produsele pe bază de emulsie din cauza

prezența surfactantului și a excesului de ulei care pot interacționa cu veziculele. Diverse proprietăți, cum ar fi vâscozitatea, pot fi controlate cu ușurință prin variarea concentrației polimerului sau prin schimbarea tipului de polimer. Astfel, gelurile lipozomale au fost preparate deoarece eludează problema de stabilitate, oferă eliberare controlată, ușor de preparat și au un aspect estetic ca produse cosmetice pentru îngrijirea pielii.23 Lipogelurile preparate au fost de culoare galben deschis și opace. S-a constatat că 0,5% g/g carbopol@974P are o consistență bună și un aspect neted, lipsit de orice agregare. Conținutul de medicament pentru gelul lipozomal s-a dovedit a fi 94,16±1,3 cu o vâscozitate a gelului în intervalul de la 13.500 cps la 16.500 cps și o capacitate de răspândire în jur de 7-8 g.cm/s.

Profilul eliberării medicamentului in vitro

Stratul exterior al pielii este stratul cornos și este compus în principal din proteine ​​​​keratine și lipide. Lipidele intercelulare joacă un rol vital în controlul absorbției percutanate. Lipidele intercelulare pot interacționa cu fosfolipidele prezente în lipozomi și, prin urmare, pot provoca umflarea lipidelor fără a modifica structura dublu stratificată a stratului cornos. Aceste lipide umflate fac ca medicamentul să se acumuleze și să formeze un depozit intracutanat. Deși mecanismul lipozomilor aplicați local nu este pe deplin înțeles, dar compoziția lipidelor, încărcătura de suprafață și lamelaritatea lipozomală joacă în primul rând un rol important în eliminarea medicamentelor. Studiile au arătat, de asemenea, că administrarea topică este influențată și de dimensiunea lipozomilor.24 Eliberarea medicamentului in vitro a fost efectuată folosind o membrană de dializă. Studiul in vitro de =eliberare a gelului lipozomal a arătat un efect de eliberare susținută de până la 12 ore în comparație cu 7-8 ore de gel convențional Graficul 2.

CONCLUZIE

Extractele de boabe de cafea verde Arabica au fost analizate pentru conținutul total de fenolici, cuantificarea acidului clorogenic și testul antioxidant. Pe baza rezultatelor obținute din aceste studii, 25% din extractul metanolic a fost ales pentru a fi încorporat în lipozomi, deoarece a arătat cel mai mare conținut de fenolic, o cantitate mai mare de acid clorogenic și o activitate antioxidantă mai bună. Înainte de încorporarea extractului în lipozomi, acesta a fost testat pentru MTT și testul antielastazei. Pe baza testului MT, extractul nu a avut potențial de citotoxicitate celulară și, conform testului antielastazic, extractul a avut activitate antielastazică. Astfel, extractul poate fi utilizat pentru a formula lipozomi anti-îmbătrânire. Veziculele multilamelare au fost preparate folosind metoda de hidratare cu peliculă subțire. Lipozomii preparați au avut o eficiență bună de încapsulare și o stabilitate fizică mai bună. Suspensia lipozomală pe bază de extract a fost formulată într-un gel lipozomal. Conform studiului de eliberare a medicamentului in vitro, gelul lipozomal a arătat un efect de eliberare prelungită de până la 12 ore în comparație cu gelul convențional. Prin urmare, lipozomii încărcați cu extract de boabe de cafea verde pot fi considerați a fi un purtător eficient pentru livrarea topică cu potențial anti-îmbătrânire.

CONFIRMARE

Autorii sunt recunoscători Stellixir Biotechnology, Bengaluru și Karnataka pentru ajutorul acordat în finalizarea testului MTT și a studiilor anti-elastazei, mulțumim, de asemenea, soluțiilor de testare Sprint, Mumbai pentru imagistica TEM și Colegiului nostru de Farmacie Dr.Bhanuben Nanavati de la colegiul nostru SVKM pentru oferind cele mai bune facilitati pentru realizarea acestui studiu.

CONFLICT DE INTERESE

Autorii nu declară niciun conflict de interese.

ABREVIERI:

TPC: Conținut total de fenolici; DPPH:2,2-difenil -1-picrhidrazil; GAE: echivalent acid galic; GC: Cafea verde; GCB: boabe de cafea verde; ELA-2 (anticorp anti-elastaza umană de șoarece conjugat): elastază neutrofilă; EGCG: galat de epigalocatechină; PC: fosfatidilcolină; CH: colesterol; RBF: balon cu fund rotund; TEM: Microscopie electronică cu transmisie; MTT: 3-(4,5-diemtiltiazol-2-il)-2,5-bromură de difenil tetrazoliu; PDI: Indicele de polidispersibilitate;IC":Concentrație inhibitorie pe jumătate maximă.

Acest articol este extras din Desai și Mallya.: Dezvoltarea gelului lipozomal anti-îmbătrânire încărcat cu extract de boabe de cafea verde